DETERMINACIÓN DE AMILASA SÉRICA, LIPASA E
IDENTIFICACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES
PRÁCTICA NO.2
INTRODUCCIÓN
Amilasa-Lipasa
El glucógeno y el almidón provenientes de la dieta, inicia su hidrólisis en la cavidad oral
por la acción de α-amilasa (ptialina) secretada por las glándulas parótidas y a nivel de
duodeno se vierte el jugo pancreático rico en amilopectina o α-amilasa pancreática que
rompe al azar de enlaces glucosídicos α-1→4 de los almidones y la enzima amilo-1,6-
glucosidasa rompe las ramificaciones de las uniones glucosídicas en la posición 1→6,
liberándose las unidades de glucosa.
La α-amilasa pancreática, hace que aumente la glucemia (porque libera glucosa) lo que
desencadena la secreción de insulina por parte del páncreas
Cuando un tejido sufre una alteración o lesión liberan enzimas específicas en el torrente
sanguíneo, sitio en que pueden detectarse en pocas horas mediante exámenes de
laboratorio realizados en el suero o plasma del paciente, su cuantificación es útil en el
diagnóstico diferencial si se miden sus isoenzimas respectivas.
En el caso de α-amilasa implica al páncreas y glándulas salivales; la medición de las
isoenzimas de origen salival y pancreático elevan la sensibilidad y especificidad
diagnostica de la prueba. La determinación de α-amilasa y lipasa, evalúa la función del
páncreas y ayuda en el diagnostico o control de enfermedades que afectan a este órgano.
Su elevación se observa en lesiones de las glándulas salivales, cistitis, colelitiasis, ulcera
péptica perforada, obstrucción intestinal, cetoacidosis diabética y embarazo. La amilasa y
lipasa, pueden indicar inflamación o cáncer del páncreas. La medición de glucosa
sanguínea en ayunas, también es útil en el caso de pancreatitis aguda, carcinomas
pancreáticos, meningitis y en algunos casos de envenenamientos (por CO).
La lipasa producida principalmente en el páncreas exocrino y en pequeñas cantidades por
las glándulas salivales y mucosas gástricas, intestinales y pulmonares, escinde las
uniones de los ésteres de glicerol de los ácidos grasos. La determinación de la lipasa es
útil para el diagnóstico y tratamiento de las patologías del páncreas como pancreatitis
aguda y obstrucción del conducto pancreático. El diagnóstico clínico debe realizarse
teniendo
Azúcares Reductores
En el adulto los glúcidos aportan más de la mitad de sus requerimientos energéticos, el
almidón constituye el 60%, seguido de la sacarosa (30%) y 10 % de lactosa ingeridos en la
dieta principalmente.
La α-amilasa salival, α-amilasa pancreática hidrolizan los enlaces α-1,4 y Amilo 1,6 -
glucosidasa los enlaces 1,6 de los polisacáridos durante el proceso digestivo. Las
disacaridasas (lactasa o β-galactosidasa, la sacarasa, la maltasa y la isomaltasa) son
segregadas a través de las membranas del lado luminal de los enterocitos del borde en
cepillo de las vellosidades del intestino delgado y permanecen asociadas al mismo y son
las responsables de la hidrólisis de los disacáridos. Si hay deficiencia enzimática, los
disacáridos (lactosa, sacarosa) pasan a intestino grueso no digeridos y como son
osmóticamente activos ocasionan diarrea osmótica, además las bacterias al
metabolizarlos producen grandes cantidades de CO2 e H2, estos gases provocan
retortijones abdominales, flatulencia e incrementa la diarrea osmótica.
El disacárido de importancia médica es la lactosa, porque genera intolerancia es la
alteración más común y la menos peligrosa. En un recién nacido su fuente energética es
la lactosa (lactancia natural y fórmula adaptada) hasta alcanzar progresivamente los
porcentajes descritos para el adulto a medida que va creciendo, sin embargo, cuando
existe un déficit de la enzima lactasa (β-galactosidasa), no puede digerir leche o derivados
lácteos e inicia el cuadro clínico descrito anteriormente.
