UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y BIOQUÍMICA

“EFECTO ANTIBACTERIANO DEL EXTRACTO

HIDROALCOHÓLICO DE LAS FLORES DE MANZANILLA
(Matricaria chamomilla) FRENTE A CEPAS DE Streptococcus
pyogenes ATTC 19615, IN VITRO”

Tesis para optar al Título Profesional de Químico

Farmacéutico y Bioquímico

TESISTAS:
Bach. MARIBEL ROXANA MORENO OLARTE
Bach. GUISSELA YESENIA NUÑEZ GABRIEL

ASESOR:
Mg. Q.F. LUIS ALEJANDRO ROA CHUNGA

LIMA – PERÚ
2018

I
 TÍTULO:

“EFECTO ANTIBACTERIANO DEL EXTRACTO

HIDROALCOHÓLICO DE LAS FLORES DE MANZANILLA
(Matricaria chamomilla) FRENTE A CEPAS DE Streptococcus
pyogenes ATTC 19615, IN VITRO”

II
DEDICATORIA

A mis padres y hermanos, por su amor,

su apoyo incondicional y ánimo
constante, que siempre me ofrecen con
lo cual he podido lograr uno de mis
objetivos, que es ser profesional

III
AGRADECIMIENTO

A mis maestros universitarios por

consolidar en mí la base de
conocimientos y actitudes para mi vida
como profesional.

A mi asesor Químico Farmacéutico

Luís Roa Chunga, por su permanente
disposición e incondicional apoyo, y por
compartir sus conocimientos, tiempo y
dedicación a esta investigación.

IV
 ÍNDICE GENERAL

Dedicatoria
Agradecimiento
Índice General
Índice de Tablas
Índice de Figuras
Índice de Anexos
Resumen
Abstract

Introducción ..................................................................................................... 1
CAPÍTULO I: PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ...................................... 3
1.1 Descripción de la realidad problemática .................................................... 3
1.2 Identificación y formulación del problema................................................. 4
1.2.1 Problema general .............................................................................. 4
1.2.2 Problema específicos ........................................................................ 4
1.3 Objetivos de la investigación ..................................................................... 5
1.3.1 Objetivo general ................................................................................ 5
1.3.2 Objetivos específicos ........................................................................ 5
1.4 Justificación de la investigación ................................................................ 5
1.5 Limitaciones de la investigación ................................................................ 6

CAPÍTULO II: MARCO TEÓRICO ................................................................... 7

2.1 Antecedentes de la investigación .............................................................. 7
2.1.1 Antecedentes nacionales .................................................................. 7
2.1.2 Antecedentes internacionales ........................................................... 9
2.2 Bases teóricas ........................................................................................... 11
2.2.1 Manzanilla (Matricaria chamomilla) ................................................... 11
[Link] Descripción botánica de la Manzanilla
(Matricaria chamomilla)....................................................... 11
[Link] Habitad y distribución.......................................................... 12
[Link] Ubicación taxonómica ......................................................... 12

V
 [Link] Composición química de Manzanilla .................................. 12
[Link] Principios activos ................................................................ 14
2.2.2. Extractos .......................................................................................... 14
[Link] Definición de extractos........................................................ 14
[Link] Clasificación de extractos ................................................... 15
2.2.3. Streptococcus pyogenes .................................................................. 16
[Link] Taxonomía .......................................................................... 16
[Link] Características morfológicas ............................................... 16
2.2.4. Faringoamigdalitis bacteriana .......................................................... 16
2.3 Formulación de hipótesis........................................................................... 17
2.3.1 Hipótesis general .............................................................................. 17
2.3.2 Hipótesis específicas ........................................................................ 17
2.4 Operacionalización de variables e indicadores ......................................... 17
2.5 Definición de términos básicos .................................................................. 18

CAPÍTULO III: METODOLOGÍA ...................................................................... 21

3.1 Tipo y nivel de investigación ...................................................................... 21
3.2 Diseño de la investigación ......................................................................... 21
3.3 Población y muestra .................................................................................. 22
3.3.1 Población ........................................................................................ 22
3.3.2 Muestra ........................................................................................... 22
3.4 Técnica de Procesamiento y Análisis de Datos ......................................... 22
3.5 Técnicas de procesamiento y análisis de datos ........................................ 22
3.5.1 Procedimiento experimental ........................................................... 22
3.6 Metodología ............................................................................................. 23
3.6.1 Preparación del pulverizado ............................................................ 23
3.6.2 Obtención del extracto .................................................................... 23
3.6.3 Cepa bacteriana ............................................................................ 26

CAPÍTULO IV: PRESENTACIÓN Y ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS ....... 30

4.1 Procesamiento de Datos: Resultados ....................................................... 30
4.2 Contrastación de hipótesis ........................................................................ 39
4.3 Discusión de resultados ............................................................................ 39

VI
CAPÍTULO V: CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ........................... 40
5.1 Conclusiones ............................................................................................. 40
5.2 Recomendaciones ..................................................................................... 41

Referencias Bibliográficas ................................................................................ 42

VII
 ÍNDICE DE TABLAS

Tabla N° 1 Interpretación de la cantidad de metabolitos presentes. 30

Tabla N° 2 Lectura de la investigación del tamizaje fitoquímico del
extracto hidroalcoholio de las flores de Manzanilla
(Matricaria chamonilla). 31
Tabla N° 3 Registro Microbiológico de la inhibición de miel sobre
Streptococcus pyogenes ATCC 19615. 31
Tabla N° 4 Estadística descriptiva de las medias de los halos de
inhibición obtenidos de los diferentes extractos. 32
Tabla N° 5 Prueba de homogeneidad de varianzas de las medias de
los halos de inhibición obtenidos de los diferentes
extractos. 32
Tabla N° 6 Prueba de ANONVA One Way de las medias de los halos
de inhibición obtenidos de los diferentes extractos. 33
Tabla N° 7 Comparaciones múltiples de las medias de los halos de
inhibición obtenidos de los diferentes extractos. 34
Tabla N° 8 Subconjunto homogéneo Prueba de Tukey de las medias
de los halos de inhibición obtenidos de los diferentes
extractos. 35
Tabla N° 9 Medidas de los halos de inhibición, valor de la mediana,
media, desviación estándar e intervalos de confianza. 36
Tabla N° 10 Efecto inhibitorio in vitro del extracto hidroalcoholico de las
flores de manzanilla sobre Streptococcus pyogenes ATCC
19615 según la escala de Duraffourd. 37
Tabla N° 11 Resumen 95% del Intervalo de Confianza con el post-test
de comparación múltiple de Dunnett. Intervalo de
confianza 95%. 38

VIII
 ÍNDICE DE GRÁFICOS

Figura N° 1 Flujograma de la extracción del extracto de las flores de

Manzanilla (Matricaria chamomilla) 24
Figura N° 2 Media de los halos de inhibición El Grafico 1 muestra la
media de los halos de inhibición donde se puede apreciar
un halo superior de la concentración de 50% seguido de
las concentraciones 30% y 10%. 37
Figura N° 3 Efecto inhibitorio in vitro del extracto hidroalcohólico de
las flores de manzanilla sobre Streptococcus pyogenes
ATCC 19615. 38

IX
 ÍNDICE DE ANEXOS

Anexo 1 Matriz de consistencia ................................................................. 48

Anexo 2 Certificado obtención de cepas ATCC 19615 ............................. 50
Anexo 3 Factura de la cepa Streptoccus pyogenes ATCC ....................... 52
Anexo 4 Constancia por haber realizado la parte experimental ................ 54
Anexo 5 Ficha de recolección de datos ..................................................... 56
Anexo 6 Preparación del extracto hidroalcoholico de las flores
Manzanilla (Matricaria chamomilla) ............................................. 57
Anexo 7 Reconstitución de la cepa Streptococcus pyogenes
ATCC®19615 .............................................................................. 61
Anexo 8 Determinación de la actividad antibacteriano de las
Flores de Manzanilla (Matricaria chamomilla) frente a
Streptococcus pyogenes mediante la técnica difusión en pozos
de agar ........................................................................................ 64

X
 RESUMEN

El Objetivo de este estudio fue determinar el efecto antibacteriano del extracto

hidroalcohólico de las inflorescencias de Manzanilla (Matricaria chamomilla) en
relación a cepas de la Streptococcus pyogenes ATCC 19615, in vitro.

Para determinar la actividad antibacteriana se utilizó el método de difusión en

pozos, se obtuvo las flores Manzanilla de puestos de mercados del distrito de la
Victoria lima-Perú ;y se realizó diluciones para obtener concentraciones de
10%,30% y 50%,las tres concentración se colocó en una placa de agar de
mueller - Hilton, que previamente fue sembrada con una suspensión de
Streptococcus pyogenes ATTC 19615 a una turbidez 0.5 de la escala de Mc
[Link] incubo las placas en condiciones de anaerobiosis y luego se midió los
halos de inhibición después de 24 [Link] observó halos de inhibición (mm) en
las concentraciones de 10% (11.2810 ± 0.7743); 30% (17.1440 ± 1.2933); 50%
(21.014 ± 0.9046), siendo la concentración del 50% el que presente el mayor
efecto antibacteriano con un nivel de significancia del 95% y un error relativo del
5%.

