GUIAS DE PRÁCTICA CIENCIAS DE LA SALUD QUIMICA

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UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE TOXICOLOGIA

PRÁCTICA No. 1

SEMINARIO: MARCO LEGAL DEL LABORATORIO DE TOXICOLOGIA

1.- CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

Toda toma de muestra para un análisis toxicológico debe cumplir con ciertos
documentos legales para realizarlo, ya que al no contar con la documentación
legal requerida pierde toda validez el informe, dictamen emitido.
El Peritaje Toxicológico de vísceras y tejidos es de gran interés criminalística,
requiere de un adecuado procedimiento en la toma de la muestra, en su fijación
o preservación, embalaje y envío con la solicitud específica de lo que se desea
determinar en el examen a informar, porque sus resultados servirán para una
buena administración de justicia.

MONOGRAFÍA TOXICOLOGICA: Es la información toxicológica de respaldo

que se presenta a la cualquier instancia judicial que lo requiera.
INFORMACIÓN DE LA DOCUMENTACION LEGAL: Es la información del
procedimiento a realizar para la toma de muestra de un análisis toxicológico que
comprende: Requerimiento Fiscal, Juramento del perito, acta de toma de
muestra, etiquetado de la muestra, cadena de custodia.
DOCUMENTOS LEGALES PARA TOMA DE MUESTRA TOXICOLOGICA
Requerimiento fiscal:
• Emitido por una autoridad Judicial.
• Solicita y comparece a la toma de muestra.
• Designa Perito que realizara la toma demuestra.
• Especifica el lugar, hora del procedimiento.
Juramento de perito.

• Perito designado comparece ante autoridad.

• Juramento y aceptación a designación.
Acta de toma de muestra.

• Identificación del lugar hora de toma de muestra.

• Presencia de testigos y autoridades.
• Realización de toma de muestra
• Firma de los presentes
Etiquetado de la muestra.
• Etiquetar el recipiente de la muestra.
• Lacrar
Cadena de Custodia.
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• Identificación d persona que realizo la toma de muestra

• Identificación quien transporta la muestra.
• Identificación quien recepciona la muestra en laboratorio
• Es un nombre complejo y poco práctico

ESTRUCTURA DE LA MONOGRAFÍA TOXICOLOGICA

Un resumen de ambas informaciones es la Monografía toxicológica en un
compendio que debe realizarse para desarrollar un medicamento:

MONOGRAFÍA TOXICOLOGICA
• REQUERIMIENTO FISCAL
• JURAMENTO DEL PERITO
• ACTA DE TOMA DE MUESTRA
• ETIQUETADO DE LA MUESTRA
• CADENA DE CUSTODIA
• VÍA DE ADMINISTRACIÓN. -
ETIQUETADO DE LA MUESTRA
• MUESTRA
• REMITENTE
• OBJETO DEL ESTUDIO
• FECHA
• FIRMA
• TESTIGOS
• OTROS
COMPETENCIA
NOMBRE DE LA MUESTRA OBJETO DE ESTUDIO
NOMBRE DEL LABORATORIO

NOMBRE DEL PERITO

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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2. COMPETENCIAS. -
• El estudiante realiza una monografía toxicológica que es el compendio de la
misma con la información de toda la documentación legal requerida para la
toma de muestra.
• El estudiante identifica los requisitos documentales para el desarrollo de la
toma de muestra.
• El estudiante identifica el procedimiento y la importancia de la documentación
legal requerida.
3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

Al ser un seminario no se utilizará equipos, ni insumos, solo se necesitará

material bibliográfico.

4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO. -

Al ser un seminario se realiza una explicación teórica.

5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA. -

100 minutos.

6. MEDICION, CÁLCULOS Y GRÁFICOS. -

Al ser un seminario no se realizan cálculos ni mediciones.

7. CUESTIONARIO. -

1. En grupos, realice la monografía toxicología haciendo uso de toda la

documentación legal
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PRÁCTICA No 2
INVESTIGACIÓN TOXICOLÓGICA Y TOMA DE MUESTRA

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

El muestreo constituye la fase más importante en el análisis toxicológico, ya que
debe ser representativo del todo del que se ha extraído, porque en función de
ello está el resultado del análisis que nos dará la información necesaria.
La investigación toxicológica es el conjunto de procesos analíticos que tienen por
objeto el aislamiento, identificación y determinación cuantitativa de los tóxicos,
tanto en el vivo como en el cadáver con el fin de permitir el diagnóstico y
establecimiento de los hechos.
2. COMPETENCIAS. -
• Define correctamente el concepto de Investigación Toxicológica a través de
muestras e interpretaciones de resultados que se presentan en el campo de
trabajo del profesional.
• Indica los procedimientos y técnicas a seguir en una Pericia.
• Establece las características de una información general y clínica para la
investigación de la muestra toxicológica.
• Enumera las muestras en orden de importancia para el análisis toxicológico.
• Enuncia los aspectos que se deben considerar en la toma de muestra.
• Diferencia las muestras para urgencias toxicológicas y las muestras
procedentes de autopsias.
• Interpretar los resultados, a través de la resolución de problemas que se
presentan en el campo de trabajo del profesional.

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

Diapositivas para la demostración de tomas de muestras
4. TECNICA, PROCEDIMIENTO. -

A. PROCEDIMIENTO Y TÉCNICAS A SEGUIR EN UNA PERICIA

Las investigaciones médico-químico legales frente a un caso de envenenamiento
comienzan con el examen del cadáver en el sitio o lugar de los hechos.
Esta primera diligencia se llama “Levú du Corps” que consiste en una triple
investigación.
- Inspección del lugar.
- Examen de las prendas de la víctima.
- Examen Exterior del cadáver.
Se examinará la habitación, observando si existen manchas o vómitos sobre el
piso, muebles o ropas los que deben ser recolectados.
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Se deben recoger cajas, frascos, medicamentos, restos de alimentos y enviarlos

al Laboratorio
Forense.

B. ORIENTACIÓN DE LOS ANÁLISIS TÓXICOS

La orientación puede prevenir de muy diversos orígenes, pero en líneas
generales, suele corresponder a dos grandes grupos de datos:
a. Información general.
b. Información clínica.
a. Información general
Pertenecen a este grupo todos los antecedentes y datos anamnésicos que
puedan tener alguna relación con la intoxicación que son:
- Profesión del enfermo, si maneja productos químicos.
- Datos personales.
Nombre de la víctima.
• Edad.
• Nacionalidad.
• Ocupación (Fábrica, oficina).
• Sexo.
• Peso.
• Altura.
• Viajó recientemente al extranjero?

• Tratamiento médico a que pudiera estar sometido anteriormente.

• Presencia de productos químicos, o medicamentos o sus envases, en el lugar
donde se produjo la intoxicación (es conveniente el envío al laboratorio de
estas sustancias, para que sirvan de testigo y para determinar si su
composición corresponde a la teoría).
• Información de familiares, vecinos o compañeros del enfermo.
b. Información clínica:
- Historia clínica.
• ¿Sufrió la victima alguna hepatitis viral u otras enfermedades infecciosas?
• ¿Tuvo alguna enfermedad crónica?
• ¿Qué drogas se le prescribieron?
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• Consumía alcohol, cigarrillos, drogas?

• ¿Qué veneno se sospecha que ingirió?
• ¿Qué cantidad?
• Formas y/o medios (tabletas, jeringas, etc.).
• Nombres de drogas y/o venenos con los que la víctima pudiese estar
involucrada.
- Tiempos.
• Fecha y hora a la que se visitó a la víctima.
• Fecha y hora (aproximada) de inicio de la enfermedad y/o de la muerte. ¿Dónde
fue
encontrada?
- Tratamientos.
• Datos de cualquier tratamiento médico después de sospechar ingesta de
tóxicos.
• Tiempo de internación en centro médico.
• Detalles de tratamiento dados (hora de toma de muestras de sangre y orina,
volumen de
Lavado gástrico
Análisis del centro médico.
• Síntomas.
• Nombre del médico/médico legalista.
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NORMAS PARA LA TOMA DE MUESTRAS DE TOXICOLOGÍA CLÍNICA

(URGENCIAS TOXICOLÓGICAS)
1. ORINA
Para una sistemática general se requiere 10 ml con una cantidad mínima de 30
– 50 ml en general no se requiere orina de 24 horas.
2.- CONTENIDO GÁSTRICO
La mayor cantidad posible obtenida por vómitos o lavado gástrico.
3. SANGRE
10 – 20 ml con agente conservante Fluoruro de Sodio, EDTA-K2 o Heparina 10
ml con anticoagulante y 10 ml sin anticoagulante.
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Las muestras deben almacenarse en frascos cerrados en forma hermética,

rotulados con el nombre del enfermo y servicio clínico, además, es de suma
importancia para un análisis toxicológico orientado, que tales muestras vengan
acompañadas de sus respectivos antecedentes clínicos del paciente.
NORMAS PARA LA RECOGIDA Y REMISIÓN DE LAS MUESTRAS
PROCEDENTES DE AUTOPSIAS
1. SANGRE
- Frasco tipo penicilina con 5 ml de sangre con Fluoruro de sodio para
alcoholemia.
- Frasco con 100 ml de sangre total para examen toxicológico.
2. CONTENIDO GÁSTRICO
- Frasco conservero con estómago y su contenido, además de vómito y lavado
gástrico.
3. ORINA
- Frasco conservero con orina, todo cuanto sea posible extraer.
4. HÍGADO
- Frasco conservero con 100 g de hígado.
5. CEREBRO
- Frasco conservero con 100 g de cerebro.
6. RIÑÓN
- Frasco conservero con 100 g de riñón.
7. VESÍCULA BILIAR
- Frasco conservero con vesícula biliar (para investigación de heroína y morfina),
la heroína no se encuentra por que rápidamente se metaboliza a morfina.
Las muestras se deben conservar en frío (4 ºC) si el análisis se practica en pocos
días, sería ideal a –20 ºC si estas se realizan posteriormente. No se debe
adicionar ningún agente conservador. Los recipientes deben estar cerrados en
forma hermética y rotulados correctamente.
Ninguna muestra por si sola entonces es importante sino en su conjunto porque
nada podemos hacer solo con el contenido gástrico.
5. TIEMPO DE DURACION D ELA PRÁCTICA. -
200 minutos
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6. MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS. -

Uno de los problemas más difíciles con que se encuentra el toxicólogo forense
es la interpretación de los resultados analíticos.
Hay que tener en cuenta que el resultado de un análisis toxicológico, ejemplo 10
ug/ml de diazepam, no debe tomarse en un sentido matemático y absoluto, sino
que debe interpretarse de acuerdo con el conjunto de datos y circunstancias que
acompañan cada caso particular.
Ejemplo, Interacción de drogas: La potenciación de dos tóxicos con actividad
depresora del sistema nervioso central (Benzodiacepínicos más alcohol) pueden
originar la muerte, aunque ninguno de los dos por separado alcance niveles
tóxicos.
A. Desde el punto de vista cuantitativo se observan numerosas discordancias
entre las concentraciones del tóxico en sangre y orina de un enfermo y su
sintomatología clínica. Puede decirse que las tablas de correlación entre los
niveles del producto en los líquidos orgánicos y el estado clínico, no suele tener
a veces más que un fin meramente orientativo:
1. Muchos de estos datos carecen del suficiente soporte estadístico pues,
proceden de pequeños números de observaciones, de diferentes autores, que
han podido utilizar distintos criterios clínicos. La más clara excepción a este
supuesto la presenta la correlación clínica de la alcoholemia, ampliamente
comprobada pro muchos autores.
2. Confusión entre valores correspondientes a sangre total, plasma o suero o las
diferentes concentraciones que puede haber en orina cuando existe oliguria o se
provoca diuresis forzada.
3. Diferencias individuales o diferentes respuestas entre distintos individuos,
debido a numerosos factores.
a) Diferentes sensibilidades de los receptores, por causa genética o adquirida
(tolerancia).
b) Distinta capacidad de las proteínas plasmáticas para retener los fármacos que
transportan; por esta razón a mayor cantidad de droga libre, habrá mayor
respuesta.
c) Adaptación metabólica, que no solo produce tolerancia para eliminar ante una
dosis, sino que también puede desviar la síntesis de metabolitos hacia a otros
más o menos tóxicos. Generalmente en el análisis toxicológico se busca y valora
el producto original y se ignoran metabolitos activos o por el contrario se
determina el conjunto: lógicamente los resultados no serán concordantes. Así
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una misma dosis de Amitriptilina puede producir unos distintos individuos