Existe una diversidad de métodos para el diagnóstico de intolerancia a la lactosa, como la
medición de la actividad de la lactasa obtenida a través de enteroscopia, Test de Hidrógeno
espirado (equipo sofisticado que pocas instituciones de salud tienen), Prueba de Tolerancia
a la lactosa es la más común (midiendo glicemia después de una ingesta oral de lactosa
entre los inconvenientes están: los síntomas y la toma de múltiples muestras de sangre)
COMPETENCIAS DE PRÁCTICA 2
El alumno es capaz de analizar e interpretar los niveles de amilasa y lipasa sérica
determinados con el equipo espectrofotómetro UV-Vis DR6000, con respecto a los
valores normales de referencia y correlacionar con datos clínicos para establecer un
diagnóstico presuntivo y probable tratamiento.
El alumno es capaz de analizar e interpretar los niveles de azúcares reductores a
partir de la hidrólisis de disacáridos de importancia médica mediante reacciones con
tabletas AimTab, explicar su utilidad en el diagnóstico de intolerancias y probable
tratamiento.
CASO CLÍNICO AMILASA-LIPASA
Práctica No. 2
Femenina de 32 años que acude a urgencias por epigastralgia. Antecedentes de
importancia: obesidad y dislipidemia con manejo de lovastatina 20 mg/día y gemfibrozilo
irregularmente, adicionalmente uso de productos homeopáticos (espirulina y vinagre de
manzana) y desde hace 12 años planifica con anticonceptivos orales. Al ingreso se
encuentra con abdomen blando, doloroso a la palpación en epigastrio sin signos de
irritación peritoneal, sin otro hallazgo anormal. Estudios: Lab. Hiperamilasemia –Amilasa:
312 UI/L (normal < 53 UI/L)- e hipertrigliceridemia triglicéridos 2087 mg/dL(40- 160 mg/dL),
Proteínas totales: 5.5 g/dl (6-8.3 g/dl), albúmina = 1.45 g/dl (3.5 -5.5) g/dl. Ecografía de
hígado y vías biliares más colangiorresonancia dentro de límites normales. Se diagnostica
con pancreatitis. Durante su estancia hospitalaria se decide manejo con insulina
Analiza el caso clínico y da respuesta a lo siguiente.
1) ¿Cuáles son los síntomas relevantes de la paciente del padecimiento actual?
2) ¿Qué pruebas de laboratorio contribuyeron al establecimiento del diagnóstico final?
3) Describe la acción de la amilasa
4) ¿Qué prueba de laboratorio incluiría usted, si sospecha de una pancreatitis aguda de
etiología alcohólica?
5) ¿Cuál fue el objetivo del tratamiento (infusión de insulina)?
6) Explica que enzima activó la hormona hipoglucemiante.
Tema de estudio autodirigido: Enzimas digestivas
Reestructuraron: Dr. Carlos Daniel Zavala, Dr. José Luis Ramos
CONCLUSION. (del caso clínico de su paciente)
Preguntas exploratorias
Práctica No.2
INVESTIGACION:
1) ¿Cuál la función de α-amilasa en el proceso digestivo de almidón y glucógeno?
Explique.
2) ¿Cuál es la función de la lipasa?
3) Escribe el nombre por lo menos de 4 enzimas digestivas.
CASO CLÍNICO AZÚCARES REDUCTORES
Masculino de 17 años de edad fue a consulta por evacuaciones disminuidas en
consistencia. A la anamnesis refiere distensión abdominal difuso tipo cólicos, aumenta
posterior a alimentos, disminuye levemente posterior a evacuaciones, achaca cuadro a
haber sido el honroso campeón de competencia de quien comía un Mega Banana Split con
medio litro de helado de cada sabor (fresa, chocolate y vainilla), con su respectiva dosis
de crema chantilly, en la menor cantidad de tiempo; las evacuaciones son disminuidas en
consistencia, de liquidas a semipastosas, en frecuencia de 4 a 6 en últimas 12 horas,
explosivas, con flatulencias abundantes. Menciona cuadros similares ocasionales
posteriores a comer algunos productos lácteos. A la exploración: T/A: 120/70, FC: 100,
Temp: 37.5. De laboratorio reportan: Glucosa sérica: 140 mg/dl, azúcares reductores en
orina (++) y coprocultivo negativo.