Palabras clave: efecto antibacteriano, Streptococcus pyogenes, Manzanilla, halo

de inhibición.

XI
 ABSTRACT

The objective of this study was to determine the antibacterial effect of the
hydroalcoholic extract of the inflorescences of Manzanilla (Matricaria chamomilla)
in relation to strains of Streptococcus pyogenes ATCC 19615, in vitro.

In order to determine the antibacterial activity, the well diffusion method was used,
the Manzanilla flowers were obtained from market stalls in the district of Victoria
Lima-Peru, and dilutions were made to obtain concentrations of 10%, 30% and
50%. Three concentrations were placed on a plate of mueller-Hilton agar, which
was previously seeded with a suspension of Streptococcus pyogenes ATTC
19615 at a turbidity 0.5 of the McFarland scale. The plates were incubated under
conditions of anaerobiosis and then the halos of inhibition after 24 hours. Halos of
inhibition (mm) were observed in the concentrations of 10% (11.2810 ± 0.7743);
30% (17.1440 ± 1.2933); 50% (21.014 ± 0.9046), being the 50% concentration the
one with the highest antibacterial effect with a level of significance of 95% and a
relative error of 5%.

Key words: antibacterial effect, Streptococcus pyogenes, Chamomile, inhibition

halo.

XII
 INTRODUCCIÓN

Los niños entre 3 y 12 años de edad son altamente vulnerables a infecciones

bacterianas. Frente a ello, resultan conocidos los diversos inconvenientes en lo
que a recurrir a antibióticos se refiere, como por ejemplo la llamada resistencia
bacteriana o resistencia a los antibióticos. Por ello se hace necesaria la
reconsideración de una farmacopea de origen vegetal.

Las propiedades antibacterianas de las inflorescencias de Manzanilla (Matricaria

chamomilla), resultan conocidas; sin embargo, no se cuentan con datos de mayor
precisión que den cuenta de su efecto específico sobre Streptococcus pyogenes.

El Streptococcus pyogenes 19615 es uno de los patógenos humanos más

comunes. Este origina diversas enfermedades supurativas y no supurativas. Entre
las supurativas, el S. pyogenes constituye la causa más frecuente de faringitis
bacteriana; aunque produce, asimismo, otitis media; mastitis; infecciones en las
capas superficiales de la piel (impétigo); en las capas profundas (erisipela) y en
los casos más severos, así como fascitis necrotizante. Las características de este
último cuadro clínico explican el apelativo de «bacteria comedora de carne».
Dentro de las enfermedades no supurativas encontramos la fiebre reumática y la
glomerulonefritis pos estreptocócica. (1)

Al analizar la problemática de las diferentes enfermedades causadas por el

patógeno, se hace necesario señalar sus causas. Estas se resumen en: pobreza,
edad, y ausencia de una cultura sanitaria que pueda conducir, con prontitud, al
paciente y sus familiares al tratamiento médico en un centro de salud.

La presente investigación buscó conocer, en lo específico, en qué medida el

extracto de flores de Manzanilla (Matricaria chamomilla) inhibe las cepas
bacterianas de Streptococcus pyognes ATCC 19615.

Conociendo la inhibición provocada por las flores de Manzanilla será posible

proporcionar un tratamiento no farmacológico a las personas más vulnerables a la
bacteria, como por ejemplo a las que sufren de faringoamigdalitis. Por otra parte,
1
una farmacología novedosa podría verse potenciada con una medicación basada
en esta fuente vegetal.

2
 CAPÍTULO I
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Para la presente investigación, el problema planteado incluye las siguientes

características:

1.1 DESCRIPCIÓN DE LA REALIDAD PROBLEMÁTICA

Actualmente, la infección respiratoria aguda por Streptococcus pyogenes o
Estreptococcus β-hemolítico es una de las más frecuentes en nuestro medio.
Esta sigue siendo la principal causa de la enfermedad de faringoamigdalitis
en todas las edades; siendo que, usualmente, los reportes dan cuenta de
una incidencia de entre 20 y 30% a nivel de las diferentes faringoamigdalitis
en niños. Además, entre un 5 y un 15% en adultos muestran una mayor
incidencia de los síntomas durante la época de invierno. Asimismo, la
faringitis originada en Streptococcus pyogenes se expresa en más de un
50% en infantes menores a los 15 años de edad. Esta se constituye en una
cifra relativamente alta, dejando en evidencia la necesidad de un diagnóstico
más oportuno.(2)

La necesidad de un diagnóstico diferenciado en materia de etología del mal

es uno de los mayores inconvenientes a los que el diagnóstico médico se
enfrenta, en busca de la obtención del diagnóstico más adecuado. La
prescripción de antibióticos puede resultar, en muchos casos, inadecuada. El
tipo de infección explica la inducción al error en la prescripción de un

3
 antibiótico en nuestro medio. Ello explica una tasa aproximada a un 80% en
prescripciones erradas. Así y en lo que a resistencias se refiere, los efectos
secundarios en la salud del paciente conllevan no sólo a un deterioro en su
salud, sino que implican un incremento negativo en su economía sanitaria.(3)

Frente a las complicaciones expuestas, las inflorescencias de Manzanilla

(Matricaria chamomilla) se constituyen en una clara alternativa
antibacteriana.

1.2 IDENTIFICACIÓN Y FORMULACIÓN DEL PROBLEMA

1.2.1 Problema general

¿Cuál es el efecto antibacteriano del extracto hidroalcohólico de las flores de
Manzanilla (Matricaria chamomilla) frente a cepa de Streptococcus pyogenes
ATTC 19615,in vitro?

1.2.2 Problemas específicos

1. ¿De qué manera la concentración del extracto hidroalcohólico de las
flores de manzanilla (Matricaria chamomilla) al 10 % tiene efecto
antibacteriano frente a cepa de Streptococcus pyogenesATTC 19615,
in vitro?

2. ¿De qué manera la concentración del extracto hidroalcohólico de las

flores de manzanilla (Matricaria chamomilla) al 30 % tiene efecto
antibacteriano frente a cepa de Streptococcus pyogenesATTC
19615,in vitro?

3. ¿De qué manera la concentración del extracto hidroalcohólico de las

flores de manzanilla (Matricaria chamomilla) al 50 % tiene efecto
antibacteriano frente a cepa de Streptococcus pyogenes ATTC 19615,
in vitro?

4
1.3 OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN

1.3.1 Objetivo general

Determinar el efecto antibacteriano del extracto hidroalcohólico de las flores
de Manzanilla (Matricaria chamomilla) frente a cepa de Streptococcus
pyogenes ATTC 19615, in vitro.

1.3.2 Objetivos específicos

1. Determinar el efecto antibacteriano de extracto hidroalcohólico de las
flores de Manzanilla (Matricaria chamomilla) al 10% frente a cepa
deStreptococcus pyogenes ATTC 19615, in vitro.

2. Determinar el efecto antibacteriano de extracto hidroalcohólico de las

flores de Manzanilla (Matricaria chamomilla) al 30% frente acepa
deStreptococcus pyogenes ATTC 19615, in vitro.

3. Determinar el efecto antibacteriano de extracto hidroalcohólico de las

flores de Manzanilla (Matricaria chamomilla) al 50% frente acepa
deStreptococcus pyogenes ATTC 19615, in vitro.

1.4 JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN

La presente investigación busca dar a conocer el grado de acción bactericida
de la Manzanilla (Matricaria chamomilla (L.) Rydb.) Diversos sustentos
técnicos en relación a sus propiedades curativas y farmacológicas de esta
especie vegetal así lo testifican. La Manzanilla muestra indicios de una
acción natural bactericida contra enfermedades bacterianas a nivel
respiratorio. En tal sentido, notorio es el caso de la faringoamigdalitis aguda,
dolencia altamente frecuente en nuestro medio. Por esta razón, la mayoría
de los médicos prescriben antibióticos para dolencias como esta. Esto puede
conducir a los temidos efectos por resistencia a los antibióticos, sobre todo
en niños; así como, en general, a un incremento en la resistencia bacteriana.
En cuanto al estreptococo se refiere, no se cuenta con pruebas rápidas para

5
 su detección. De contar con ello, podría disminuirse su incertidumbre
diagnóstica.(4)

El Streptococcus pyogenes es responsable de 616 millones de casos de

infección a nivel de la faringe (faringitis, amigdalitis, etc.) al año en el mundo.
Diferentes estudios en niños muestran que aproximadamente el 30% de las
faringoamigdalitis presentes entre edades de 2 y 3 años de edad son
causadas por esta bacteria.(5)

Para el caso del impétigo, esta es una dolencia más frecuente en latitudes y
zonas tropicales que en otras. Prospera en períodos estacionales de altas
temperaturas. Su trasmisión se produce por contacto directo; siendo su
período de incubación el comprendido entre 7 y 10 días. Se requiere de un
trauma para que se produzca la enfermedad.(5)

La presente investigación busca abrir más campos en la industria

farmacéutica, de manera que logren generarse propuestas innovadoras para
una industria farmacéutica natural, en busca de las más convenientes
alternativas para los tratamientos de las vías respiratorias.

