UNIVERSIDAD NACIONAL

“PEDRO RUIZ GALLO”

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

“efecto inhibitorio In Vitro del extracto acuoso de

Allium sativum L. (ajo) Frente a cepas de Candida
albicans resistente a la nistatina obtenidas del
hospital regional docente las mercedes. Lambayeque.
marzo – Setiembre 2017.”

TESIS
PARA OPTAR EL TÍTULO DE
LICENCIADO EN BIOLOGÍA – MICROBIOLOGÍA Y
PARASITOLOGÍA

PRESENTADO POR:

Bach. MESTANZA CARRASCO, KATHERINE ELIZABETH

Bach. VÁSQUEZ PACHAMANGO, ERICKSON JOAU MARCO

PATROCINADOR:

Dra. GIANINA LLONTOP BARANDARIAN

LAMBAYEQUE – PERÚ
2018

1
 UNIVERSIDAD NACIONAL
“PEDRO RUIZ GALLO”

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

“efecto inhibitorio In Vitro del extracto acuoso de Allium

sativum L. (ajo) Frente a cepas de Candida albicans resistente
a la nistatina obtenidas del hospital regional docente las
mercedes. Lambayeque. marzo – Setiembre 2017.”

TESIS
PARA OPTAR EL TÍTULO DE
LICENCIADO EN BIOLOGÍA – MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

APROBADO POR:

Dr. Eduardo Tejada Sánchez _____________________

JURADO, Presidente

Mblga. Teresa Silva García _____________________

JURADO, Secretario

Lic. Julio Cesar Silva Estela _____________________

JURADO, Vocal

Dra. Gianina Llontop Barandarian _____________________

PATROCINADOR
LAMBAYEQUE – PERÚ
2018

2
 DEDICATORIA

A Dios

Por la vida, y los hermosos padres que me

dió, por hacer de la microbiología mi mayor
pasión. Clama a mí y yo te responderé, y te
enseñaré cosas grandes y ocultas que tú
no conoces.

A Mis Padres
Maria y Valoy

Por ser el mejor ejemplo de

entrega y dedicación, porque con
su amor y ternura me encaminan
hacia el éxito y porque día a día
me brindan incondicional apoyo.

A Mis Hermanos Maricielo y Elias

Por ser amigos y compañeros, mi respaldo

en todo momento.

A Mi Abuelita Petronila

Por sus grandes enseñanzas y

consejos, por mostrarme de
manera dulce que se puede llegar
lejos.

Erickson Joau Marco

3
A Dios

Por la vida, y los hermosos padres que me

dió, por hacer de la microbiología mi
mayor pasión. Clama a mí y yo te
responderé, y te enseñaré cosas grandes
y ocultas que tú no conoces.

A Mis Padres
Rosalia y Norvil

Por ser el mejor ejemplo de

entrega y dedicación, porque con
su amor y ternura me encaminan
hacia el éxito y porque día a día
me brindan incondicional apoyo.

A Mi Hermano Leonardo

Por ser amigo y compañero, mi respaldo

en todo momento.

A Billy y Romina

Por ser el motivo de mi

superación día a día.

Katherine Elizabeth

4
 AGRADECIMIENTO

A Dios

Por su infinito amor y bondad, porque

está conmigo en todo momento, y por
permitirme alcanzar mis sueños.

A Mis Padres
Maria y Valoy

Por su amor y lucha constante, por

todas sus enseñanzas y por hacer
de mí una persona de bien.

A Mis Hermanos Maricielo y Elias

Por ser parte de mí día a día, y compartir

conmigo tan buenos momentos.

A Mi Abuelita Petronila

Por su dedicación y entrega, por

compartir conmigo sus enseñanzas,
su humildad y cariño.

Erickson Joau Marco

5
A MI ASESORA
Gianina LLontop Barandarian

Por cada una de sus enseñanzas, por

contribuir de manera fundamental en el
desarrollo del presente trabajo, por ser mi
guía, amiga y maestra.

A Mi Profesor
Manuel Farcio Villareal

Por su amistad y motivación, por el

apoyo en la realización del presente
trabajo y por cada uno de sus
consejos y enseñanzas.

A Mis Profesores
Eduardo, Julio y Teresa

Porque además de ser mis maestros son

mis amigos, por el aporte en el desarrollo
de mi carrera profesional, y por la ayuda
recibida siempre.

Erickson Joau Marco

6
A Dios

Por su infinito amor y bondad, porque

está conmigo en todo momento, y por
permitirme alcanzar mis sueños.

A Mis Padres
Rosalia y Norvil

Por su amor y lucha constante, por

todas sus enseñanzas y por hacer
de mí una persona de bien.

A Mi Hermanos Leonardo

Por ser parte de mí día a día, y compartir

conmigo tan buenos momentos.

A Billy y Romina

Por ser el motivo de mi superación

día a día.

Katherine Elizabeth

7
A MI ASESORA
Gianina LLontop Barandarian

Por cada una de sus enseñanzas,

por contribuir de manera
fundamental en el desarrollo del
presente trabajo, por ser mi guía,
amiga y maestra.

A Mi Profesor
Manuel Farcio
Villareal

Por su amistad y motivación,

por el apoyo en la realización
del presente trabajo y por cada
uno de sus consejos y
enseñanzas.

A Mis Profesores
Eduardo, Julio y Teresa

Porque además de ser mis maestros son

mis amigos, por el aporte en el desarrollo
de mi carrera profesional, y por la ayuda
recibida siempre.

Katherine Elizabeth

8
 RESUMEN

OBJETIVO: Determinar el efecto inhibitorio In Vitro del extracto acuoso Allium

sativum L (Ajo) frente a cepas de Candida albicans resistente a la nistatina
obtenidas del Hospital Regional Docente las Mercedes. Lambayeque. Marzo -
Setiembre 2017. Se analizaron 4 cepas de Candida albicans de muestra vaginal
resistentes a la nistatina, Se realizó 3 repeticiones por cepa para evaluar
resultados confiables y confirmativos. Las cepas de Candida albicans se
identificaron por medio de la prueba del tubo germinativo según lo establecido en
la Norma Técnica Peruana N° 44 del INS/CNSP, formación de clamidosporas,
crecimiento en caldo de Urea Stuart y aislamiento e identificación en
Chromogenic Candida Agar (CCA) y Agar Arroz. La prueba de susceptibilidad de
las cepas de Candida albicans resistente a la nistatina frente al extracto acuoso
de ajo. Se realizó mediante el método de Disco de difusión (INS/CNSP), y para la
evaluación de la CMI se trabajó con el método de macrodilución en tubo según
Norma Técnica Peruana N° 30 del INS. RESULTADOS: Como resultado se
obtuvo que todas las cepas de Candida albicans resistente a la nistatina en
estudio fueron susceptibles al extracto acuoso de Allium sativum L (ajo).
Notándose mayor susceptibilidad de las cepas a medida de que la concentración
del extracto aumentaba. La Concentración Mínima Inhibitoria del extracto acuoso
de ajo sobre cepas de Candida albicans resistente a la nistatina se determinó
utilizando la concentración más baja (25 uL/mL) que causó susceptibilidad de
todas las cepas en estudio.CONCLUSIÓN: Al realizar el estudio sobre el efecto
inhibitorio del extracto acuoso de Allium sativum L. frente a cepas de Candida
albicans resistentes a la nistatina obtenidas del Hospital Regional Docente Las
Mercedes se concluye que, Las cepas en estudio (C1:3729 - C2:3709 - C3:3414 -
C4:3690) son susceptibles al extracto acuoso de Allium sativum L, lo cual fue
evidenciado por la presencia de halos de inhibición y CMI. Lo cual de esta manera
de concluye que los metabolitos del extracto acuoso de ajo tienen un alto
mecanismo de acción antifungico.

Palabras Clave: Efecto inhibitorio, candidosis, resistencia a la nistatina.

