TEMA 5: REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Una enzima alostérica es aquella a la que la unión de un ligando
produce un cambio en la forma de la enzima.
En las células van a representar x formas en la célula: 1 (+) activas y
2 (-) inactivas.
Estos cambios de forma van a ser provocados por moduladores
(en la enzima alostérica) y además, van a tener 2 lugares de
actuación:
A veces el modulador es el mismo substrato: en este caso hablamos de una interacción
homotrópica (cuando el agente que va a provocar el cambio en la forma es el propio
substrato). Este tipo de interacción es siempre + → Activan la enzima
Si el modulador es distinto del substrato, a la interacción la llamamos interacción
interotrópica. Pueden dar respuestas (+) Activación ó (-) Inactivación→(Restruidad
enzimática??)
Hay que diferenciar entre la teoría inhibidor mixto no competitivo con esto ya que esta
última sigue la cinética de Michaelis y además en este caso si se produce un cambio de
forma.
En las enzimas alostéricas va a haber por lo menos 2 sitios de interacción y son proteínas
con estructura de oligómeros.
Las enzimas alostéricas siguen una simetría sigmoidea.
Esta sigmoide es el reflejo de interacciones cooperativas entre las distintas subunidades
de la enzima alostérica.
La unión del ligando afectará también al compartimento del resto de enzimas.
A bajas concentraciones de substrato la actividad no aumenta, hasta que llega a un
punto en el que la velocidad de reacción se dispara.
En las enzimas alostéricas homotrópicas (ligando es el + substrato), la unión del
susbtrato al sitio alostérico, va a dar siempre una interacción (+) que se transmite y va a
favorecer la cooperación de las distintas subunidades (en el segundo va a entrar el
ligando, en el tercero aun irá más rápido...)
Si la enzima es heterotrópica (se le une un ligando distinto al substrato) la interacción
puede ser (+)→aumenta cooperatividad→facilidad para vivir substrato ò (-)→lo
contrario.
Según como afecten esos ligandos a la enzima alostérica tenemos otros 2 tipos de
enzimas alostéricas:
- Enzimas alostéricas K : son aquellas, en donde, la unión de un ligando va a provocar un
cambio en el valor de K0,5, no va a alterar la Vmáx.
Modulador (+)→aumenta K0,5
Modulador (-)→disminuye K0,5
- Enzimas alostéricas M: la unión de un modulador va a conducir a un aumento o
disminución de Vmáx, sin afectar a la Km.
*modulador (+)→aumenta Vmáx
*modulador (-)→disminuye Vmáx
Estas cinéticas no siguen el modelo de Michaelis – Menten sino que siguen el modelo de
Hill:
Diferentes métodos matemáticos nos permiten saber la cooperatividad.
El más utilizado para conocer la cinética de la enzima alostérica es este método de Hill
que está basado en la cinética de la unión de O2 a la hemoglobina.
La ecuación que es y = mx + b nos da la siguiente representación. La pendiente es n que
en muchos libros aparece como h
N es el coeficiente de Hill que no da la información sobre la cooperatividad, si es positiva,
negativa… (y sobre el número y tipo de sitios a los que se puede unir el sustrato)
● Si la enzima solo tuviera un sitio de unión de ligando n = 1, sino hay cooperatividad
también n = 1 porque n va a hacer referencia al número de sitios a los que se
puede unir ligando, tipo y fuerza de esa unión entre ligando y enzima.
● Si n > 1 la cooperatividad sería positiva, es decir, la unión de un substrato o ligando
favorecería la unión de los siguientes ligandos a la enzima.
● Si n < 1 entonces hablamos de cooperatividad negativa, es decir, a la enzima le va
a costar más unirse al substrato a medida que se va uniendo al substrato a ella.
En el punto rosa log = 𝑉 = 0 por tanto, si despejamos vemos que V = Vmáx – V→ 𝑉𝑚á𝑥−𝑉
V = Vmáx / 2 sucede cuando estamos en valor K 0,5 o S 0,5 n no puede ser negativa. Por
último tenemos – log K’
K’ es la constante de disociación macroscópica que es la constante de disociación global
de todos los sitios de unión que existen o que haya en una enzima alostérica.