diferencias plasmáticas hasta de 40 veces.
B. Muestras Post Morten: A menos que se conozca el tiempo de ingesta con
razonable seguridad, es casi imposible relacionar la concentración de droga
medida post morten, con las respuestas potencialmente fatales a las sustancias
químicas.
La cuantificación de tóxicos, si bien es cierto es importante pero no siempre
concruente. La correlación entre concentración sanguínea y estado clínico
muchas veces tiene un fin meramente orientativo. Ejemplo: tenemos distintos
tipos de compuestos, distintos niveles tóxicos, pero estos carecen primero, del
soporte estadístico o sea ya tienen una diferencia entre los exámenes del perfil
bioquímico. Los valores normales del perfil bioquímico incluyen al 95% de la
población, en cambio los valores toxicológicos o las concentraciones de drogas
para establecer un valor terapéutico o tóxico letal primero carece de soporte
estadístico porque se han hecho muy pocas determinaciones, diferentes autores
han utilizado diferentes criterios. Lo único universalmente comprobado es la
relación clínica de la alcoholemia.
7. CUESTIONARIO. -
1. Cuál es el objetivo de la investigación toxicológica.
2. Indique el procedimiento a seguir en una pericia.
3. Enuncia los tipos de muestra para el análisis toxicológico Clínico y Forense.
4. Cuál es el órgano de elección en la intoxicación por metales.
5. ¿En una Urgencia Toxicológica cuales son las muestras y cantidad que se
debe solicitar?
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PRÁCTICA No. 3
SEMINARIO: MÉTODOS Y TÉCNICAS PARA LA INVESTIGACIÓN
TOXICOLÓGICA

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

Hoy en día, la detección de xenobióticos en matrices biológicas es una tarea

difícil, no solo porque se necesitan equipamientos relativamente caros, sino
debido a que la transformación parcial o total de los mismos en el organismo da
lugar a la aparición de entidades químicas diferentes, lo que conlleva a una
buena preparación por partes de los toxicólogos, así como el desarrollo de
técnicas de laboratorio lo suficientemente sensibles y específicas, además de
contar con los patrones de referencia de las drogas y sus posibles metabolitos.
Debido a esta amplia variedad de sustancias que pueden estar presentes en un
determinado fluido, se hace casi imposible diseñar un esquema único para el
aislamiento y la determinación de estas.
El grupo más numeroso es el de las drogas, (entre ellas, medicamentos) con
alrededor de 1000 compuestos diferentes, lo que le da una importancia singular,
además de tener la mayor incidencia en casi todo el mundo, ya sea como drogas
de abuso o como medicamentos de manera general.
Las drogas son todas aquellas sustancias naturales o sintéticas que,
introducidas en el organismo, modifican, alteran, o reparan una de las funciones
normales del organismo vivo. En Química Forense, la identificación y
cuantificación de xenobióticos en fluidos biológicos es de mucha utilidad; los
tóxicos se clasifican en seis grupos de acuerdo con los métodos que se utilizan
para aislarlos de los mismos.
Clasificación Químico-Forense de los Tóxicos
GRUPO METODO DE EJEMPLO
AISLAMIENTO
Aniones Diálisis Clorato, Fluoruro,
Hipoclorito, Nitrato,

Metales Incineración Arsénico, Antimonio,

Plomo, Mercurio, Talio.
Gases Difusión Monóxido de Carbono,
Cianuro,
Volátiles Destilación Etanol, Metanol,
Acetona, Aldehídos,
Tolueno,
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Pesticidas Extracción líquido - Fosforados, Clorados,

líquido sólido Carbamatos
Drogas líquido Psicofármacos, No
Psicofármacos. líquido

Todos los compuestos extraños o xenobióticos pueden ser determinados en

matrices biológicas y no biológicas, de manera directa e indirecta.
Por lo tanto, tenemos cuatro modalidades de análisis en química forense que
podemos resumir de la manera siguiente:
1. ANÁLISIS DIRECTO EN FLUIDOS BIOLÓGICOS: Esta modalidad implica la
aplicación de procedimientos de extracción y determinación específicas para una
determinada sustancia que se quiere buscar. Se realiza cuando los antecedentes
del caso apuntan hacia la misma o si se quieren hacer determinaciones
cuantitativas.
2.- ANÁLISIS INDIRECTO EN FLUIDOS BIOLÓGICOS: Esta modalidad implica
la aplicación de un “screening” para descartar el mayor número de tóxicos
posibles e incluir un número reducido de ellos, hasta lograr la identificación,
pudiendo -posteriormente- aplicar una técnica directa para aumentar la eficiencia
de los análisis. Este procedimiento de screening puede variar algo, dependiendo
de la muestra biológica de que se trate.
3.- ANÁLISIS DIRECTO EN MUESTRAS NO BIOLÓGICAS: Como en el primer
caso, la determinación se lleva a cabo mediante una técnica ya probada,
utilizando como patrones de referencia las sustancias sospechosas, debido a
que los antecedentes del caso así lo requieren.
4.- ANÁLISIS INDIRECTO EN MUESTRAS NO BIOLÓGICAS: Como las
muestras pueden ser tan diversas, existen varios procedimientos de "screening"
dependiendo del estado físico de la sustancia, solubilidad, y de la naturaleza
químico-física de la muestra en cuestión.
Nosotros abordaremos el análisis de drogas en fluidos biológicos, pero bien,
independiente
de la modalidad de los análisis, generalmente tendremos cinco pasos
fundamentales, cuya
comprensión es de extrema importancia para obtener buenos resultados, y cada
uno de
ellos representan prácticamente un campo dentro de la toxicología analítica:
ETAPAS
1.- Preparación de la muestra: Este paso es crucial en los análisis. Generalmente
involucra la homogenización de las muestras, ajustes de pH, procedimientos de
hidrólisis (ácida, básica o enzimática), precipitación, centrifugación, etc. Debido
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a la complejidad de las muestras biológicas, este paso adquiere especial

significación.
2.- Aislamiento del analito: El método de aislamiento dependerá de la naturaleza
del tóxico que se quiere buscar. En el caso de las drogas la tendencia ha sido
desde la extracción con cloruro de n-butilo, que fue uno de los primeros solventes
declarados como extractores selectivos de drogas, después las extracciones con
sales y con solventes, hasta la cada vez más empleada extracción en fase sólida,
la cual presenta muchas ventajas con respecto a todas las anteriores, como son
mayor selectividad, ahorro de solventes y de tiempo, extractos más limpios y
mayor recobrado de los analitos, etc. Existen muchos trabajos que comparan la
extracción líquido-líquido con la extracción en fase sólida, demostrándose cada
vez más sus ventajas, pero no obstante a ello la extracción líquido-líquido se
sigue utilizando, dependiendo de los recursos con que cuenta cada laboratorio.
3.- Concentración del extracto: El objetivo de este paso es colocar el analito en
el menor volumen posible para, de esta manera, aumentar la sensibilidad de los
análisis. En el caso de las drogas, es importante conocer que la concentración
de los extractos debe realizarse en condiciones controladas, aunque las
condiciones ideales son concentrar a temperatura ambiente y en corriente de
nitrógeno o de aire.
4- Identificación del analito: En la identificación del analito existen diferentes
niveles de complejidad, dependiendo de las técnicas que se utilicen para la
detección de las mismas. Así tenemos un nivel primario que utiliza técnicas de
identificación como la cromatografía en capa delgada y la espectrofotometría UV,
además de reacciones de coloración para la orientación, etc. Un nivel secundario
involucra técnicas tales como la cromatografía de gases y la líquida de alta
resolución ya sea para screening como para la determinación directa y un nivel
terciario que utiliza la espectrometría de masas acoplada con una cromatografía
separativa tal como la cromatografía de gases y la líquida de alta resolución.
5- Cuantificación del analito: Una vez identificado el analito, la cuantificación del
mismo se puede realizar por una técnica directa, bien ajustada y utilizando
patrones de referencia puros para análisis. Esta técnica directa generalmente es
una técnica cromatográfica gas-líquida o líquida-líquida y la espectrometría
acoplada a estas dos anteriores.
2. COMPETENCIAS. -
• Explicará al alumno los objetivos e implicancias del Análisis Químico
Toxicológico, así como los diferentes tipos de muestras problemas y su
procesamiento.
• Emplear el método descriptivo de asesoría permanente.
• Identificar el tipo de intoxicación. Toma de las muestras para el análisis
toxicológico
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• Procesamiento de los diferentes tipos de muestra para el análisis toxicológico

adquiriendo los conocimientos para diferenciar los tipos de agentes tóxicos
que pueden causar intoxicaciones.
• Cumplir y hacer cumplir las medidas de bioseguridad.

MONOGRAFÍA DE METODOS E INVESTIGATOXICOLOGICA: Es la

información toxicológica para realizar un estudio toxicológico.

ESTRUCTURA DE LA MONOGRAFÍA TOXICOLOGICA

Un resumen de ambas informaciones es la Monografía toxicológica en un
compendio que debe realizarse de los métodos de análisis toxicológico.

MONOGRAFÍA TOXICOLOGICA
• PREPARACION DE LA MUESTRA
• AISLAMIENTO DEL ANALITO
• CONCENTRACION DEL EXTRACTO
• IDENTIFICACION DEL ANALITO
• CUANTIFICACION DEL ANALITO
•
ETIQUETADO DE LA MUESTRA
• MUESTRA
• REMITENTE
• OBJETO DEL ESTUDIO
• FECHA
• FIRMA
• TESTIGOS
• OTROS
COMPETENCIA
NOMBRE DE LA MUESTRA OBJETO DE ESTUDIO
NOMBRE DEL LABORATORIO

NOMBRE DEL PERITO

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

Al ser un seminario no se utilizará equipos, ni insumos, solo se necesitará

material bibliográfico.
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4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO. -

Al ser un seminario se realiza una explicación teórica.

5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA. -

100 minutos.

6. MEDICION, CÁLCULOS Y GRÁFICOS. -

Al ser un seminario no se realizan cálculos ni mediciones.

7. CUESTIONARIO. -

En grupos, realice la monografía de un método en una investigación toxicológica

de un xenobiótico.
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PRÁCTICA No. 4

INVESTIGACIÓN DE MANCHAS HEMÁTICAS Y PELO

1.- CONOCIMIENTO TEÓRICO REQUERIDO

Es importante la diferenciación de los restos encontrados en diferentes
escenarios de un crimen, como son las manchas de sangre y de pelo que tienen
gran implicancia legal.
Durante la lucha que casi siempre precede a los homicidios la victima al tratar de
defenderse de su agresor, no es raro que lo coja de los cabellos o la barba, por
lo que debe examinarse los dedos de la víctima, los vestidos y el lugar del crimen.
Se examinarán los pelos y se podrá compararlos, para establecer si se trata de
pelos de la víctima, o del agresor o si se trata de pelos animales. La resistencia
que ofrecen los pelos a la putrefacción, hace que el examen de ellos sea de gran
utilidad para estudio de osamentas humanas.
2. COMPETENCIAS. -
• Identifica a la persona por pertenencia del cabello y posterior comparación,
en los homicidios la victima al tratar de defenderse de su agresor.
• Determina si su procedencia es humana o animal, a través de la resolución
de problemas que se presentan en el campo de trabajo del profesional.
• Caracteriza en cuanto a: ubicación anatómica (vello o cabello), en el estudio
de exámenes de osamentas humanas.
• Determina la forma en que la muestra fue extraída, a través de la resolución
de problemas que se presentan en el campo de trabajo del profesional.
• Compara la muestra con otra igual del sospechoso a través de la resolución
de problemas.