9
 ABSTRACT

OBJETIVE: To determine the inhibitory effect In Vitro of the aqueous extract Allium
sativum L (Garlic) against strains of Candida albicans resistant to nystatin obtained
from the Teaching Regional Hospital Mercedes. Lambayeque. March - September
2017. Four strains of Candida albicans of vaginal sample resistant to nystatin were
analyzed. Three replications were performed per strain to evaluate reliable and
confirmatory results. The strains of Candida albicans were identified by means of the
germinative tube test as established in the Peruvian Technical Standard No. 44 of the
INS / CNSP, chlamydospore formation, growth in Urea Stuart broth and isolation and
identification in Chromogenic Candida Agar (CCA) and Rice Agar. The susceptibility
test of the strains of Candida albicans resistant to nystatin against the aqueous extract
of garlic. It was carried out using the diffusion disc method (INS / CNSP), and for the
evaluation of the CMI, the method of macrodilution in tube was carried out according to
Peruvian Technical Standard No. 30 of the INS. RESULTS: As a result it was obtained
that all the strains of Candida albicans resistant to the nystatin in study were
susceptible to the aqueous extract of Allium sativum L (garlic). Noticing greater
susceptibility of the strains as the concentration of the extract increased. The Minimum
Inhibitory Concentration of the aqueous extract of garlic on strains of Candida albicans
resistant to nystatin was determined using the lowest concentration (25 uL / mL) that
caused susceptibility of all the strains under study. CONCLUSION: When conducting
the study on the effect inhibition of the aqueous extract of Allium sativum L. against
strains of Candida albicans resistant to nystatin obtained from the Teaching Regional
Hospital Las Mercedes concludes that, The strains under study (C1: 3729 - C2: 3709 -
C3: 3414 - C4: 3690) are susceptible to the aqueous extract of Allium sativum L, which
was evidenced by the presence of inhibition halos and CMI. Which in this way
concludes that the metabolites of the aqueous extract of garlic have a high mechanism
of antifungal action.
Keywords: Inhibitory effect, candidosis, nystatin resistance

10
 INDICE GENERAL

I. INTRODUCCIÓN….……………………………………………………………....... 1

II. ANTECEDENTES BIBLIOGRÁFICOS…………………………………………… 3

III. MATERIALES Y MÉTODOS…………………..………………………………….. 10

3.1 MATERIALES…………………………………………………………………… 10

3.1.1 Material biológico………………………………………………………… 10

3.2 MÉTODOS Y TÉCNICAS……………………………………………………… 10

3.2.1 Población y muestra en estudio……………………………………….. 10

3.2.2 Obtención del extracto acuoso a partir del bulbo de Allium sativum L.
(AJO) (Cobeñas y Ramos ,1998)....................................................... 11

3.2.3 Concentraciones del extracto acuoso de Allium sativum L (ajo) …… 14

3.2.4 Efecto inhibitorio del extracto acuoso de Allium sativum L (AJO) …. 14

1. Identificación de las cepas de Candida albicans……………………14

2. Preparación y estandarización del inóculo fúngico……..……. ….. 14

3. Evaluación del efecto inhibitorio de Candida albicans resistente a

la nistatina frente al extracto acuoso de Allium sativum L(AJO)… 15

3.2.5 Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CIM) del

extracto acuoso de Allium sativum L. sobre Candida albicans resistente
a la nistatina .Método de macrodilución en tubo según Norma Técnica
Peruana N° 30 del INS…………………………………………………... 17

3.2.6 Diseño de Contrastación…………………………………………………18

3.2.7 Análisis Estadístico De Los Datos………………………………………18

11
IV. RESULTADOS

4.1 Efecto inhibitorio de cepas de Candida albicans resistente a la nistatina a

diferentes concentraciones del extracto acuoso del bulbo de Allium sativum
L .(AJO) ………………………………………..………………………………. 20

4.2 Concentración Mínima Inhibitoria del extracto acuoso del bulbo de Allium
sativum L (AJO) sobre cepas de Candida albicans resistente a la
nistatina………………………………………………………………………….. 35

V. DISCUSIÓN……………………………………………………………………………39

VI. CONCLUSIONES.…………….……………………… ……………………………. 42

VII. RECOMENDACIONES.…………………………………………………………… 43

VIII. RESUMEN.………….…………………………………………….………………… 44

IX. ANEXOS.………………………………………………………….…………………. 46

X. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………………………… 56

12
 INDICE DE TABLAS

Tabla 1. Diferentes concentraciones del extracto acuoso de Allium sativum L

(Ajo)…………………………………………………………………………… 14

Tabla 2. Promedio de los diámetros de los halos de inhibición de Candida

albicans resistente a la nistatina a diferentes concentraciones del
extracto acuoso de Allium sativum L. (Ajo)……………………………….. 21

Tabla 3. Análisis de varianza del efecto inhibitorio de Candida albicans resistente

a la nistatina a las diferentes concentraciones del extracto acuoso de
Allium sativum L. (Ajo)………………………………………………………. 28

Tabla 4. Prueba de significancia de Tukey(0,05) de los promedios de los

diámetros de los halos de inhibición de las cepas de Candida albicans
resistente a la nistatina frente al extracto acuoso de Allium sativum L
(Ajo)…………………………………………………………………………… 29

Tabla 5. Prueba de significancia de Tukey(0,05) de los promedios de los

diámetros de los halos de inhibición de Candida albicans resistente a la
nistatina en función a las diferentes concentraciones del extracto acuoso
de Allium sativum L (Ajo)…………………………………………………… 31

Tabla 6. Prueba de significancia de Tukey (0,05) interacción de las diferentes

concentraciones del extracto acuoso de Allium sativum L. y cepas de
Candida albicans resistente a la nistatina………………………………… 33

Tabla 7. Concentración Mínima Inhibitoria del extracto acuoso del bulbo de Allium
sativum L. sobre cepas de Candida albicans resistente a la
nistatina………………………………………………………………………. 36

13
 INDICE DE FIGURAS

Fig.1 Diagrama de obtención del extracto acuoso de Allium sarivum L (Ajo)……. 12

Fig. 2 Obtención del extracto acuoso de Allium sativum L. (Ajo)…………………... 13

Fig. 3 Preparación y estandarización del inóculo fúngico; Agar Almidón Arroz para
la prueba de clamidosporas…………………………………………………….. 16

Fig.4 Identificación de Candida albicans. A. Observación microscópica del tubo

germinativo de Candida albicans; B. Cepas de Candida albicans en
Chromogenic Candida Agar; C. Cepas de Candida albicans en Agar
Sabouraud Glucosado; D. Cepas de Candida albicans en caldo de Urea de
Stuart. …………………………………………………………………………….. 19

Fig. 5 Cepas de Candida albicans resistentes a la nistatina (C1:3729 – C2:3709 –

C3:3414 – C4:3690) enfrentadas individualmente a las concentraciones Cc
25uL/mL - Cc 50uL/mL - Cc 75uL/mL - Cc 100uL/mL - Cc 150uL/mL del
extracto acuoso de Allium sativum L……………………….………………….. 22

Fig. 6 Efecto inhibitorio de cepas de Candida albicans resistente a la nistatina a

diferentes concentraciones del extracto acuoso del bulbo de Allium sativum L
(Ajo)……………………………………………………………………………….. 26

Fig. 7 Concentración Mínima Inhibitoria del extracto acuoso del bulbo de Allium
sativum L. sobre cepas de Candida albicans resistente a la nistatina
(C1:3729 – C2:3709 – C3:3414 – C4:3690)…………………………………... 38

14
 INDICE DE ANEXOS

Anexo 1. Clasificación Taxonómica de Allium sativum L..………………………….. 46

Anexo 2. Pared celular de Candida albicans.………………………………………… 47

Anexo 3. Clasificación de Alicina, Dialil, Vinilodetiinas.………………………………47

Anexo 4. Formación de clamidosporas de las cepas de Candida albicans.……… 48

Anexo 5. Tabla referencial del procedimiento para realizar la macrodilución en

caldo según Norma Técnica Peruana Nº 44 del INS ….……………….. 49

Anexo 6. Prueba de efecto inhibitorio método de difusión en disco

KIRBY BAUER………………………………………………………………..50

Anexo 7. Gráfico de la prueba de significancia de Tukey (0,05) de los promedios de

los diámetros de los halos de inhibición de las cepas de Candida
albicans resistente a la nistatina frente al extracto acuoso de Allium
sativum L……......................................................................................... 51

Anexo 8. Gráfico de la prueba de significancia de Tukey (0,05) de los promedios de

los diámetros de los halos de inhibición de Candida albicans resistente a
la nistatina en función a las diferentes concentraciones del extracto
acuoso de Allium sativum L………………………………………………... 51

Anexo 9. Comparaciones múltiples en Percentil de Dosis………………………….. 52

15
 I. INTRODUCCIÓN

Anualmente 26 millones de personas padecen infección fúngica y más de 1,6 millones

muere cada año (Global Action Fund for Fungal Infections), dentro de ese contexto se
encuentra la candidosis, una enfermedad causada por especies del género Candida,
siendo la especie más implicada Candida albicans. En dicho proceso el oportunismo de
esta levadura se ve favorecido a su condición de comensal en piel y mucosas y, a
factores predisponentes del individuo por lo que su incidencia ha aumentado provocando
un 25% en micosis superficiales y entre el 75 y 88% en infecciones fúngicas
nosocomiales.

