REGULACIÓN DE LA SÍNTESIS DE β-

GALACTOSIDASA EN

Escherichia coli
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA Y METABOLISMO MICROBIANO 5IM2
1.
Gen. mRNA monocistrónico
Es una secuencia de DNA que
Codifica para una sola cadena polipeptidica
codifica a una proteína o un
RNA, que tiene función
catalítica o estructural.

mRNA policistrónico
Codifica para dos o mas cadenas polipeptídicas .
 Genoma Cromosoma Haploide Diploide
Todo el Estructuras que Célula u organismo Célula u organismo
complemento de contienen la con un único compuesto por 2
DNA que información genética; conjunto de juegos de
compone el formado por una cromosomas. cromosomas.
material genético molécula de DNA, Ejemplos: algas y Ejemplo animales y
de un organismo. asociada a RNA y hongos plantas.
proteínas.

Diploide Nucleoide
parcial bacteriano
Entidad estructural y
Bacteria que tiene funcional que
parte de sus genes contiene la
en dos dosis. información genética
bacteriana.
2. cómo se encuentra organizada y almacenada la información genética en células eucariotas y
procariotas.

Figura 1. Almacenamiento de material genético en

procariota y eucariota
Equipo 5
Figura 1.1Micrografía electrónica de un Figura 1.2. Micrografía electrónica de un
cromosoma de Escherichia coli plásmido bacteriano

Equipo 5
Los cromosomas eucariotas consisten en alrededor de
un tercio de DNA y dos terceras partes de proteínas,
constituyendo juntos a la cromatina.

Figura 2.1.Esquema que muestra el

superenrollamiento del DNA.

Equipo 5
Células procariotas : contienen un único
cromosoma circular adherido a la
membra plasmática de la célula

. Cada cromosoma presenta un centrómero

que sirve para unirse a las proteínas que
forman el huso acromático y que durante la
mitosis o meiosis participan en la distribución
de los cromosomas hijos en las células
resultantes.

Figura 2.2 Los cromosomas metafásicos.

Equipo 5
 3.-Complete el siguiente diagrama que explica el sentido del flujo de la
información genética

DNA
Enzimas y proteinas; RNA Polimeraza
Enzimas y proteinas; DNA polimerasas Sustratos; Ribonucleótidos ATP, CTP, GTP y UTP
(cofactor Mg++) Requerimientos: DNA parental: Una cadena de DNA 3' 5'
DNA Topoisomerasas
Primer, sitios de inicio y termino.
Proteinas de union al DNA (SSB)
Helicasa, primasa, DNA ligasas RNA Enzimas y proteinas; Ribosomas, Aminoacil RNA-t sintetasa,
Sustratos; Desoxirribonucleótidos
dATP, dCTP, dGTP y dUTP
translocasas y peptidasas (robizil).
Requerimientos: DNA parental: Una Sustratos; Aminoacidos cargados (activados)
cadena de DNA molde 3' 5' Requerimientos: Factores de iniciación, eleongación y
DNA Polimeraza requiere una terminación, Cadena de RNAm, energia (ATP y GTP)
secuencia iniciadora (Primer), Sitios PROTEÍNA
(secuencias en el DNA parental) de
inicio y termino.
4. Transcripción en procariotas.
¿Qué es? Tiene 3 etapas:
Consiste en la copia de 1 cadena
Iniciación Terminación
de DNA para dar una cadena de
RNA, gracias a la
complementariedad de base.
Elongación

Equipo 5
4. Transcripción en procariotas

Subunidades RNA polimerasa

Núcleo:
α
β
β′
ω
Externa: 70
σ σ Reconoce al promotor

Promotores

Equipo 5
4. Transcripción en procariotas

Iniciación
No requiere de un primer

Requiere ATP, GTP, UTP y CTP Hebra codificante

Mg 2+

Viaja en sentido 3´a 5´

Hebra molde
Crea un RNA en sentido 5´a 3´
Equipo 5
4. Transcripción en procariotas
Terminación
Elongación Existen dos formas de terminar
1. Independiente de rho

2. Factor rho

Secuencia de terminación

Equipo 5
5. Traducción en procariotas
ACTIVACIÓN DE AMINOÁCIDOS
COMPONENTES Reacción global
20 aminoácidos
20 aminoacil-tRNA sintetasas
32 o más tRNAs
ATP
Mg2+

El grupo aminoacilo se esterifica en

Aminoacil-tRNA la posición 3 del residuo A terminal.