3.- MATERIALES, REACTIVOS, Y EQUIPOS. -

EQUIPOS y MATERIALES

Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones

1 Microscopio.
Secador. 5
2
portaobjetos.
3 2
Cubreobjetos.
4 Detergente. 10
5 100 ml Agua destilada. 10 Unidad 2 Grupos de 6
Gotero.
6 5 es estudiantes
Placa de toque
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7 5
8

INSUMOS

Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones

Muestras problemas de
1
manchas de sangre
2 Pelos o vellos.
3 Eukitt (resina).
50 ml Agua oxigenada. 50 ml
4 50 ml Ácido nítrico.
50 ml
5
50 ml Alcohol etílico.
6 50 ml
Reactivo de Adler. . .
7

4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO. -

Descripción de la muestra
Recepción, tipo de envase, rótulo, etc.
Aspecto característico de la muestra: color de pelo, liso o crespo, aspecto
general.
Tratamiento
Pelo
Si se tiene la suficiente muestra, lavar un mechón de ellos, posteriormente
seleccionar 10 pelos lavados, secarlos y montarlos.
Si la muestra es escasa se debe hacer el examen en un numero de pelos
proporcional al total, siempre reservando muestra.
Lavado de pelos.
1. Lavado con solución detergente.
2. Enjuague con agua corriente.
3. Enjuague con agua destilada.
4. Desengrasar con alcohol.
5. Secar usando secador y gasa para evitar pérdidas de muestra.
Estudio macroscópico
A cada uno de los 10 pelos seleccionados aplicar el siguiente procedimiento:
1. verificar color y aspecto (ondulado, liso, etc.).
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2. Medir longitud.
3. Montar con resina (Eukitt) en portaobjeto debidamente rotulado uno de los
pelos y observar al microscopio.
Estudio microscópico
Observar detenidamente cada pelo y hacer un dibujo considerando lo siguiente:
1. Color.
2. Raíz (su forma y estado).
3. Canal medular (si está presente, si es continuo o discontinuo).
4. Cutícula (presencia, forma, estado, conservación).
5. Punta (su forma y conservación).
NOTA: Si no es posible observar el canal medular, debido a que el color del pelo
es muy oscuro, es necesario decolorar los pelos con agua oxigenada por 1 día
o bien con ácido Nítrico por algunos minutos y enjuagar con agua destilada.
Sangre:
Colocar la mancha en una placa de toque (fibras pequeñas)
Colocar una gota del reactivo
Colocar 1 gota de agua oxigenada
Observar el cambio de color de acuerdo a cada reactivo

5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA. -

200 minutos
6.- MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS. -
De acuerdo con el resultado, se emite el resultado
7. CUESTIONARIO. -
1) Que muestra es representativa para la investigación de pelos.
2) Que parte del pelo es la que proporciona más datos para la determinación de
la procedencia del pelo.
3) En la determinación del índice medular el valor inferior o superior a 0,5
corresponde a pelo humano.
4) Cuáles son los parámetros que nos permiten comparar o identificar un pelo
problema
encontrado sobre una víctima o en el sitio del suceso?
5) Que cantidad de pelos se necesita para proceder a efectuar un estudio de
pelos?
6)Los reactivos cómo reaccionan en sangre fresca, seca y lavada.
7) Explique cómo es la reacción de Luminol para sangre.
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PRÁCTICA No. 5
ENSAYOS DE IDENTIFICACIÓN DE DROGAS DE ABUSO

1.- CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

Aplica a los ensayos que se realizan en el laboratorio que permiten orientar al
perito profesional sobre la sustancia o droga ilícita sospechosa que está presente
en las muestras incautadas como son: cocaína y derivados, opio y sus derivados,
anfetaminas, cannabis, barbitúricos, benzodiazepinas y adulterantes.
2.- COMPETENCIAS
• Realiza el análisis preliminar como etapa previa a la identificación de las
sustancias o drogas ilícitas sospechosas por parte del profesional en el área
de química legal.
3.- MATERIALES REACTIVOS Y EQUIPOS. –

EQUIPOS Y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
1 Gradilla 5 Unidades 2 Grupos de 6
2 Placa de cromatografía 5 estudiantes
Espátula
3 Tubos de ensayo 5
4 Balones aforados 5
5 Pipetas 5
6 Agitadores 5
7 Papel Indicador 1

INSUMOS

Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones

1 Reactivo de Scott
2 Reactivo de Marquis
3 Reactivo de Simon
4 Reactivo de Simon –
acetona
5 Reactivo de ácido
gálico
6 Reactivo de Frodhe
7 Reactivo de Mecke
8 Reactivo de Duquenois
9 -Levine
10
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Reactivo de Dille -
11 Koppanyi
12 Reactivo de
13 Zimmermann
Formaldehído - Ácido
14 sulfúrico
Sustancias de
15 referencia
Muestras adulterantes
como los de cannabis,
cocaína y derivados,
opiáceos,
benzodiazepinas,
adulterantes,
anfetaminas y
barbitúricos en estado
sólido, en solución o en
los diferentes sistemas
de camuflaje

4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO. -
FUNDAMENTO DE LA TÉCNICA UTILIZADA
Muchas sustancias producen reacciones cromáticas cuando se ponen en
contacto con diversos reactivos químicos; en algunos casos el color producido
con un reactivo particular puede ser específico para el compuesto que se está
analizando, pero para algunas sustancias no siempre la reacción de color es
específica para ese compuesto, sino que también puede ser producida por otros
compuestos.
En la mayoría de las pruebas el color está relacionado con aspectos particulares
de la estructura de la sustancia. También se pueden dar reacciones de
precipitación al mezclar soluciones de las sustancias de interés con los reactivos
químicos específicos y aunque la precipitación es fundamentalmente un método
de separación será usado como método de identificación.
METODOLOGÍA
Para cada una de las sustancias de interés se practica la reacción preliminar y
se registra el resultado como (+) en el formato si se obtiene la coloración
reportada del respectivo ensayo, en caso contrario se reporta como negativo.
Con cada prueba se debe realizar un blanco de reactivos.
5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA. -
100 minutos
6.- MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS. -
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De acuerdo con resultados de la práctica reportar informe

7. CUESTIONARIO. -
Será proporcionado por el docente de acuerdo con el resultado de las pruebas y
el tipo de sustancia que se determine.
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PRÁCTICA No. 6
ALCOHOLEMIA

1.- CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

El etanol o alcohol etílico (CH3CH2OH) es una de las sustancias químicas más

consumidas en el mundo, siendo su consumo legal y aceptado en muchas
sociedades. Sin embargo, el uso abusivo de bebidas alcohólicas se considera
uno de los mayores problemas de salud pública, principalmente por las
numerosas consecuencias negativas que este uso puede ocasionar. Se estima
que la dependencia del alcohol (conocido como “alcoholismo”) afecta
aproximadamente al 10% de la población, incluidos hombres y mujeres. Además,
la mayoría de los accidentes de tránsito involucran a conductores que habían
consumido bebidas alcohólicas antes de conducir, lo que puede haber
comprometido su coordinación motora y sus reflejos, esenciales en el acto de
conducir vehículos u operar diversas máquinas.

Cabe señalar que el grado alcohólico de las bebidas puede variar del 4 al 6 %
en la cerveza, del 10 al 15 % en el vino y del 40 % o más en las bebidas
destiladas, como el whisky, la cachaza, el brandy, etc.

2. COMPETENCIAS. -

• Determinación presuntiva y cuantitativa de etanol en muestras problemas

mediante un
método indirecto.

3. MATERIALES REACTIVOS Y EQUIPOS. -

EQUIPOS Y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
1 Cajas de Petri con 2 Unidades 2 Grupos de 6
centro de vidrio. estudiantes
2 Matraces volumétricos 3 Unidades
de 10 mL
3 Pipetas volumétricas 3 Unidades
de 2 mL
4 Pinzas para tubo de 3 Unidades
ensayo
5 4 Unidades
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Pipetas volumétricas
6 de 1 mL. 4 Unidades
7 Cámara de Conway 1 Piezas
8 Papel filtro (2 x 5 cm) 6 Unidades
Tubos de ensayo 16 x
9 150. 3 Unidades
Pipetas graduadas de
10 5 mL 3 2 Unidades
Celdas de vidrio para
11 espectrofotómetro 3 Unidades
Pipetas graduadas de
12 1 mL 5 Unidades
Pipetas volumétricas
13 de 5 mL 4 Unidades
Pipetas Pasteur con
14 globo 4 Unidades
Matraces de
destilación de 250 ml.
15 refrigerantes. 4 Piezas
16 Malla calefactora 1 Unidad
17 Espectrofotómetro 1 Unidad
18 Estufa 1 Unidad
Balanza analítica

INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
1 Dicromato de potasio* 50 Gr
(K2Cr2O7)
2 Carbonato de potasio* 50 Gr
(K2CO3)
3 Ácido sulfúrico 50 Ml
(H2SO4)
4 Etanol (EtOH) 50 Ml
5 Reactivo de Anstie 50 ml
6 Sustancias de
referencia
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4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO. -
FUNDAMENTO DE LA TÉCNICA UTILIZADA

La Micro difusión se realiza en cámara de Conway, la cual posee un

compartimiento externo en el que se coloca la muestra de sangre a analizar y el
agente liberador carbonato de potasio (CO3K2), y un compartimiento interno
donde se coloca el agente atrapante una disolución sulfúrica de dicromato de
potasio.

En los métodos basados en procesos de oxidación-reducción; el alcohol se hace

reaccionar con un oxidante y se valora el consumo de este. El método requiere
la separación previa de etanol, bien mediante destilación (Técnica de Nicloux).
La modificación de una sustancia que se reduce (dicromato) puede permitir la
valoración colorimétrica, y en esto se basan los más antiguos procedimiento de
análisis de aliento o más propiamente, el aire espirado, que se hace pasar por
un tubo o frasco con el reactivo;
interfieren todas las sustancias volátiles de carácter reductor.
En 1863 Anstie reporto que el reactivo que ahora lleva su nombre (dicromato de
potasio disuelto en ácido sulfúrico concentrado) cambia en calor de un color
amarillo a uno azul-verdoso al hacer pasar aire que había sido pasado por una
solución acuosa diluida de etanol. Este cambio de color muestra que el cromo
redujo su valencia de +6 a +3 con la oxidación del etanol. El etanol es convertido

en ácido acético.

MUESTRAS

Sustancias referencia de las sustancias de interés, así como los posibles

adulterantes.
A cada alumno se le proporcionarán 2 muestras problema a las cuales se les
realizará la determinación presuntiva y cuantitativa de etanol

METODOLOGÍA

Prueba presuntiva

- Rotular 4 tubos como control positivo, control negativo, muestra 1 y

muestra 2.
- Al tubo control positivo agregarle 5 ml de agua destilada y 5 gotas de
etanol.
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- Al tubo control negativo agregarle 5 ml de agua destilada y 5 gotas de

agua destilada.
- A los tubos muestra 1 y 2 agregarles 1 mL de cada una de las muestras
problema respectivamente.
- A cada uno de los tubos, adicionarles 0.5 mL de solución de K2Cr2O7
(Pesar 2.5 g de K2Cr2O7 y solubilizarlo en 20 mL de H2SO4 al 50 %,
aforar a 100 mL con H2SO4 al 50%.)
- Incubar 10 minutos a temperatura ambiente y observar la coloración de
los tubos.

