PRÁCTICA: ENTEROBACTERIACAE

Los miembros de esta familia se caracterizan por ser bacilos Gram negativos y oxidasa
negativos. En la actualidad esta familia se encuentra dentro de un nuevo orden denominado
Enterobacterales cuyo base de datos se encuentra en
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi?id=91347

Fuente: elaboración propia

Además, están relacionados con diversas enfermedades asociadas al tracto gastrointestinal,

neumonías, infecciones urinarias y al consumo de alimentos. Algo importante de resaltar es
que se suele usar como sinónimos Enterobacteriaceae y enterobacterias, lo cual es incorrecto.
Debido a que enterobacterias se refiere a bacterias relacionadas específicamente con intestino
y esto involucra no solo a algunos miembros de esta familia sino a otras bacterias como Vibrio
cholerae y Campylobacter.

Para realizar la identificación de los miembros de esta familia se hará uso de características
bioquímicas propias de su metabolismo como degradación de sustratos y el empleo de
enzimas

OXIDASA

La prueba de oxidasa utiliza ciertos reactivos colorantes como Dihidrocloruro de p-

fenilendiamina, que sustituye al oxígeno como aceptor artificial de electrones. En el estado
reducido el colorante es incoloro, sin embargo, en presencia del citocromo oxidasa C y oxígeno
atmosférico, p-fenilendiamina es oxidado, formando indofenol azul. La prueba ayuda a
discriminar colonias sospechosas de Aeromonas, Pseudomonas, Neisseria, Campylobacter y c
Las colonias bacterianas que tienen actividad de citocromo oxidasa desarrollan un intenso
color azul en el sitio de inoculación en 10 segundos. Cualquier organismo que produce un color
azul entre en más de 60 segundos, debe ser nuevamente probado porque es posible que el
oxígeno ambiental haya actuado sobre el reactivo y sería un falso positivo. Las asas de siembra
o alambre de acero o nicrón no deben ser utilizados en esta prueba porque los productos de
oxidación de sus superficies, formados cuando se flamean para esterilizarlas, pueden resultar
en reacciones falso positivos.

PRODUCCIÓN DE INDOL

La prueba del indol está basada en la formación de un complejo de color rojo cuando el indol
reacciona con el grupo aldehído del p-dimetil amino benzaldehído. Este es el compuesto
químico activo en los reactivos de Kovac’s y Ehrlich’s. Para la realización de esta prueba se debe
utilizar un medio rico en triptófano. En la práctica, se usará el medio combinado como sulfito -
indol - motilidad (SIM). Esta es una prueba importante en la identificación de muchas especies
de microorganismos, siendo particularmente utilizada en separar E. coli (positivo) de miembros
del grupo Klebsiella - Enterobacter - Hafnia - Serratia (generalmente negativos).

Tras la adición del reactivo de Kovac´s se forma un anillo de color rojo fucsia brillante en la
superficie del medio, indicando la presencia de indol y es una prueba positiva.

PRODUCCIÓN DE ÁCIDO SULFHIDRICO

El ácido sulfhídrico es producido por ciertas bacterias a partir de sulfuros contenidos en los
aminoácidos como la cisteína, metionina o por reducción de compuestos sulfurados
inorgánicos como son las tiosulfatos, sulfitos o sulfatos.

El ácido sulfhídrico liberado puede ser detectado por incorporación de una sal de metal pesado
como el hierro en el medio de cultivo (por ejemplo, en el medio SIM), dando coloración negra
por formación de los sulfuros correspondientes.

MOTILIDAD

Esta prueba nos permite determinar si una bacteria es móvil o no móvil. Las bacterias son
móviles por presencia de flagelos. Para la determinación de esta característica usamos el
medio SIM. Las bacterias mótiles se desplazarán en el medio de cultivo semisólido a partir de la
línea de inoculación, observando el medio turbio. Las bacterias no mótiles sólo serán
visualizadas en la línea de siembra.
FERMENTACIÓN BUTELINGLICÓLICA (PRUEBA DE VOGES – PROSKAUER)

El piruvato formado en la degradación fermentativa de la glucosa es metabolizado a través de

un número de vías metabólicas, dependiendo de los sistemas de enzimas que poseen las
diferentes bacterias. Una de estas vías, la fermentación butelinglicólica, resulta en la
producción de acetoína (acetil - metil - carbinol), un producto final neutro. Organismos como
los miembros del grupo Klebsiella, Enterobacter, Hafnia y Serratia, producen acetoína como el
principal producto final del metabolismo de glucosa y forman menor cantidad de ácidos
mixtos. En presencia del oxígeno atmosférico e hidróxido de potasio al 40%, la acetoína es
convertida a diacetilo, y el alfa naftol sirve como catalizador para resaltar un complejo de color
rojo. Para este caso se usará el caldo RM – VP.