El enlace éster que activa el

aminoácido y lo une al El ARNt está

sombreado en rosa.
5. Traducción en procariotas
INICIACIÓN
COMPONENTES
-mRNA
-N-Formilmetionil-tRNA(fmet)
-Codón de iniciación en mRNA (AUG) El anticodón f-met se

-Subunidad 30S empareja con el codón de

-Subunidad 50S iniciación del mRNA

-Factores de iniciación (IF-1, IF-2, IF-

3) GTP Mg2+

La subunidad 30s se

une a los factores de

iniciación 1 y 3

Se forma el complejo

de iniciación al unirse

El mRNA se une a la
con la subunidad 50s
subunidad 30s

Señal de iniciación:

Secuencia Shine-Dalgarno
5. Traducción en
Paso 2
procariotas
ELONGACIÓN Paso 3
COMPONENTES
- Ribosoma 70S

funcional (complejo de

iniciación)
-Aminoacil-tRNAs

especificados por

codones
-Factores de elongación

(EF-Tu, EF-Ts, EF-G)

-GTP
-Mg2+

Paso 1
 5. Traducción en procariotas

TERMINACIÓN
COMPONENTES
-Codón de terminación en el mRNA
-Factores de liberación (RF-1, RF-2, RF-3)

La señal de terminación está dada por uno de

los tres codones de paro: UAA, UAG, UGA

Los factores de terminación contribuyen a :

(1) hidrólisis del enlace terminal peptidil-tRNA
(2) Liberación del polipéptido y del último tRNA

ya sin carga, del sitio P

(3) disociación del ribosoma 70s en las

subunidades 30s y 50s

 6. Investigue y explique con sus propias palabras, a qué hace alusión el término “Regulación
del metabolismo” y a que niveles se suscita en la célula.

La regulación del metabolismo es vital, y

de ésta depende que un un organismo
produzca solamente la cantidad necesaria
de cada una de las moléculas que requiere
para subsistir y por lo tanto que el
desperdicio de energía sea mínimo.

inducción
represión

Equipo 5
Equipo 5
Equipo 5
7. Mecanismos de la síntesis de enzimas y actividad catalítica.

Inducción: síntesis de ciertos enzimas (o aumento de su síntesis) debida

a la presencia en el medio de sustratos metabolizables adecuados, o en
términos más generales, por la existencia de determinados estímulos
ambientales.
Represión: desconexión rápida de la ruta biosintética de un
determinado compuesto, cuando éste aparece aportado en el medio de
la bacteria.

Universidad de Granada. (2006). Regulación génica. https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/15regulacion.htm#_Toc62377248

7. Mecanismos de la síntesis de enzimas y actividad catalítica.

Nelson, D., & Cox, M. (2009). Lehninger. Principios de bioquímica. (5.a ed.). Ediciones Omega. pp 1118.
7. Mecanismos de la síntesis de enzimas y actividad catalítica.

Atenuación: es un mecanismo de control que se da en ciertos operones

de rutas biosintéticas (sobre todo de aminoácidos), por el cual una
onda de transcripción recién iniciada puede terminar prematuramente
en una zona denominada atenuador, antes de alcanzar al primer gen
estructural de ese operón.

Universidad de Granada. (2006). Regulación génica. https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/15regulacion.htm#_Toc62377248

7. Mecanismos de la síntesis de enzimas y actividad catalítica.

Nelson, D., & Cox, M. (2009). Lehninger. Principios de bioquímica. (5.a ed.). Ediciones Omega. pp 1128.
7. Mecanismos de la síntesis de enzimas y actividad catalítica.

Nelson, D., & Cox, M. (2009). Lehninger. Principios de bioquímica. (5.a ed.). Ediciones Omega. pp 1129.
7. Mecanismos de la síntesis de enzimas y actividad catalítica.

Nelson, D., & Cox, M. (2009). Lehninger. Principios de bioquímica. (5.a ed.). Ediciones Omega. pp 572
 8. Defina que es un “operón” y esquematice cuáles son los elementos que lo constituyen y su
función.