Determinación cuantitativa de etanol (Microdifusión)

Cada una de las muestras se tratará de acuerdo con el siguiente procedimiento:

Cámara de Conway

- Colocar 2 mL de la solución de K2Cr2O7 (Disolver 0.5 g de K2Cr2O7 en

25 mL de agua destilada y agregar cuidadosamente 40 mL de H2SO4
concentrado, dejar enfriar y diluir con agua destilada a 100 mL.) en el
recipiente B.
- Adicionar 1 mL de solución saturada de K2CO3 en el recipiente A
(Reactivo Liberante).
- Colocar 1 mL de la muestra problema en el recipiente A (depositar en el
otro extremo del compartimento externo 0,8 ml de sangre o 4 ml de
tejido homogeneizado.) y tapar inmediatamente con el recipiente C
(Cerrar e imprimir un movimiento rotatorio sobre una superficie plana, a
fin de mezclar la muestra con el reactivo liberante. Es importante colocar
la solución saturada de K2CO3 en el lado opuesto al que se halla la
muestra de sangre sin que tomen contacto hasta que la cámara este
perfectamente tapada. Si se mezclaran antes de tapar comenzaría la
liberación de alcohol de inmediato y se cometería error por defecto.).
- Proceder de forma similar en otra cámara de Conway colocando 0,8 ml
de testigo en lugar de la muestra.
- Colocar la cámara de Conway en una estufa a 40 ºC, durante 45 minutos.
(Si no se tuviera estufa dejar difundir a temperatura ambiente 3 horas para
muestras de sangre u orina; o toda la noche para muestras de tejido.)
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- Una vez transcurrido el tiempo indicado, transferir el contenido del

recipiente B a un matraz volumétrico de 10 mL, lavando perfectamente
dicho recipiente y la parte externa del recipiente A con un volumen
máximo de 5 mL para ambos recipientes. Finalmente, aforar a 10 mL con
agua destilada (en ocasiones puede aparecer un precipitado que
desaparece al aforar con agua destilada).
- Determinar la absorbancia a 450 nm, utilizando como blanco en tubo
graduado de 10 ml, colocando 2 ml de solución sulfúrica de dicromato de
potasio y llevar a 10 ml con agua. Mezclar por inversión. (Llevar a cero
con agua destilada)
- Determinar la absorbancia de la solución B de dicromato de potasio diluida
1 a 10, a 450 nm, utilizando como blanco agua destilada. Esta solución se
utilizará como referencia para realizar los cálculos pertinentes.

Cálculos

Curva de Calibración

También puede realizarse una curva de calibración con testigos de

concentraciones conocidas crecientes de etanol (Preparar a partir de la solución
madre testigos conteniendo, 0,5; 1,0; 2,0 y 3,0 g /l) obtenidas a partir de la
solución madre de etanol (Se prepara una solución al 1% en peso de etanol,
midiendo 1,27 ml de alcohol absoluto o 1,34 ml de alcohol 95º y se lleva a un
volumen de 100 ml con agua destilada.) y calcular el valor en la muestra a partir
de la curva obtenida.

Método Niclcloux

- En un matraz de destilación de 250ml, se procede a verter con una pipeta

graduada 5ml de la solución de ácido pícrico saturado (tomando en
consideración la existencia de precipitado, evitar tomar parte del mismo)
y 5ml de sangre venosa.
- Se tapa el matraz con tapón de hule y se arma el equipo de destilación.
- Se procede a calentar con el mechero, cocinilla o mala calefactora ambos
líquidos, calentando el tiempo necesario para que se lleve el proceso de
destilación.
- Las primeras 3 gotas del destilado son desechadas en la capsula de
porcelana, y se recogen entre 5 y 6 gotas en un tubo de ensayo de 13 x
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75. Posterior a la destilación se retira el mechero, cocinilla o malla

calefactora del matraz.
- Se colocan 3 gotas del reactivo de Anstie (Disolver 3.70 g de dicromato
de potasio den 150 ml de agua destilada, posteriormente agregar
lentamente 280 ml de ácido sulfúrico y aforar con agua destilada a 500ml.
Almacenar en frascos ámbar.) en el tubo de ensaye, se procede a pasar
el tubo en el fuego entre 4 y 5 veces.
- Se procede a comparar el viraje con los patrones establecidos.

5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA. -

100 minutos

6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS. -

De acuerdo con resultados de la práctica reportar informe

7.- CUESTIONARIO

Será proporcionado por el docente de acuerdo con el resultado de las pruebas y

el tipo de sustancia que se determine.
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PRÁCTICA No. 7
IDENTIFICACIÓN DE PRESENCIA DE PLOMO A TRAVÉS DE
BIOMARCADOR ACIDO DELTA AMINOLEVULINICO

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

La detección de Pb en hígado, corteza renal, sangre, orina, heces o forrajes se

realiza para diagnosticar la toxicidad por Pb.
De la materia orgánica, el Pb puede recuperarse por incineración. La ceniza se
trata con ácido sulfúrico (H2SO4) y se incinera nuevamente para producir el
sulfato de plomo. Sin embargo, el sulfato de plomo y el sulfuro de plomo se
hierven con una solución de carbonato de amonio. El carbonato de plomo
resultante se disuelve en ácido acético y las soluciones se analizan para Pb. Los
compuestos inorgánicos de Pb se disuelven por ebullición con ácido nítrico
(HNO3).
El ácido delta amino levulínico en orina es utilizado como indicador biológico de
intoxicación Plúmbica. El plomo es capaz de alterar la actividad de enzimas
involucradas en la biosíntesis de la hemoglobina (delta amino levulínico
deshidrogenasa citoplasmática). El bloqueo de estos mecanismos enzimáticos
produce acumulación de intermediarios que se excretan en forma amentada en
orina =Δ-ALA.

2. COMPETENCIAS. -

Detectar envenenamiento por plomo en muestras sospechosas.

Cuantificar la existencia de plomo a través de un biomarcador en muestra
sospechosas.

3.- MATERIALES REACTIVOS Y EQUIPOS

EQUIPOS Y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
1 Gradilla con tubos de 5 Unidades 2 Grupos de 6
ensayos. estudiantes
2 Picetas con agua 5 Unidades
destilada.
3 Hornalla. 5 Unidades
4 Malla con amianto. 5 Piezas
5 Pinza para tubo. 5 Unidades
6 Embudo de plastico. 5 Unidades
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7 Papel filtro. 10 Piezas

8 Papel tornasol. 10 Piezas
9 Espectrofotómetro UV- 1 Unidad
visible
10 Baño termostático 1 Unidad
11 Centrífuga hasta 500 1 Unidad
rpm

INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
1 Dicromato de potasio. 50 Gr
2 Ácido acético. 50 Ml
3 Ácido clorhídrico. 50 Ml
4 Yoduro de potasio 50 Gr
5 Infusión de té
6 Acetato de sodio 0.5 M 50 Ml
7 Acetilacetona. 50 Ml
8 Buffer de acetato pH = 50 Ml
4,6 50 Ml
9 Reactivo de Erhlich. 50 Ml
10 Ác. Tricloroacético 50 Gr
(TCA) 50 Gr
11 Cloruro de mercurio II
12 Fosfato de disodio 50 Gr
dihidratado
13 Fosfato diacido de sodio 50 Ml
monohidratado
14 Clorhidrato del ácido 50 Gr
delta-aminolevulínico
(ALA-HCl).
15 p-Dimetilaminobenzaldehido 50 Ml
(pDMAB)
16 ácido perclórico 50 Ml
17 Ácido acético glacial 50 Ml
18 Sustancias de
referencia
19 MUESTRAS

Orina correspondiente a
24 horas recolectada en
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frasco oscuro
conteniendo solución
saturada de ácido
tartárico aprox. 1 ml/ 100
ml de orina

4.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

FUNDAMENTO DE LA TÉCNICA UTILIZADA
Muchas sustancias producen reacciones cromáticas cuando se ponen en
contacto con diversos reactivos químicos; en algunos casos el color producido
con un reactivo particular puede ser especifico para el compuesto que se está
analizando, pero para algunas sustancias no siempre la reacción de color es
específica para ese compuesto, sino que también puede ser producida por otros
compuestos.
En la mayoría de las pruebas el color está relacionado con aspectos particulares
de la estructura de la sustancia. También se pueden dar reacciones de
precipitación al mezclar soluciones de las sustancias de interés con los reactivos
químicos específicos y aunque la precipitación es fundamentalmente un método
de separación será usado como método de identificación.
Se basa en la formación de un compuesto pirrólico, producto de la reacción de
Δ-ALA con acetilacetona a pH 0 4,6 para luego reaccionar con p-
dimetilaminobenzaldehído, generando un compuesto de coloración rosado que
es capaz de absorber a 553nm.
METODOLOGÍA

Prueba presuntiva 1

- A 3 ml de muestra, agregue unas gotas de solución acuosa de dicromato

de potasio.
- Luego, agregue una solución diluida de ácido acético hasta que el medio
se vuelva ácido al papel de tornasol.
- Si hay presencia de Pb, se formará un precipitado amarillo de cromato de
plomo.

Prueba presuntiva 2

- Agregue ácido clorhídrico (solución altamente picante de cloruro de

hidrógeno, HCl) a la muestra. Se formará un precipitado blanco de Pb.
- Este precipitado es soluble en agua hirviendo y cristaliza al enfriarse.
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Prueba presuntiva 3

- Agregue unas gotas de solución de yoduro de potasio (KI) a la muestra.

Se formará un precipitado amarillo brillante.
- Este precipitado es soluble en agua hirviendo y su cristalización a amarillo
dorado al enfriarse indica la presencia de Pb.

Prueba presuntiva 4

- En 2 ml de muestra, añadir unas gotas de infusión de té.

- La formación de un precipitado marrón indicará la presencia de Pb.

Determinación de Acido Delta Aminolevulínico (delta ALA) en orina

La reacción se fundamenta en la reacción del delta ALA con acetilacetona dando

un
compuesto pirrolico (2 metil, 3 acetil 4 – (3 propion) pirrol) que condensa luego
con el
reactivo de Erhlich originado un compuesto rojo que se determina por
espectrofotometría a 553 nm.

Preparación de reactivos.

- Reactivo de Erlich modificado = 1 gr de p-dimetilaminobenzaldehído se

disuelve en 35 ml de ácido acético glacial, se agregan 8 ml de ácido
perclórico 70% y se lleva a 50 ml con ácido acético glacial.
- Solución acetato de sodio 0.5 M: 41 gr de AcNa se disuelven en 1 litro
de agua destilada.
- Solución AcH 0.5 M: 28.7 ml AcH glacial se llevan a 1000 ml con agua
destilada.
- Buffer acetato: 93.2 ml AcH 0.5 M más 6.8 ml AcNa 0.5 M (pH=3.5).
- Solución diluyente: 0.25 gr de carbón medicinal se agregan a 100 ml de
solución buffer acetato 0.5 M.
- Estándar de delta-ALA 400 µg/ml: se disolverán 4 mg de delta-ALA p.a.
en buffer acetato, llevando a 10 ml totales.

Procedimiento

- Transferir 1 ml de orina (pH 6 – 6.5) a un tubo de centrífuga y agregar 9

ml de solución diluyente. Mezclar durante unos minutos y centrifugar.
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- Filtrar por papel de filtro y transferir 2 alícuotas de 2 ml c/u del filtrado a

sendos tubos de ensayo B y D (Blanco y Desconocido, respectivamente).
Al tubo D se le agrega 0.1 ml de acetilacetona y ambos tubos se llevan a
baño María (BM) hirviente durante 20 minutos.
- Se enfrían entonces los tubos en baño de agua y se le agrega 2 ml de
Reactivo de Erlich a cada una. Luego de 15 minutos se lee la absorbancia
del tubo D a 553 nm contra el tubo blanco.
- La cantidad de delta ALA se obtiene a partir de una curva de calibración
expresada en µg/ml. Se tomarán soluciones de 50, 30, 10, 5 y 1 µg/ml,
diluyendo la solución standard original de 400 µg/ml. sobre ellas se realiza
la reacción de Erlich en forma análoga a la realizada sobre las muestras.

Observación: La reacción del delta ALA con el reactivo de Erlich es muy sensible,
aunque no específica pues también la dan las aminocetonas y las glucosaminas.
Desde el punto de vista de la determinación del perfil plúmbico, estas
interferencias no tienen relevancia en los rangos de concentración de δ-ALA

halladas en el saturnismo.
Determinación de Acido Delta Aminolevulínico (delta ALA) en sangre

El método se basa en la incubación de la enzima con un exceso de ácido delta-

aminolevulínico (ALA). El porfobilinógeno (PBG), que se forma después de un
cierto tiempo, se mezcla con reactivo de Ehrlich modificado y el color
desarrollado se mide frente a un blanco, en un espectrofotómetro a 555 nm. La
cantidad de PBG formado constituye una medida de la actividad del ALA-D.

Preparación de reactivos.

- Disolución A: 1,78g de Na2HPO4 2 H20 disuelto en 100 ml de agua.