1.5 LIMITACIONES DE LA INVESTIGACIÓN

Se considera en la investigación con las diversas limitaciones:

- La presente investigación tuvo como limitación el retraso para poder

obtener cepas ATCC estudio (Streotoccocus pyogenes).ya que fueron
importadas teniendo como tiempo de entrega 30 días

- Otra limitación fue la dificultad para poder obtener las cepas debido a
que no se encontraron en el INS (Instituto Nacional De Salud), ni en
hospital Cayetano Heredia por lo que se retrasó el inicio de la parte
experimental.

6
 CAPÍTULO II
MARCO TEÓRICO

A continuación, se expone el marco teórico sobre el cual se sostiene la presente

investigación.

2.1 ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACIÓN

Los antecedentes nacionales e internacionales son los siguientes:

2.1.1 Antecedentes nacionales

Cosco Robles (2010) mediante su investigación: “Actividad inhibitoria del

crecimiento de Streptococcus mutans y de flora mixta salival por acción del
aceite esencial de la Matricaria chamomilla, manzanilla", señala que el
Streptococcus mutans, la bacteria que ocasiona la caries dental, requiere de
varias medidas para su eliminación. Así, un incremento en el uso de plantas
medicinales resulta conveniente para el tratamiento de afecciones
dentobacterianas. (6)

Rengifo Penadillos (2009) desarrollando un estudio experimental enfocado

en la determinación de la actividad antibacteriana in vitro de extractos de
Piper aduncum sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes,
evaluó extractos de tipo acuoso, metanólico, clorofórmico y diclorometánico.
En el extracto acuoso quedó evidenciada la presencia de flavonoides y
saponinas; en el extracto metanólico la de alcaloides y flavonoides; en el
7
extracto clorofórmico de triterpenoides; mientras que en el extracto
diclorometanico la de alcaloides y triterpenoides. El procedimiento para la
extracción de extracto acuoso logró ser fraccionado mediante la metodología
de la cromatografía flash. La caracterización de las fracciones se llevó a
cabo por espectroscopía UV-VIS, IR y 1H-NMR, así como por métodos
GC/MS. En este último caso se encontraron flavonoides. Asimismo, se
llevaron a cabo ensayos de la actividad antibacteriana de los diferentes
extractos así como de las fracciones del extracto acuoso, siempre en
relación a cultivos de Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes. El
extracto acuoso mostró la actividad más sobresaliente y el extracto
metanólico actividad moderada, mientras que los extractos diclorometánico y
clorofórmico expresaron muy escasa actividad. Mediante esta investigación
las fracciones del extracto acuoso y las de la fracción B produjeron una
mayor actividad que la fracción A.(7)

Chillón Quispe, (2015) estudiando el “Efecto inhibitorio in vitro de

Rosmarinus officinalis L. (romero) comparado con penicilina y sobre cepas
de Streptococcus pyogenes”, halló un significativo efecto inhibitorio in vitro.
Como resultados experimentales se encontraron diferencias significativas
respecto a una inhibición de cepas de Streptococcus pyogenes por efecto de
distintas concentraciones del extracto, más en lo específico, en lo que a
concentraciones de 50% y 75% se refiere.(8)

Jáuregui Álvarez, (2013) mediante el estudio: “Efecto antibacteriano in vitro

del colutorio a base de Matricaria chamomilla (manzanilla) a diferentes
concentraciones sobre la cepa ATCC 2652263 de Streptococcus mutans”,
determinó la eficacia de tres colutorios de inflorescencias de manzanilla a
diferentes concentraciones, todas sobre cepas de Streptococcus mutans,
siendo que no se evidenció una alta diferencia entre los mencionados tres
colutorios.(9)

8
Zuta Arroyo, (2014) en su trabajo: “Actividad antibacteriana in vitro de
extractos de Piper angustifolium (matico) y Matricaria chamomilla
(manzanilla) en cepas de Staphylococcus aureus con resistencia múltiple”,
determinó la eficacia de la actividad antibacteriana de hojas de matico e
inflorescencias de manzanilla sobre cepas de Staphylococcus aureus.
Tratándose de una bacteria multirresistente el extracto que contó con una
mayor actividad antibacteriana en relación a la bacteria fue el preparado de
Piper angustifolim, aunque sin diferencias estadísticas significativas respecto
al de Matricaria chamomilla.(10)

2.1.2 Antecedentes internacionales

Rojas Camacho & Villca Vega (2011) mediante su investigación:

“Determinación de la actividad antibacteriana in vitro del ajo (Allium sativum)
contra Streptococcus pyogenes mediante el método por dilución”, estudiaron
la actividad antimicrobiana del ajo (Allium sativum). Este trabajo, de carácter
tanto prospectivo como descriptivo, describió cómo fue la actividad
antibacteriana in vitro del ajo sobre la cepa ATCC 19615 de Streptococcus
pyogenes, siendo quehubo óptimos resultados con el extracto etílico. Para la
consecución de los resultados, la concentración mínima inhibitoria del
extracto etílico corresponde a los 12 mg/[Link]ás, se emplearon tres
solventes, los que correspondieron a agua destilada, éter de petróleo entre
60-80 ºC, y etanol a 96ºC de temperatura, en busca de una actividad
antibacteriana del ajo contra el Strepcoccus pyogenes. Para la obtención del
macerado de ajo se hizo uso de 3 tipos de solventes de distinta polaridad,
como son: agua destilada estéril; éter de petróleo de entre 60-80 °C; y etanol
a 96°C. Se utilizó ajo (Allium sativum) de la Variedad Colorada. Para el
reconocimiento y verificación del Streptococcus pyogenes se empleó el
antibióticoBacitracina.(11)

Llapa Y, Luna C, Macao C, (2013) estudiaron la “Prevalencia de

faringoamigdalitis aguda estreptocócica mediante el test de detección rápida

9
del antígeno de Streptococo beta hemolítico y los factores asociados en
pacientes entre 5 y 19 años en el Centro de Salud N° 1 de Cuenca”, en
Ecuador. Estos investigadores encontraron una prevalencia de la
faringoamigdalitis en un determinado grupo de personas. Entre los más
afectados se observó que los niños y adolescentes son más susceptibles a
la enfermedad. La estadística levantada sugirió que los inconvenientes se
originaron en una deficiente disposición de medicinas y una baja condición
económica entre los afectados, así como en otros factores asociados a esta
infección respiratoria. Se desarrollaron metodologías diversas para una
detección perentoria con una inmediata observación del Streptococcus beta
hemolítico.(12)

Astudillo Sánchez (2013) estudiando la prevalencia del Streptococcus beta

hemolítico del grupo A sobre paciencias de 5 a 15 años diagnosticados con
faringoamigdalitis bacteriana, encontró que en el Hospital de la Policía
Nacional de la ciudad de Guayaquil, Ecuador, se produce un desmedido uso
de antibióticos, siendo los niños de tres años los más afectados. Debido a un
uso inadecuado así como por una ausencia de cultura sanitaria, los niños
menores a los tres años de la muestra, no fueron, al momento del estudio,
nunca remitidos a un centro de salud; de manera que tratándose de algunos
de los más afectados, estos niños menores a 3 años fueron reconocidos con
faringitis, tratándose por ello de un mal diagnóstico.(13)

Collantes Mendoza (2014) mediante su investigación: “Infecciones

respiratorias agudas en niños menores de 10 años que llegan a la
emergencia del hospital Federico Bolaños Moreira y sus factores de riesgo
clínico epidemiológicos”, en Ecuador, confirmó que las infecciones
respiratorias son causadas, principalmente, por virus y bacterias. La
frecuencia de muertes estadísticamente cuantificadas estuvo dirigida a niños
menores a diez años de edad. A manera de conclusión se sostuvo que una
promoción de la prevención resulta necesaria para promover la prevención y
evitar consultas por infecciones respiratorias como la faringoamigdalitis. La

10
 investigación, asimismo, determinó que los factores notorios de riesgo
fueron: la falta de lactancia materna; bajo peso; hacinamiento; falta de
recursos económicos; y escaso nivel educativo. (14)

2.2 BASES TEÓRICAS

2.2.1 Manzanilla (Matricaria chamomilla)

[Link] Descripción botánica de la manzanilla

(Matricariachamomilla)
Se trata de una especie botánica herbácea, de arquitectura erecta y
de amplia difusión geográfica. Es posible encontrarla prácticamente
en cualquier ubicación: desde parcelas secas y pedregosas hasta
praderas. Por altitud suele encontrarse hasta los 500 msnm. Tiene un
tallo erguido que puede alcanzar los 60 cm de altura. Su raíz es
pivotante perenne, articula y fibrosa.

El tallo de la manzanilla alcanza entre los 40 y 70 cm de altura, siendo

muy ramificada en la parte alta. Es de forma redondeada y hueca.
Sus hojas son alternas, pinnadas y sectas. El color de estas es verde
claro, con incisiones muy profundas.
Sus flores son perfectas; es decir, hermafroditas (hay órganos de
reproducción femenina y masculina), asociadas en capítulos con
pedúnculos alargados sobre un cáliz vacío. Presente flores externas e
internas. Sus flores externas muestran una lígula blanca; mientras que
las internas son tubulosas y con una corola amarilla.