Es una unidad genética funcional formada por un grupo complejo de

genes capaces de ejercer una regulación de su propia expresión por
medio de sustratos con los que interactúan las proteínas codificadas
por sus genes.
 definición
9. Clasificación de los operones
Cuando la introducción de un ejemplos
sustrato en el medio aumenta la
Operón lactosa
expresión de las enzimas
Inducible
(lac operon)
necesarias para su metabolismo.

clasificación de los operones

Funcionan en presencia de una Operón arabinosa
molécula inductora. (ara operon)

definición
La síntesis de las enzimas
disminuye cuando se encuentran ejemplos
cantidades suficientes de los Operón triptófano
reprimible productos terminales de la vía (trp operon)
metabólica correspondientes. Operón histidina
Funcionan en ausencia de una (his operon)
molécula correpresora.

definición ejemplos
Operones bacterianos
Siempre se expresan, no están de ARNr

constitutivo regulados ni por inductores ni

por represores.
Operón arc en S. aureus

Campbell, Neil. (2007). “Biología”. (7a ed., Pág.353-354). España: Editorial Médica Panamericana.
 Sistema de regulación de genes

REGULACIÓN REGULACIÓN
POSITIVA NEGATIVA

La expresión de los genes requiere una Los genes se expresan constantemente

proteína activadora. hasta que una proteína represora lo evita
Ayudan a la ARN polimerasa a iniciar la al unirse al operador.
transcripción. Impiden que la ARNp inicie la transcripción.

INDUCIBLE REPRIMIBLE INDUCIBLE REPRIMIBLE

La proteína La proteína La proteína La proteína

reguladora reguladora reguladora reguladora
(inductora) está (represora) está (represora) está (represora) está
inactiva. activa. activa. inactiva.

Se activa Se inactiva Se inactiva Se activa

cuando se le une cuando se le une cuando se le une cuando se le une
un inductor. un represor. un inductor. un correpresor.

Operón
Operón Operón triptófano
arabinosa
lactosa Operón histidina

Pierce, Benjamin. (2006). “Genética. Un enfoque conceptual.” (2a. ed., Pág. 438-440). España: Editorial Médica Panamericana.
 10.DENTRO DE LA REGULACION DEL METABOLISMO DEFINA;
Sistema inducible: Se presenta en procesos catabolicos.

SISTEMA REPRESIBLE: SE PRESENTA EN PROCESOS ANABOLICOS.

 El operón trp (artículo). (s. f.). Khan Academy. Recuperado 18 de mayo de
2022, de https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-
regulation/regulation-of-gene-expression-and-cell-specialization/a/the-trp-operon
11. ELEMENTOS DEL OPERON LACTOSA
Transporte y metabolismo

Lactosa

E. coli
12.Funcionamiento del operón lac de Escherichia coli en presencia y ausencia de lactosa

Ausencia del inductor (sin Lactosa) Presencia del inductor (con Lactosa)

Control negativo
Equipo 3
Fig.1 Operon en ausencia de lactosa obtenido de:https://www.ucm.es/data/cont/media/www/pag-56185/23- fig.2Operon en presencia de lactosa, imagen obtenida
Regulaci%C3%B3n%20de%20la%20expresi%C3%B3n%20g%C3%A9nica%20en%20procariontes.pdf de:https://bqexperimental.files.wordpress.com/2010/01/operc3b3n-lac-.pdf
12.Funcionamiento del operón lac de Escherichia coli en presencia y ausencia de lactosa

Sitio de unión de CAP

Es un sitio regulador positivo
al que se une la proteína
activadora de catabolitos
(CAP). Cuando se une CAP a
este sitio, promueve la
transcripción al ayudar a la
ARN polimerasa a unirse al
promotor.
Control Positivo
Equipo 3
Fig. 3 Operón lac, obtenida de :https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-regulation/regulation-of-gene-expression-and-cell-specialization/a/the-lac-operon
13. Describa el mecanismo de regulación de “Represión por
catabolito” en el operón lac de Escherichia coli.

Regulación de la expresión génica en procariontes. Recuperado el 15/Mayo/2022 en: https://www.ucm.es/data/cont/media/www/pag-

56185/23 Regulaci%C3%B3n%20de%20la%20expresi%C3%B3n%20g%C3%A9nica%20en%20procariontes.pdf Equipo 7
14. En el operón lac de Escherichia coli, ¿a qué se refiere el
término “Exclusión del inductor”?

La enzima IIA causa la exclusión

del inductor de lactosa mediante
la unión a la escasa lactosa
permeasa presente en la
membrana celular, lo que
significa que el operón lac no se
puede encender mientras que la
glucosa está siendo
transportada.

Equipo 7
15. Describa brevemente como ocurre la transferencia de material genético a
través del proceso de "Conjugación"
CONJUGACIÓN/THG

Conjugación Bacteriana. Youtube: https://www.youtube.com/watch?