- Disolución B: 1,38g de NaH2PO4 1 H2O disuelto en 100 ml de agua.
- Tampón 0,1 M de fosfato de sodio de pH 6,4: 29 ml de disolución A +
71 ml de disolución B.
- Clorhidrato del ácido delta-aminolevulínico (ALA-HCl): Disolver 167,6
mg de ALA-HCl en la disolución B que debe estar a pH ácido, ajustar el
pH a 6,4 con la disolución A. Ajustar el volumen a 100 ml con el tampón
para obtener una disolución 0,01 M de ALA. La disolución así preparada
es estable durante cinco horas.
- Cloruro de mercurio II (HgCl2): Disolver 1,35 g de HgCl2 en 100 ml de
TCA al 10%.
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- Ácido Tricloroacético (TCA).

- Disolución de 0,25 g de HgCl2 en 10 ml de ácido acético glacial

Procedimiento

- La muestra de sangre venosa (2 ml) extraída con jeringa de polietileno o

poliestireno se recoge en tubos del mismo material, conteniendo heparina
(<5 mg) como anticoagulante.
- Si el tiempo transcurrido entre la toma de muestra y el análisis es superior
a tres horas, es necesario conservarlas refrigeradas. El periodo máximo
permisible para la conservación de las muestras a esta temperatura es de
24 horas.
- Preparar cuatro alícuotas de cada muestra, de 0,2 ml cada una, en tubos
de plástico. Utilizar pipetas de alta fiabilidad. Tres de las cuatro alícuotas
se utilizarán para determinar ALA-D y una como blanco.
- Justo antes del análisis, todas las muestras se deben introducir en un
baño de hielo-agua, durante 10 minutos.
- Las alícuotas de sangre se hemolizan con 1,3 ml de agua, (previamente
calentada a 37°C), durante 10 minutos a 37°C ±0,2°C.
- Debe utilizarse una pipeta graduada de 2 ml para añadir el agua y luego
mezclar cuidadosamente hasta la homogeneización.
- Calentar la disolución de ALA a 37°C, al menos 10 minutos antes de la
adición. Añadir 1 ml de esta disolución al hemolizado, utilizando una
pipeta aforada de 1 ml.
- Tomar una alícuota de 0,2 ml de sangre, tratada como para determinar
ALA-D hasta el punto de la adición de la disolución de ALA. En lugar de
esto, añadir 1 ml de la disolución TCA-HgCl2; seguidamente añadir 1 ml
de la disolución de ALA. Para la adición de las disoluciones deben
utilizarse pipetas aforadas. (Blanco)
- Las muestras y el blanco se mantienen durante 60 minutos a 37°C ±0,2°C
en baño de agua. El tiempo de incubación comienza desde la adición de
la disolución de ALA.
- Añadir 1 ml de la disolución de TCA-HgCl2 a la mezcla de incubación,
utilizando una pipeta aforada de 1 ml.
- Centrifugar a 3000 rpm, durante 10 minutos como mínimo y filtrar con
papel Whatman n° 54 o equivalente.
- La fase de filtrado se incluye para evitar transferir a través de la pipeta
pequeñas partículas de la superficie del líquido sobrenadante. Estas
partículas producen una reacción coloreada con el reactivo de Ehrlich.
Esta fase se puede reemplazar, si es necesario, por un segundo
centrifugado.
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- Mezclar 1 ml del líquido sobrenadante con 1 ml del reactivo de Ehrlich con

la ayuda de una pipeta aforada de 1 ml. Utilizar un agitador para asegurar
que la mezcla sea homogénea.
- Dejar reaccionar la mezcla 5 minutos antes de medir la absorbancia.
- Medir las absorbancias de las muestras frente al blanco en un
espectrofotómetro o colorímetro a 555 nm en una cubeta de 1 cm (ó 2 cm
si la absorción es. muy baja).
- Esta medida no se debe realizar en un tiempo superior a 10 minutos
después de la adición del reactivo de Ehrlich.
- La actividad enzimática expresada en: mol ALA/ min x I eritrocitos = U/I
se calcula mediante la siguiente ecuación:

Donde:
Abs. = Valor medio de las absorbancias de las tres determinaciones.
2 = Factor de conversión de PBG a ALA.
35 = Factor de dilución.
Hct = Valor hematocrito.
60 = Tiempo de incubación.
0,062 = Coeficiente de extinción en l/µmol x cm.

Las unidades propuestas están de acuerdo con las recomendaciones de la Unión

Internacional de Bioquímica sobre nomenclatura enzimática.

Determinación de Hematocrito

- Homogeneizar adecuadamente la muestra.

- Llenar el tubo de hematocrito de Wintrobe con la sangre problema
mediante la ayuda de una pipeta capilar Pasteur con pera de goma. A
medida que se vaya llenando el tubo, la punta de la pipeta se va elevando
si bien, ha de permanecer por debajo del menisco de la sangre para evitar
la formación de espuma.
- Centrifugar durante 20 minutos a 3.000 rpm.
- Medir las alturas de la columna de eritrocitos y la altura total.

donde:
L1 = es la altura de la columna de eritrocitos (no incluye la capa blancuzca de
leucocitos y plaquetas).
L2 = es la altura de la muestra total de sangre.
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5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA. -

100 minutos

6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS. -

De acuerdo con resultados de la práctica reportar informe

7. CUESTIONARIO. -

Será proporcionado por el docente de acuerdo con el resultado de las pruebas y

el tipo de sustancia que se determine.
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PRÁCTICA No. 8
IDENTIFICACIÓN DE MONÓXIDO DE CARBONO

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

El monóxido de carbono es un gas incoloro, inodoro, insípido y no irritante que

se origina durante la combustión incompleta del carbón o derivados combustibles
con carbono. Las fuentes productoras más frecuentes son braseros, estufas,
calefones, hornos, incineradores, plásticos y automóviles en mal estado de
funcionamiento.
La toxicidad del monóxido de carbono (CO) se debe a su combinación con la
hemoglobina para formar carboxihemoglobina (COHb). En dicha forma la
hemoglobina no libera oxígeno, dado que ambos gases (O2 y CO) reaccionan
con el grupo hemo en la molécula tetramérica de la hemoglobina. Sin embargo,
la afinidad del monóxido de carbono por la hemoglobina es cerca de 240 veces
mayor que por el oxígeno, de esta manera, la intoxicación puede ocurrir aun
cuando pequeñas cantidades de CO se encuentren presentes en la atmósfera.
En casos de sujetos muertos debido a intoxicación con CO, el aspecto del
cadáver y el
color carminado de las vísceras constituyen manifestaciones propias de la
intoxicación aguda.
Dicho color resulta visible en los órganos como el cerebro, corazón, pulmones y
la musculatura voluntaria. En los casos en que el sujeto está vivo, la sangre
deberá extraerse, a lo sumo hasta dos horas después de la exposición, puesto
que gran parte del monóxido resulta eliminado por vía pulmonar. Para casos
mortales, la muestra de sangre deberá extraerse lo más rápido posible antes que
se inicien los procesos putrefactivos.

2. COMPETENCIAS. -

• Detectar intoxicación por monóxido de carbono en muestras sospechosas.

• Cuantificar la presencia de monóxido de carbono a través de la
carboxihemoglobina en muestra sospechosas.

3.- MATERIALES REACTIVOS Y EQUIPOS

EQUIPOS Y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
1 Gradillas con tubos de 5 Unidades 2 Grupos de 6
ensayos. estudiantes
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2 Piceta con agua 5 Unidades

destilada.
3 Espectrofotómetro UV- 1 Unidad
visible

INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
1 Hidróxido de sodio. 50 Gr
2 Hidróxido de amonio 50 Ml
3 Hidrosulfito de sodio 50 Ml
(Ditionito)
Sustancias de
referencia.
MUESTRAS

La recolección de la
muestra de sangre debe
ser obtenida por punción
venosa con
anticoagulante
(heparina) evitando la
formación de burbujas o
la entrada de aire a la
jeringa. Se recomienda
obtener sangre del
corazón o de las venas
gruesas como la
femoral. El recipiente
para utilizar para la
conservación de la
muestra debe estar
escrupulosamente
limpio, seco y cerrado
en forma hermética.
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4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO. -
FUNDAMENTO DE LA TÉCNICA UTILIZADA

La determinación cuantitativa de la carboxihemoglogina en sangre puede

realizarse por métodos espectroscópicos que se basan en los diferentes
espectros de absorción que presentan la carboxihemoglobina respecto de la
hemoglobina. En todos ellos se realizan medidas de absorción a distintas
longitudes de onda de diluciones adecuadas de la sangre en estudio. Estas
longitudes de onda corresponden a los máximos, mínimos o puntos isosbésticos
de absorción de cada una de las especies de hemoglobina que coexisten en la
muestra.
Otra propiedad que es utilizada por estos métodos es la gran estabilidad que
presenta la carboxihemoglobina respecto de la oxihemoglobina frente a reactivos
reductores o metahemoglobinizantes. A ojo desnudo, la sangre con alto
contenido de carboxihemoglobina presenta un marcado tono carmín, mientras
que la sangre con alto contenido de metahemoglobina es chocolate.

METODOLOGÍA

Prueba presuntiva

- Preparar soluciones sanguíneas al 1% en agua destilada de muestra a

analizar y de sangre normal.
- Observar simultáneamente ambos tubos de ensayo con luz natural difusa.
- La sangre normal presenta color rojo amarillento.
- La sangre si contiene carboxihemoglobina, presenta color carminado
neto.

Prueba presuntiva

- En un tubo de ensayo colocar 3 a 4 gotas de la sangre a analizar y en otro

tubo similar colocar igual número de gotas de sangre normal.
- Agregar 15 ml de agua destilada y mezclar bien.
- Agregar a cada tubo 5 gotas de solución de hidróxido de sodio al 10% y
mezclar bien.
- La sangre normal adquiere color castaño a castaño verdoso (hematina
alcalina).
- La sangre oxicarbonada permanece inalterada (color carminado durante
cierto tiempo).
El ensayo ofrece un neto contraste y resulta positivo cuando la concentración de
carboxihemoglobina es superior al 10%.
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DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE LA CARBOXIHEMOGLOBINA POR

EL MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO

El siguiente método se basa en que la sangre normal contiene varias formas de

hemoglobina (la forma reducida, la forma oxidada, y pequeñas cantidades de
metahemoglobina), y si un agente reductor como el ditionito de sodio es
agregado a la sangre, la forma oxigenada y la metahemoglobina son
cuantitativamente convertidas a la forma reducida que presenta un espectro
como se presenta en la Figura. Debe recordarse que en caso de que la persona
haya estado expuesta a sustancias metahemoglobinizantes esta determinación
es poco recomendada.

Procedimiento

- Diluir 0,2 ml de la muestra de sangre homogenizada con 25 ml de solución

0,1% de hidróxido de amonio.
- Dividir la solución resultante en tres partes iguales A, B, y C.
- Saturar la solución A con monóxido de carbono mediante el burbujeo de
gas a una velocidad que minimice la formación de espuma.
- La solución B se trata con oxígeno puro durante 10 minutos a los efectos
de desplazar completamente el monóxido de carbono unido a la muestra.
- Agregar una pequeña cantidad de ditionito a cada una de las soluciones
A, B y C.
- También a 10 ml de la solución de amonio 0,1% y mezclar bien.
- Medir la absorbancia de cada solución a 540 y a 579 nm para cada
solución A, B, y C.
- Se calcula la de relación de absorbancias a 540 a 579 para cada solución.

El porcentaje de saturación de carboxihemoglobina se calcula por la siguiente

fórmula:
Los valores normales aproximados para la relación de absorbancia son:
carboxihemoglobina saturada 1,5 y hemoglobina reducida 1,1%.
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CÁLCULO DE PORCENTAJE DE SATURACIÓN

Se basa en la distinta localización de los máximos y mínimo de absorción de las

bandas correspondientes a los espectros de absorción de la oxihemoglobina.
Haciendo 2 lecturas (una corresponde al máximo y la otra al mínimo) y
calculando el cociente de absorbancia a 541nm y 555nm se obtienen valores
que siguen con gran exactitud las diferencias de los correspondientes
coeficientes de intoxicación.

Se realizan dos lecturas, una a541 nm y la otra a 555 nm. El valor del cociente
entre estas absorbancias indica indirectamente el porcentaje de
carboxihemoglobina en sangre.

Procedimiento

- Tomar 25 uL de sangre total y diluirla en 5 mL de amoniaco al 0,4%.