Sin embargo, la vulvovaginitis por C. albicans se encuentran entre las enfermedades que
más afecta a las mujeres y al igual que la candiduria continúan siendo un problema de
salud más común en las infecciones fúngicas sobre todo asociado a factores
iatrogénicos de pacientes con tratamiento prolongado de antibióticos, corticosteroides,
diabéticos y cateterismo. En el tracto urinario se forma microplacas blanquecinas que en
pocas ocasiones, llega a los riñones, produciendo pielonefritis; esta entidad clínica se
observa con más frecuencia en niños recién nacidos.

Pero hoy en día C. albicans está expresando mayor resistencia al tratamiento

demostrando de esta manera mayor patogenicidad ; anteriormente el tratamiento con el
antimicótico nistatina era el más común , pero actualmente debido a su falta de
susceptibilidad y generar resistencia es causa de preocupación y de buscar nuevas
alternativas antifúngicas , esta resistencia puede verse en cepas salvajes de Candida sp
(resistencia primaria) o puede haber sido inducida por tratamientos previos (resistencia
secundaria). En los hospitales de salud pública se administra nistatina a pacientes con
problemas de candidosis vaginal, bucofaríngea y gastrointestinal lo cual no está
demostrando resultados positivos, de esta manera volviéndose las infecciones más
agudas. Los estudios de sensibilidad In Vitro con agentes antifúngicos no se realizan de
forma habitual en los laboratorios clínicos, sin embargo, cada vez resulta más evidente
que es necesario contar con técnicas que permitan orientar el tratamiento adecuado de
las micosis, así se tiene en cuenta la creciente frecuencia de cepas resistentes.

1
En los últimos años el uso de plantas medicinales se está incrementando, alrededor del
mundo. Razón por la cual un 80% de personas que viven en países en vías de desarrollo
emplea exclusivamente plantas medicinales tradicionales para necesidades primarias de
salud (Organización Mundial de la Salud). Dentro de ellas está el ajo (Allium sativum L.),
una planta con múltiples propiedades terapéuticas que es empleada en diferentes países
existiendo en la actualidad gran interés por el estudio de esta especie vegetal. Diversos
extractos a partir de su jugo, semillas y fruto completo han sido empleados del ajo; de
igual manera sus hojas, flores y raíces exhiben propiedades antioxidantes,
antiinflamatorias, anticancerígenas, antihelmínticas, antibacteriales, antitumorales,
antivirales y astringentes. Por tanto, hay necesidad de investigar la susceptibilidad de los
extractos del ajo frente a Candida albicans.

En tal escenario los productos naturales constituyen una alternativa para combatir
diversas enfermedades infecciosas y dado que en nuestro país existe una variedad de
plantas medicinales, fue objetivo de la presente investigación determinar el “Efecto
inhibitorio In Vitro del extracto acuoso de Allium sativum L (ajo) Frente a Cepas de
Candida albicans resistente a la nistatina”

2
 II. ANTECEDENTES BIBLIOGRÁFICOS

FERNANDEZ Y ECHEMENDIA (2001) Determinaron en cuba la concentración mínima

inhibitoria (CMI) de nistatina, uno de los antifúngicos más empleados en esta micosis,
frente a 68 cepas de Candida sp aisladas de exudados vaginales. Candida albicans
representó 75 % del total de cepas, mientras que C. parapsilosis, C. krusei y C. glabrata
se encontraron con mucha menor frecuencia. Los factores predisponentes que más se
presentaron fueron el embarazo y el tratamiento con antibacterianos, mientras que la
leucorrea y el prurito caracterizaron los síntomas en la mayoría de los casos. Generando
resistencia. Entre las micosis, probablemente la candidosis sea la de más amplia
distribución y es considerada también la principal micosis oportunista. Una de sus
formas clínicas más comunes es la vaginitis por Candida albicans o candidosis vaginal,
que constituye una causa común de morbilidad en las mujeres.

La nistatina es uno de los principales agentes antifúngicos utilizados en el tratamiento

tópico de la candidiasis vaginal y es quizás, el más utilizado en Cuba; sin embargo, con
frecuencia se presentan casos de mujeres que padecen vaginitis crónica por Candida,
las cuales responden solo parcialmente al tratamiento antifúngico tópico y pueden tener
ataques recurrentes severos. Muchas veces las razones de esta recurrencia no llegan a
precisarse, lo que hace sugerir un fallo terapéutico no inherente al hongo o la aparición
de cepas con sensibilidades disminuidas o resistentes a la droga.

CÓRDOVA Y GARCÍA (2002) evaluaron el efecto inhibitorio in – vitro de una solución

hidroalcoholica de Allium sativum “Ajo” sobre cepas de Candida albicans. Realizaron el
experimento con seis cepas de Candida albicans sujetas a la presencia del extracto de
Allium sativum “ajo” en Solución Hidroalcoholica a concentraciones de 30 mg/ml, 60
mg/ml y 90 mg/ml., con cinco repeticiones por cepa, obteniéndose 90 evaluaciones.
Emplearon técnicas de obtención del extracto de ajo y ensayos microbiológicos,
realizando modificaciones para este estudio.
Como resultado señalaron que la solución Hidroalcoholica de Allium sativum “Ajo” ejerce
acción inhibitoria sobre cepas de Candida albicans, además la Concentración Mínima
Inhibitoria de la solución hidroalcoholica de Allium sativum fue de 5.50 mg/ml.

CUBAS Y MEJÍA (2004) determinaron el efecto inhibitorio in vitro del extracto alcohólico
de propóleo sobre el crecimiento de Candida albicans. Trabajaron con 5 cepas
3
diferentes de Candida albicans (C-1, C-2, C-3, C-4, C5) aisladas de secreciones
vaginales en el área de Programa de Control de Enfermedades de transmisión sexual y
SIDA (PROCETSS) del Hospital Regional Docente “Las Mercedes” – Chiclayo;
enfrentadas a concentraciones de 24, 28, 32 y 36 mg/ml del extracto alcohólico de
propóleo y sometidas a tiempos de exposición de 30, 60, 120 minutos; considerando 3
repeticiones por cepa, obteniendo un total de 180 evaluaciones.

El efecto inhibitorio y la Concentración Mínima Inhibitoria se determinaron según el

método de diluciones en agar modificado, obteniendo como resultado que el extracto
alcohólico de propóleo a concentraciones de 24, 28 ,32 y 36 mg/ml expuestos por 30,
60, 120 minutos tiene efecto inhibitorio in vitro sobre Candida albicans, dicho efecto es
directamente proporcional a la concentración del producto y al tiempo de exposición. La
CMI de dicho extracto a los 120 minutos fue de 36 mg/ml para las cepas C-2, C-4 y C-5.
Para las cepas C-1 y C-3 la CMI resulto ser 40 mg/ml.

ESPINOZA Y VIDAURRE (2004) Realizaron un estudio en el que determinaron la

prevalencia de Trichomonas vaginalis, Candida albicans, Gardenerela vaginalis en
gestantes de los centros de Salud Paul Harris, Atusparias, Tupac Amaru y Cerropon
Chiclayo 2004. En el centro de salud de Atusparias se encontró una prevalencia de
87.5%, en el centro de Salud Tupac Amaru 81.9%, en el centro de Salud de Paul Harris
80.6% y en el centro de Salud Cerropon 72.2%. El tipo de infecciones única obtuvo un
mayor procentaje con 77.6% predominando Gardenerella vaginalis con 46.6 seguido de
Candida albicans con 28.4% y Trichomonas vaginalis con 19.8%, la infección causada
por la asociación de los tres microorganismos alcanzo una prevalencia de 0.4%.
Además se encontró mayor prevalencia de infección en el grupo de 25-30años con
89.1%; asi como en las gestantes que se encontraron cursando las 28-4 semanas de
gestación con 84.6%, número de partos 0-1 con 81.6%
SABARBURU (2004) en su trabajo “Microbiología de las investigaciones vaginales en
mujeres de edad fértil, prevalencia y aspectos epidemiológicos en el programa de control
de ETS y SIDA (PROCETSS) Centro de Salud José Olaya. Chiclayo. Diciembre 2002 –
junio 2003”, evaluó 105 pacientes que presentaron flujo vaginal y/o síntomas. Encontró
una prevalencia de 87,62% siendo Candida albicans el agente etiológico con mayor
frecuencia (43,48 %), seguido por Gardnerella vaginalis (28,26 %); Trichomonas

4
vaginalis (5,43%); Enterobacterias (7,61) e infecciones mixtas (10,87 %). Evaluó 11
mujeres embarazadas y encontró a todas positivas a la infección vulvovaginal (10,48%).