Una prueba positiva es representada por el desarrollo de un color rojo entre 10 y 15 minutos,
pero no debe exceder los 30 minutos de lectura tras añadir los reactivos, indicando la
presencia de diacetilo, el producto de oxidación de acetoína.

FERMENTACIÓN ÁCIDO MIXTA

La prueba del rojo de metilo es una prueba que detecta la producción de ácidos resultantes de
la vía de fermentación ácido mixta. Para ello se requiere que los organismos positivos generen
ácidos fuertes como láctico, acético, fórmico a partir de glucosa. Muchas especies de
Enterobacteriaceae pueden producir suficiente cantidad de ácidos fuertes que son detectados
por el indicador rojo de metilo durante la fase inicial de incubación, solamente los organismos
que puedan mantener este pH bajo aproximadamente 4.2 (después de una incubación
prolongada de 48 a 72 horas), superan el pH del sistema tamponado del medio y pueden ser
llamados Rojo de Metilo positivos.

Para este caso también se hace uso del caldo RM – VP. Además, se debe tener en cuenta que si
un miembro de esta familia es positivo para la prueba de rojo de metilo será negativo para la
prueba de Voges Proskauer y viceversa.

El desarrollo de un color rojo estable en la superficie del medio indica una producción de
acidez menor que pH 4.2 y constituye una prueba positiva. Otros organismos pueden producir
menores cantidades de ácido a partir del sustrato se puede desarrollar un color naranja,
intermedio entre amarillo y rojo. Esto no indica una prueba positiva.

FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS (AGAR TRIPLE AZÚCAR HIERRO)

Los microorganismos capaces de fermentar glucosa, sacarosa y lactosa son comúnmente

detectados por la observación de las reacciones que producen cuando crecen sobre agar Triple
Azúcar Hierro (TSI, siglas en inglés). Una reacción alcalina (no cambio de color) en la sección
inclinada del agar, ni en el fondo (en cualquiera de estos medios), indica una falta de
producción de ácidos y una incapacidad del organismo probado para fermentar la glucosa y los
otros
carbohidratos presentes. Esta reacción sola es suficiente para excluir un organismo de la familia
Enterobacteriaceae.

La incorporación de 4 proteínas derivadas de extracto de carne, extracto de levadura, peptona

y proteosa peptona hacen al TSI nutricionalmente muy rico. La falta de inhibidores permite el
crecimiento de casi todas las especies bacterianas más fastidiosas (excluyendo los anaerobios
obligados).

Por esta razón, el agar TSI puede ser usado sólo cuando una especie bacteriana a probar es
recuperada de una sola colonia que creció en placas de agar selectivo o primario. La lactosa
está presente en una concentración 10 veces más que la glucosa (similarmente, la tasa de
sacarosa/glucosa es 10:1 en TSI). El sulfato ferroso es un detector de H2S menos sensible que
otras sales férricas o ferrosas.

El indicador rojo de fenol es amarillo bajo un pH 6.8, debido a que el pH del medio no
inoculado es tamponado a pH 7.4, cantidades relativamente pequeñas de producción de ácido
resultan en un visible cambio de color.

Los tipos de reacciones que se pueden dar son:

No fermentadores: Alcalino en el pico de flauta / Alcalino en la profundidad (K/K)

No fermentadores de lactosa, sólo fermentan glucosa: Alcalino en el pico de flauta/ Acido en

profundidad (K/A)

Fermentadores de lactosa, sacarosa y glucosa: Acido en pico de flauta / Acido en la

profundidad (A/A)

La configuración del agar solidificado inclinado resulta esencialmente en 2 cámaras de reacción

dentro del mismo tubo. La porción inclinada, expone toda su superficie al oxígeno atmosférico
y es aeróbico, mientras que la porción inferior está protegida del aire y es relativamente
anaeróbica. Es importante, cuando se prepare el medio, que tanto el lado inclinado como la
profundidad tengan igual longitud (aproximadamente 3 cm), de modo que este efecto de doble
cámara sea preservado.