- Tapar el tubo con parafilm, homogenizar y dejarlo reposar por 10 minutos
- Traspasar a tubos limpios, 2 mL del homogenizado
- Agregar a cada tubo 10 mg de ditionito de sodio (previamente pesado),
cubrir con parafilm y agitar suavemente por inversión (10 veces)
- Leer absorbancia a 541 nm y 555 nm, utilizando amoniaco al 0,4% como
blanco reactivo
- Calcular el porcentaje de saturación

R = A 555 nm
A 541 nm

Con el valor de R, interpolar el valor de %S en la siguiente tabla:

Valores de referencia:
➢ No fumadores hasta 1,5 %
➢ Fumadores activos hasta 2,5 %
➢ Fumadores con exposición a otras fuentes hasta 5%

Cuantificación de la gravedad
Leve: mayor de 5% y hasta 15%
Moderada: 15 a 35%
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Severa: mayor a 35%

5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA. -

100 minutos
6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS. -
De acuerdo con resultados de la práctica reportar informe
7. CUESTIONARIO. -
Será proporcionado por el docente de acuerdo con el resultado de las pruebas y
el tipo de sustancia que se determine.
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PRÁCTICA No. 9
CUANTIFICACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA ACETILCOLINESTERASA

Los organofosforados causan toxicidad al inhibir la enzima acetilcolinesterasa

(AchE), que es esencial para la hidrólisis de la acetilcolina (Ach). Esta inhibición
conduce a la acumulación de Ach, que produce los síntomas de la estimulación
para simpaticomimética. Los organofosforados se unen a los sitios aniónico y
esterático de la enzima AchE.

2. COMPETENCIAS. -

Detectar intoxicaciones por insecticidas organofosforados en muestra

sospechosa y realizar su prueba de tratamiento.

3.- MATERIALES REACTIVOS Y EQUIPOS. -

EQUIPOS Y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
1 Vasos precipitados de 5 Unidades 2 Grupos de 6
50, 100 y 250 ml. estudiantes
2 Probeta de 20, 100 ml 5 Unidades
3 Pipeta de 5, 10, ml. 5 Unidades
4 pHchimetro. 1
5 Espectrofotómetro UV - 1 Unidad
Visible

EQUIPOS Y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
1 Solución fisiológica 100 Ml
2 Hidrogeno Fosfato 50 Gr
disodico
dodecahidratado.
3 Dihidrogeno fosfato de 50 Gr
socio dihidratado.
4 Ácido 5,5-ditiobis-2 nitro
benzoico 50 Ml
5 Ioduro de acetiltiocolina 50 gr
6 MUESTRAS
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Se trabaja con sangre

heparinizada,
aproximadamente 8 ml
de sangre, obtenida por
venopunción (evitar la
hemólisis), transferirla a
un tubo heparinizado
(con una gota de
heparina), tapar y agitar
cuidadosamente por
inversión.

4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO. -
FUNDAMENTO DE LA TÉCNICA UTILIZADA

El método se fundamenta en que la enzima acetilcolinesterasa provoca la

hidrólisis
de la acetilcolina en colina y ácido acético. Existen diversas variables en el
mercado.

Este método estima la actividad de la enzima, midiendo el cambio de pH a través

del
empleo de un electrodo de vidrio. Otros métodos como el de W. Caraway,
registra el cambio de pH usando un indicador colorimétrico.

La AChE puede hidrolizar a la acetilcolina y a la acetiltiocolina, los productos de

hidrólisis serán acetato y tiocolina. La tiocolina reacciona con el ácido 5,5’-
ditiobis-2-nitrobenzoíco (DTNB) produciendo el 2-nitro-5-mercapto benzoato,
compuesto coloreado que puede medirse a 405nm.

METODOLOGÍA

Preparación de reactivos.

- Solución de Na2HPO4 .12H2O 52 mmol/l: Pesar 1,86 g de la droga

sólida y llevar a 100 ml con agua destilada.
- Solución de NaH2PO4 .2H2O 52 mmol/l: Pesar 0,405 g de la droga
sólida y llevar a 50 ml con agua destilada.
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- Solución Tampón fosfato: Na2HPO4/NaH2PO4: 52 mmol/l pH= 7,2.

Colocar aproximadamente 65 ml de la solución de Na2HPO4 y 35 ml de
la solución de NaH2PO4 en un vaso de precipitado de 250 ml. Ajustar el
pH a 7,2.
- Solución Tampón cromógeno: ácido 5,5-ditiobis-2 nitro benzoico
(DTNB): 0,26 mmol/l. Pesar 10,3 mg del DTNB y disolverlos en 100 ml de
la solución tampón. (SN1).
- Solución de yoduro de acetiltiocolina (sustrato) 156 mmol/l. Pesar 90
mg de la droga sólida y disolverla en 2 ml de agua destilada. (SN2)

Procedimiento

- Separar mediante centrifugación el paquete globular.

- Lavar el paquete globular con solución
- fisiológica dos veces, descartando el líquido de lavado mediante
centrifugación, durante 5 minutos.
- Preparación del hemolizado: Tomar 0,1 ml del paquete globular lavado y
llevarlo a 2,5 ml con agua destilada.
- En la cubeta colocar 3,0 ml de la solución Tampón cromógeno y 20 ml del
hemolizado.
- Homogeneizar bien e incubar unos 5 minutos a 25ºC.
- Adicionar 0,1 ml de Solución de yoduro de acetiltiocolina, homogeneizar.
- Leer las absorbancias a 405 nm cada 30 segundos durante 3 - 4 minutos.

Calculo

Cálculo de la actividad de AChE: determinar ΔA/min y calcular:

ε(coeficiente de extinción molar 250C )= 13600 l x M-1 x cm-1

106 = para pasar moles a micromoles
Vf = volumen final expresado en litro en la cubeta (en este caso: 0,00312 l)
Vm = volumen muestra expresado en litro (en este caso: 0,00002 l)
Paso óptico = 1 cm
D = factor de dilución (25)
Observación: U/l= mmol de sustrato/l x min a 250C

Valores de referencia
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Colinesterasa Eritrocitaria: 7120-11760 U/l

5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA. -

100 minutos
6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS. -
De acuerdo con resultados de la práctica reportar informe
7. CUESTIONARIO. -
Será proporcionado por el docente de acuerdo con el resultado de las pruebas y
el tipo de sustancia que se determine.
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PRÁCTICA No. 10
IDENTIFICACIÓN DE ACIDO ACETILSALICÍLICO

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

El ácido acetilsalicílico es la causa de más intoxicaciones accidentales en niños

que cualquier otra sustancia. Este analgésico tan extraordinariamente útil se usa
con tanta amplitud y se dispone de él con tanta facilidad que los niños con
frecuencia ingieren una cantidad tóxica por comer las tabletas saborizadas como
si fueran caramelos.

Las dosis tóxicas de salicilatos producen inicialmente estimulación del sistema

nervioso central, este podría reflejarse en hiperventilación, rubor y fiebre. Por
desgracia en un caso no reconocido de envenenamiento por salicilatos puede
pensarse en un caso de infección y entonces se le administra más ASA al
paciente por un vano intento por bajar la fiebre. La estimulación del sistema
nervioso central va seguida de depresión.

Los salicilatos se pueden determinar en los fluidos biológicos mediante una

prueba rápida basada en la formación de un complejo de color morado-violeta
entre el Fe+++ y los fenoles.

2. COMPETENCIAS. -

Detectar intoxicaciones por ácido acetilsalicilico en muestra sospechosa y

realizar su prueba de tratamiento.

3.- MATERIALES REACTIVOS Y EQUIPOS

EQUIPOS y MATERIALES

Íte
m DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones

Soporte universal y nueces

Malla de asbesto Beaker 5
Embudo de filtración 5
Papel filtro 5 Unidad 2 Grupos de 6
Mechero 10 es estudiantes
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INSUMOS
Íte
m DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Cloruro de mercurio Gramos
Cloruro férrico al 10% Gramos
Ácido clorhídrico (0.1 mol / L) 50 Ml
Nitrato férrico 50 …
NaOH 0.1 mol/L 50 Gramos
Muestra Csp 2 Grupos de seis
50 estudiantes

4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO. -

Prueba presuntiva

- Lleve 5ml de orina a un tubo de ensayo.

- Agregue 1ml de reactivo cloruro férrico al 10%
- La aparición de un color morado-violeta persistente nos indicará la
presencia de salicilatos.

Esta prueba es muy sensible y es positiva en orina después de la ingestión de

solamente 300 mg de ácido acetil salicílico. Es sensible para ácido acetil
salicílico, salicilatos de sodio, fenilo, metilo, y los derivados fenólicos.

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA

El procedimiento se basa en la formación de un complejo de color violeta entre

el hierro férrico y los fenoles. Esta reacción no es especifica de los salicilatos,
pero no ocurre falsos negativos. En este método y con el objeto de precipitar las
proteínas séricas, el reactivo lleva incorporado cloruro mercúrico y ácido
clorhídrico. La presencia de nitrato férrico en altas concentraciones previene la
inhibición del desarrollo del color producido por la presencia de fosfatos y
oxalatos.

Procedimiento
- La orina debe diluirse con agua destilada antes del análisis, la manera
corriente de trabajar es hacer diluciones del 1:2 (1ml de orina + 1ml de
agua), o del 1:5 (1ml de orina + 4ml de agua).
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- La orina diluida debe calentarse suavemente antes del análisis con el

objeto de eliminar los cuerpos cetónicos. Dejar enfriar completamente.
Es necesario hacer un blanco biológico de orina diluida, una mezcla de 1ml de
orina diluida y 5ml del reactivo de Trinder (mezclar 40 g de HgCl disuelto en 800
ml de H2O destilada con 120 ml de HCl (1 M) y 40 g de nitrato férrico. Diluir
hasta volumen final de 1 L con agua destilada.).

1. tubo muestra (orina problema) 1ml + 5ml reactivo color.

2. tubo blanco (agua destilada) 1ml + 5ml reactivo color.
3. tubo blanco biológico 1ml + 5 ml reactivo color.
4. tubo estándar ácido salicílico 1ml + 5ml reactivo color.

Determinar la densidad óptica de cada tubo a 540 mu, usando el tubo Nº 2

(blanco) para cuadrar el fotómetro a cero de D.O (100% de transmitancia). La
concentración de salicilatos en la orina se calcula por la siguiente formula:

Interpretación:

La relación entre las cifras séricas de salicilato (en mg/100ml) en las primeras
seis horas después del envenenamiento es la siguiente:
Menos de 45 = nivel terapéutico
45 a 65 = intoxicación ligera.
65 a 90 = intoxicación moderada
90 a 120 = intoxicación grave
Más de 120 = usualmente mortal.

5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA. -

100 minutos

6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS. -

De acuerdo con resultados de la práctica reportar informe

7. CUESTIONARIO. -

Será proporcionado por el docente de acuerdo con el resultado de las pruebas y

el tipo de sustancia que se determine.
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PRÁCTICA No. 11
IDENTIFICACIÓN DE ANTIHISTAMÍNICO POR CROMATOGRAFÍA DE CAPA
FINA

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

Los antihistamínicos clásicos se han asociado siempre a sedación y efectos

anticolinérgicos que, desde los años 80, han intentado evitarse en el desarrollo
de nuevos principios activos. Durante los años 90, algunos de estos nuevos
compuestos se han relacionado con interacciones medicamentosas y toxicidad
potencial importantes.

Los antihistamínicos actúan como antagonistas competitivos de la histamina: se

unen al receptor H1 sin activarlo e impiden así que la histamina se una y los
active. La unión de muchos antihistamínicos es fácilmente reversible, pero
algunos de ellos, como terfenadina y astemizol, no se disocian fácilmente de los
receptores. Aunque hay
moléculas específicas que sí han demostrado efectos en este sentido, los
antihistamínicos
como grupo no inactivan químicamente a la histamina, ni la antagonizan desde
el punto de vista fisiológico, ni previenen de ninguna forma su liberación.