Analiza el caso clínico y da respuesta a lo siguiente.
1) ¿Cuál es el diagnóstico definitivo (s) al correlacionar la clínica con los resultados de
laboratorio?
2) En base a los grupos funcionales, ¿Cómo se clasifican los carbohidratos?
3) En base a la cantidad de unidades, ¿Cómo se clasifican los carbohidratos y cuál
está involucrado en este paciente?
4) En base a la respuesta de la pregunta anterior explica que enzima está involucrada,
así como su función reductora.
5) Explica la relación entre la deficiencia de la enzima y los síntomas del paciente.
Tema de estudio autodirigido: Carbohidratos, Intolerancia a la lactosa
Reestructuraron: Dr. Carlos Daniel Zavala, Dr. José Luis Ramos
CONCLUSION. (del caso clínico de su paciente)
Preguntas exploratorias
Práctica No.2
INVESTIGACION:
1) ¿Cuál es la explicación bioquímica de la diarrea?
2) ¿Cuál es la explicación bioquímica de la flatulencia?
3) La galactosa forma parte de la estructura de glucoproteínas, cerebrósidos, gangliosidos,
entre otras; si se suprime de la dieta ¿En qué grado afectará al organismo,
principalmente SNC? Explica.
BIBLIOGRAFIA CONSULTADA DEL CASO CLÍNICO Y PREGUNTAS PREVIAS (3
libros o artículos originales recientes)
DESARROLLO EN EL LABORATORIO.
Amilasa-Lipasa
FUNDAMENTO
Amilasa: El procedimiento amiloclásico mide la actividad de la α-amilasa determinando la
hidrólisis del almidón la cual se hace evidente por la disminución de la formación del
complejo almidón- yodo. La actividad de la α-amilasa es inversamente proporcional a la
cantidad del complejo color azul, el cual absorbe a 405 nm.
Lipasa: A pH alcalino, el sustrato de lipasa 1,2-O-dilauril-rac-glicerol -3-ácido glutárico-(6-
metil resorufina)-éster, se desdobla por acción de la lipasa pancreática, formándose 1,2-O-
dilauril-rac-glicerol y ácido glutárico-(6-metil resorufina)-éster, que es un producto
inestable.Éste en solución alcalina se transforma espontáneamente en acido glutárico y
metilresorufina, cuya intensidad de color es directamente proporcional a la actividad de la
lipasa presente en la muestra cuantificada a 578 nm.
MATERIAL POR EQUIPO
❖ 2 tubos c/tapón rojo o amarillo
❖ Agujas vacutainer o jeringas de 5 ml.
❖ 1 Holder (en caso de usar agujas vacutainer )
❖ 1 ligadura de látex
❖ Torundas con alcohol y secas
❖ 4 celdas de 10 mm para espectrofotómetro
❖ 1 micropipeta de 1000 µl
❖ Puntillas azules para micropipeta de 1000 µl
❖ 1 micropipeta de 10-100 µl
❖ Puntillas amarillas para micropipeta de 10-100 µl
MATERIAL POR GRUPO.
❖ 1 centrifuga
❖ Espectrofotómetro UV-Vis DR6000
NOTA: preguntar al docente, si traerá usted al paciente y que indicaciones debe dar para
la toma de muestra
TRABAJO PRACTICO
Práctica Núm. 2
1. Obtención de muestras (el docente le indicara si trae un paciente)
2. Centrifugar la muestra a 3000 rpm durante 5 minutos
3. Entregar la muestra al docente para su proceso con el espectrofotómetro UV-Vis DR600
4. El docente le entregará resultados del paciente conocido.
5. Analizar los parámetros y establecer un diagnostico presuntivo o final (En base a
resultados e información bibliográfica).