HUAMANI Y RUIZ (2005) Investigaron la actividad antifúngica In Vitro de doce extractos

etanolicos correspondientes a diez plantas medicinales peruanas; Annona cherimolia
mill. (hojas) , Annona muricata L. (corteza y hojas) , Bidens pilosa L. (partes aéreas) ,
Hypericum laricifolium L. (partes aéreas), Juglans neotropica Diels (corteza) , Piper
spp.(hojas) , Plantago major L.(hojas) ,Psidium guajava L.(hojas) , Schimus molle
L.(corteza y hojas) y Spartium junceum L. (planta entera). Recolectaron a las especies
en el departamento de Amazonas, excepto Schinus molle L. (Apurimac) y Annona
muricata L. (Lima). Evaluaron la actividad antifúngica mediante los métodos de difusión
en agar y dilución en agar para la determinación de la concentración mínima inhibitoria
(CMI).

Utilizaron las levaduras Candida Albicans ATCC 10231 y Candida albicans cepa clínica,
así como, el hongo filamentoso Aspegillus niger ATCC1 16404, como microorganismos
de prueba; se investigaron 12 extractos, de ellos seis presentaron actividad antifúngica
consistente con un diámetro de halos de inhibición #18mm (prueba de difusión en agar)
frente a Candida albicans ATCC 10231. Ningún extracto mostro actividad consistente
frente a la cepa clínica de Candida albicans y Aspergillus niger ATCC 16404. La CMI de
los extractos que presentaron actividad consistente frente a Candida albicans ATCC
10231, fue de 250 ug/ml para Hypericum laricifolium L, Juglans neotropica Diels,
Psidium guajava L. y Schinus molle L. (un exracto de corteza y una de hojas) y de 500
ug/ml para Piper spp. No se determinó la CMI de los extractos (Juglans neotropica Diels
y Psidium guajava L.) que presentaron halos frente al Aspergillus niger ATCC 16404 por
considerarlos sin actividad significante (<18mm), los antifungicos Nistatina y Fluconazol
fueron incluidos en el estudio como controles positivos.

BUSTAMANTE (2006) Evaluaron el efecto inhibitorio de los extractos etanolicos de

Piper aduncum (matico) y Alloysia triphylla (cedron) frente a Candida albicans , utilizo 5
cepas de Candida albicans ( c-1UNPRG , c-2 UNPRG , c-3 UNPRG ,c-4 INS , C-5 INS) ,
a una concentración de 3x106 UFC/ ml y 4 concentraciones del extracto etanolico (0,05 ;
0,07 ; 0,09 ; 0,10 MG/ml). El efecto inhibitorio y la concentración Mínima Inhibitoria se
determinaron según el método del Cilindro placa y cálculo de la CMI.

5
Como resultado obtuvo que el efecto inhibitorio del extracto etanolico de Piper aduncum
y Aloysa triphylla frente a Cándida albicans fue directamente proporcional a las
concentraciones. La concentración Mínima Inhibitoria del extracto etanolico de Piper
aduncum, según la prueba estadística de correlación y regresión es de 0.0464 mg/ml y
para Aloysa triphylla es de 0,0585 mg/ml.

GARCIA Y HERRERA (2007) Realizaron un trabajo donde evaluaron el efecto inhibitorio

In Vitro Allium sativum, Aliium fistulosum y Allium cepa sobre cinco cepas bacterianas
patógenas: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, -bacillus
cerus y Salmonella spp. El extracto de Allium cepa mostro mayor poder inhibitorio sobre
E.coli, Salmonela spp. Y Bacillus cereus; Allium Fistulosun mostro un bajo efecto
antibacterinao excepto cuando se enfrentó a Staphylococcus aureus y Pseudomona
aeruginosa con los cuales mostro el mayor efecto inhibitorio. Los extractos de Allium
cepa y Allium fistulosun mostraron un mayor poder antimicrobiano con respecto a Allium
sativum.

MAMANI Y MERCADO (2009) Realizaron un trabajo de investigación del efecto In Vitro

de Allium sativum liofilizado sobre Candida albicans; se utilizaron 15 muestras aislados
de pacientes del hospital “Carlos Monge Medrano”Juliaca; se utilizó ajo liofilizado (alicina
9 mg) ; posteriormente se realizaron diluciones para encontrar la concentración mínima
inhibitoria (CMI) y la concentración mínima Letal (CML ,por medio de la escala de Mc
Farland)

Se encontró que la CMI produjo un halo de inhibición promedio de 7.3mm siendo la

concentración del ajo 25mg/ml; CML produjo un halo de inhibición promedio de 11.6mm
y una concentración de 50mg/ml de solución de ajo, además se demostró la
concentración óptima (CO) 200mg/ml y un halo promedio de 31.3mm. Concluyendo así
que el ajo liofilizado posee una actividad anti fúngica In Vitro frente a Cándida albicans.

LORA et al., (2010) Realizaron un trabajo orientado al efecto antimicótico In Vitro de

Allium sativum sobre dermatofitos y Candida albicans. Para ello se utilizaron treinta
cultivos puros de los cuales correspondieron: 7 a Trichophyton mentagrophytes, 4 a
Trichophyton rubrum, 4 a Microsporum canis y 15 a Candida albicans; se utilizaron 100g
de Allium sativum.

6
Las pruebas de sensibilidad se realizaron usando el método de difusión en agar (MDA) y
el método de dilución en agar. Para el caso de los dermatofitos por el MDA se logró una
inhibición de 300-400 ug/ml de ajo liofilizado; una concentración mínima inhibitoria (CMI)
de 500 ug/ml y un efecto fungicida de 1000 ug/ml. N el caso de Candida albicans, por el
MDA se obtuvo mayor diámetro de inhibición entre 4000 y 5000 ug/ml una CMI de 250
ug/ml y un efecto fungicida de 5000 ug/ml. Con estos resultados se corrobora las
propiedades medicinales que se le atribuyen al ajo y se podrían utilizar en estudios In
Vivo.

DIAZ et al., (2011) Realizaron que el tratamiento sindrómico de la candidosis vulvo

vaginal aumenta la posibilidad de crear resistencia en las agentes causales; en sus
resultados se reportó resistencia a nistatina y fluconazol por especie Candida krusei,
Candida albicans; pero en las demás cepas fueron sensibles a los tratamientos incluso a
fluconazol.

Tomaron 15 cepas de C.albicans de las cuales 5 generaron resistencia a nistatina 7mm

y fluconazol con halos de 10 mm y el resto de cepas mostraron susceptibilidad ambos
antimicoticos, sin embargo de las 10 cepas de C.krusei 6 mostraron resistencia al
nistatina el resto de cepas fueron sensibles al fluconazol dicho antimicótico terapéutico.

GULL et al., (2012) Realizaron un estudio sobre el efecto inhibidor de Allium sativum y
Zingiber offcinale contra bacterias patógenas resistentes a drogas clínicamente
importantes. Utilizaron tres tipos de extractos de ajo y jengibre incluyendo; extracto
acuoso, metanol extracto y etanol extracto, contra Pseudomona aeruginosa, S.aureus,
B,subtilis, K.pneumoniae, Salmonella sonnei, Staphylococcus epidermidis ,E.coli y
Salmonella thypi. La actividad bacteriana se determinó por método de difusión en disco,
obteniendo como resultado en todas las cepas bacterianas probadas susceptibilidad del
extracto acuoso del ajo y pobre susceptibilidad al extracto acuoso de jengibre. La CMI
de las diferentes especies bacterianas vario de 0.005 mg/ml a 1.0 mg/ml. Concluyeron
que el estudio fomenta el uso de especies, como medicina alternativa o complementaria
para producir la carga de alto costo, efectos secundarios y aumento progresivo de la
resistencia a fármacos de los agentes patógenos.

SARAVIA Y GUILLINTIA (2012) determinaron la actividad antifúngica del extracto de

etanol Schinus molle y Fluconazol sobre Candida albicans, se utilizó las hojas de la
planta para preparar el extracto etanólico. Se experimentó con 30 muestras de extracto
7
etanolico de Schinus molle y 30 muestras de Fluconazol, se aplicó en el disco el extracto
etanolico de Schinus molle y otro disco se utilizó para el Fluconazol y se colocaron en el
agar dextrosa sabouraud.