PRODUCCIÓN DE UREASA

La urea es una diamina de ácido carbónico y todas las amidas son fácilmente hidrolizadas con la
liberación de amonio y dióxido de carbono.

La enzima ureasa presente en muchas especies de microorganismos hidroliza la urea de la

siguiente manera:
El amonio reacciona en solución para formar carbonato de amonio, resultando en
alcalinización e incremento del pH del medio.

El caldo urea de Stuart es uno de los medios más comúnmente utilizados en laboratorios
clínicos para la detección de la actividad de ureasa.

Los organismos que hidrolizan rápidamente la urea pueden producir reacción positiva en 1 o 2
horas, especies menos activas pueden requerir 3 o más días. El cambio a color fucsia es
positivo y amarillo es negativo.

USO DE CITRATO

El uso del citrato por una bacteria es detectado en el medio citrato por la producción de
productos secundarios alcalinos. El medio incluye citrato de sodio como única fuente de
carbono y fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno de la sal de amonio, conduciendo
a la alcalinización del medio desde la conversión de NH4+ a hidróxido de amonio (NH4OH). El
azul de bromotimol, amarillo a pH menor de 6.0 y azul de pH mayor de 7.6 es el indicador. El
medio citrato más comúnmente usado es la fórmula de Simmons. El medio es vertido en tubo
con el agar inclinado.

En una prueba positiva se observa el desarrollo de un color azul intenso entre las 24 a 48 horas
(lo cual indica que el organismo probado ha sido capaz de utilizar el citrato contenido en el
medio, con la producción de productos alcalinos) o también puede ser leída como tal, si hay un
crecimiento colonial visible en la línea de inoculación (sin necesidad del color azul).

DESCARBOXILACIONES

Muchas especies bacterianas poseen enzimas capaces de descarboxilar aminoácidos

específicos en el medio de cultivo, lo cual libera aminas de reacción alcalina y CO2 como
productos. Un número de sistemas de prueba han sido descritos para medir esta propiedad,
basada tanto en la detección de un cambio del pH a alcalino en el medio de cultivo, como por
la medición directa de los productos de la reacción.
La actividad de la descarboxilasa en esta familia es mayormente medida en los laboratorios de
microbiología clínica con el caldo de Moeller. El punto final de la reacción es la producción de
un cambio de pH a alcalino en el medio y el desarrollo de un color azul - púrpura luego de la
incubación con el organismo probado. El Medio Moeller esta tamponado a pH 6.0, esto es más
ácido que la mayoría de los medios de cultivo. Este pH bajo es necesario porque las enzimas
descarboxilasas no son óptimamente activas hasta que el pH del medio caiga por debajo de
5.5.

La caída de 6.0 a 5.5 se produce por el crecimiento de la bacteria, la cual utiliza la pequeña
cantidad de glucosa en el medio para producir los ácidos mixtos. Un tubo control, carente de
aminoácidos, puede ser incluido para asegurarse que esta caída inicial del pH ha ocurrido. Un
cambio de color a amarillo en el indicador púrpura de bromocresol del tubo control, muestra
acidificación. El piridoxal fosfato es incluido en el medio y actúa como una coenzima para el
posterior aumento de la actividad descarboxilasa.

La prueba de descarboxilación de la Lisina que será realizada en el agar Lisina Hierro (LIA, siglas
en inglés) es útil para diferenciar especies Citrobacter lactosa negativas (0% positivas) de las
especies de Salmonella (94.5% positivos).

La conversión del color del medio a amarillo en el fondo del tubo y lila en el pico de flauta
indica lisina descarboxilasa negativo. El cambio de color a un lila más fuerte en el pico de flauta
y fondo del tubo indica que es positivo, es decir descarboxilación de lisina.

OBJETIVOS

1. Identificar mediante pruebas bioquímicas convencionales la cepa perteneciente a la

Familia Enterobacteriaceae.