6. Sugerir un tratamiento
7. NOTA: Es recomendable que cada laboratorio
establezca sus propios valores de referencia y
consultar bibliografía de apoyo para cada parámetro.
PROCEDIMIENTO AMILASA
1. Longitud de onda 405 nm
2. Temperatura 37°C/15-25°C
3. Ajustar espectro a cero con agua destilada
4. Pipetear en tubos de reacción
Tubo Muestra
1 Reactivo (mL) 1.0
2 Muestra (µL) 20
5. Mezclar e incubar 30 segundos a 37 °C
6. Leer absorbancia de la muestra con respecto al blanco de reactivo
7. Leer absorbancia cada minuto por 3 minutos
8. Calcular el promedio de incremento de absorbancia por minuto (Abs/min)
*Nota: La hemolisis interfiere en los resultados. La actividad de la alfa amilasa puede ser
inhibida por factores quelantes como citrato y EDTA
Cálculos Valor de Referencia
Suero o Plasma: Suero: Hasta 90 UI/L
A / min x 3954 = U/L Amilasa Orina: Hasta 450 UI/L
PROCEDIMIENTO LIPASA
1. Longitud de onda 578 nm
2. En tres tubos correspondientes a blanco, patrón y muestra añadir las siguientes
cantidades
Técnica Blanco Patrón Muestra
1 Agua (µL) 10 — —
2 Reactivo A (mL) 1 1 1
3 Estándar (µL) — 10 —
4 Muestra (µL) — — 10
3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37 °C
4. Adicionar seguidamente el reactivo B
Técnica Blanco Patrón Muestra
1 Reactivo B (µL) 600 600 600
5. Mezclar bien, al cabo de 60 seg. Leer (A1) para muestra y patrón
6. Pasados 90 seg. más, volver a leer (A2) para muestra y patrón
7. Calcular A de la muestra y el patrón y obtener resultado final.
Cálculos Valor de Referencia
Suero o Plasma: Suero, plasma: Menor a 60 UI/L
∆𝐴 = 𝐴2 − 𝐴1
(𝐴2−𝐴1)𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝑥𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑆𝑇𝐷 (49.8) = 𝑈/𝐿
(𝐴2−𝐴1)𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛
Nota: La hemolisis interfiere en el ensayo. La hemoglobina interfiere a partir de 400 mg/dl,
la bilirrubina a partir de 60 mg/dl.
FUNDAMENTO
Azúcares reductores
Cuando un glúcido se cicla, se forma un carbono anomérico (C1) a partir del grupo aldehído
(hemiacetal) o de la cetona (hemicetal), el oxígeno del (C1) por eso se les llama azúcares
reductores. La reacción redox ocurre entre el hemiacetal o hemicetal y el sulfato de Cobre
(II) contenido en los reactivos de Tollens, Benedict ó Fehling; es decir, un azúcar reductor,
reduce al cobre (Cu++) y produce un precipitado de óxido cuproso (CuO) que vira de color
anaranjado a rojo ladrillo. La cantidad de precipitado y la intensidad de coloración es
directamente proporcional a la concentración de azúcar reductor presente en la muestra.
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
AZÚCARES REDUCTORES
MATERIAL POR EQUIPO
• 1 tubo de ensayo de 16 x 150 mm
• 1 gradilla
• 1 piseta solución NaCl 0.9%
• 1 agitador de madera
REACTIVOS POR GRUPO
• 1 Tableta AimTab Reducing substances tablets
EL ALUMNO TRAERA EL DIA DE LA PRACTICA (equipo)
• 3 ml. de orina (persona diabética)
• Heces líquidas (Muestra diarreica de persona intolerante a la lactosa)
NOTA: ideal paciente con intolerancia a la lactosa o tras una dieta rica en carbohidratos
reductores.
AZÚCARES REDUCTORES EN ORINA O HECES
(Tabletas AimTab Reducing substances tablets)
1) Con el gotero en posición vertical, coloque 5 gotas de muestra en el tubo de
ensayo.
Muestra (heces/ orina)
+
Solución salina
2) Enjuague el gotero y agregue 10 gotas de agua al tubo de ensayo.