El extracto de Schinus molle mostró actividad antifúngica con 25μg/ml, con un halo de
inhibición ≥20mm, y el Fluconazol con 25 μg/ml con un halo de inhibición de ≥31mm.
(p=0.0001) mostrando así actividad antifúngica frente a cepas clínicas de Candida
albicans ATCC 10231. (Kiru 2012, 9(1): 39-41).

MUNAYAKO Y MURAMI (2013) Realizaron un estudio para determinar el efecto

antimicrobiano y antifúngico del extracto de Allium sativum L a diversas concentraciones
frente a cepas estándares de la cavidad bucal: Streptococcus mutans, Capnocytophaga
sputigena, Lactobacillus casei y Candida albicans. El extracto se obtuvo por el proceso
de maceración y para la experimental se usó el método de difusión mediante discos:
Ciprofloxacino y Fluconazol como control positivo de las bacterias y hongos
respectivamente y el alcohol 70º como control negativo.
La concentraciones antimicrobiana frente a Capnocytophaga sputigena, Streptococcus
mutans y Candida albicans fue de 120 mg/ml, teniendo como referencia estándar al
ciprofloxacino a una concentración de 4 mg/ml y al fluconazol a una concentración de
2mg/ml. Concluyendo que el extracto hidroalcoholico de Allium sativum presento efecto
antimicrobiano frente a las cepas estándares de la cavidad bucal con excepción de
Lactobacillus casei que presento resistencia.
NUÑEZ Y WILMA (2014) Determinaron la resistencia al fluconazol y nistatina mediante
el fungigrama en vaginosis crónica causada por Candida albicans en mujeres de 18-35
años que acuden a CEMOPLAF (Centro medico de orientación y planificación familiar)
Latacunga, que tuvieron por 2 veces o más infecciones vaginales por Cándida Albicans
en 6 meses anteriores y acuden a consulta con los mismos síntomas.
Determinaron en esta investigación la resistencia de Candida albicans al fluconazol y
nistatina en porcentaje, contaron con la colaboración voluntaria de 108 pacientes con
candidosis vaginal crónica que acuden a CEMOPLAF Latacunga. De los cuales 78
pacientes se obtuvo resistencia ala nistatina con un porcentaje de 72% y con el
fluconazol 60 pacientes mostraron resistencia con un porcentaje de 55%.

8
SUAREZ et al., (2015) En Nicaragua realizaron el Perfil de resistencia micótica de
Candida sp. Al clotrimazol, fluconazol y nistatina en mujeres durante la segunda mitad
del embarazo con candidosis vulvo-vaginal atendidas en el hospital L. F. M. La
Candidosis Vulvo-vaginal es una de las enfermedades más comunes en mujeres
embarazadas con una incidencia de un 35% se asocia a parto pre término y sepsis
neonatal; representa un problema de índole mundial por cambio epidemiológico en los
agentes etiológicos y modificaciones en sus perfiles de resistencia. En Nicaragua no se
realizan pruebas de sensibilidad micótica por lo cual es un reto cumplir con el objetivo
del mileneo enfocado a la reducción de la morbi mortalidad materna. Por esta razón se
plantea establecer el perfil de resistencia micótica de Candida sp. Con los resultados se
espera mejorar la calidad de atención de la mujer embarazada con diagnóstico de
candidosis vaginal.

9
 III. MATERIALES Y MÉTODOS

El presente trabajo de investigación se realizó en los laboratorios de Microbiología y

Parasitología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional “Pedro
Ruíz Gallo” (Lambayeque).

3.1. MATERIALES

3.1.1. Material biológico

Se utilizó como materia prima, el bulbo de Allium sativum L “AJO”, el fruto de ajo
fue obtenido en el Mercado Modelo de la ciudad de Chiclayo en el departamento
de Lambayeque, durante los meses de Marzo 2017 – Setiembre de 2017.
Se trabajó con cultivos puros de Candida albicans resistentes a la nistatina
obtenidos a partir de secreciones vaginales, aislados e identificados en el
Laboratorio de Microbiología del Hospital Regional Docente las Mercedes
Chiclayo -Lambayeque.

3.2. MÉTODOS Y TÉCNICAS

3.2.1. Población y muestra en estudio

La población son las cepas de Candida albicans resistentes a la nistatina
aisladas de pacientes con diferentes tipos de candidosis atendidos en el Hospital
Regional Docente las Mercedes. La muestras estará constituidas por 4 cepas de
Candida albicans resistentes a la nistatina aisladas de muestras de secreción
vaginal,
Las cuáles serán enfrentadas a concentraciones de 25uL/mL, 50uL/mL,
75uL/mL, 100uL/mL y 150uL/mL, del extracto acuoso de Allium sativum L (ajo)
realizando tres repeticiones por cepa, obteniendo 60 evaluaciones.
Se utilizó como control positivo disco antimicótico de fluconazol de 25 uL/mL y
como control negativo se utilizó disco embebido en agua destilada estéril.

10
3.2.2 Obtención del extracto acuoso a partir del bulbo de Allium sativum L.
(AJO) (Cobeñas y Ramos 1998).

Se Obtendrá extracto acuoso de Allium sativum L. “ajo”

La experimentación se realizó en el laboratorio de Microbiología y Parasitología, de
las instalaciones de la Universidad Nacional “Pedro Ruiz Gallo” Lambayeque.
Los bulbos de ajo fresco se pelaron usando guantes, morteros esterilizados.
De los bulbos descascarados se pesó 100g. En una balanza analítica.
Después de ser pesados se procedió a la desinfección para ello se utiliza
hipoclorito de sodio al 1% en la cual fueron lavados, luego se procede a la
eliminación del exceso de desinfectante, lavando los bulbos con abundante agua
destilada estéril, posteriormente fueron escurridos y secados en un recipiente
estéril.
Los ajos desinfectados son llevados a un extractor aséptico haciendo uso de
guantes estériles durante su manipulación y proporcionando un ambiente
adecuado de esterilidad.
El extracto obtenido se coloca en un frasco esterilizado para su uso inmediato.

11
 Obtención
del extracto
acuoso.

Recojo de Muestras

Limpieza y Selección

100g.
Pesado

Con hipoclorito
de sodio 1% Desinfección

En extractor
Extracción aséptico

Extracto
Fig. 1 Diagrama de obtención del extracto acuoso de Allium sativum L (Ajo).
12
 A. Fruto de Allium sativum L (Ajo). B. Se pelo , peso el bulbo de Allium sativum L

C. Desinfección con hipoclorito de sodio al 1% y lavado para la eliminación del exceso

del desinfectante del bulbo Allium sativum L

D. Extracción en extractor aséptico.

E. Obtención del extracto acuoso.

Figura. 2 Obtención del extracto acuoso de Allium sativum L (Ajo).

13
3.2.3. Concentraciones del extracto acuoso de Allium sativum L (Ajo).
La concentración se obtendrá midiendo la densidad del extracto de ajo en
uL/mL. A partir de 100 gr de Allium sativum L (ajo) se obtendrá 5 ml de
concentración. A partir de la solución madre se procederá a realizar diluciones
para obtener concentraciones de 25uL/mL, 50uL/mL, 75uL/mL, 100uL/mL,
150uL/mL. Tomando un volumen de solución stock y completando con agua
destilada estéril. En relación de 1 en 4.

Tabla 01. Diferentes concentraciones del extracto acuoso de Allium sativum L

(Ajo).

Extracto acuoso (mg) Agua (mL) Concentración (mg/mL)

1 uL 6.7 mL 150 uL/mL

0.5 uL 5 mL 100 uL/mL

0.5 uL 6.7 mL 75 uL/mL

0.5 uL 10 mL 50 uL/mL

0.1 uL 4 mL 25 uL/mL

3.2.4 Efecto inhibitorio del extracto acuoso del bulbo de Allium sativum L.

1. Identificación de las cepas de Candida albicans.

- La caracterización macroscópica y microscópica de Candida albicans, se
realizó en Agar Sabouraud, identificándose colonias con aspecto
característico (Colonias pequeñas 2,00 mm – 3,00 mm de diámetro y
completamente blancas).
- El procedimiento e identificación de la prueba del tubo germinativo se
realizó según lo establecido en la Norma Técnica Peruana N° 44 del INS.
- Otros estudios complementarios fueron, la observación de
Clamidosporas, identificación en Chromogenic Candida Agar (CCA) así
como también la prueba de Urea de Stuart.