Replicación

v=O5tnmJGL-n4&list=WL&index=84&t=97s
oriT

Genes
Tra

F+ Hfr

CONJUGACIÓN (f+x f-)

 Conjugación Bacteriana. Youtube: https://www.youtube.com/watch?v=O5tnmJGL-
n4&list=WL&index=84&t=97s
Intercambio de información genética. Dr. Gner, M. University of South Carolina.
https://www.microbiologybook.org/Spanish/chapter8.htm
15. Describa brevemente como ocurre la transferencia de material genético a
través del proceso de "Conjugación"

CONJUGACIÓN (F' x f-)

CONJUGACIÓN (Hfr x f-)
 16. A partir del operón lac silvestre de Escherichia coli y de los experimentos efectuados
por Jacob y Monod, indique qué mutantes de este operón se han identificado

- c
Mutación Lac I Mutación Lac 0
Represor Lac Represor Lac

Sitio Sitio
Promotor Operador Lac Z Lac Y Lac a Promotor Operador Lac Z Lac Y Lac a
CAP CAP

ARN ARN
Polimerasa Polimerasa

Imagen de operón lac basadas en Molecular Genetics of Bacteria por Simon F Park , Jeremy W Dale (2010)
Equipo 3

 s Mutaciónes operón lac

Mutación Lac I Mutación Afecta Operón Lac

Alolactosa
Represor Lac Lac I- Represor lac Constitutivo

Lac Oc Operador Constitutivo

Sitio
Promotor Operador Lac Z Lac Y Lac a
CAP
Lac Is Represor lac Reprimido
ARN
Polimerasa

Imagen de operón lac basadas en Molecular Genetics of Bacteria por Simon F Park , Jeremy W Dale (2010)

Equipo 3
 Cis o trans, recesiva o dominante
Alolactosa Plasmido F´ lac
Represor Lac
silvestre
CIS :Generalmente cambia un
Sitio sitio de DNA y afecta SOLO
Promotor Operador Lac Z Lac Y Lac a a este
CAP
Lac Oc
ARN
Trans: La mutación afecta a
Polimerasa
un producto difusible
Lac I-, Lac IS
Recesiva: Esta subordinada al
tipo silvestre, la mutación no
Alolactosa afecta
Represor Lac
Dominante: Aunque este el tipo
silvestre la mutación se ejerce
Sitio
Promotor Operador Lac Z Lac Y Lac a
CAP
ARN
Polimerasa
Mutación lac en el cromosoma
Equipo 3
 17. Mediante un Esquema, indique cuáles son los elementos que conforman al
operón de Triptófano (Operón trp) en Escherichia coli.
Retrieved 17 May 2022, form https://repositorio.cinvestav.mx/bitstream/handle/cinvestav/3258/SSIT0011036.pdf?sequence=1
Salazar Cavazos, E. (2022). Pulsos transcripcionales en el oper´on tript´ofano de Escherichia coli y su efecto en la din´amica
estoc´astica del sistema (Maestría). Centro de Investigación y de Estudios Avanzados del Instituto Politécnico Nacional.

Adaptado por Héctor Daniel Gabriel Almanza, de: El Operón trp. (2017). Retrieved 17 May 2022, from
https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-regulation/regulation-of-gene-expression-and-cell-specialization/a/the- Eq. 3
trp-operon.
(HDGA)
 18. Indique cómo funciona el operón trp de Escherichia coli en presencia y
ausencia de Triptófano intracelular.

En ausencia de triptófano, o cuando hay muy

poco, la proteína reguladora producto del gen
trpR no es capaz de unirse al operador de forma
El gen regulador r produce
un represor inactivo, que que la ARN-polimerasa puede unirse a la región
no puede unirse al promotora y se transcriben los genes del operón
operador
triptófano.
La RNA polimerasa transcribe los
genes estructurales. La traducción
produce las enzimas de la via de la
síntesis de triptófano

-Sadava, David (2008) Vida, La ciencia de la biología, Editorial Médica Panamericana, 8ª edición, pp. 299 Cap. 13.4
-Universidad Computense de Madrid, Regulación de la expresión génica en procariontes, p. 28. Consultado en: https://www.ucm.es/data/cont/media/www/pag-56185/23-
Regulaci%C3%B3n%20de%20la%20expresi%C3%B3n%20g%C3%A9nica%20en%20procariontes.pdf
Equipo 4
-Yanofsky, C. (2007). RNA-based regulation of genes of tryptophan synthesis and degradation, in bacteria. Consultado el 29 de noviembre del 2021 en https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-
expression-and-regulation/regulation-of-gene-expression-and-cell-specialization/a/the-trp-operon
 18. Indique cómo funciona el operón trp de Escherichia coli en presencia y
ausencia de Triptófano intracelular.

