Unidad 3:
Estequiometría del crecimiento microbiano y
formación de productos
En el biorreactor se produce la conversión de los
sustratos para obtener biomasa y productos de
interés industrial
Sustratos Biorreactor o
fermentador
Biomasa
Productos
El estudio de la “estequiometría del crecimiento microbiano”
permitirá:
1. Formular adecuadamente un medio de cultivo.
2. Calcular rendimientos: saber cuanto producto es posible obtener
a partir de una cierta cantidad de sustrato (importante en el costo
del proceso).
3. Realizar balances de materia y energía.
Darán cuenta de las transformaciones que se están
llevando a cabo en un biorreactor
3
Para el estudio de la estequiometría es necesario
plantear el crecimiento microbiano como si fuera una
reacción química común:
Ej
aA +bB → c C + d D + calor
Sustratos Productos
Para el crecimiento microbiano se requiere un medio de cultivo que
contenga:
Fuente de carbono y energía (FCE ej azúcares).
Fuente de nitrógeno (amoníaco, nitrato).
Componentes Oxígeno.
de un medio
Fósoforo (PO43-), azufre (SO4=,), potasio, magnesio,
de cultivo
(nutrientes) calcio, hierro.
Micronutrientes (Co, Cu, Mn, Zn, etc.).
Factores de crecimiento: Vitaminas.
Los que serán los
sustratos de la
reacción
Células
Productos de Algún producto
la reacción
CO2
H2O
Considerando únicamente aquellos componentes del medio de
cultivo que se consumen en forma notoria , la ecuación de
crecimiento microbiano será:
FCE + Fte.de N + O2 → biomasa + producto + CO2 + H2O + calor
Modelo de caja negra
Esquema del crecimiento celular según el modelo de caja negra.
1. Fórmula molecular de un microorganismo promedio:
Concepto de C-mol
Tomado de Principles of Fermentation Technology (Stanbury
P. F. y col.)
Microorganismo promedio
Composición elemental de cualquier microorganismo:
% p/p
C = 46,5
H = 6,94
O = 31
N = 10,85
Cont. de sales = 5
Fórmula centecimal: C3,87H6,94 O1,93N0,775 - Fórmula Mínima : C H1,79 O0,5 N0,2
C-mol de biomasa: cantidad de biomasa (g) que contiene 1 átomo gramo de
carbono
El peso molecular de 1 C-mol de 12 + 1,79 + 16 ⋅ 0,5 + 14 ⋅ 0,2
= 25,8 g
biomasa será = 0,95
1 C-mol de biomasa = 25,8 g
C-mol de cualquier sustancia
1 C-mol de cualquier sustancia: cantidad de esa sustancia que
contiene un átomo gramo de carbono (12 g de carbono)
Ej:
glucosa: C6H12O6 PM= 180 g/mol
1 c-mol de glucosa: CH2O PM= 30 g/c-mol
Ej. ¿Cuántos C-moles hay en 5 g de penicilina (C16H24O4N2S)?.
1 c-mol: 21,25 g/c-mol
5 g: 0,235 c-mol
2. Ecuación de crecimiento microbiano generalizada
Ecuación de crecimiento basada en un C-mol de fuente de carbono y energía:
CHa1Ob1Nc1 + a NH3 + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CHa2Ob2Nc2 + yco2/s CO2 + w H2O + q
Siendo:
a = moles de la FN consumida por cada C-mol de FCE consumida.
b = moles de la O2 consumido por cada C-mol de FCE consumida.
yx/s = C-moles de biomasa formada por cada C-mol de FCE consumida.
yp/s = moles de producto formado por cada C-mol de FCE consumida.
yCO2/s = moles de CO2 formado por cada C-mol de de FCE consumida.
q = Kcal produc./c-mol de FCE cons.
yx/s, yp/s, yCO2/s son los “rendimientos” expresados en C-moles.
Para calcular los coeficientes de rendimiento se deben medir todas las
variables del cultivo: biomasa, FCE, velocidad de consumo de oxígeno y
producción de CO2, concentración de producto.
3. Rendimientos
Rendimiento: se define como la relación entre el producto obtenido
y el sustrato consumido (FCE).