Los frutos de la manzanilla son aquenios, indehiscentes (que no se

abre) y contienen, cada uno, una sola semilla. Estos frutos son
cilíndricos. Asimismo suelen ser muy pequeños, con una longitud de
entre 0.3 a 5.5 mm. A la sequedad, el fruto forma la colina del
receptáculo, logrando ser más cónico (15)

11
[Link] Hábitat y distribución
La manzanilla es nativa de la región de los Balcanes, desde donde se
difundió al resto de Europa. Su alto nivel adaptativo ha hecho que se
haya naturalizada en varias regiones del continente americano. Su
cultivo se encuentra, prioritariamente, hacia la industria. Se desarrolla
con facilidad en suelo con buen drenaje y alta luminosidad. Tiene
buena resistencia a las heladas, y tolera niveles relativamente bajos
en fertilidad y acidez del suelo. Fue introducida por los españoles en
Perú en 1928, como insecticida.(16)

[Link] Ubicación taxonómica

Nombre científico: Matricaria chamomilla (L.) Rydb.
Taxonomía:
División: ANGIOSPERMAE
Clase: DICOTYLEDONES
Orden: SYNANDRAE
Familia: ASTERACEAE
Género: Matricaria
Especies: Matricaria chamomilla; Matricaria recutita
Nombre Vulgar: “Manzanilla”

[Link] Composición química de la manzanilla

Aceite esencial (0,3%-1,5%): Es el componente más relevante, y se

obtiene de la región superior de la planta. El aceite esencial forma
parte del grupo lipofílico. Conforme a la farmacopea argentina, la
droga no deberá contener más de un 10% de materia fresca de la
planta, ni más de un 2% de materia orgánica extraña. La Farmacopea
Británica exige un contenido de aceite esencial entre 0.25 y 0.70%. La
mayoría de su esencia (más del 50% del total), expresa la siguiente
composición:

12
Azulenos (26-46%): El principal es el camazuleno (6-15%) y en
menor medida guajazuleno. Se trata de un aceite volátil. Este otorga a
la esencia un color azulado. Esta coloración surge por acción del calor
durante el proceso de extracción. Esta es la razón por la que dicha
característica no se expresa a la preparación convencional de su
infusión.

Sesquiterpenos: Posee los siguientes compuestos: a-bisabolol (10-

25%) y derivados (bisabolóxidos A, B y C, bisabonlonóxido A).

Lactonas sesquiterpénicas:Matricarina y desacetilmatricarina. La

matricina sería, asimismo, una precursora del camazuleno.

Flavonoides (1-3%): Junto con los mucílagos constituye el grupo

hidrofílico de la droga. En la manzanilla han sido identificadas
numerosas flavonas y flavonolesmetoxilados, como por ejemplo la
apigenina (0.25 a 42%) y la quercetina, con sus correspondientes
glucósidos (7 - glucosil - apigenina y 7-glucosil quercetina). Asimismo
la apiína, la luteolina, el lisorhamnetol, la rutina y la patuletina, entre
otros, forman parte de los flavonoides de la manzanilla.

Cumarinas: Las principales cumarinas de la manzanilla son la

dioxicumarina, la umbeliferona y la herniarina

Otros: Asimismo y en proporciones menores, en la manzanilla

encontramos: ácido valeriánico; ácido ascórbico; ácido angélico; ácido
salicífico; ácidos grasos diversos; diversos taninos; mucílagos
urónicos (10%); esteroides derivados del estigmasterol;
mucopolisacáridos; principio amargo (ácido antémico), xiloglucuranos;
sales minerales (8-10%), triacontano y fitosterina (resinas). (17)

13
 [Link] Principios activos y propiedades
Los principios activos de la manzanilla se basan en: farneseno;
spathulenol; (pro) camazufen; (-)-alfa bisabolol; (-) alfa bisabololoxide
y (-)-alfa bisabolonoxide.
Estos, contenidos en las inflorescencias de la manzanilla, pueden ser
de naturaleza hidrosoluble o liposoluble. Los liposolubles están
presentes en los aceites esenciales.
En una infusión se libera de un 10 a un 15% del contenido total de los
compuestos activos. En las flores, el aceite esencial oscila entre un
0.4 y un 1 % del peso seco.
La esencia de Manzanilla recién destilada es de color azul. Ello se
explica por la presencia de sesquiterpenos. Entre estos destaca el
llamado [Link] azuleno es el responsable del efecto
antiinflamatorio de la Manzanilla. En el aceite, el contenido de azuleno
varía entre 1 y 18%. Los aceites con alto contenido de azuleno son
producidos por determinadas variedades cultivadas.
Resulta característico que en la Manzanilla y mediando procesos
oxidativos, pueda encontrarse el (-)-alfa bisabolol. Mediando procesos
análogos, el (-)-alfa bisabolol ingresa, dentro de la planta, buscando
formar, como por ejemplo alcoholes secundarios denominados óxido
de bisabolol.
Glicósidos sulfurados: En este caso se trata de geninas azufradas.
Estas cuentan con propiedades antibióticas. Requieren de un tiempo
de maceración de diez minutos en agua tibia, siendo que sólo de esta
manera una genina es aislada haciéndose activa.(18)

2.2.2 Extractos
Los aspectos relevantes en cuanto a los extractos son los siguientes:

[Link] Definición de extractos

Son preparados concentrados de consistencia sólida, líquida o
intermedia. Se trata de derivados de materia seca vegetal. Estos se

14
obtienen a la evaporación parcial o total del disolvente en los líquidos
extractivos de origen vegetal. Los extractos, según su consistencia y
concentración de principio activo, logran ser clasificados como:
extractos secos, fluidos, blandos y crio extractos.

[Link] Clasificación de extractos

Los extractos fluidos: Son extractos de drogas que mereced a la

concentración prescrita de etanol, están preparados de forma tal que
una parte de droga corresponde a una o dos partes del extracto fluido.
Así y de 85 partes de droga seca 100 corresponden a la planta fresca.
Por lo general los extractos fluidos se obtienen por percolación.

Los extractos secos: Son aquellos que presentan una consistencia

seca. Son fácilmente pulverizables y se consiguen por evaporación
del disolvente y desecación del residuo. Los extractos secos no deben
presentar un contenido de humedad mayor al 5%. Por otra parte y al
tratarse de materia seca, cuentan con una concentración mayor de
principio activo que la droga original. En cuanto a su preparación esta
puede lograrse de manera muy estable hasta lograrse un preparado
de bastante estabilidad y fácil manipulación. Como líquido extractor se
utiliza alcohol y agua.

Extractos Blandos: Cuentan con una concentración de principio

activo superior a la de la droga original. Su consistencia es
semisólida. El solvente suele ser agua o mezcla hidroalcohólica. Los
extractos blandos son escasamente estables y resultan difíciles de
manipular; por lo que no suelen emplearse.(19)

15
2.2.3 Streptococcus pyogenes

[Link] Taxonomía
Reino : Bacteria
Phillum : Firmicutes
Clase : Bacilli
Orden : Lactobacillales
Familia : Streptococcaceae
Género : Streptococcus
Especie : S. pyogenes

[Link] Características morfológicas

El Streptococcus pyogenes pertenece al género Streptococcus y se
caracteriza por agruparse en cocaceas Gram positivas de 0,5-2 um de
diámetro, anaerobios facultativos, crecen en pares o en cadenas en
medio líquido, inmóviles, no formadores de esporas, capsulados,
requieren medio nutricionalmente rico y una baja tensión de oxígeno
para crecer. Su energía la obtienen a través de metabolismo
fermentativo, productor principalmente de lactato, pero no de gas. Son
catalasa(-).Generalmente atacan glóbulos rojos provocando lisis total
(beta hemólisis). El rango de la temperatura de crecimiento varía entre
25 – 45°C (óptima: 37°C) (20)

2.2.4 Faringoamigdalitis bacteriana aguda

Según (Almeida A.) La faringoamigdalitis es una de las enfermedades más
comunes que se presentan en los niños, y por lo tanto una de las principales
causas de consulta en el mundo. Esta infección puede ser causada por virus
o bacterias con una evolución menor de 15 días, entre las bacterias el grupo
que más la ocasiona es el Streptococcus pyogenes o beta hemolítica.(21)

16
2.3 FORMULACIÓN DE HIPÓTESIS

2.3.1 Hipótesis general

Existe efecto antibacteriano del extracto hidroalcohólico de las flores de
Manzanilla (Matricaria chamomilla) frente a cepa de Streptococcus pyogenes
ATTC 19615, in vitro.

2.3.2 Hipótesis específicas

1. La concentración del extracto hidroalcohólico de las flores de
Manzanilla (Matricaria chamomilla) al 10% tiene efecto antibacteriano
in vitro frente a cepa de Streptoccus pyogenes ATTC 19615.
2. La concentración del extracto hidroalcohólico de las flores de
manzanilla (Matricaria chamomilla) al 30% tiene efecto antibacteriano
in vitro frente a cepa de Streptococcus pyogenes ATTC 19615.
3. La concentración del extracto hidroalcohólico de las flores de
Manzanilla (Matricaria chamomilla) al 50% tiene efecto antibacteriano
in vitro frente a cepa de Streptococcus pyogenes ATTC 19615.