PROCEDIMIENTO PARA COLORACIÓN DE GRAM

Materiales
✔ Cepa para identificar
✔ 1 tubos con Pseudomonas
✔ 1 tubo con agar TSI
✔ 1 tubo con agar LIA
✔ 1 tubo con agar Citrato
✔ 1 tubo con medio SIM
✔ 1 tubo con caldo Urea
✔ 2 tubos con caldo RM – VP
✔ Asas de siembra en aro y en punta
✔ Papel filtro
✔ 2 hisopos o mondadientes estériles
✔ Reactivos: oxidasa (primer día), Kovac´s, rojo de metilo, alfa naftol, KOH 40% con
creatina (segundo día)
Procedimiento
1. Las pruebas y siembras se realizarán de acuerdo con lo visualizado en el video
proporcionado
2. Realizar la prueba de oxidasa con las cepas de Pseudomonas y las 2 cepas a identificar.
3. Realizar las siembras en los medios de TSI, LIA, citrato, SIM, caldo MR VP y urea de las 2
cepas a identificar.
4. Los medios sembrados serán incubados a 37°C por 24 horas.
5. Tras la incubación, se realizará la lectura y en los casos que amerite la adición de reactivos.
6. Completar los datos obtenidos en el formato para informe y usar la tabla para
identificación de las cepas. También puede usar el programa ABIS. Recomendación
comparar la identificación con ambas herramientas.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Koneman E, Allen S. Koneman. Diagnóstico Microbiológico: Texto Y Atlas En Color. 7 ed. Madrid:
Médica Panamericana; 2008.
 PRÁCTICA: Familia Enterobacteriaceae

ALUMNOS:

GRUPO:

RESULTADOS (4 puntos)

EJERCICIO: Identificación de cepas familia Enterobacteriaceae

En la tabla dibujar los resultados obtenidos para cada cepa, asimismo colocar la lectura de
resultados (no interpretación)

DESCA R VOGE U
RBOXIL O S R
ACIÓN J PROS E
O KAUE A
CÓDIGO BACTERIA
D R S
E A
M
E
TI
L
O

Cepa

Pseudomonas
TSI (positivo) LIA (descarboxilacion Citrato (negativo) Fermentacion Acido
positiva) mixta (negativa)

Fermentacion SIM UREA(negativo9

Butenilglicolica indol(positivo)
(negativo) ácido sulfhídrico
(positivo)
motilidad(positivo)

DISCUSIÓN DE RESULTADOS (8 puntos)

La discusión debe basarse en las características bioquímicas que presenta cada una de las
bacterias identificadas de acuerdo con sus resultados. No olvidarse de la Pseudomonas en el
caso de oxidasa.
1. Oxidasa(v)

Esta prueba se utilizó para determinar la presencia de la enzima oxidasa, la cual se debe a
la presencia de un sistema citocromo c oxidasa que activa la oxidación del citocromo que
se reduce en oxígeno o peróxido de hidrógeno (1). Este mecanismo se encuentra
mayormente en las bacterias aeróbicas capaces de utilizar el O2 como aceptor final de
hidrogeno para reducir el O2 en peróxido de hidrógeno (2), el último enlace de la cadena
de la respiración aeróbica. Es por ello por lo que la reacción oxidasa positiva está limitada
tanto por los organismos capaces de desarrollarse en presencia de oxígeno y lo que no
tienen la enzima. Para esto se utilizan colorantes artificiales como, el dimetil p-fenilen-
diamina, que sustituyen al oxígeno como aceptor de electrones artificial. En el estado
reducido el colorante es incoloro, sin embargo, en presencia de citocromo oxidasa el
colorante es oxidado formando un compuesto azul (indofenol) (2). En el caso de las
Pseudomonas el resultado fue positivo y esto se debe a la actividad de la enzima
citocromo oxidasa característico de estas, donde el colorante es oxidado y se observa por
tanto la coloración azul. No obstante en el caso de las enterobacterias no se observa el
cambio de coloración del papel y esto se debe a que no presenta el citocromo oxidasa c y
por ende no oxido el reactivo de fenilendiamina
(https://dadun.unav.edu/bitstream/10171/58506/1/Tesis_Ojer15.pdf )

https://espanol.libretexts.org/Biologia/Microbiolog%C3%ADa/Manual_de_microbiolog%C3%ADa_general/07%3A_Metodos_de_identificacio
n_de_microorganismos/7.05%3A_Enzimas_Respireatorias .