14
2. Preparación y estandarización del inóculo fúngico
- Las cepas de Cándida albicans se sembrarán en 4 tubos con caldo
Sabauroud glucosado y se incubaron por 24 horas, se procederá a
preparar una suspensión en solución salina.
- La suspensión se ajustará a la escala del nefelómetro de Mc Farland
(tubo N° 0,5), cuya densidad poblacional es de 1,5 x 108 UFC/ml.

3. Evaluación del efecto inhibitorio de Candida albicans resistente a la

nistatina frente al extracto acuoso de Allium sativum L, según el
método de difusión de disco (INS/CNSP, Laboratorio de referencia
Nacional de Micología, Tercera edición 2016).
- Se empleó papel filtro Watman N° 01 para obtener los discos de 5 mm de
diámetro posteriormente con la ayuda de una pinza esterilizada, los discos
se embebieron con de las diferentes concentraciones de extracto acuoso
de Allium sativum L “Ajo” (25 uL/mL, 50 uL/mL, 75 uL/mL, 100 uL/mL, 150
uL/mL).
Se utilizó como control positivo discos de fluconazol y como control
negativo se utilizó discos embebidos en agua destilada estéril.
- Del inoculó estandarizado y con ayuda de un hisopo previamente
embebido se retiró presionando ligeramente sobre la pared del tubo; luego
fue sembrado en agar de Müller Hinton II modificado (MHm) en tres
direcciones a fin de asegurar la distribución uniforme del inóculo y se dejó
durante 15 minutos temperatura ambiente para que el exceso de humedad
sea absorbido.
- Transcurrido el tiempo y con la ayuda de una pinza estéril se colocaron los
discos suavemente sobre la superficie del agar, en el centro de la placa
individual por cada concentración.
- Concluida este proceso las placas fueron incubadas en posición invertida a
37°C por 24 horas.
- Después del periodo de incubación se procedió a la evaluación midiéndose
los diámetros de las zonas de inhibición completa, con una regla
milimetrada.

15
C1: 3729, C2: 3709, C3:3414, C4: 3690 de Candida albicans
en Agar Sabouraud glucosado.

Cultivo en tubos de Candida

albicans en Caldo Sabouraud

Estandarización del inóculo fúngico al tubo 0.5 de la escala de Mc. Farland. Equivalente
a 1.5 x 108 UFC / mL.

Agar Almidón Arroz para la realización de la prueba de clamidosporas.

Figura. 3 Preparación y estandarización del inóculo fúngico; Agar Almidón Arroz

para la prueba de clamidosporas.
16
3.2.5 Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CIM) del
extracto acuoso de Allium sativum L sobre Candida albicans
resistente a la nistatina. Método de macro dilución en tubo según
Norma Técnica Peruana N° 30 del INS.
- La Concentración Mínima Inhibitoria para las cepas de Candida
albicans resistente a la nistatina se realizó siguiendo las
recomendaciones del método de macrodilución en tubo según Norma
Técnica Peruana N° 30 del INS.
- Las cepas se sembraron en Agar Müller Hinton Modificado y se
incubaron a temperatura de 37 °C durante un tiempo de 24 horas,
transcurrido ese tiempo se procede a la cosecha, se compara con el
tubo número 0.5 del nefelómetro de Mc Farland que indica una
densidad poblacional de 1.5 x108 UFC/ml. Una vez ajustado el inóculo
y dentro de los quince minutos de preparada la misma, diluir en caldo
para lograr una dilución 1/100 (inóculo de trabajo = 1 x 106 UFC/ml).

Procedimiento
Se colocó 0,5 mL de Caldo Sabouraud desde el tubo N° 2 al N° 12. Se
colocó 0,5 mL de solución del extracto acuoso de Allium sativum L en el
tubo N°1 y N°2.
Luego se transfirió 0,5 mL del tubo N°2 al tubo N°3 y así sucesivamente
hasta el tubo N°10.
De la última dilución correspondiente al tubo N°10, se descartó 0,5 mL.
El tubo N°11 fue el control del inóculo y el N°12 el control de esterilidad.
Se incubó a 35°C, en un tiempo de 16 – 24 horas.
El punto final se definió a simple vista, por la falta de turbidez del caldo,
para ello se comparó cada tubo con el tubo de control de crecimiento.

17
3.2.6 Diseño de Contrastación:
- El Diseño de Investigación utilizado fue el de estímulo creciente,
descrito por ALVITRES (1997). Siendo los grupos experimentales las
cepas de Candida albicans resistente a la nistatina, al cual se le aplicó
el estímulo creciente que consistió en las diferentes concentraciones
crecientes del extracto acuoso de Allium sativum L. (Ajo).
- Según este diseño la variable independiente estuvo constituida por las
concentraciones del extracto acuoso (25 uL/mL, 50 uL/mL, 75 uL/mL,
100uL/mL, 150 uL/mL) y la variable dependiente, por el diámetro de
los halos de inhibición, en milímetros, de las cepas del
microorganismo (Candida albicans).

3.2.7 Análisis estadístico de los datos

- El análisis estadístico de los datos, obtenidos en la experimentación
correspondiente, se realizó por medio de Análisis de Varianza
(ANAVA), con arreglo factorial (5x4x3); donde cinco es el número de
concentraciones del extracto acuoso de Allium sativum L. (25uL/mL,
50uL/mL, 75uL/mL, 100uL/mL, 150uL/mL), cuatro es el número de
cepas de cultivo puro de Candida albicans y tres es el número de
repeticiones; lo que nos da un total de 60 unidades experimentales;
en donde se observó el grado de susceptibilidad de Candida albicans
cuando fue expuesta a las diferentes concentraciones del extracto
acuoso de Allium sativum L, este análisis se complementó con la
Prueba discriminatoria de Tukey a 0,05 nivel de significación (STELL
y TORRIE, 1983) con la finalidad de determinar las diferencias entre
cada uno de los factores.
- El procesamiento estadístico se realizó con ayuda del software
estadístico: SPSS Statistics v19 y Excel 2013.

18
A B

C D

C1 C4 C2 C3

Figura. 4 Identificación de Candida albicans. A. Observación microscópica del tubo

germinativo de Candida albicans; B. Cepas de Candida albicans en Chromogenic
Candida Agar; C. Cepas de Candida albicans en Agar Sabouraud Glucosado; D.
Cepas de Candida albicans en caldo de Urea de Stuart.

19
 IV. RESULTADOS

El objetivo del presente trabajo de investigación fue determinar el efecto inhibitorio In

Vitro del extracto acuoso de Allium sativum L. (ajo) Frente a cepas de Candida
albicans resistente a la nistatina, lo cual se evidenció por la presencia de halos de
inhibición medidos en milímetros, los resultados se muestran a continuación en
tablas y gráficos con su interpretación correspondiente.

4.1 Efecto inhibitorio de cepas de Candida albicans resistente a la nistatina a

diferentes concentraciones del extracto acuoso del bulbo de Allium
sativum L.
Los valores obtenidos demostraron que todas cepas de Candida albicans resistente
a la nistatina en estudio fueron susceptibles al extracto acuoso de Allium sativum L,
encontrándose algunas diferencias en el comportamiento de las cepas, debido a que
fueron enfrentadas a diferentes concentraciones del extracto.
Se obtuvieron los promedios del diámetro en mm. De los halos de inhibición para
todas las cepas de Candida albicans, de tal manera que para:

La C1 (3729) de Candida albicans, se observó que la menor concentración

(25uL/mL) alcanzó un promedio de 22 mm de inhibición y la concentración mayor
(150uL/mL) alcanzó un promedio de 31,6 mm de inhibición.

La C2 (3709) de Candida albicans, la menor concentración (25uL/mL) obtuvo

promedio de inhibición de 22,1 mm y la concentración mayor (150uL/mL) obtuvo
promedio de inhibición de 37.3 mm.

La C3 (3414) de Candida albicans, la menor concentración (25uL/mL) obtuvo

promedio de inhibición de 24,2 mm., y la concentración mayor (150uL/mL) obtuvo
promedio de inhibición de 44,6 mm.

La C4 (3690) de Candida albicans, la menor concentración (25uL/mL) obtuvo

promedio de inhibición de 23,5 mm., y la concentración mayor (150uL/mL) un
promedio de inhibición de 41.6 mm.

20
 19
Tabla 02. Promedio de los diámetros de los halos de inhibición de Candida
albicans resistente a la nistatina a diferentes concentraciones del extracto acuoso
de Allium sativum L. (Ajo).