2.4 OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES E INDICADORES

VARIABLE CONCEPTO INDICADOR TIPO

Sustancia
V.I:
antibacteriana a
Extracto
diferentes
Hidroalcoholico de las 10%
concentraciones con cualitativo
flores de 30%,50%
propiedades
manzanilla(Matricaria
beneficiosas para la
Chamomilla)
salud.
Capacidad inhibitoria
del crecimiento
bacteriano de: Medición de
V.D. Streptococcus halos de
Efecto antibacteriana pyogenes (ATCC inhibición Cuantitativo
in vitro 19615) debido a la expresada en
presencia de extracto (mm)
hidroalcoholico de
Manzanilla
17
2.5 DEFINICIÓN DE TÉRMINOS BÁSICOS

- Extracto
Producto sólido o espeso obtenido por evaporación de un zumo o de
una disolución de sustancias vegetales o animales. Según el líquido
disolvente recibe la calificación de acuoso. (19)

- Efecto antibacteriano
Capacidad de matar o destruir o inactivar microrganismos, impedir su
proliferación y/o impedir su acción patógena. (22)

- Bacteriostático
Un efecto bacteriostático es aquel que aunque no produce la muerte a
una bacteria. Impide su reproducción; la bacteria muere sin dejar
descendencia. Un efecto bacteriostático está producido por sustancias
bacteriostáticas. Estas sustancias son secretadas por los organismos
como medios defensivos contra las bacterias. (23)

- Cepa
Cultivo puro formado por bacterias descendientes de un solo
aislamiento.

- Eritromicina
Antibiótico macrólido bacteriostático producido por
Streptomyceserythreus. La eritromicina A se considera su componente
activo principal. En los organismos sensibles, inhibe la síntesis de
proteínas mediante la unión a subunidades 50S ribosomales. (24)

- Bacterias Gram Positivas

Las bacterias Gram positivas se tiñen de color purpura con la tinción
Gram ya que el colorante queda atrapado en la capa de peptidoglucano

18
 (una estructura entrecruzada y gruesa que tiene forma de malla y rodea
a la célula).(49)

- Concentración
Corresponde al antibiótico capaz de inhibir el crecimiento visible de una
cepa bacteriana.

- ATCC
American Type Culture Collection.

- Halos de inhibición
Zona alrededor de un disco de antibiótico en un antibiograma, es una
medida de la potencia del antibiótico frente al germen.

- Antibacteriano
El término se refiere a una sustancia cuyas propiedades son capaces de
eliminar agentes bacterianos o la inhibición de su crecimiento o
proliferación sin incurrir en el daño del objeto, ambiente u organismo que
las porta. Son en esencia fármacos como es el caso de los antibióticos u
otros agentes químicos capaces de combatir estos cuerpos.(25)

- Principio activo
Sustancia química responsable de la actividad farmacológica y de uso
terapéutico de una droga.(26)

- Extracto hidroalcoholico
Son extractos líquidos concentrados, obtenidos de la extracción de una
planta o parte de ella, utilizando como solvente alcohol y agua presentan
sedimento, color y aroma característicos de la planta de la cual se
obtienen. (27)

19
- Bactericida
Un efecto bactericida es aquel que produce la muerte a una bacteria y
está provocado por alguna sustancia bactericida. Los organismos
secretan sustancias bactericidas como medios defensivos contra las
bacterias. Los antimicrobianos de efecto lísico o lítico (lisis) en las
bacterias, provocan una reducción en la población.(28)

- Cultivos
En biología, bacteriología y específicamente en microbiología, un cultivo
es un método para la multiplicación de microorganismos, tales como lo
son bacterias en el que se prepara un medio óptimo para favorecer el
proceso deseado. Un cultivo es empleado como un método fundamental
para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan
enfermedades en medicina humana y veterinaria.(29)

- Agar
Polímero sulfatado complejo de unidades de galactosa, extraído del
Gelidiumcartilagineum, Gracilariaconfervoides y otras algas rojas
asociadas. Se usa en forma de gel en la preparación de medios de
cultivo sólidos para microorganismos, como laxante, para la elaboración
de emulsiones y como medio de soporte para la inmunodifusión y la
inmunoelectroforesis.(30)

- Microbiología
La microbiología es la ciencia encargada del estudio y análisis de los
microorganismos, seres vivos pequeños no visibles al ojo humano
también conocidos como microbios. Se dedica a estudiar los organismos
que son sólo visibles a través del microscopio: organismos procariotas y
eucariotas simples.(31)

20
 CAPÍTULO III
METODOLOGIA

3.1 TIPO Y NIVEL DE LA INVESTIGACIÓN

De acuerdo a las características y al alcance de los resultados, es un estudio
de tipo:

 Experimental: Debido a la introducción y manipulación de los extractos

para la determinación del efecto antibacteriano.
 Transversal: Debido a que el estudio se realizó en un determinado
tiempo, ya que las variables fueron observadas en un solo momento
después de trascurrir un corto periodo de tiempo con una aproximación
de 24 horas después de realizado el cultivo.
 In vitro: Debido a que la investigación se lleva a cabo con parámetros
controlados, en medios de cultivo que sirven para el desarrollo de las
bacterias y se manipulara de manera intencional las condiciones de la
investigación.
 Prospectivo: ya que la recolección de datos se realizara de acuerdo a
la ocurrencia de los hechos.

3.2 DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN

La investigación se realizó con medios de cultivo y cepas ATTC (American
Type Culture Collection, las cuales fueron importados a través de
laboratorios GenLab S.A.C y cultivados en el laboratorio de ecología
microbiana de la universidad Nacional Mayor de San Marcos. Para la

21
 recolección de datos, se utilizó una ficha elaborada donde se anotaron los
datos obtenidos a través de una medición de los halos con el vernier. Las
pruebas fueron realizadas en el Laboratorio de la Universidad Nacional
Mayor de San marcos, entre los meses de Octubre 2017 y noviembre del
2017.

3.3 POBLACIÓN Y MUESTRA

3.2.1 Población
Flores de Manzanilla (Matricaria chamomilla)

3.2.2 Muestra
Se utilizará un total diez placas Petri con medio de cultivo Mueller Hinton.

3.4 TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS

Instrumento de medición de precisión vernier.

3.5 TÉCNICAS DE PROCESAMIENTO Y ANÁLISIS DE DATOS

3.5.1 Procedimiento experimental

A. Colecta e identificación de la población en estudio

Las Flores de Manzanilla (Matricaria chamomilla) fueron adquiridas en
puestos de mercados del distrito de la Victoria lima-Perú, cuya procedencia
es de la provincia de Tarma, departamento de Junín.

B. Microorganismo
Cepa Streptococcus pyogenes ATCC®19615, la cual fue importados a
través de laboratorios GenLab S.A.C y cultivado en el laboratorio de
Ecología Microbiana de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad
Nacional Mayor de San Marcos, entre los meses de Octubre 2017 y
noviembre del 2017.

22
3.6 METODOLOGÍA

3.6.1 Preparación del pulverizado

Las flores de Manzanilla (Matricaria chamomilla) fueron recolectadas y
limpiadas con alcohol de 70°, luego se procedió a secarlas al ambiente bajo
sombra por 14 días; finalmente se llevaron a secar nuevamente en una
estufa a temperatura 40°C por 24 horas hasta obtener una muestra
totalmente seca y fácilmente triturable. Posteriormente se pulverizó haciendo
uso de un molinillo manual hasta obtener un fino polvo. El pulverizado se
guardó en un frasco oscuro debidamente etiquetado. Se conservó en un
lugar fresco hasta su posterior uso.

3.6.2 Obtención del extracto

El proceso se realizó siguiendo las recomendaciones del protocolo de Chilon
S.(15) En un envase estéril de vidrio ámbar de boca ancha se colocó las
flores pulverizadas (250 g), luego se añadió un litro medio alcohol 96°, se
cerró herméticamente para evitar que el solvente se evapore durante la
extracción. Se dejó macerar por 10 días a temperatura ambiente, agitándose
dos veces al día. El extracto hidroalcohólico obtenido se lleva a rota vapor
con una temperatura de 40°c y presión de 110 milibares para recuperar
solvente y obtener el extracto limpio, obteniendo el extracto hidroalcohólico
seco correspondiente.
Luego de realizar las diluciones respectivas:

 Extracto hidroalcohólico al 10%: 4ml extracto hidroalcohólico al 60% +

21ml alcohol de 70°
 Extracto hidroalcohólico al 30%: 13ml extracto hidroalcohólico al 60% +
12ml alcohol de 70°
 Extracto hidroalcohólico al 50%: 21ml extracto hidroalcohólico al 60% +
4ml alcohol de 70°

23
SELECCION LAVADO ESCURRIDO

ADJUNTAR MOLIDO CORTADO

ALCOHOL

FILTRADO SECADO ENVASADO

Figura N° 1: Flujograma de la extracción del extracto hidroalcohólico de

las flores de Manzanilla (Matricaria chamomilla)

Marcha Fitoquímica: Identificación de metabolitos secundarios

Se utilizó el extracto hidroalcoholico para la identificación de metabolitos
secundarios que incluye reacciones de caracterización química de coloración
y precipitación

a) Determinación de taninos

Con gelatina. A 1mL de muestra se agregará 3 gotas de reactivo, en

una centrifuga y si queda en el fondo un precipitado de color blanco
confirma la presencia de taninos.