2.- COMPETENCIAS. -

Identifica y Valora los fármacos antihistamínicos H1

3.- MATERIALES REACTIVOS Y EQUIPOS

EQUIPOS y MATERIALES

Íte Observacione
m DENOMINACIÓN Cantidad Unidad s

Tubos de ensayo
50
Mortero
5 Unidades
Frascos gotero
5 Unidades
Microcámara cromatográfica
5 Unidades
Placas cromatográficas
5 Unidades
Matraces, bureta 2 Grupos de 6
5 Unidades
estudiantes
5 Unidades
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INSUMOS

Íte Observacione
m DENOMINACIÓN Cantidad Unidad s

Disolventes, alcohol, éter y

cloroformo
Reactivo de Ddragendorff 50 Ml
Vapores de yodo 50 ml
Reactivo de Mayer .. ..
Reactivo de Yodo 50 Ml
Reactivo de Acido Pícrico 50 Ml
Cristal violeta TS 50 Ml
Acido Acético 20 Gramos
Anhídrido acético 50 Ml
2 Grupos de 6
Acido Perclórico 0.1 N 50 Ml
estudiantes
50 ml

4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO. -
FUNDAMENTO DE LA TÉCNICA UTILIZADA

La cromatografía en capa fina (TLC) es un método de afinidad que se utiliza para

separar los compuestos de una mezcla. La TLC es un método de separación
muy versátil que se utiliza ampliamente para el análisis cualitativo y cuantitativo
de las muestras. La TLC puede utilizarse para analizar prácticamente cualquier
clase de sustancia: plaguicidas, esteroides, alcaloides, lípidos, nucleótidos,
glucósidos, carbohidratos y ácidos grasos.

En la TLC, la fase estacionaria es una fina capa de material adsorbente,

normalmente gel de sílice u óxido de aluminio, que recubre una superficie de
placa inerte, normalmente vidrio, plástico o aluminio. Se deposita una pequeña
cantidad de la muestra en un extremo de la placa de TLC, que se coloca
verticalmente en una cámara cerrada con un disolvente orgánico (fase móvil). La
fase móvil se desplaza hacia arriba por la placa por capilaridad y los
componentes de la muestra migran distancias variables en función de sus
afinidades diferenciales por las fases estacionaria y móvil. Cuando el disolvente
llega a la parte superior de la placa, ésta se retira de la cámara de desarrollo y
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se seca. Los componentes separados aparecen como puntos en la placa, y se

evalúa el factor de retención (RF) de cada componente.

El factor de retención (Rf) se utiliza para medir el movimiento de los compuestos

a lo largo de la placa de TLC. Rf se define como la distancia recorrida por una
componente dividida por la distancia total recorrida por el disolvente. Su valor se

encuentra siempre entre cero y uno.

En general, cuanto más fuerte se une un compuesto a la fase estacionaria

adsorbente, más despacio migra hacia arriba en la placa de la TLC. Como los
adsorbentes de la TLC son normalmente polares, los compuestos no polares
tienden a subir más deprisa por la placa, lo que produce mayores valores de Rf,
mientras que los compuestos polares tienden a moverse más despacio e y tienen
menores valores de Rf.

MUESTRAS

Fármaco puro de referencia o patrón: Clorfeniramina Maleato

Forma Farmacéutica o muestra problema: Tabletas de Clorfeniramina maleato 4
mg

METODOLOGÍA

Procedimiento

Preparación de la muestra problema:

- En un mortero moler una tableta hasta polvo fino.

- Colocar en polvo en un tubo de ensayo, adicionar 3 mL de agua destilada,
agitar
- fuertemente y filtrar. Reservar la fase líquida para los ensayos

Identificación:

- Aspecto, color y olor de la muestra de referencia.

- Solubilidad: Comprobar la solubilidad del fármaco puro en agua, alcohol,
- cloroformo y éter
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Cromatografía en capa Fina:

- Para saturar la cámara cromatográfica, media hora antes, cubrir las

paredes con papel filtro y adicionar el disolvente (Fase móvil)
aproximadamente en 1 cm de altura.
- Preparar la solución de la muestra y de referencia aprox 1 % en el solvente
de mayor solubilidad y aplicar con un capilar a 0.5 cm de los márgenes
inferior y lateral. Aplicar, muestra, patrón y la mezcla de muestra y patrón.
- Dejar secar y marcar con lápiz el margen superior del frente del disolvente
(fase móvil) w introducir la placa cromatográfica de forma vertical en la
cámara tapar rápidamente.
- Dejar e luir el disolvente hasta que alcance el límite superior marcado.
Retirar la placa de la cámara y dejar secar.
- Detectar las manchas por UV y/o revelar con el indicador Dragendorff, o
yodo y delinear las manchas.
- Determinar el centro de la mancha y medir la distancia recorrida por la
muestra y el patrón, el frente de disolvente luego, calcular el Rf de la
muestra y de la referencia o patrón y comparar.

El Rf de un compuesto es una constante física, pero que puede variar con

cualquier cambio físico-químico por lo que siempre debe compararse con un
patrón cromatográfico en las mismas condiciones experimentales

Reacciones de identificación:

En su mayoría se fundamentan en la presencia del grupo amino en la cadena

lateral.
Realizar el ensayo con muestra problema y patrón en forma paralela y
comparando
los resultados.

- Con Reactivo pícrico: A1 mL de muestra adicionar gotas de reactivo, se

debe observar la formación de precipitado amarillo.
- Con Reactivo de Yodo: A1 mL de muestra adicionar gotas de reactivo, se
debe observar la formación de precipitado pardo.
- Con Reactivo de Mayer: A1 mL de muestra adicionar gotas de reactivo,
se debe observar la formación de precipitado blanco.

Valoración de Clorfeniramina maleato:

Se utiliza el método de valoración de bases en medio anhidro.

Pesar una cantidad exacta alrededor de 40 mg de sustancia (el grupo de trabajo
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recibirá la muestra a valorar ya pesada, pero desconocerá el peso exacto, lo cual

deberá
determinar). Adicionar 10 mL de ácido acético, 3 mL de anhídrido acético y gotas
de cristal violeta TS como indicador. Valorar con ácido perclórico 0.1 N, el final
de la reacción se determina por viraje de color a azul verdoso, hacer un blanco
si es necesario. 1mL de ácido perclórico 0.1 N equivale a 19.54 mg de
clorfeniramina maleato.

5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA. -

100 minutos

6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS. -

De acuerdo con resultados de la práctica reportar informe

7. CUESTIONARIO. -

Será proporcionado por el docente de acuerdo con el resultado de las pruebas y

el tipo de sustancia que se determine.
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PRÁCTICA No. 12
DETERMINACIÓN DE CAFEÍNA

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

La cafeína es un alcaloide que está presente en el té, café, bebidas cola y otras
bebidas. Una taza de té o café contiene aproximadamente 100 mg de la droga.
La cafeína es una sustancia con propiedades estimulantes de SNC. Es también
usado en el tratamiento del apnea neonatal.

Las reacciones metabólicas incluyen N-demetilación y oxidación a derivados del

ácido úrico. Aproximadamente el 85% de una dosis oral es excretada sin
cambios en la orina La cafeína es un metabolito importante de la teofilina cuando
los neonatos son tratados con esta última sustancia y en adultos con hábitos de
drogas del grupo de las xantinas.

La sobredosis con cafeína puede causar palpitaciones, hipertensión, aumento

de diuresis,
estimulación del sistema nervioso central, náuseas, vómitos, marcada
hipocalemia, acidosis metabólica y convulsiones. El tratamiento es sintomático y
de sostén.

2. COMPETENCIAS. -

Conocer el método para la extracción de la cafeína en una muestra.

Determinar la cantidad de cafeína en nescafé instantáneo.

3. MATERIALES REACTIVOS Y EQUIPOS. -

EQUIPOS y MATERIALES

Íte
m DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones

Matraz aforado de 100 ml 5 Unidades

Probeta de 100 ml 5 Unidades
Peras de decantación 5 Unidades
Papel filtro 10 Piezas
Embudos 1 Unidad
Balon con tapón 1 Unidad
2 Grupos de 6
Baño maría 1 Unidad
estudiantes
Centrifuga 1 Unidad
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INSUMOS

Íte
m DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones

Acetato de zinc
Ácido acético
50 Gramos
Ferrocianuro de potasio
50 Ml
Amoniaco
50 Gramos
KOH al 1 %
50 Ml
Agua destilada
100 Ml
100 ml

4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO. -

MUESTRAS

Muetra de nescafe.

METODOLOGÍA

Procedimiento

- Pesar 10 g de muestra.
- Colocar en una Matraz aforado de 100 ml, 20 ml de muestra y 60 ml de
agua destilada homogenizar.
- Agregar 5 ml de solución de acetato de zinc (Disolver 21.9 g de acetato
de zinc deshidratado en agua con 3 ml de ácido acético y enrazar a 100
ml.) Mezclar y añadir 5 ml de solución de ferrocianuro (Disolver en agua
10. 6 g de ferrocianuro de potasio trihidratado y enrasar a 100 ml.)
- Mezclar y enrasar con agua destilada y dejar en reposo por 5 minutos o
más.
- Filtrar o centrifugar para obtener solución libre de impurezas.
- Recibir el filtrado o centrifugado en probeta de 100 ml y agregarle 10 ml
de amoniaco.
- Colocar la muestra en un embudo de decantación con tapón y extraer la
cafeína mediante la adición de cloroformo en tres etapas: con 20, 15, 5 ml
de cloroformo.
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- En cada etapa se añade el cloroformo, se agita durante 10 a 15 minutos.

Y transfiere al embudo de decantación.
- Los extractos clorofórmicos de las etapas se reúnen en el balón y se lavan
5 ml de KOH al 1 %. Agitar y separar las fases acuosas y califórnicas.
- Evaporar el extracto califórnico hasta obtener 10 a 15 ml de muestra.
- Colocar la muestra en la placa Petri tarada y llevar a estufa a 60 ºC hasta
obtener cristales.
- Enfriar y pesar los cristales.

RESULTADOS

- Con la ecuación siguiente se calcula la cantidad de cafeína:

Donde:
P1: peso d cristales de cafeína en gramos
M: peso de muestra en gramos

5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA. -

100 minutos

6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS. -

De acuerdo con resultados de la práctica reportar informe

7. CUESTIONARIO. -

Será proporcionado por el docente de acuerdo con el resultado de las pruebas y

el tipo de sustancia que se determine.
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PRÁCTICA No. 13

DETERMINACIÓN DE AFLATOXINA EN LECHE.

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

Se conocen actualmente casi 500 tipos de micotoxinas, entre ellas, las más
importantes por su ocurrencia y toxicidad son las Aflatoxinas, Ocratoxinas,
Rubratoxinas y Tricotecenes, siendo las primeras las más destacadas y
evaluadas por constituir un riesgo toxicológico importante para la salud humana
Su presencia en productos lácteos es posible si en su elaboración se emplea
leche procedente de animales alimentados con alimentos contaminados con
hongos micotoxigénicos, debido a la contaminación cruzada en el envasado de
la leche o el desarrollo de estos mohos durante la elaboración de los quesos
Las aflatoxinas son micotoxinas producidas por ciertas cepas de hongos (mohos
del género Aspergillus como el aspergillus Flavus y aspergillus Parasiticus). Su
importancia radica en que son cancerígenas mutagénicas y teratogénicas.
Las aflatoxinas más comunes son las B1, B2, G1 y G2, las cuales toman el
nombre con base en la fluorescencia que presentan en capa fina de gel, y la M1
que es el metabolito hidroxilado de la AFB1, que se elimina en la leche de los
animales que ingieren forrajes contaminados con AFB Siendo las principales B1,
B2, G1 y G2 además de sus metabolitos M1, M2.
2. COMPETENCIAS. -
Adquirir conocimientos en la determinación de aflatoxinas en muestras de leche

3. MATERIALES REACTIVOS Y EQUIPOS. -

EQUIPOS y MATERIALES

Íte
m DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones

Erlenmeyer 100ml
Papel filtro 5
Probetas de 250 ml,100ml,50 ml 10
Pipetas de 10 ml,5ml,2ml. 5
Agitador mecánico. 5
Placas de cromatografía. 1 Unidades
Tubos capilares sin heparina. 5 Piezas
Mechero. 15 Unidades
Embudo de separación. 5 Unidades
2 Grupos de 6
Cubas para cromatografía en capa 5 Unidad
estudiantes
fina 5 Unidades
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INSUMOS