Solo se puede obtener cuando toda la enzima alostérica tiene todos los sitios de unión
ocupados.
Por eso para “mejorar” el modelo de Hill tenemos la ecuación de Adair:
Tiene en cuenta todas las K’ de una enzima alostérica.
K’→constante de cada sitio al que se une ligando
Esta pensado para una enzima alostérica para cuatro subunidades con 4 sitios de unión.
Nos permite tener en cuenta ocupaciones parciales de la enzima alostérica, podríamos
saber en que situación se encuentra la enzima.
➔ Modelos moleculares
El que realmente habla de cooperatividad es el Modelo Secuenciado.
● Modelo Concertado ó Modelo de simetría (MWC → Morod, Wyman, Changeux)
● Modelo Secuencia (KNF → Koshland, Nemethy, Filmer)
➢ MODELO CONCERTADO
Parte de tres premisas:
1) Todas las enzimas alostéricas están formadas por un número fijo de
subunidades, son oligómeros.
2) En cada subunidad tiene que haber un centro activo y un centro alostérico
3) En la célula una enzima alostérica puede estar presente en 2 conformaciones:
A una le llamamos conformación T de Tenia y a la otra R de relajada, que se van a
encontrar en EQUILIBRIO TERMODINÁMICO y no se admiten formas híbridas, todas las
subunidades tienen que tener la misma conformación.
Vamos a suponer que el substrato tiene mayor afinidad por la forma R que por la forma T
entonces K0,5 T > K0,5 R
Equilibrio cuando no hay substrato muy dirigido a forma T cuando ponemos substrato la
enzima se unirá a la forma R
Esta unión del substrato a la subunidad R provoca una disminución en el número de
formas R libres provoca que equilibrio se desplace a la transformación de las formas T a
R.
Si viene segunda molécula substrato se une a forma R con K0,5 igual a la anterior ya que
no se modifica ----- este pero se desplaza todavía más el equilibrio a formas R.
EXAMEN→En el caso de una enzima homotrópica la unión del ligando que provocará?
Un activador va a provocar según modof un desplazamiento hacia la forma R. Mientras
que un inhibidor provocará un desplazamiento del equilibrio hacia las formas T.
Homotrópicas: ligando el mismo substrato va a provocar desplazamiento equilibrio
desde las formas T a las formas R.
En el caso de heterotrópicas un activador desplazará equilibrio de formas T a formas K
mientras que inhibidor provocará lo contrario de formas R a T.
En modelo concreto no hay cooperatividad lo único que cambia son las conformaciones
de enzima, no hay cambio en Ks.
➢ MODELO SECUENCIAL o KNF:
En este modelo se parte también de 3 premisas, en las cuales las 2 primeras son iguales
al modelo concertado:
1) Todas las enzimas alostéricas son oligómeros formados por un número fijo de
protómeros.
2) En cada subunidad va a haber un sitio activo y un sitio alostérico. En las enzimas
homotrópicas el substrato se une a enzima.
3) No va a existir un equilibrio termodinámico entre las diferentes conformaciones
de la enzima alostérica.
La disposición de esas subunidades en una conformación o en otra son totalmente al
azar. En forma T o en R además en este modelo se admiten formas HIBRIDAS.
En este modelo se establece que la unión de un ligando a una subunidad va a repercutir,
afectar a la unión de otros ligandos, otros substratos a otras subunidades, con mayor
facilidad o con menor, cambia la constante Ks con unos factores denominados factores
de cooperatividad.
Si ponemos molécula substrato se va a unir a subunidad con constante Ks provocando
que esa subunidad adquiere conformación de mayor afinidad R.
Ese cambio estructural provoca que las demás subunidades hayan cambiado la
siguiente Ks a αKs. Los siguientes substratos lo normal es que entran con mayor facilidad.
- Si α,β,γ > 1 hablaremos de cooperatividad negativa.
- Si α,β,γ < 1 Ks disminuirá y la cooperatividad es positiva.
- Si α,β,γ = 1 NO HAY COOPERATIVIDAD no estaríamos ante enzima reguladora
estaríamos ante ecuación de Michaelis Menten.