Con Cloruro Férrico o Alumbre férrico. A la muestra se agregará unas

gotas de cloruro férrico; si se observa una coloración negra azulada nos
indicara que el tanino pertenece a los derivados del ácido pirogálico,
mientras que la coloración verde nos indicará que deriva de la catequina.
24
b) Determinación de flavonoides

Con R. Shinoda. En un tubo de ensayo se colocará 1mL de muestra

con 1 limadura de magnesio pequeña, con un gotero se añadirá 3 gotas
de HCl concentrado. Si se observa un intenso burbujeo por la reacción
de las limaduras y la solución va adquiriendo una débil coloración
naranja al principio; conforme va reaccionando más, la coloración
naranja se va intensificando, hasta que después de 10 minutos la
solución tiene un color anaranjado intenso indicara un resultado positivo

c) Determinación de cumarinas
Agregar 1ml de la muestra diluida en un tubo de ensayo, humedecer un
papel de filtro en NAOH 10% tapar la boca del tubo, la observación de
fluorescencia verde amarillenta bajo la lámpara UV 365 nm indicara la
presencia de cumarinas fijas.

d) Determinación de quinonas
Se pesará dos gramos de muestra y se triturara hasta un polvo muy fino
en un mortero, luego se realizará los siguientes ensayos químicos:

Solubilidad en NaOH al 5%. En un tubo de ensayo se introducen 10 mg

de la muestra, se añade 0,2mL de etanol y 0,4mL de NaOH al 5%. El
cambio de coloración indicara la presencia de compuestos quinónicos.

Reacción de Bornträger. Un gramo de muestra se trata con NaOH 5%

en caliente, se filtrará, enfriara y se acidulará con HCl 20%, se añadirá
benceno, se agitará y se deja en reposo. Luego se separará la fase
bencénica a la cual se le añadirá NH4OH. La formación de una
coloración rosada a roja, indicara la presencia de antraquinonas.

25
e) Determinación de alcaloides

Reactivo de Dragendorff.Coger1ml del extracto diluido previamente en

alcohol de 70° con ayuda de una pipeta o gotero, agregar a un tubo de
ensayo. Adicionarle 0.5ml de HCl 1% y agitaragregamos 0.5 ml de
reactivo se observó positivo para este ensayo porque nos dio un
precipitado naranja.

Reactivo de Mayer. Se disolverá 1,36 g de HgCl2 en 60 mL de agua y

se adicionará 10 mL de una solución conteniendo 5g de KI y se diluirá
hasta un volumen de 100mL. Al agregar un exceso de reactivo a una
solución acidulada de la muestra se deberá observar la aparición de un
precipitado de blanco a crema

3.6.3 Cepa bacteriana

Para el estudio de la actividad antibacteriana de extracto hidroalcoholico de
las flores de Manzanilla (Matricaria chamomilla) se trabajó con una cepa de
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 adquirida en Genlab (anexo N° 3).

a. Reactivación de la cepa bacteriana

Siguiendo las indicaciones del proveedor se procedió a extraer el
hisopo que se encontraba en el contenedor de la cepa Streptococcus
pyogenes ATCC® 19615, se emulsionó en un tubo con Caldo
Tripticasa de Soya (TSB) y se incubó a 37°Cpor 24 a 48 horas en
anaerobiosis por el método de la vela en extinción. Al cabo de
48horas se realizó un repicaje en Agar Sangre (5% de sangre de
carnero) y finalmente la cepa fue conservada en un vial con Agar
tripticasa de soya (TSA) a 4ºC. Certificado de la cepa Streptococcus
pyogenes ATCC®19615 (anexo N° 7).

26
b. Identificación bacteriana de Streptococcus pyogenes ATCC ®
19615
Para lograr la identificación bacteriana se realizó un frotis
bacteriano, que consistió en colocar una gota de agua estéril en
el centro de un portaobjetos, luego se flameo el asa de siembra
y se tomó en condiciones asépticas una pequeña cantidad del
cultivo bacteriano y se transfirió a la gota de agua. Se removió la
mezcla con el asa de siembra hasta formar una extensión
homogénea. Se dejó secar la preparación, se fijó al calor suave y en
seguida se realizó la coloración Gram para la identificación
bacteriana. Realizado el frotis y fijadas las bacterias, se realizó el
examen microscópico determinando así la forma y el Gram de la cepa
bacteriana de Streptococcus Pyogenes. (Anexo 10)

c. Prueba de efectividad antibacteriana

c.1. Estandarización de la cepa aislada de Streptococcus

pyogenes
Se estandarizó la cepa bacteriana según la escala de Mc Farland 0.5,
para la cual se extrajeron con un asa de siembra de tres a cuatro
colonias de la cepa reactivada de Streptococcus pyogenes y se
inocularon en 5 ml de suero fisiológico al 0.9 %, se agitó el tubo por 5
minutos, se observó la misma turbidez de la escala de Mc Farland al
0.5. Bajo condiciones estériles se procedió a sembrar con un hisopo el
inóculo bacteriano en placas que contenían Agar Mueller Hinton. Las
placas se dejaron reposar unos minutos.

c.2. Difusión en agar con pozos

Se elaboraron pozos sobre la superficie de los agares con ayuda de

un sacabocados estéril de 6 mm de [Link] una micropipeta se
colocó 10 µl de extracto hidroalcohólico al 10%, 30% y 50%,

27
 Dimetilsulfóxido (control negativo) y Eritromicina control positivo se
dejó reposar por 30 minutos. Posteriormente, se incubaron las placas
se incubaron por 48 horas a 37°C en anaerobiosis.

d. Recolección de datos

d.1. Medición del diámetro de los halos de inhibición del

crecimiento bacteriano
Para la medición de los halos de inhibición se utilizó un vernier
previamente calibrado, con el fin de minimizar errores.
La lectura se realizó midiendo los halos de inhibición incluyendo el
diámetro del disco embebido.

Evaluación del Efecto Antibacteriano

La evaluación se realizó tanto cuantitativamente por medición
numérica de los halos de inhibición, y cualitativamente tomando como
referencia las pautas por Duraffourd. (32)

Escala de Duraffourd: Escala utilizada para determinar

cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, según diámetro de
inhibición. (32)

- Nula (-): para un diámetro inferior a 8 mm.

- Sensibilidad límite (sensible = +): para un diámetro comprendido
entre 8 a 14 mm.
- Medio (muy sensible = ++): para un diámetro entre 14 y 20 mm. -
Sumamente sensible (+++): para un diámetro superior a 20 mm.

28
29
 CAPITULO IV
PRESENTACION Y ANALISIS DE LOS RESULTADOS

4.1 PROCESAMIENTO DE DATOS: Resultados

Los datos fueron procesados mediante el paquete estadístico Stata (versión
14), con el que se realizó los siguientes procedimientos estadísticos de
análisis:
a) Obtención de medias con su respectiva desviación estándar.
b) Se presenta los resultados en tablas con su respectiva representación
gráfica.
c) Se considerará un margen de error estadístico de 5%.

Tabla Nº 1: Interpretación de la cantidad de metabolitos presentes

Muy abundante +++

Abudante ++

Moderado +

Escaso +/-

ausencia -

30
 Tabla N° 2: Lectura de la investigación del tamizaje fitoquímico del
extracto hidroalcoholico de las flores de manzanilla (Matricaria
chamonilla)

Ensayo Reactivo Resultado

Taninos Gelatina – cloruro de sodio +
Cloruro ferrico +
Flavonoides R. Shinoda +++
Cumarinas NaOH 10% +
Quinonas NaOH 5% +
Rx Borntrager +
Alcaloides Dragendorff +
Mayer +
Fuente: Ficha de recolección de datos

Ficha De Recolección De Datos Recolección de datos:

Se ha tomado las medidas de los halos de inhibición (en mm).

Tabla N° 3: Registro microbiológico de la inhibición del extracto

hidroalcoholico de las flores de manzanilla sobre Streptococcus
pyogenes ATCC 19615.

Control Control
positivo negativo Extracto al Extracto Extracto al
(DMSO) 10% al 30% 50%
N° Placa
(mm) (mm) (mm) (mm) (mm)

1 37 6 9.67 15.98 21.43

2 38 6 11.53 14.78 20.32
3 39 6 12.32 16.34 19.45
4 35 6 10.09 17.92 21.5
5 38 6 11.54 14.93 22.54
6 34 6 12.00 16.09 21.67
7 35 6 10.43 19.76 20.68
8 37 6 9.98 19.65 23.00
9 37 6 12.02 18.56 20.54
10 37 6 12.93 17.43 19.01

Fuente: Ficha de recolección de datos

31
 Tabla N°4: Estadística descriptiva de las medias de los halos de
inhibición obtenidos de los diferentes extractos

95% del intervalo de confianza

Desviación Error para la media
N Media Mínimo Máximo
estándar estándar
Límite inferior Límite superior

1,00 10 11,2510 1,12608 ,35610 10,4455 12,0565 9,67 12,93

2,00 10 17,1440 1,80785 ,57169 15,8507 18,4373 14,78 19,76

3,00 10 21,0140 1,26458 ,39989 20,1094 21,9186 19,01 23,00

4,00 10 6,0000 ,00000 ,00000 6,0000 6,0000 6,00 6,00

Total 40 13,8523 5,90681 ,93395 11,9632 15,7413 6,00 23,00

Dónde:
1 = Extracto al 10%
2 = Extracto al 30%
3 = Extracto al 50%
4 = Control Negativo (DMSO)

En el cuadro adjunto podemos observar la aplicación de la estadística

descriptiva a los datos obtenidos, todas las medias se encuentran dentro de
los límites establecidos a un intervalo de confianza del 95% y un error
relativo del 5% por ello ningún dato se excluye y por ende se aplicará
estadística inferencial para determinar si existen diferencias significativas de
las medias de cada tratamiento aplicado.