Cepas (C) Concentración (k) Media Total

k-25 22,0000
k-50 22,3333
C-1 (3729) k-75 25,0000 27,6666
k-100 32,3333
k-150 31,6666
f-25 33.3333
k-25 22.1666
k-50 25,3333
C-2 (3709) k-75 26,3333 30,6666
k-100 35,0000
k-150 37,3333
f-25 37,8333
k-25 24,2000
k-50 25,6666
C-3 (3414) k-75 35,0000 32,4222
k-100 31,6666
k-150 44,6666
f-25 33,3333
k-25 24,8333
k-50 31,0000
C-4 (3690) k-75 31,0000 33,1666
k-100 35,3333
k-150 41,6666
f-25 35,1666

21
C1: 3729

C2: 3709

C3: 3414

C4: 3690

Figura. 5 Cepas de Candida albicans resistente a la nistatina (C1:3729 - C2:3709 - C3:3414 -

C4:3690) enfrentadas individualmente a las concentraciones Cc. 25ul/mL – Cc. 50ul/Ml Cc.75 ul/mL
– Cc.100 ul/mL – Cc .150 ul/mL del extracto acuoso de Allium sativum L.
22
C1: 3729

cc 25uL/mL cc 50uL/mL

cc 75uL/mL cc 100uL/mL

cc 150uL/mL

23
C2: 3709

cc 25uL/mL cc 50uL/mL

cc 75uL/mL cc 100uL/mL

cc 150uL/mL
24
C3: 3414

cc 25uL/mL cc 50uL/mL

cc 75uL/mL cc 100uL/mL

cc 150uL/mL
25
C4: 3690

cc 25uL/mL cc 50uL/mL

cc 75uL/mL cc 100uL/mL

cc 150uL/mL

Figura. 6 Efecto inhibitorio de cepas de Candida albicans resistente a la

nistatina a diferentes concentraciones del extracto acuoso del bulbo de Allium
sativum L(Ajo), individual por cada concentración.
26
Al realizar el Análisis de varianza del efecto inhibitorio de Candida
albicans resistente a la nistatina a diferentes concentraciones del
extracto acuoso de Allium sativum L. se concluye que las variables
concentración y cepa, así como la interacción concentración – cepa,
presentan diferencias estadísticas significativas (Tabla 3).

De tal manera que los resultados permiten observar que las variables
cepa y concentración, influyeron significativamente en la efectividad del
extracto acuoso de del bulbo de Allium sativum L sobre la susceptibilidad
Candida albicans.

HIPÓTESIS

Cepas:

H0 = Cepa1: 3729 = Cepa2: 3709 = Cepa3: 3414 = Cepa4: 3690

Concentración:

H0 = K 25 = K 50 = K 75 = K 100 = K 150

Interacciones:

H0 = No existen efecto de interacciones entre las cepas de Candida

albicans y las diferentes concentraciones del extracto acuoso
de Allium sativum L.

27
 Tabla 03. Análisis de varianza del efecto inhibitorio de Candida albicans
resistente a la nistatina a las diferentes concentraciones del extracto acuoso de
Allium sativum L. (Ajo).

Origen SC GL CM F Sig. Decisión

Cepa (C) 321.023 3 107.0078 11.12 0.0000116686485500672 Rechazar H0

Concentración (K) 1,996.567 5 399.3133 41.50 0.00000000000000022204 Rechazar H0

Interaction 387.550 15 25.8367 2.69 0.00484064446397114 Rechazar H0

Error 461.840 48 9.6217

Total 3,166.980 71

a. R cuadrado = 0.898 (R cuadrado corregida = 0.884)

S.C = Suma de Cuadrados G.L = Grados de libertad

C.M = Cuadrado Medio

Al realizar la prueba de significancia de Tukey (0,05) a los promedios de

los diámetros de los halos de inhibición de las cepas de Candida albicans
frente al extracto acuoso de Allium sativum L., para el factor cepas
(C1:3729, C2:3709, C3:3414, C4:3690) se demostró estadísticamente que
la cepa C1:3729, la cepa C2:3709 y la cepa C3:3414 presentaron
comportamiento similar; sin embargo se evidenció que existe diferencia de
la cepa C4:3690 ante las ya mencionadas.

Se determinó el grado de susceptibilidad de cada cepa de Candida

albicans, frente al extracto acuoso de Allium sativum L.

28
 Tabla 04.Prueba de significancia de Tukey (0,05) de los promedios de los
diámetros de los halos de inhibición de Candida albicans resistente a la
nistatina frente a las diferentes concentraciones del extracto acuoso de
Allium sativum L (Ajo).

Cepa Promedio Significancia

C1:3729 27.66667 a

C2:3709 30.66667 b

C3:3414 32.42222 b

C4:3690 33.16667 b

 Letras diferentes = Diferencia significativa

 Letras iguales = No existe diferencia significativa
.

29
Por medio de la prueba de Tukey (0,05) se demostró estadísticamente la
susceptibilidad de Candida albicans al ser expuesta a las diferentes
concentraciones (Cc. 25 uL/mL, Cc. 50 uL/mL, Cc. 75 uL/mL, Cc. 100 uL/mL,
Cc. 150 uL/mL) del extracto acuoso de Allium sativum L. Se determinó que
existen diferencias significativas entre las diferentes concentraciones (Tabla
Nº6).

De esta manera se pudo afirmar que a medida que aumenta la

concentración del extracto acuoso, existe también mayor susceptibilidad
de las cepas de Candida albicans.

30
 Tabla 05. Prueba de significancia de Tukey (0,05) de los promedios de los
diámetros de los halos de inhibición de Candida albicans resistente a la
nistatina en función a las diferentes concentraciones del extracto acuoso del
bulbo de Allium sativum L.

Cc Promedio Significancia

25 23.30000 a

50 26.08333 a b

75 29.33333 b

100 33.58333 c

fluconazol 34.83333 c

150 38.66667 d

 Letras diferentes = Diferencia significativa

 Letras iguales = No existe diferencia significativa

31
Por medio de la prueba de Tukey (0,05) para el factor Interacción Cepas -
Concentración, se demostró estadísticamente que los promedios de los
diámetros de los halos de inhibición van a diferir significativamente cuando
las concentraciones del extracto acuoso de Alluim sativum L. van en
aumento, teniendo en cuenta además del distinto comportamiento que
presenta cada una de las cepas de Candida albicans, lo cual demuestra que
la susceptibilidad de Candida albicans a diferentes concentraciones del
extracto acuoso de Alluim sativum L., se va a ver influenciada tanto por las
concentraciones del extracto (Cc 25 uL/mL, Cc 50 uL/mL, Cc 75 uL/mL, Cc
100 uL/mL, Cc 150 uL/mL), como por diferencias existentes entre las cepas
de Candida albicans (C1:3729, C2:3709, C3:3414, C4:3690), notándose
mayor diferencia a partir de la K25, observando a partir de allí mayor
susceptibilidad de las cepas, confirmando que a mayor concentración existe
mayor inhibición.

32
 Tabla 06. Prueba de significancia de Tukey (0,05) interacción de las
diferentes concentraciones del extracto acuoso del bulbo de Alllium
sativum L y cepas de Candida albicans resistente a la nistatina.

Cepa Cc Promedio Significancia

C1:3729 25 22.00000 a

C2:3709 25 22.16667 a

C1:3729 50 22.33333 a

C3:3414 25 24.20000 a b

C4:3690 25 24.83333 a b

C1:3729 75 25.00000 a b

C2:3709 50 25.33333 a b c

C3:3414 50 25.66667 a b c d

C2:3709 75 26.33333 a b c d

C1:3729 150 31.00000 a b c d e

C4:3690 75 31.00000 a b c d e

C4:3690 50 31.00000 a b c d e

C3:3414 100 31.66667 a b c d e

C1:3729 100 32.33333 b c d e f

C1:3729 fluconazol 33.33333 b c d e f

C3:3414 fluconazol 33.33333 b c d e f

C3:3414 75 35.00000 c d e f g

C2:3709 100 35.00000 c d e f g

C4:3690 fluconazol 35.16667 c d e f g

C4:3690 100 35.33333 d e f g

C2:3709 150 37.33333 e f g

C2:3709 fluconazol 37.83333 e f g

C4:3690 150 41.66667 f g

C3:3414 150 44.66667 g

33
34
4.2 Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria del extracto acuoso
del bulbo de Allium sativum L (Ajo) sobre cepas de Candida albicans
resistente a la nistatina.
Para determinar la Concentración mínima inhibitoria del extracto acuoso del bulbo
de Allium sativum L (Ajo) sobre cepas de Candida albicans, se trabajó el método
de macrodilución en tubo, aplicado según Norma Técnica Peruana N° 30 del INS.

