MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS
DILUCIONES
1. Si se sospecha que una muestra tiene una gran cantidad de microorganismos por mL o
g, la muestra se diluye.
2. Al diluir la muestra antes de hacer la prueba, se evita que las placas tengan exceso de
colonias.
3. Son válidas las placas que tienen entre 25 y 250 CFU/ml o g.
4. El plan de dilución que más frecuentemente se utiliza envuelve diluir la muestra por
un factor de 10.
5. La muestra pura sea sólida o líquida se considera que tiene un factor de dilución de
100 ó 1 (es decir no está diluida).
6. Cuando se emplea la técnica de vertido en placa o también llamada siembra por
difusión, primero se coloca el inóculo (1ml) en la placa petri y luego el agar.
7. Cuando se emplea la técnica de superficie en placa o también llamada siembra por
diseminación, primero se coloca el agar y se espera a que solidifique y luego se coloca
el inóculo (0,1ml) sobre la placa con el agar solidificado.
CÁLCULOS
1) Para encontrar la cantidad de diluyente o de muestra para preparar una cierta
dilución.
Volumen de diluyente = (Cantidad de muestra x Dilución) – Cantidad de muestra
Vd = (M x D) - M
Por ejemplo. Si se tiene 5ml de una muestra y se quiere preparar una dilución 1:10, se
procede así:
Vd = (M x D) - M
Vd = (5 x 10) – 5
Vd = 5
Por ejemplo. ¿Cuántos gramos de queso hay que añadir a 99ml de agua de dilución
para obtener una dilución 1:2?, se procede así:
Vd = (M x D) - M
99 = (M x 2) – M
M = 99/1
M = 99
2) Para encontrar alguna dilución con la que se desee trabajar.
Dilución = Cantidad de muestra / (Cantidad de muestra + Volumen de diluyente)
D = M / (M + Vd)
Por ejemplo. Cien gramos de col se mezclan con 250ml de agua de dilución, ¿qué
dilución es? Se procede así:
1
D = M / (M + Vd)
D = 100 / (100 + 250)
D = 0,29 = 2,9 x 10-1
Es decir que se estaría trabajando con una dilución de 10-1
3) Para reportar los recuentos microbiológicos
Ufc / g ó ml = colonias en la placa / (dilución x volumen inoculado)
Ejemplo 1: Con la técnica de vertido en placa, se tienen 65 colonias en la dilución 10-3
Ufc / g ó ml = 65 / (10-3 x 1) = 65000 ó 6,5 x 104
Ejemplo 2: Con la técnica de superficie en placa, se tienen 65 colonias en la dilución 10-3
Ufc / g ó ml = 65 / (10-3 x 0,1) = 650000 ó 6,5 x 105
Problemas Resueltos
1. 1 ml de cultivo de bacterias se diluye con 9 ml de peptona. 1/10 de ml de está dilución
se diluye en 9.9 ml de peptona. De ésta dilución 1/10 de ml se pone en una placa con
25 ml de medio. Luego de 24 horas de incubación se contaron 219 colonias.
¿Cuántas células había en el cultivo original? Muestra todo tu trabajo. ¿Tendrá efecto
la cantidad de medio de la placa?
D = M / (M + Vd) D = M / (M + Vd)
D = 1 / (1 + 9) D = 0,1 / (0,1 + 9,9)
D = 0,1 = 10-1 D = 00,1 = 10-2
Ufc / ml = 219 / (10-2 x 0,1) = 219000 ó 2,19 x 105
La cantidad de medio usado no influye en el recuento.
2
2. Cinco gramos de yogurt se mezclan con 45 ml de agua de peptona. Se hacen dos
diluciones sucesivas de 1/100. 1/10 de ml se pone en placa de la última dilución. Esto
se hace en duplicado. Luego de incubar se obtienen los siguientes resultados: 75 CFU
y 73 CFU. Calcula el número de CFU/gm de yogurt.
D = M / (M + Vd)
D = 5 / (5 + 45)
D = 0,1 = 10-1
Ufc / g = ((75+73)/2) / (10-5 x 0,1) = 74000000 ó 7,4 x 107