Yx/s = ∆x/∆s (g de biomasa obtenida/g de FCE consumida)
Yp/s = ∆p/∆s (g de producto obtenido/g de FCE consumida)
Yo2/s = moles de oxígeno consumido/g de FCE consumida
Estos son los rendimientos experimentales y representan la cantidad
de producto formado respecto al sustrato total consumido.
Dan una medida de la eficacia de conversión del sustrato en biomasa
y productos.
4. Grado de reducción
Grado de reducción (γ): número de electrones que se transfieren al oxígeno
cuando se oxida 1 C-mol de un compuesto dado.
Combustión de 1 C-mol de diferentes compuestos en condiciones estándar y pH 7
(adaptado de J.A.Roels)
Comp. Reacción γ q (Kcal/C-mol) q0 = q/γ
Metano CH4 + 2 O2 → CO2 + 2 H2O 8 213,4 26,7
Etanol CH3O0,5 + 3/2 O2 → CO2 + 3/2 H2O 6 163,8 27,3
Glucosa CH2O + O2 → CO2 + H2O 4 111,0 28
Ac.fórmico CH2O2 + ½ O2 → CO2 + H2O 2 61,0 30,5
Cálculo de γ
CHaObNc + n O2 → g CO2 + w H2O + k NH3
Cada molécula de oxígeno capta 4 electrones, por lo tanto el número de
electrones que son transferidos al oxígeno será:
γ= 4n
Siendo:
n = moles de oxígeno necesarios para oxidar completamente 1 C-mol
de un compuesto.
Haciendo balances de cada uno de los elementos (C, O, N, etc) se obtiene la
ecuación general del grado de reducción de cualquier compuesto:
γNH3 = 4 n = 4 + a - 2 b – 3 c
Ejémplo:
Biomasa CH1,8O0,5N 0,2 γx = 4,19
Se ha encontrado que el contenido energético de los compuestos orgánicos
está relacionado con el grado de reducción.
Comp. Reacción γ q (Kcal/C-mol) q0 = q/γ
Metano CH4 + 2 O2 → CO2 + 2 H2O 8 213,4 26,7
Etanol CH3O0,5 + 3/2 O2 → CO2 + 3/2 H2O 6 163,8 27,3
Glucosa CH2O + O2 → CO2 + H2O 4 111,0 28
Ac.fórmico CH2O2 + ½ O2 → CO2 + H2O 2 61,0 30,5
q0: calor liberado por mol de electrones transferidos al oxígeno = constante.
q0 = q/γ = 27,5 Kcal/mol de e- transf. al o2
Esto implica que γ es una medida de la energía contenida en un compuesto
q. = γ . q0
Así 1 C-mol de etanol brinda mas energía que 1 C-mol de glucosa.
5. Balances de materia y energía
5.1. Balance de materia en la ecuación de crecimiento
El crecimiento microbiano obedece a ley de conservación de la materia.
Todos los C, H, O, N, consumidos durante el crecimiento se incorporan a las
nuevas células o se liberan como productos.
CHa1Ob1 + a NH3 + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CHa2Ob2Nc2 + yco2/s CO2 + w
H2O + q
Balance de carbono:
1 = yx/s + yp/s + yco2/s (ec.1)
Balance de nitrógeno:
a = yx/s . 0,2 + yp/s . C2 (ec.2)
Si la fuente de nitrógeno fuese urea ( NH2CONH2 ):
balance de C: 1 + a = yx/s + yp/s + yco2/s
balance de N: 2 a = yx/s . 0,2 + yp/s . c2
5.2. Balance de grado de reducción
El número de electrones disponibles se conservan durante el metabolismo.
CHa1Ob1 + a NH3 + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CHa2Ob2Nc2 + yco2/s CO2 + w
H2O + q
nº de electrones a la izquierda = nº de electrones a la derecha
γs + a γNH3 - 4 . b = γx . yx/s + γp . yp/x
Siendo γNH3 = 0 y dividiendo por γs se 4b γ γ
p
obtiene:
+ y x
+ y =1
γ γ
s s
x/s
γ
s
p/s
ε + η + ξ = 1
Si multiplicamos y dividimos ambos miembros por q0 se obtiene que ε, η y
ξ representan la fracción de energía (de la FCE) transferida al oxígeno, a la
biomasa y al producto respectivamente.
Las ecuaciones de balance de carbono y grado de reducción permiten
comprobar la consistencia de los datos experimentales y verificar si las
determinaciones han sido correctas.