Tabla N°5: Prueba de homogeneidad de varianzas de las medias de los

halos de inhibición obtenidos de los diferentes extractos

Estadístico de
df1 df2 Sig.
Levene

11,622 3 36 ,000

32
Dónde:
Ho = Las varianzas de los tratamientos aplicados son homogéneos
(P < 0.05)
H1 = Las varianzas de los tratamientos aplicados no son homogéneos
(P > 0.05)

La prueba de homogeneidad de varianzas nos permite determinar si las

varianzas de cada tratamiento aplicado son iguales o diferentes
estadísticamente, depende de ello para determinar el tipo de prueba
estadística inferencial a ser aplicado. Observamos que P < 0.05, por lo tanto
se concluye que las varianzas de los tratamientos aplicados son
homogéneas, rechazando la hipótesis alternativa. Es importante el resultado
ya que esto nos permite elegir la prueba estadística inferencial
correspondiente que en este caso será la prueba ANNOVA ONE WAY o de
un factor.

Tabla N° 6: Prueba de ANNOVA One Way de las medias de los halos de

inhibición obtenidos de los diferentes extractos

Suma de Media
gl F Sig.
cuadrados cuadrática

Entre grupos 1305,506 3 435,169 283,703 ,000

Dentro de 55,220 36 1,534

grupos

Total 1360,726 39

Dónde:
Ho = No existe diferencias significativas entre los tratamientos
aplicados (P > 0.05)
H1 = Existe diferencias significativas entre los tratamientos aplicados
(P < 0.05)

33
 La prueba ANNOVA One Way nos permite descifrar si existen diferencias
significativas entre los tratamientos aplicados comparando la media de cada
uno de ellos. Al observar el resultado (P < 0.05) se afirma la hipótesis
alternativa, es decir, existe diferencias significativas entre los tratamientos
aplicados. Si deseamos determinar que medias son estadísticamente
diferentes se debe aplicar pruebas POST HOC, en este caso se aplicará la
prueba de TUKEY.

Tabla N° 7: Comparaciones múltiples de las medias de los halos de

inhibición obtenidos de los diferentes extractos

95% de intervalo de
(I) (J) Diferencia de Error confianza
Sig.
Concentración Concentración medias (I-J) estándar Límite Límite
inferior superior
*
2,00 -5,89300 ,55388 ,000 -7,3847 -4,4013
*
1,00 3,00 -9,76300 ,55388 ,000 -11,2547 -8,2713
*
4,00 5,25100 ,55388 ,000 3,7593 6,7427
*
1,00 5,89300 ,55388 ,000 4,4013 7,3847
*
2,00 3,00 -3,87000 ,55388 ,000 -5,3617 -2,3783
*
4,00 11,14400 ,55388 ,000 9,6523 12,6357
*
1,00 9,76300 ,55388 ,000 8,2713 11,2547
*
3,00 2,00 3,87000 ,55388 ,000 2,3783 5,3617
*
4,00 15,01400 ,55388 ,000 13,5223 16,5057
*
1,00 -5,25100 ,55388 ,000 -6,7427 -3,7593
*
4,00 2,00 -11,14400 ,55388 ,000 -12,6357 -9,6523
*
3,00 -15,01400 ,55388 ,000 -16,5057 -13,5223
*. La diferencia de medias es significativa en el nivel 0.05.

Dónde:
1 = Extracto al 10%
2 = Extracto al 30%
3 = Extracto al 50%
4 = Control Negativo (DMSO)

La prueba de TUKEY es una prueba estadística que nos permite realizar

comparaciones múltiples y además determina que medias son
34
estadísticamente homogéneas. En el cuadro adjunto observamos que
existen diferencias significativas entre todos los extractos y control negativo.

Tabla N°8: Subconjunto homogéneo Prueba de Tukey de las medias de

los halos de inhibición obtenidos de los diferentes extractos

Subconjunto para alfa = 0.05

Concentración N 1 2 3 4

4,00 10 6,0000

1,00 10 11,2510

2,00 10 17,1440

3,00 10 21,0140

Sig. 1,000 1,000 1,000 1,000

Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.

a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 10,000.

La prueba de TUKEY permite también la homogeneidad de cada extracto y

del control negativo. En el cuadro adjunto se observa que todos los extractos
y el control negativo presenta medias heterogéneas, por ello se deduce que
el extracto hidroalcohólico de manzanilla al 50% presente el mejor efecto
antibacteriano frente a Streptococcus pyogenes.

35
Tabla N° 9: Medidas de los halos de inhibición, valor de la mediana,
media, desviación estándar e intervalos de confianza

Extracto hidroalcohólico de las flores de Manzanilla

Concentraciones
Halos de inhibición (mm)

Control Control
N° PLACA 10% 30% 50%
positivo negativo
1 37 6 9.67 15.98 21.43
2 38 6 11.53 14.78 20.32
3 39 6 12.32 16.34 19.45
4 35 6 10.09 17.92 21.5
5 38 6 11.54 14.93 22.54
6 34 6 12.00 16.09 21.67
7 35 6 10.43 19.76 20.68
8 37 6 9.98 19.65 23.00
9 37 6 12.02 18.56 20.54
10 37 6 12.93 17.43 19.01
Mediana 11.535
37 6 16.885 21.055

Media 36.7 6 11.2810 17.1440 21.014

Desviación 1.08243
1.56702 ,00000 1.80785 1.26458
estándar
I.C 95% inferior 35.5790 6,0000 10.5067 15.8507 20.1094
I.C 95% superior 37.8210 6,0000 12.0553 18.4373 21.9186

Fuente: Ficha de recolección de datos

36
Figura N° 2: Media de los halos de inhibición El Grafico 1 muestra la
media de los halos de inhibición donde se puede apreciar un halo
superior de la concentración de 50% seguido de las concentraciones
30% y 10%.

MEDIA DE HALOS DE INHIBICION

40
36.7
35

30
control positivo
25 control negativo
21.05
20 10%
17.14
30%
15
11.28 50%

10
6
5

Tabla N° 10: Efecto inhibitorio in vitro del extracto hidroalcohólico de

las flores de manzanilla sobre Streptococcus pyogenes ATCC 19615
según la escala de Duraffourd

Extracto
hidroalcohólico de las Media Halo (mm) Escala de Duraffourd
flores de Manzanilla
10% 11.28 Sensible limite
30% 17.14 Muy sensible
50% 21.01 Sumamente sensible

Fuente: Ficha de recolección de datos

37
 Figura N° 3: Efecto inhibitorio in vitro del extracto hidroalcohólico de
las flores de manzanilla sobre Streptococcus pyogenes ATCC 19615

Leyenda:
1 = Control positivo
2 = Control negativo
3 = Extracto al 10%
4 = Extracto al 30%
5 = Extracto al 50%

Tabla N°11: Resumen 95% del Intervalo de Confianza con el post-test

de Comparación múltiple de Dunnett. Intervalo de confianza 95%

Diferencia
Comparación Significancia Intervalo
de medias
1 vs 2 -30.7000 SIGNIFICATIVO -32.1755 a -29.2245
1 vs 3 -25.4190 SIGNIFICATIVO -26.8945 a -23.9435
1 vs 4 -19.5560 SIGNIFICATIVO -21.0315 a -18.0805
1 vs 5 -15.6860 SIGNIFICATIVO -17.1615 a -14.2105

Fuente: Ficha de recolección de datos

38
4.2 CONTRASTACIÓN DE HIPÓTESIS
H: La concentración de las flores de manzanilla al 50% tiene efecto
Antibacteriano frente a la cepa de la Streptococcus pyogenes ATTC 19615

4.3 DISCUSIÓN DE RESULTADOS

En el presente estudio se demostró la presencia antibacteriana de las flores
de Manzanilla (Matricaria chamomilla) proveniente del departamento Junín -
Tarma, sobre una cepa de Streptococcus pyogenes. Investigación realizada
in vitro, los resultados de la presente investigación corroboraron el efecto
relativo antibacteriana de la manzanilla, Demostrando la presencia
inhibitoria in vitro del extracto hidroalcohólico de las flores de Manzanilla
(Matricaria chamomilla) tres diferentes concentraciones 10%, 30% y 50%
frente a cepas de Streptococcus pyogenes presentando un halo de inhibición
mínimo al 10% (11.28 mm) y una máxima en la concentración del 50%
(21.01 mm).
Este estudio coincide con el de Zuta quien en el 2014 analizo la actividad
bacteriana a de la manzanilla y matico a diferentes concentraciones sobre el
Estreptococos aereus hallando en la concentración al 100% halos de
inhibición de crecimiento bacteriano que van desde 10,12 y 15 mm
resultados muy similares al nuestro.
En su estudio Cosco demostró la actividad inhibitorio de la Matricaria;
nuestro estudio coincide en el efecto relativo, inhibitorio del Streptoccocus
mutans a diferentes concentraciones del aceite esencial de Matricaria
chamomilla “manzanilla”, teniendo una media de 22mm de diámetro en sus
halos de inhibición para la concentración de 100%.

