Alumno Rajae Ellouizi Fecha: 21/10/2022
Práctica nº 3
USO DE MICROPIPETAS (AUTOMÁTICAS)
MICROPIPETAS - Pautas generales y Técnicas de pipeteo
Pautas generales
-
Revisar la pipeta al inicio del día de trabajo para retirar suciedad y polvo
- Ajustar el volumen en el rango especificado para la pipeta
-
Sujetar la pipeta de forma que el reposamanos de la pipeta descanse sobre el dedo índice
-
Para maximizar exactitud, la pipeta, la punta y el líquido deben estar a la misma temperatura
- Comprobar que las puntas son las adecuadas para la pipeta
- Usar las puntas una sola vez
-
Enjuagar la punta varias veces en el liquido a pipetear antes del pipeteo para mejorar la exactitud
-
No volver la pipeta del revés, de forma que el líquido de la punta afecte al interior de la pipeta
-
Evitar contaminaciones de las puntas usando el eyector y los guantes
Técnicas de pipeteo
- Técnica Directa (forward pipetting)
Recomendada para soluciones acuosas como tampones, ácidos diluidos y bases
1. Regular el volumen y presionar el émbolo hasta el primer tope
Introducir verticalmente la punta en el líquido. Ver la profundidad adecuada en la
siguiente tabla
Volumen (μL) Profundidad óptima de inmersión (mm)
0,1 - 1 1
1- 100 2-3
101 - 1000 2-4
1001 - 10000 3-6
2.
Soltar lentamente el émbolo hasta su posición inicial. Sacar la punta del líquido
tocando las paredes del recipiente para dejar los excesos de líquido del exterior de
la punta
3.
Dispensar el líquido en el recipiente presionando el embolo hasta el primer tope y
después hasta el segundo. De esta forma vaciamos totalmente la punta
4.
Sacamos la punta del recipiente tocando las paredes del mismo y dejamos el émbolo
en su posición inicial
Técnica Indirecta (reverse pipetting)
Esta técnica se usa para pipetear soluciones con una gran viscosidad o tendencia a formar
espuma. Se deben realizar con pipetas de desplazamiento de aire
1. Regular el volumen y presionar el émbolo hasta el segundo tope
Introducir verticalmente la punta en el líquido. Ver la profundidad adecuada
en la siguiente tabla
Profundidad óptima de inmersión (mm)
Volumen (μL)
0,1 - 1 1
1- 100 2-3
101 - 1000 2-4
1001 - 10000 3-6
2. Soltar lentamente el émbolo hasta su posición inicial. Sacar la punta del líquido
tocando las paredes del recipiente para dejar los excesos de líquido
3. Dispensar el líquido en el recipiente presionando el embolo hasta el primer tope. Este
volumen es el volumen ajustado. Mantener el émbolo fijo en esta posición. Quedará
algún liquido en la punta que no se debe dispensar.
4. El líquido restante en la punta se puede devolver al contenedor inicial o tirarlo junto
con la punta.
5. Dejamos el émbolo en su posición inicial
- Pipeteo Repetitivo (Repetitive Pipetting)
Esta técnica está especialmente indicada para pipeteo repetido del mismo volumen.
1. Regular el volumen y presionar el émbolo hasta el segundo tope
Introducir verticalmente la punta en el líquido. Ver la profundidad adecuada en la
siguiente tabla
Volumen (μL) Profundidad óptima de inmersión (mm)
0,1 - 1 1
1- 100 2-3
101 - 1000 2-4
1001 - 10000 3-6
2.
Soltar lentamente el émbolo hasta su posición inicial. Sacar la punta del líquido
tocando las paredes del recipiente para dejar los excesos de líquido
3.
Dispensar el líquido en el recipiente presionando el émbolo hasta el primer tope. Este
volumen es el volumen ajustado. Mantener el émbolo fijo en esta posición. Quedará
algún líquido en la punta que no se debe dispensar. Este líquido se puede echar en el
recipiente original o desechar con la punta.
4.
Repetimos los pasos 2 y 3
- Pipeteo de muestras heterogéneas
Esta técnica está especialmente indicada para pipeteo de muestras viscosas en las que no se
puede lavar previamente la punta con la muestra y se necesita pipetear el volumen total
disponible. Por ejemplo, sangre o suero
1. Regular el volumen y presionar el émbolo hasta el primer tope
Introducir verticalmente la punta en el líquido. Ver la profundidad adecuada en la
siguiente tabla
Volumen (μL) Profundidad óptima de inmersión (mm)
0,1 - 1 1
1- 100 2-3
101 - 1000 2-4
1001 - 10000 3-6
2.
Soltar lentamente el émbolo hasta su posición inicial
3+4
No sacar la punta del líquido. Volver a presionar el émbolo hasta el primer tope y
dejar que vuelva a su posición inicial. Sacar la punta del líquido tocando las paredes
del recipiente para dejar los excesos de líquido
5.
Dispensar el líquido en el recipiente presionando el émbolo hasta el segundo tope
vaciando completamente la punta
6. Dejamos el émbolo en su posición inicial
Material
Tubos de ensayo
Gradillas
Pipeta de vidrio graduada de 1 ml y de 2 ml
Pipeta automática, fija de 50 µl, 1000 µl y de volumen variable
Agua destilada
Práctica
Con las pipetas de vidrio, pipetear los volúmenes indicados depositándolos en un tubo de
ensayo
Calcular y realizar el número de pipeteos con las pipetas automáticas correspondientes
Estimar si en el tubo de ensayo quedan volúmenes residuales y calcularlos.
Nº de pipeteos con
¿Volumen residual?
Volumen a pipetear pipeta automática de
SI/NO VOLUMEN
50 µl
0,2 ml (200
200 /50 = 4 Sí
Pipeta graduada vidrio microlitros)
1 ml 0,4 ml (400
400/50 = 8 No
microlitros )
0,8 ml (800
800/50 = 16 No
microlitros)
1 ml (1000 Sí
microlitros) 1000/50 = 20
Nº de pipeteos con
¿Volumen residual?
Volumen a pipetear pipeta automática de
SI/NO VOLUMEN
1000 µl
1 ml ( 1000
1 Sí
Pipeta graduada vidrio microlitros)
2 ml 3 ml (3000
No
microlitros) 3000/1000 = 3
5 ml ( 5000
5000/1000 = 5 No
microlitros)
10 ml ( 10000
10000/1000 = 10 No
microlitros)
Resultados