http://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/52389/Documento_completo.pdf?sequence=1&isAllowed=y

https://www.lifeder.com/prueba-de-oxidasa/

https://issuu.com/rubenantonio5/docs/revista_microbiologia_pruebas_bioqu

2. TSI(v)
El medio de cultivo permite la identificación de Enterobacterias mediante la detección
rápida de la fermentación de la glucosa, lactosa y sacarosa, así como por la producción
de sulfuro de hidrógeno. Está conformado principalmente por tres azúcares lactosa (1%)
sacarosa(1%) y glucosa (0.1%) asimismo por peptonas, sulfato ferroso y rojo fenol. Cada
uno de ellos determinará diferentes reacciones de acuerdo con las necesidades de la
bacteria estudiada. Por una lado la capacidad de fermentar glucosa es característico de la
 familia Enterobacteriaceae y ello se puede evidenciar mediante la observación de las
reacciones que se producen en este medio. La degradación del azúcar con formación de
ácido, se detecta por el viraje a amarillo en el indicador (rojo fenol) mientras que ante
una reacción de alcalinización cambia a rojo vino. Para el caso que solo se degrade
glucosa preferentemente por esta bacteria, la producción del ácido es débil, y se evapora
en la superficie, permitiendo la re-oxidación del indicador, con lo que queda una
superficie alcalina (roja) y un fondo amarillo (ácido) . En cambio si se fermenta la lactosa
o la sacarosa en caso que ya la glucosa se ha terminado, la producción de ácido es mayor
y todo el medio queda amarillo. Por otro lado si se observa la coloración roja vino lo cual
se pudo observar en los resultados es debido a que al terminar los suministros de
carbohidratos en la parte superficial la cual es más vulnerable debido al consumo de
oxígeno (parte aerobia) es más propenso a que comience a utilizar como suministro a
otros componentes del medio como son las peptonas las cuales alcalinizan el medio
liberando residuos de nitrógeno. Asimismo la producción de acido sulfhídrico, ya sea a
partir del tiosulfato o de los aminoácidos azufrados de las peptonas se observa mediante
la formacion de precipitados negros SFe debido a que posee un indicador el sulfato
ferroso. Por último se observó la presencia de gas y esto es debido al producto de la
fermentación de la glucosa, el ácido fórmico.
- Mecanismo de producción de gas
Formicoliasa

HCOOH (ácido fórmico)----------------------> CO2+H2

- Producción del sulfuro ferroso

3. LIA(v)

4. Citrato

La prueba del citrato tiene como fin determinar la capacidad de un microorganismo para
 crecer en un medio que solo contiene citrato como fuente de carbono. Los
microorganismos suelen utilizar la energía proporcionada por la fermentación o la
producción de ácido láctico; sin embargo, ciertas bacterias son capaces de metabolizar
el citrato para desarrollarse cuando su medio no presenta azúcares. Las bacterias
metabolizan el citrato a través de la vía del ácido tricarboxílico o la fermentación del
citrato, dicho proceso se lleva a cabo gracias a la presencia de enzimas bacterianas como
la citrato oxalacetato liasa, el cual requiere de un cofactor para su activación (magnesio
o manganeso), o la citrato desmolasa(1). Las bacterias que utilizan el citrato como
fuente de energía, también son capaces de utilizar las sales inorgánicas de amonio del
medio como su única fuente de nitrógeno, ambos procesos alcalinizan el medio; es por
ello, que el medio cambia de color verde a azul, cambio que es posible distinguir
debidoa al indicador de pH llamado azul de bromotimol (2). Sin embargo, la bacteria en
estudio en este laboratorio, Edwardsiella tarda, no demostró dicha capacidad, pues el
color verde del medio se mantuvo de principio a fin, lo cual es un gran indicador de que
nuestra bacteria no es capaz de utilizar el citrato como fuente principal de carbono, por
ende, no logra desarrollarse en medio que no presenten azúcares como lactosa, glucosa
y sacarosa.

