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Glucosa Oxidasa/Peroxidasa: Glucose

Este documento proporciona instrucciones para medir la concentración de glucosa en suero o plasma utilizando un método enzimático. Incluye detalles sobre el fundamento del método, composición de los reactivos, procedimiento, características metrológicas, controles de calidad y aplicaciones clínicas. La medición se basa en las reacciones acopladas de la glucosa oxidasa y la peroxidasa que generan un complejo coloreado cuantificable. Los valores normales de glucosa en ayunas son menores a 100 mg/dL,
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Glucosa Oxidasa/Peroxidasa: Glucose

Este documento proporciona instrucciones para medir la concentración de glucosa en suero o plasma utilizando un método enzimático. Incluye detalles sobre el fundamento del método, composición de los reactivos, procedimiento, características metrológicas, controles de calidad y aplicaciones clínicas. La medición se basa en las reacciones acopladas de la glucosa oxidasa y la peroxidasa que generan un complejo coloreado cuantificable. Los valores normales de glucosa en ayunas son menores a 100 mg/dL,
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COD 11803 COD 11503 COD 11504 COD 11538 GLUCOSE

1 x 50 mL 1 x 200 mL 1 x 500 mL 1x1L


CONSERVAR A 2-8ºC
Reactivos para medir la concentración de glucosa GLUCOSA
Sólo para uso in vitro en el laboratorio clínico GLUCOSA OXIDASA/PEROXIDASA

FUNDAMENTO DEL MÉTODO Estos valores se dan únicamente a título orientativo; es recomendable que cada laboratorio
establezca sus propios intervalos de referencia.
La glucosa presente en la muestra origina, según las reacciones acopladas descritas a
continuación, un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometría1. Según el National Diabetes Data Group (US)3, valores de glucosa plasmática en ayunas
glucosa oxidasa
superiores a 140 mg/dL (7,77 mmol/L) obtenidos en más de una ocasión, permiten el
Glucosa + ½ O2 + H2O Glucónico + H2O2 diagnóstico de diabetes mellitus.
peroxidasa
2 H2O2 + 4 – Aminoantipirina + Fenol Quinonaimina + 4 H2O CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda el uso de los Sueros Control Bioquímica niveles I (cod. 18005, 18009 y 18042) y
CONTENIDO II (cod. 18007, 18010 y 18043), para verificar la funcionalidad del procedimiento de medida.
COD 11803 COD 11503 COD 11504 COD 11538
Cada laboratorio debe establecer su propio programa de Control de Calidad interno, así como
A. Reactivo 1 x 50 mL 1 x 200 mL 1 x 500 mL 1x1L procedimientos de corrección en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias
S. Patrón 1 x 5 mL 1 x 5 mL 1 x 5 mL 1 x 5 mL aceptables.

COMPOSICIÓN CARACTERÍSTICAS METROLÓGICAS


− Límite de detección: 0,23 mg/dL = 0,0126 mmol/L
A. Reactivo: Fosfatos 100 mmol/L, fenol 5 mmol/L, glucosa oxidasa > 10 U/mL, peroxidasa > 1
U/mL, 4-aminoantipirina 0,4 mmol/L, pH 7,5 − Límite de linealidad: 500 mg/dL = 27,5 mmol/L. Cuando se obtengan valores superiores,
S. Patrón de Glucosa/Urea/Creatinina. Glucosa 100 mg/dL (5,55 mmol/L), urea 50 mg/dL, diluir la muestra 1/4 con agua destilada y repetir la medición.
creatinina 2 mg/dL. Patrón primario acuoso. − Repetibilidad (intraserie):

CONSERVACIÓN Concentración media CV n

Conservar a 2-8ºC. 88 mg/dL = 4,84 mmol/L 1,2 % 20


El Reactivo y el Patrón son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, 326 mg/dL = 17,93 mmol/L 0,9 % 20
siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminación durante su uso.
− Reproducibilidad (interserie):
Indicaciones de deterioro:
− Reactivo: Presencia de partículas, turbidez, absorbancia del blanco superior a 0,150 a 500 Concentración media CV n
nm (cubeta de 1 cm). 88 mg/dL = 4,84 mmol/L 2,7 % 25
− Patrón: Presencia de partículas o turbidez. 326 mg/dL = 17,93 mmol/L 1,9 % 25

PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS − Sensibilidad: 4 mA⋅dL/mg = 0,22 mA⋅L/mmol


Tanto el Reactivo como el Patrón están listos para su uso. − Veracidad: Los resultados obtenidos con estos reactivos no muestran diferencias
sistemáticas significativas al ser comparados con reactivos de referencia (Nota 2). Los
EQUIPO ADICIONAL detalles del estudio comparativo están disponibles bajo solicitud.
− Baño de agua a 37ºC
− Interferencias: la hemoglobina (> 3 g/L), la lipemia (trigliceridos >1,25 g/L) y la bilirrubina (10
− Analizador, espectrofotómetro o fotómetro para lecturas a 500 ± 20 nm mg/dL) interfieren.. Otros medicamentos y sustancias pueden interferir4.
MUESTRAS Estos datos han sido obtenidos utilizando un analizador. Los resultados pueden variar al
cambiar de instrumento o realizar el procedimiento manualmente.
Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estándar. El suero o plasma deben
separarse de los elementos celulares lo antes posible para evitar la glucolisis. La adición de CARACTERÍSTICAS DIAGNÓSTICAS
fluoruro sódico a la muestra de sangre previene la glucolisis.
La glucosa es la principal fuente de energia del organismo. La insulina, producida en las células
La glucosa en suero o plasma es estable 5 días a 2-8ºC. Los anticoagulantes como la heparina,
de los islotes del páncreas, facilita la entrada de glucosa en las células de los tejidos. Una
EDTA, oxalato o fluoruro no interfieren.
deficiencia de insulina o una disminución de su actividad ocasiona un aumento de la glucosa en
PROCEDIMIENTO sangre.
Se encuentran concentraciones elevadas de glucosa en suero o plasma en pacientes con
1. Atemperar el Reactivo a temperatura ambiente. diabetes mellitus (dependiente de insulina o no dependiente de insulina) y con otras
2. Pipetear en tubos de ensayo: (Nota 1) condiciones o síndromes2,3.
La hipoglucemia puede darse como respuesta al ayuno, o bien puede ser debida a fármacos,
Blanco Patrón Muestra venenos, errores congénitos del metabolismo o gastrectomía previa2,5.
Patrón (S)  10 µL  El diagnóstico clínico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un único ensayo,
Muestra   10 µL sino que debe integrar los datos clínicos y de laboratorio.
Reactivo (A) 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
NOTAS
3. Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente (16-25ºC) o
durante 5 minutos a 37ºC. 1. Estos reactivos pueden utilizarse en la mayoría de analizadores automáticos. Solicite
información a su distribuidor.
4. Leer la absorbancia (A) del Patrón y de la Muestra a 500 nm frente al Blanco. El color es
estable durante al menos 2 horas. 2. La calibración con el patrón acuoso suministrado puede causar sesgos, especialmente en
algunos analizadores. En estos casos, se recomienda calibrar usando un patrón de base
CÁLCULOS sérica (Calibrador Bioquímica, cod. 18011 y 18044).
La concentración de glucosa en la muestra se calcula a partir de la siguiente fórmula general:
BIBLIOGRAFÍA
A Muestra
x C Patrón = C Muestra 1. Trinder P. Determination of glucose in blood using glucose oxidase with an alternative
A Patrón oxygen acceptor. Ann Clin Biochem 1969; 6: 24-27.
Si se utiliza para calibrar el Patrón de Glucosa suministrado (Nota 2): 2. Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 4th ed. Burtis CA, Ashwood
ER, Bruns DE. WB Saunders Co, 2005.
A Muestra x 100 = mg/dL glucosa
3. National Diabetes Data Group: Classification and diagnosis of diabetes mellitus and other
A Patrón x 5,55 = mmol/L glucosa categories of glucose intolerance. Diabetes 1979; 28:1039-1057.
4. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 5th ed. AACC Press, 2000.
VALORES DE REFERENCIA 5. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press,
Suero y plasma2: 2001.

Neonato, prematuro 25-80 mg/dL = 1,39-4,44 mmol/L


Neonato, a término 30-90 mg/dL = 1,67-5,00 mmol/L
Niños, adultos 70-105 mg/dL = 3,89-5,83 mmol/L

M11503c-15 BioSystems S.A. Costa Brava, 30. 08030 Barcelona (Spain) 05/2011
Quality System certified according to
EN ISO 13485 and EN ISO 9001 standards

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