Así también Chilón S. En el 2015 evaluó el efecto inhibitorio in vitro de

Rosmarinus officinalis L. (Romero) comparado con penicilina sobre cepas de
Streptococcus pyogenes, mostrando resultados en las concentraciones 50%
con un promedio de halos de inhibición de 20.7 mm muy similares a nuestro
estudio, demostrando efecto inhibitorio in vitro sobre cepas de Streptococcus
pyogenes.

39
 CAPITULO V
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

5.1 CONCLUSIONES

1. El extracto hidroalcohólico de las flores de Manzanilla (Matricaria

chamomilla) al 10% presenta sensibilidad, es Sensible limite sobre el
Streptococcus pyogenes con promedios de halos de inhibición de. 11.28
mm

2. El extracto hidroalcohólico de las flores de Manzanilla (Matricaria

chamomilla) al 30 % es muy sensible sobre el Streptococcus pyogenes con
un promedio de halo de inhibición de 17.14mm.

3. El extracto hidroalcohólico de las flores de Manzanilla (Matricaria

chamomilla) que presentó mayor sensibilidad sobre el Streptococcus
pyogenes fue la de 50 % con un promedio de halo de inhibición de
21.01mm

40
5.2 RECOMENDACIONES

1. Realizar más estudios con cepas hospitalarias ya que son tomadas de

los propios pacientes, y han surgido principalmente en los centros de
salud como consecuencia por el amplio uso de antibacterianos.

2. Elaborar estudios con cepas nativas para evaluar si existe alguna

diferencia significativa con el estudio usando cepas estandarizadas.

3. Se recomienda trabajar con una muestra mayor para que los resultados
sean de una mayor significancia estadística.

4. Se recomienda utilizar preparados galénico a base de Matricaria

Chamomilla ya que tiene efecto antibacteriano.

41
 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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Nacional de Salud, 2002.

47
 Anexo 1: Matriz de consistencia

TITULO: EFECTO ANTIBACTERIANO DEL EXTRACTO HIDROALCOLICO DE LAS FLORES DE MANZANILLA (Matricaria chamomilla) FRENTE A CEPAS de STREPTOCOCCUS PYOGENES,
ATTC 19615 IN |VITRO

Dimension Indicador
Problema general Objetivo general Hipótesis general Variable Metodología
es es

¿Cuál es el efecto antibacteriano del Determinar el efecto antibacteriano del Si existe efecto antibacteriano del VI VI: VI: Diseño
extracto hidroalcoholico de las flores extracto hidroalcoholico de las flores de extracto hidroalcoholico de las EXTRACTO
Manzanilla (Matricaria chamomilla) Manzanilla (Matricaria chamomilla) frente flores de Manzanilla (Matricaria HIDROALCOHOL Extracción Concentra Experimental
frente a cepas de Streptococcus a cepasde Streptococcus pyogenesATTC chamomilla) frente a cepas ICO
pyogenesATTC 19615, invitro? 19615,in vitro deStreptococcus pyogenesATTC de ción del
DE Manzanilla. extracto
19615, in vitro.
Manzanilla(Matric
en
aria chamomilla) Tipo:
estudio.
estudio correlacional
Problema especifico Objetivo especifico Hipótesis especifica VD VD: VD:
EFECTO
1. ¿De qué manera la concentración 1. Determinar el efecto antibacteriano de 1. La concentración del extracto Halo de Inhibición
ANTIBACTERIAN
del extracto hidroalcohólico de las extracto hidroalcohólico de las flores de hidroalcohólico de las flores de inhibición de
O IN VITRO Nivel:
flores de manzanilla (Matricaria manzanilla (Matricaria chamomilla) al manzanilla (matricaria chamomilla) sobre los crecimient
chamomilla) al 10 % tiene efecto 10% frente a cepa de Streptococcus al 10% tiene efecto antibacteriano
microrganis o (halos Correlacional transversal
antibacteriano frente a cepa de pyogenes ATTC 19615, in vitro. in vitro frente a cepa de VI
Streptococcus pyogenes ATTC 19615, Streptoccus pyogenes ATTC
mos de
CEPAS DE
invitro? 2. Determinar el efecto antibacteriano de 19615. inhibición)
Streptoccocuspyo Método de
extracto hidroalcohólico de las flores de genes ATTC unidad de
difusión por Población y muestra:
2. ¿De qué manera la concentración manzanilla (Matricaria chamomilla) al 2. La concentración del extracto 19615 medida
del extracto hidroalcohólico de las 30% frente a cepa de Streptococcus hidroalcohólico de las flores de perforación
-10 placas con microorganismos de
flores de manzanilla (Matricaria pyogenes ATTC 19615, in vitro. manzanilla (matricaria chamomilla) en placa mm de
al 30% tiene efecto antibacteriano
Estreptoccus pyogenes
chamomilla) al 30 % tiene efecto diámetro.
antibacteriano frente a la cepa de 3. Determinar el efecto antibacteriano de in vitro frente a cepa de
-
Streptococcus pyogenes ATTC 19615, extracto hidroalcohólico de las flores de Streptoccus pyogenes ATTC
invitro? manzanilla (Matricaria chamomilla) al 19615.
50% frente a cepa de Streptococcus
48
3. ¿De qué manera la concentración pyogenes ATTC 19615, in vitro.
del extracto hidroalcohólico de las
flores de manzanilla (Matricaria 3. La concentración del extracto Instrumentos de recolección de
chamomilla) al 50 % tiene efecto hidroalcohólico de las flores de datos:
antibacteriano frente a cepa de manzanilla (matricaria chamomilla)
Streptococcus pyogenes ATTC 19615, al 50% tiene efecto antibacteriano
 Instrumento de medición de
invitro? in vitro frente a cepa de
precisión vernier
Streptoccus pyogenes ATTC
19615.
 Ficha de recolección de
datos

Técnica:
Prueba de sensibilidad método de
difusión en pozo

Procesamiento y análisis de datos:

análisis de varianza (ANOVA)

49
Anexo 2: Certificado obtención de cepas ATCC 19615

50
51
Anexo 3: Factura de la cepa Streptoccus pyogenes ATCC

52
53
Anexo 4: Constancia por haber realizado la parte experimental

54
55
 Anexo 5. Ficha de recolección de datos

TESIS:

“EFECTO ANTIBACTERIANO DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE LAS

FLORES DE MANZANILLA (Matricaria chamomilla) FRENTE A CEPAS DE
Streptococcus pyogenes ATTC 19615, IN VITRO”

Extracto hidroalcoholico de las flores de manzanilla

Concentraciones

Halos de inhibición

N°Placa Control Control 10% 30% 50%

positivo negativo

(mm) (mm) (mm) (mm) (mm)

10

56
 Anexo 6: Preparación del extracto hidroalcoholico de las flores manzanilla
(matricaria chamomilla)

Pulverización
Recolección Selección y secado

Eliminación del Filtración Adición del solvente

solvente

Se obtuvo 5 gr de extracto
Obtención del
etanolico solido de
extracto solido
Manzanilla

57
 Tamizaje fitoquímico extracto hidroalcoholico de las flores de
manzanilla(Matricaria chamonilla)

1. Determinación de taninos

Gelatina-cloruro de sodio Cloruro férrico

2. Determinación de flavonoides

R, Shinoda

58
3. Determinación de camarinas

NaOH 10%

4. Determinación de quinonas

NaOH 5% Rx Borntrager

59
5. Determinación de alcaloides

Dragendorff Mayer

60
Anexo 7: Reconstitución de la cepa Streptococcus pyogenes ATTC®19615

Streptococcus pyogenes
ATCC®19615

Emulsión del hisopo del contenedor en

TSB
°
Incubar a 37 Cpor 24 a 48 horas en
anaerobiosis

Siembra por el método de estriado

°
Incubar a 37 Cpor 24 a Agar Sangre (5% de
Agar Tripticasa de Soya 48 horas en sangre de carnero)
(TSA) anaerobiosis

61
 Coloración Gram +

Estandarización de la cepa de streptococcus pyogenes ATCC 19615 según

la escala mc farland 0.5

62
Medición de halos de inhibición

63
Anexo 8: Determinación de la actividad antibacteriano de las flores de
Manzanilla (Matricaria chamomilla) frente a Streptococcus pyogenes
mediante la técnica difusión en agar

Reactivación de la cepa Preparación y estandarización

patógena del inoculo

Se hizo los pozos con un Del inoculo del microorganismo

sacabocado (tapón horador) se sembró por el método del
hisopado en una placa de
MullerHinton.

Reposar por 30 min. A

temperatura ambiente y luego se
°
incubo a 37 Cpor 24 horas en
anaerobiosis
Se agregó 50 ul del extracto
preparado

64
 Lectura a las 24 horas de los Halos de inhibición

Concentración
de extracto Concentración
hidroalcohólico de extracto
de las flores de hidroalcohólico
manzanilla 50% de las flores de
manzanilla al
10%

Concentración de
extracto
hidroalcohólico
de las flores de
manzanilla al 30%

Control Positivo
(Eritromicina)

Control negativo (DMSO)

65