Íte Unida
m DENOMINACIÓN Cantidad d Observaciones

Metanol. Ml
Cloruro de sodio. 50 Gram
Hexano 50 os
50 Ml
Diclorometano o cloroformo
50 Ml
Aceto 50 Ml
Ácido sulfúrico 50 ml

4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO. -
FUNDAMENTO DE LA TÉCNICA UTILIZADA Extracción mediante solventes
orgánicos, identificándose por cromatografía en capa fina

MUESTRAS
Leche fresca
Leche en polvo
METODOLOGÍA
Extracción. -
A 20 ml de leche en estudio se le agregaron 35 ml de metanol; se agitó, sonicó
y centrifugó a 3000 rpm por 7 minutos. El sobrenadante se filtró través de un
papel; a 25 ml del filtrado se le adicionaron 10 ml de NaCl al 20% y 15 ml de
hexano; se agitó y centrifugó a 3000 rpm por 7 min. Se descartó la fase orgánica
rica en lípidos. A la fase acuosa se le adicionaron 10 ml de diclorometano, se
agitó y se dejó reposar por 5 min, para permitir la separación de fases,
extrayendo y conservando la nueva fase orgánica; se repitió la extracción con
diclorometano dos veces, los sobrenadantes se llevaron a sequedad
Determinación por cromatografía en capa fina
Recuperar el extracto con cloroformo y sembrar en una placa frente a patrones.
Eluyente Cloroformo: acetona (176:24), llevar a luz UV previo aspersor con
H2SO4

5.- TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA

200 minutos

6.- MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS

De acuerdo con resultados de la práctica reportar informe

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7.- CUESTIONARIO

Será proporcionado por el docente de acuerdo con el resultado de las pruebas y

el tipo de sustancia que se determine.
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PRÁCTICA No. 14
DETERMINACIÓN DE METAHEMOGLOBINA COMO INDICADOR DE
NITRITOS Y NITRATOS

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

Los nitratos como el nitrato de sodio (NaNO3) se utilizan como fertilizantes

inorgánicos,
antiséptico, preservantes de algunos alimentos, en explosivos, etc. La muerte en
un adulto puede sobrevenir por ingestión de aproximadamente 15 g de la sal de
sodio o potasio. Los nitratos orgánicos como el gliceril trinitrato son usados como
vasodilatadores. Los niños y lactantes son particularmente sensibles a estos
compuestos.
Los nitratos son metabolizados a nitritos en el tracto gastrointestinal.
Los nitratos son agentes fuertemente oxidantes y los ensayos indicados más
adelante podrían detectar compuestos con similares propiedades, como los
bromatos, cloratos, hipocloritos, iodatos y nitritos.

Los Nitritos como el nitrito de sodio (NaNO2) fueron usados como vasodilatores
y se usan como oxidantes, como preservantes de alimentos y en la fabricación
de explosivos. Los nitritos también pueden ser consecuencia del metabolismo de
los nitratos. La dosis fatal de nitrito de sodio es aproximadamente 10 g, aunque
la ingestión de cantidades tan pequeñas como 2 g ha causado la muerte en un
adulto. Los lactantes y niños son especialmente sensibles a estas sustancias.
Los nitritos son agentes fuertemente oxidantes y los ensayos indicados más
adelante pueden también detectar compuestos similares como los bromatos,
cloratos, hipocloritos, iodatos y nitratos.

2.- COMPETENCIA (S)

Determinar la concentración de nitritos presente en una muestra de jamón.

3.- MATERIALES REACTIVOS Y EQUIPOS

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EQUIPOS y MATERIALES

Íte Cantida Observacione

m DENOMINACIÓN d Unidad s

2 Grupos de 6
Gradillas 5 Unidades estudiantes
Tubos de ensayo 50 Unidades
Varillas de vidrio 5 Unidades
Matraz Erlen Meyer de 500 ml 5 Unidades
Matraz Erlen Meyer de 250 ml 5 Unidades
Probeta de 50 mL 5 Unidades
Frascos de 200 mL 5 Unidades
Papel filtro No. 1 5 Unidades
Papel filtro Whatman No. 42 5 Unidades
Celdas de vidrio para
espectrofotómetro 5 Unidades
Morteros 5 Unidades
Baño maria 1 Unidad
Termómetros 5 Unidades
Soporte Universal 5 Unidades
Anillos para soporte 5 Unidades
Vasos de precipitación de 100
Ml 5 Unidades
Matraz Erlen Meyer de 200 ml 5 Unidades
Probeta de 100 ml 5 Unidades
Matraz volumétrico de 250 ml 5 Unidades
Matraz volumétrico de 50 ml 5 Unidades
Embudo de filtración 5 Unidades
Pipeta volumétrica de 25 ml 5 Unidades
Pipetas graduadas de 5 ml 5 Unidades
Agitador de vidrio 5 Unidades
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Matraz volumétrico 1000 ml 5 Unidades

Matraz volumétrico 100 ml 5 Unidades
Matraz volumétrico 50 ml 5 Unidades
Pipeta volumétrica de 2 ml 5 Unidades
Pipeta volumétrica de 5 ml 5 Unidades
Pipeta volumétrica de 10 ml 5 Unidades
Pipeta volumétrica de 15 ml 5 Unidades
Pipeta volumétrica de 20 ml 5 Unidades
Pipeta volumétrica de 25 ml 5 Unidades
Pipetas graduadas de 5 ml 5 Unidades
Vaso de precipitación de 100 ml 5 Unidades
Jeringas heparinizadas 5 Unidades
Balanza analítica 1 Unidad
espectrofotómetro 1 Unidad

INSUMOS

Íte Cantida
m DENOMINACIÓN d Unidad Observaciones

Difenilamina 50 Gramos
Sulfanilaminda 50 Gramos
N-(1-naftil etilendiamino)
diclorhidrato 50 Gramos
Acido acetico 100 ml
Nitrito de sodio 50 Gramos
Fosfato disódico anhidro 50 gramos
Fosfato monopotasico anhidro 50 gramos
Ferricianuro de potasio 50 gramos
Cianuro de sodio 50 Gramos
Nitrito de sodio 50 Gramos
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4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO. -

MUESTRAS

50 g de jamón
2 ratas por equipo con un peso aproximado de 250 g.

METODOLOGÍA

Prueba presuntiva

- Filtrar, si es necesario 5 ml de contenido estomacal o muestra en un tubo

de vidrio de 10 ml.
- Agregar 0,5 ml del filtrado en un tubo limpio.
- Lentamente agregar 0,5 ml de solución de difenilamina por las paredes
del tubo.
Frente a la Difenilamina aparición de un color azul fuerte que se desarrolla
inmediatamente en la unión de las dos capas en presencia de oxidantes.

DETERMINAR LA CONCENTRACIÓN DE NITRITOS PRESENTE EN UNA

MUESTRA DE JAMÓN

Procedimiento

- Triturar la muestra de jamón hasta obtener una pasta tipo paté.

Posteriormente pesar 5 g y pasarla a un vaso de precipitados de 100 mL.
- Adicionar 80 mL de agua destilada y calentar sobre una parrilla a 80 ºC,
mezclando con una varilla de vidrio.
- Transferir la muestra cuantitativamente a un vaso de precipidados de 250
mL, lavando el vaso de precipitados con varias porciones de agua
destilada caliente, hasta un volumen aproximado de 150 mL.
- Calentar a baño maría a 80 ºC durante 1.5 horas, agitando
frecuentemente. Transcurrido este tiempo, enfriar en baño de hielo;
posteriormente poner a reposar hasta que adquiera la temperatura
ambiente, trasvasar a un matraz aforado de 500 mL, llevar hasta el aforo
con agua destilada (no olvide hacer lavados cuantitativos).
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- Filtrar la muestra empleando papel filtro No.1 y silica gel 60 en polvo;

posteriormente pasar el filtrado sobre papel Whatman No.42 doble con
silica gel 60, hasta que desaparezca la opalescencia del filtrado. NOTA:
NO ES NECESARIO REALIZAR EL FILTRADO DE LOS 500 mL, SOLO
de aproximadamente 100-150 mL con el que buscará mediante
filtraciones obtener un filtrado transparente.
- Tomar una alícuota de 25 mL del filtrado, transferirla a un matraz
volumétrico de 50 mL y colocarlo sobre un baño de hielo para llevar al
cabo la reacción.
- Adicionar 2.5 mL de reactivo de sulfanilamida, agitar y dejar reposar la
reacción durante 5 minutos.
- Agregar 2.5 mL del reactivo de NED, mezclar y dejar que la reacción se
estabilice durante 15 minutos a temperatura ambiente. Dependiendo del
color observado en comparación a la curva tipo, aforar al volumen con
agua destilada, o leerlo sin diluir, empleando un espectrofotómetro a una
longitud de onda de 540 nm.
- Preparar un blanco de reactivos empleando agua en lugar de muestra y
con el mismo tratamiento que el problema.

Preparación de la curva

- Pesar exactamente 1 g de nitrito de sodio y transferirlo a un matraz

volumétrico de 1 L. De esta solución tomar 10 mL y llevarlos a un volumen
de 100 mL; tomar 2 mL de esta solución y llevarlos a 100 mL.
- De la última solución, tomar alícuotas de 5, 10, 15, 20 y 25 mL;
transferirlas a matraces volumétricos de 50 mL
- Adicionar a cada matraz 2.5 mL de reactivo de sulfanilamida, agitar y dejar
en reposo durante 5 min.
- Agregar a cada matraz 2.5 mL de reactivo de NED, agitar y permitir que
la reacción se estabilice durante 15 min. Transcurrido este tiempo, aforar
a volumen cada matraz con agua destilada.
- Determinar la absorbancia en un espectrofotómetro a una longitud de
onda de 540 nm, usando como referencia un blanco de reactivos y agua
destilada, tratado de la misma forma que el problema.

EVALUACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DE METAHEMOGLOBINA POR

INTOXICACIÓN DE NITRITOS NITRATOS

Procedimiento

Obtención de la muestra
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- Pesar las ratas y administrar por vía i.p las siguientes dosis

Rata 1. Dosis de 50 mg/kg de nitrito de sodio

Rata 2. Administrar SSI de acuerdo con su relación peso/0.01 mL volumen
SSI
- Después de media hora de la administración, obtener sangre por punción
retroorbital
- Para la cuantificación de hemoglobina, tomar 0.2 mL de sangre
heparinizada y mezclar con 8 mL de amortiguador de fosfatos, dejar
reposar por 5 minutos y centrifugar a 3000 rpm por 10 min. Pasar el
sobrenadante a un tubo limpio y medir su absorbancia en 630 nm,
tomando esta lectura como A1.
- Este mismo sobrenadante se coloca en un tubo limpio y adicionar 1 gota
de solución neutralizada de cianuro. Mezclar por inversión y esperar 2
min. Leer nuevamente a 540 nm, tomando esta lectura como A2
- En un tubo de prueba mezcle 2 mL de solución anterior, 8 mL de
amortiguador de fosfatos y 0.2 mL de ferricianuro de potasio. Al mismo
tiempo, prepare un blanco empleando 2 mL de agua y trate de la misma
forma descrita. Después de 2 min adicione 1 gota de cianuro de sodio al
10%, mezcle y espere 10 min, leyendo a 540 nm empleando como
referencia el sol. A3.
Resultados

- Reportar la Hb total en [g/100mL] = A3 x 37.4

- Reportar la MtHb total en [g/100mL] = (A1/A2) 23.4
- Reportar la relación de Hb y MtHb expresada en %

% MtHb = [(A1/A2) 23.4] / [(A3x37.4)]

- Compare el resultado de la determinación de MtHb de las ratas testigo

(SSI) con respecto a las administradas con nitrito de sodio y concluya.
5. TIEMPO DE DURACIÓN DE LA PRÁCTICA.-

100 minutos

6. MEDICIÓN, CÁLCULOS Y GRÁFICOS.-

De acuerdo con resultados de la práctica reportar informe

7. CUESTIONARIO. -
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UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE TOXICOLOGIA

Será proporcionado por el docente de acuerdo con el resultado de las pruebas y

el tipo de sustancia que se determine.