5. SIM

Medio SIM, otra de las pruebas aplicadas para el reconocimiento de características

bioquímicas bacterianas, tiene como finalidad observar la producción de indol, ácido
sulfhídrico y motilidad. El medio de cultivo SIM, presenta inicialmente un color
blanquecino, además es de consistencia semisólida, tal como se observó antes de
colocar los reactivos a la muestra. Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa
tienen la capacidad de hidrolizar así como deaminar triptofano, esas dos reacciones
producen tanto indol, piruvato y amoniaco. Para detectar producción de indol se le
agrega al medio p-dimetilaminobenzaldehido también conocido como reactivo de
Kovac, por el cual se formará un halo rojo en la parte superior del tubo al reaccionar con
el grupo aldehído del reactivo en caso sea positivo. La bacteria Edwardsiella tarda por
ejemplo reaccionó con el reactivo Kovac dando como resultado un halo rojo, por lo que
se puede confirmar la producción de indol por parte de esta bacteria; dada la
desaminación del triptófano, por parte de la triptofanasa. Por otro lado mediante esta
prueba es posible reconocer también la producción de ácido sulfhídrico, se conoce que
algunos organismos reducen el tiosulfato de sodio mediante la tiosulfato reductasa, esta
reaccion genera una produccion de acido sulfhídrico el cual al combinarse con el hierro
presente forma un precipitado de color negruzco. Es mediante la observación del color
negro en la parte media inferior del tubo que se puede concluir que la bacteria produce
acido sulfhídrico. Sin embargo; se debe considerar que el color negro tambien puede ser
resultado de la produccion de melamina por parte de algunas bacterias como la M.
Morganii, por lo que se debe estar seguro que el cultivo es puro, no obstante no es el
caso en esta práctica, de igual manera se muestra como una limitación x. La motilidad,
una de las otras características a evaluar, pudo ser reconocida gracias a al agar y su
propiedad solidificante; dado que al tener una consistencia semisólida permite el
crecimiento por zonas distintas al sitio de siembra, es importante tener en cuenta que
para poder observar la presencia de motilidad la siembra es realizada mediante la
introducción de un asa recta en el tubo (en un ángulo de 90° con la base); puesto que,
esto permite observar si hubo crecimiento o no fuera de esa área. x

Laboratorios Britania s.a. B0213905. MR-VP Medio [Internet]. Buenos Aires:

Laboratorios Britania s.a.; 2012 [consultado el 20 de abril de 2023]. 2. Disponible en:

https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6070922459b84.pd
f

https://mdmcientifica.com/wp-content/uploads/2021/03/IS-24-SERIES-DE-IDENTIFIC
ACION-BIOQUIMICA.pdf

MR VP (d)

La prueba de Rojo de Metilo y Voges Proskauer se utiliza en microbiología para la

identificación de una característica taxonómica principal de las bacterias, el cual es el
tipo y la proporción de fermentación de glucosa. Existen dos vías de fermentación que
pueden seguir las bacterias, la fermentación ácido mixta y la fermentación
2,3-butanediol. En primer lugar, la cadena de reacciones de la fermentación ácida mixta
se forma: ácido acético, ácido láctico, ácido succínico, etanol, dióxido de carbono
hidrógeno gaseoso pero no butanodiol (brook), dicha producciòn de 3 ácidos aumenta la
acidificaciòn del medio, manteniendo un pH en un rango de 4.2 a 6.3 (2). El caldo en el
cual se inoculan las bacterias suelen tornarse de colores entre un rojo claro hacia un
amarillo, debido a la acidez del medio, las principales especies conocidas por realizar
este tipo de fermentación son la Escherichia, Salmonella, Shigella, y Proteus . En cuanto
a la fermentación de 2,3-butanediol, las bacterias que toman esta vía fermentativa de
 glucosa producen pequeñas cantidades de ácido y la principal formación es la del
butanediol, seguido de etanol, dióxido de carbono e hidrógeno gaseoso (brook); la
acetìna producida en esta vía de fermentación se une al alfa-naftol para formar un
complejo de color rojizo en el medio, pues al contar con poca cantidad de ácidos
presente este no se acidifca al nivel de virar su color a amarillo (2). Las principales
especies reconocidas que realizan esta vía fermentativa son las Enterobacter, Klebsiella y
Serratia. Nuestra bacteria de interés, Edwardsiella tarda, reaccionó al rojo de metilo al
tornar su medio totalmente amarillo y la zona de arriba de un color rojizo, lo cual nos
indica un cambio en el pH, debido a la producción de ácido, por tanto, se llegó a la
conclusión que la vía de fermentación que utiliza esta bacteria es la de ácido mixta.