En presencia de triptófano, el triptófano se une a la

proteína reguladora o represora cambiando su
conformación, de manera que ahora si puede unirse a
la región operadora y como consecuencia la ARN-
polimerasa no puede unirse a la región promotora y no
El triptófano se se transcriben los genes estructurales del operón trp
une al represor...

... que luego se

une al operador

El triptófano bloquea la unión y la

transcripción de los genes
estructurales por parte de la RNA
polimerasa, evitando la síntesis de
las enzimas de la vía del triptófano

-Sadava, David (2008) Vida, La ciencia de la biología, Editorial Médica Panamericana, 8ª edición, pp. 299 Cap. 13.4
-Universidad Computense de Madrid, Regulación de la expresión génica en procariontes, p. 28. Consultado en: https://www.ucm.es/data/cont/media/www/pag-56185/23-
Regulaci%C3%B3n%20de%20la%20expresi%C3%B3n%20g%C3%A9nica%20en%20procariontes.pdf Equipo 4
-Yanofsky, C. (2007). RNA-based regulation of genes of tryptophan synthesis and degradation, in bacteria. Consultado el 29 de noviembre del 2021 en https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-
expression-and-regulation/regulation-of-gene-expression-and-cell-specialization/a/the-trp-operon
 19.-Describa el mecanismo de "atenuación" que se da en el operón trp de
Escherichia coli en presencia y ausencia de Triptófano intracelular

Región líder:
El mecanismo de
atenuación del operón
trp utiliza señales
codificadas en cuatro
secuencias dentro de
una región líder de 162
nucleótidos en el
extremo 5 del ARNm

Kim H.B,Gadd M.G.(2008).Bacterial Physiology and Metabolism.CAMBRIDGE UNIVERSITY PRESS.1ra edición. Pag. 420-423. Cap.
Equipo 4 Nelson. L.D., Cox.M.M.(2013)Lehninger Principles of Biochemistry.W.
12. H. Freeman and Company.6ta edición. Pag 1167-1168.Cap 28.3
19.-Describa el mecanismo de "atenuación" que se da en el operón trp de

1167-1168.Cap 28.3
Biochemistry.W. H. Freeman and Company.6ta edición. Pag
Nelson. L.D., Cox.M.M.(2013)Lehninger Principles of
Escherichia coli en presencia y ausencia de Triptófano intracelular
Presencia de Trp: La tercera y cuarta regiones forman una
estructura de horquilla. Esta horquilla
se denomina atenuador o terminador.

Equipo 4 Kim H.B,Gadd M.G.(2008).Bacterial Physiology and Metabolism.CAMBRIDGE UNIVERSITY PRESS.1ra edición. Pag. 420-423. Cap. 12.
 19.-Describa el mecanismo de "atenuación" que se da en el operón trp de Escherichia
coli en presencia y ausencia de Triptófano intracelular

Freeman and Company.6ta edición. Pag 1167-1168.Cap 28.3

Nelson. L.D., Cox.M.M.(2013)Lehninger Principles of Biochemistry.W. H.
Ausencia de Trp:

El ARNm líder forma una estructura de horquilla

entre la segunda y la tercera región. Esta
horquilla se conoce como un antiterminador.
Equipo 4
Kim H.B,Gadd M.G.(2008).Bacterial Physiology and Metabolism.CAMBRIDGE UNIVERSITY PRESS.1ra edición. Pag. 420-423. Cap. 12.
Procedimiento
experimental
20. Obtención de los cultivos de
Lactosa: El isómero alolactosa es

Escherichia coli inductor natural del operón lac

Glicerol: Fuente de carbono, no influye

en la regulación del operón lac

Equipo 4
20. Obtención de los cultivos de
Regulador de fosfatos: Eliminar las

Escherichia coli fuentes de carbono para detener el

proceso de transcripción.

Equipo 4
21)Determinación de la actividad de la beta-galactosidasa
Reactivos
-Tolueno
-Regulador de fosfatos
50mM pH 7.3
-Ortonitro fenil
galactopiranósido (ONPG)
20mM

Condiciones
*A=1 a 600nm
*Agitación con vórtex por
2 minutos
-*Baño de hielo
*Lectura de A en
espectrofotómetro a
temperatura ambiente a
420nm
Reacción del ortonitro fenil galactopiranósido

Información consultada de https://www.sigmaaldrich.com/MX/es/product/sigma/n1127 y

de https://mail.google.com/mail/u/0/#inbox/KtbxLzfhcfFZhClBTmDbzDNhbPRPjbhSPL
22)Cinética de inducción y represión catabólica
22)Cinética de inducción y represión catabólica