En un cultivo microbiano, tanto el balance de carbono como el de grado de
reducción tienen que dar 1.
Medidas realizadas en el laboratorio se deben encontrar dentro de los
intervalos:
0,94 ≤ yx/s + yp/s + yco2/s ≤ 1,06
0,93 ≤ ε + η + ξ ≤ 1,07
Si hay un producto y no se lo está midiendo los dos balances darán valores < 1.
6. Rendimientos máximos teóricos
1 = yx/s + yp/s + yco2/s
Para obtener el máximo rendimiento para la producción de biomasa se
puede considerar que no se forma producto ni CO2 por lo tanto a partir
del balance de carbono:
Del balance de carbono:
yx/smt = 1
Del balance de grado de reducción se puede considerar que todos los
electrones de la FCE van a parar a la biomasa, es decir:
4b γ γ
p
+ y x
+ y =1
γ γ s s
x/s
γ
s
p/s
Del balance de grado
de reducción: yx/smt = γs/γx
mt = yx/smt = γs/γx
yx/s 1
De los dos rendimientos se usará aquel que sea menor, según el valor
de γs
a) Cuando:
γs < γx ⇒ yx/smt = γs/γx
b) Cuando:
γs > γx ⇒ yx/smt = 1
7. Calor producido en un cultivo microbiano
Las células utilizan la energía química de manera bastante eficiente
pero, es inevitable el desprendimiento de calor.
El crecimiento de cultivos aerobios se puede representar por:
CHa2Ob2Nc2 + a NH3 + b O2 → yx/s biom. + yp/s prod. + yco2/s CO2 + ∆HR
∆HR = calor producido por cada c-mol de FCE consumida (asociado al
metabolismo celular). Diferencia de entalpía entre productos y reactivos.
En los procesos a gran escala, el calor desprendido durante la reacción
puede causar la muerte de las células o la desnaturalización de las
enzimas si no se elimina rápidamente.
El principio de conservación de la energía es aplicable a bioprocesos.
Realizando un balance de entalpía en la ecuación de crecimiento microbiano:
CHa2Ob2Nc2 + a NH3 + b O2 → yx/s biom. + yp/s prod. + yco2/s CO2 + ∆HR
∆Hs = yx/s ∆Hx + yp/s ∆Hp + ∆HR
Despejando ∆HR = ∆Hs - yx/s ∆Hx - yp/s ∆Hp
Recordando que el contenido energético de los compuestos orgánicos está
relacionado con el grado de reducción mediante la ecuación qi = q0 . γi sería:
∆Hs = qs = γs q0 - ∆Hx = qx = γx q0 - ∆Hp = qp = γp q0
∆HR = γs q0 - yx/s γx q0 - yp/s γp q0 (ec. I)
4b γ γ
p
A partir del balance de grado de reducción + yx
+ y =1
γ γ
s s
x/s
γ
s
p/s
Despejando 4 b y multiplicando ambos miembros por qo:
4 b q0 = γs q0 - yx/s γx q0 - yp/s γp q0
Por analogía con la ec. I 4 b q0 = ∆HR
En cultivos aerobios, la cantidad de energía desprendida durante la reacción
(∆HR) se puede calcular conociendo el valor de b.
En cultivos anaerobios: El calor de reacción (∆HR) se calcula mediante
el balance de entalpía:
∆HR = ∆Hs - yx/s ∆Hx - yp/s ∆Hp
8. Balance de energía en un biorreactor
En los balances de energía de los fermentadores los efectos energéticos
que se consideran son: el calor de reacción y el trabajo mecánico.
Ws
∆Hp
∆Hs Fermentador
∆Hx
Q
∆E = ∆Hs - ∆Hp - ∆Hx - Q + Ws
∆Hp = entalpía de producto.
∆Hx = entalpía de biomasa Siendo: ∆HR
∆Hs = entalpía de sustrato
∆E: representa el cambio total o acumulación de energía en el sistema.
Ws: representa el trabajo mecánico.
Considerando que no se acumula calor en el sistema:
∆HR - Q + Ws = 0
Despejando:
Q = ∆HR + Ws
Esta ecuación permite determinar la cantidad de calor que debe
eliminarse de un fermentador (Q) para mantener las condiciones
óptimas de temperatura.