3) Coloque 1 tableta en el tubo. No agitar. Permita que se lleve a cabo
completamente la reacción (dura aprox. 15 seg.) después que se hay detenido
la ebullición.
4) Transcurridos los 15 segundos, mezcle suavemente y de inmediato compare el color
desarrollado con la carta de color (la tendrá el docente). Ignore el sedimento y el
cambio de color que se desarrolle después.
5) Anote la concentración de glucosa que más se aproxime al color del líquido
desarrollado.
REPORTE INDIVIDUAL
PRÁCTICA NO. 2 AMILASA, LIPASA Y AZÚCARES REDUCTORES
Título de la práctica
____________________________________________________________
Nombre del alumno _______________________________________ Gdo. _____
Gpo.______
Fecha de realización ___________________________ Fecha de entrega
_____________
Fecha de Revisado ____________________________
ANALISIS E INTERPRETACION DE RESULTADOS
CONCLUSION.
BIBLIOGRAFIA CONSULTADA (3 libros o artículos originales recientes)
EVALUACION
PRÁCTICA NO.2: AMILASA, LIPASA Y AZÚCARES REDUCTORES
INDICADORES EXCELENTE BUENO REGULAR DEFICIENTE
REPORTE DE PRACTICA Cumple con todos los Falta menos de 1 dato Falta más de la mitad de No presenta los datos
10% datos llenados en el llenado en el reporte los datos solicitados. solicitados.
-Título de la Práctica. reporte de práctica. de práctica.
-Nombre del alumno.
-Grado/Grupo.
-Fecha de realización.
-Fecha de Entrega.
CASO CLINICO Interpreta y analiza los Interpreta y analiza los Interpreta y analiza los No Interpreta y no analiza
resultados del caso clínico resultados obtenidos resultados obtenidos pero los resultados obtenidos del
20% en base a la clínica del pero no no redacta la conclusión con caso clínico.
-Conclusión. paciente comparativamente comparativamente con la sus propias palabras en base
-Bibliografía (mínimo 3) con la bibliografía clínica del paciente. a la clínica del paciente. No indica bibliografías.
consultada.
Bibliografía incompleta. Presenta menos de 2
bibliografías.
ANALISIS E -Realiza el procedimiento -No Recopila y ordena los -No presenta los resultados
INTERPRETACION DE de pipeteo correcto -No incluye unidades de materiales y equipos de obtenidos.
los valores de referencia. laboratorio, acorde a su
RESULTADOS. practica de lab
-Manejo del -No realiza su diagrama
30% espectofotometro -No Realiza esquemas de flujo.
adecuadamente completo de sus
procedmietos en el lab. -No incluye valores de -No realiza el pipeteo
-Realiza los cálculos de referencia. corecto
las lecturas de -No realiza el pipeteo
absorbancias de manera adecuada -No realiza el pipeteo -No realiza lecturas
adecuadamente adecuadas en el
-manejo de residuos de espectofotometro
acuerdo a R.P.B.I. -No maneja
adecuadamente el -No realiza cálculos para
Recopila y ordena los datos espectofotometro los resultados
obtenidos presentándolos
en tabla claramente -No identifica los R.P.B.I.
identificados.
-Incluye valores de
referencia y unidades.
CONCLUSION. Redacta con sus propias Redacta con sus No redacta las No redacta las
30% palabras, si se cumplen o propias palabras si se conclusiones, no conclusiones.
no las competencias en cumplen o no las analizando los resultados.
base al análisis de los competencias pero no
resultados. considera
completamente el
análisis de resultados.
BIBLIOGRAFIA Presenta por lo menos 3 Presenta menos de 2 Presenta menos de 1 No presenta bibliografía.
10% bibliografías consultadas bibliografías bibliografía consultada y
Bibliografía (mínimo 3) con datos completos. consultadas y datos datos incompletos.
Nombre del Autor. completos.
Nombre del Libro.
Editorial.
Edición.
Año.
Paginas.
*Dirección electrónica.
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