6. Urea (d)

El agar urea se utiliza para diferenciar bacterias que tengan la propiedad de producir
ureasa. Las bacterias que producen ureasa son capaces de hidrolizar el medio al formar
dióxido de carbono y amoniaco, dichas formaciones reaccionan con el medio al
alcalinizar y virarlo al color rojo-rosado, cuando previamente el color del medio fue
amarilo, este cambio es posible de observar gracias a la presencia de un indicador de pH
llamado rojo fenol en el agar urea. En cuanto a la degradación existen bacterias que
logran degradar con mayor velocidad a la urea y estos tornan el medio de un rojo
intenso; y otras que degradan con menor velocidad y solo tornan el medio de un color
rosa claro en el pico del tubo y gradualmente con el pasar de las horas se va
extendiendo por todo el tubo (2). Cabe recalcar, que la enzima ureasa le confiere cierta
protección a la bacteria frente al ácido de la mucosa gástrica y puede ser utilizado como
fuente de nitrógeno para el desarrollo de la bacteria (3). En este laboratorio la bacteria
de interés, Edwardsiella tarda, no viró el color de su medio, lo cual es un indicador de
que no hubo cambios en su pH, por tanto no produce la enzima ureasa.

CONCLUSIONES (deben estar relacionadas a sus resultados y los objetivos de la práctica) – 6

puntos.

Identificar mediante pruebas bioquímicas convencionales la cepa perteneciente a la Familia

Enterobacteriaceae.

● De acuerdo a los resultados obtenidos en cada una de las pruebas bioquímicas para
identificar a la cepa con la que se inoculó cada agar, se concluyó que la especie estudiada
fue la Edwardsiella tarda; puesto que, la revisión de la literatura acerca de las principales
 características taxonómicas de esta bacteria se encontraron coincidencias en cuanto a lo
que se obtuvo en cada prueba. En primer lugar, la prueba TSI nos indicó que la bacteria
fermenta glucosa al 100%, produce gas de glucosa y forma ácido sulfhídrico en su medio.
En la prueba de LIA se identificó que la bacteria realiza la descarboxilación de la lisina, en
la prueba SIM, se encontró que la bacteria tiene motilidad, es positiva en bajos niveles al
indol y también que produce ácido sulfhídrico. En cuanto a las prueba de citrato y urea, se
observó que la bacteria no es capaz de producir ureasa y que no es capaz de utilizar el
citrato como fuente de energía; es decir, que para el desarrollo de nuestra bacteria de
interés es necesario la presencia de glucosa. Finalmente el tipo de fermentación en la que
fue positiva nuestra bacteria fue al Rojo de Manitol. Todas las características mencionadas
reafirman que la sepa trabajada fue la Edwardsiella tarda.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS (citar de acuerdo con normas Vancouver, mínimo 2

referencias) – 2 puntos.

1. Macfaddin JF. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia

clínica. 3a ed. Editorial Médica Panamericana; 2003.[citado el 21 de abril de 2023].
Disponible en:
https://books.google.es/books?hl=es&lr=&id=FYWSzy7EjR0C&oi=fnd&pg=PA1&dq=prueb
a+dnasa+&ots=RPRHVfNcUt&sig=uip5_IBeM3C9zkk0XXvL-5Qa1WU#v=onepage&q&f=tru
e
2. SERIE DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA (UREA, CITRATO, LISINA, SIM Y TSI) Kit x ​unidad,
10 unidades, 20 unidades de medio de cultivo en tubo, listos para usar [Internet].
www.mdmcientifica.com. [citado el 21 de abril de 2023]. Disponible en:
https://mdmcientifica.com/wp-content/uploads/2021/03/IS-24-SERIES-DE-IDENTIFICACI
ON-BIOQUIMICA.pdf
3. Alarcón T., Baquero M., Domingo D., López-Brea M., Royo G,. Procedimientos en
Microbiología Clínica [Internet]. www.seimc.org. [citado el 22 de abril de 2023].
Disponible en:
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologi
a/seimc-procedimientomicrobiologia17.pdf
4. Madigan MT, Bender KS, Buckley DH, Martinko JM, Stahl DA. Brock biology of
microorganisms. 15a ed. Upper Saddle River, NJ, Estados Unidos de América: Pearson;
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