Para la realización del experimento, se utilizaron las cuatro cepas de Candida

albicans (C1:3729, C2:3709, C3:3414, C4:3690) y la concentración de 25uL/mL
del extracto acuoso del bulbo de Allium sativum L, se trabajó con dicha
concentración debido a que fue la menor concentración que ejerció susceptibilidad
sobre todas las cepas de Candida albicans resistente en estudio.

Para la evaluación de la Concentración Mínima Inhibitoria, se tuvo en cuenta si

hubo crecimiento o no de Candida albicans en los tubos en que se realizaron las
diluciones del extracto acuoso de Allium sativum L (Cc 25 mg/mL).

Se pudo observar la susceptibilidad de cada una de la cepas, y se obtuvo como

resultado que para la C3:3414 y C4:3690de Candida albicans la concentración
mínima que no permite su desarrollo visible es 3,125 uL/mL, sin embargo para la
C2:3709 de Candida albicans la concentración mínima que impide su desarrollo
es 6,25 uL/mL, a diferencia de la C1:3729 cuya concentración mínima Inhibitoria
es 12,5 uL/mL, lo cual se observa en la Tabla Nº 07.

35
 Tabla 07. Concentración Mínima Inhibitoria del extracto acuoso del bulbo de Allium sativum L
sobre cepas de Candida albicans resistente a la nistatina.

Cepas de Candida albicans - Concentración 25 uL/mL

Tubo C1: 3729 C2: 3709 C3: 3414 C4: 3690

1 Control positivo (*) - - - -

2 25 uL/mL - - - -
3 12,5 uL/mL - - - -
4 6,25 uL/mL + - - -
5 3,125 uL/mL + + - -
6 1,56 uL/mL + + + +
7 0,78 uL/mL + + + +
8 0,39 uL/mL + + + +
9 0,19 uL/mL + + + +
10 Control negativo (**) + + + +
Control Control del Extracto (***) - - - -
Flu. Testigo (****) - - - -

(*) Extracto + inóculo

(**) Caldo sabouraud + inóculo + agua
(***) Caldo sabouraud + extracto acuoso
(****) Caldo sabouraud + inóculo + fluconazol

(+) Crecimiento

(-) No hay crecimiento

36
C1:3729 Cc. 25 uL/mL. CMI 12,5 uL/mL. Evidencia de crecimiento del tubo 4 – 9

C2:3709 Cc. 25 uL/mL. CMI 6,25 uL/mL. Evidencia de crecimiento del tubo 5 – 9

37
 C3:3414 Cc. 25 uL/mL. CMI 3,125 uL/mL. Evidencia de crecimiento del tubo
6–9

C4:3690 Cc. 25 uL/mL. CMI 3,125 uL/mL. Evidencia de crecimiento del tubo 6 – 9

Figura. 7 Concentración Mínima Inhibitoria del extracto acuoso del bulbo de

Allium sativum L. sobre cepas de Candida albicans (C1:3729 - C2:3709 -
C3:3414 - C4:3690).

38
 V. DISCUSIÓN

En el presente trabajo de investigación se determina la susceptibilidad de

cepas de Candida albicans resistentes a la nistatina a diferentes
concentraciones del extracto acuoso del bulbo de Allium sativum L., el cual
busca contribuir con el desarrollo de nuevas alternativas en la terapia
antimicótica.

Los resultados obtenidos nos indican que el extracto acuoso del bulbo de
Allium sativum L. ejerce mecanismos de acción de actividad antifúngica sobre
Candida albicans resistente a la nistatina.

Los estudios revelan que esto puede ser debido a la acción de los
compuestos activos del bulbo, ya que esta contiene Alicina, Dialil y
Vinilodetiinas; donde aproximadamente 20% es de Dialil y Vinilodetiinas
totales altamente concentrados incluyendo un alto porcentaje 80% de Alicina.

Un análisis realizado del bulbo de Ajo muestra compuestos detectados, los

cuales incluyen: glucosa, ácido glutamínico, arginina, ácido aspártico, leusina,
lisina, valina, aliina, aminoácidos azufrados como la S-alilcisteina o sulfóxido
de alicisteina que se transforma en alicina, disulfuro de dialilo y también
contiene compuestos como: fructosanos (inulina), quercetina, flavonoides,
vitamina B6, vitamina C y minerales (potasio, manganeso, calcio, selenio y
fosforo). El mismo estudio reveló el efecto de los extractos del bulbo de Ajo
sobre la morfología y estructura de C. albicans y C. krusei, el cual se examinó
mediante microscopía electrónica de barrido y transmisión, con la
visualización de una membrana irregular e hifas, formación de vacuolas y
engrosamiento de la pared celular.

Existen diferentes investigaciones, sobre el uso y efectividad de Allium

sativum L. el presente estudio fue realizado a partir del extracto acuoso del
bulbo de Ajo, a concentraciones de 25 uL/mL - 150 uL/mL sobre cepas de
Candida albicans, obteniendo resultados de 23,30000 mm hasta 38,66667
mm de halos de inhibición; con una CMI de 12,5 uL/mL, 3,125 uL/mL. Según
LORA et al., (2010). encontró que Allium sativum liofilizado sobre Candida
albicans en su CMI produjo un halo de inhibición promedio de 7.3 mm siendo
la concentración del ajo 25mg/ml; cabe señalar que el tipo de extracto y la
39
concentración de metabolitos responsables de la inhibición, que se
encuentran en el bulbo de Ajo puedan marcar las diferencias entre las
experimentaciones.

Para HUAMANI Y RUIZ (2005) la actividad antifúngica In Vitro de diez extractos

etanolicos correspondientes a diez plantas medicinales peruanas; Annona
cherimolia mill. (hojas) , Annona muricata L. (corteza y hojas) , Bidens pilosa L.
(partes aéreas) , Hypericum laricifolium L. (partes aéreas), Juglans neotropica
Diels (corteza) , Piper spp.(hojas) , Plantago major L.(hojas) ,Psidium guajava
L.(hojas) , Schimus molle L.(corteza y hojas) y Spartium junceum L. (planta
entera). Recolectaron a las especies en el departamento de Amazonas, excepto
Schinus molle L. (Apurimac) y Annona muricata L. (Lima). La actividad antifúngica
mediante los métodos de difusión en agar y dilución en agar para la
determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI).

Utilizaron las levaduras Candida albicans ATCC 10231 y Candida albicans cepa
clínica, así como, el hongo filamentoso Aspegillus niger ATCC1 16404, como
microorganismos de prueba; se investigaron 12 extractos, de ellos seis
presentaron actividad antifúngica consistente con un diámetro de halos de
inhibición #18mm (prueba de difusión en agar) frente a Candida albicans ATCC
10231. Ningún extracto mostro actividad consistente frente a la cepa clínica de
Candida albicans y Aspergillus niger ATCC 16404. La CMI de los extractos que
presentaron actividad consistente frente a Candida albicans ATCC 10231, fue de
250 ug/ml para Hypericum laricifolium L, Juglans neotropica Diels, Psidium
guajava L. y Schinus molle L. (un exracto de corteza y una de hojas) y de 500
ug/ml para Piper spp. No se determinó la CMI de los extractos (Juglans
neotropica Diels y Psidium guajava L.) que presentaron halos frente al Aspergillus
niger ATCC 16404 por considerarlos sin actividad significante (<18mm), los
antifungicos Nistatina y Fluconazol fueron incluidos en el estudio como controles
positivos.

Dependiendo del tipo de extracto y la parte de la planta utilizada, se deduce

que los extractos de Allium sativum L. son eficaces contra Candida albicans
resistente a la nistatina, y que la susceptibilidad de la levadura es
directamente proporcional a la concentración del extracto; notándose mayor
efectividad con el extractos acuoso del bulbo del Ajo, asumiendo de esta

40
manera que los principios activos están presentes en gran proporción en esta
parte de la planta, así como lo señala la literatura.

Demás estudios revelan que el extracto acuoso de Allium sativum L. posee

efectos antifúngicos similares al fluconazol, importante en el tratamiento
antifúngico; un estudio comparativo de extracto hidroalcoholico demostró que
A. sativum L. en concentraciones de 30 mg / mL, tiene actividad definida
contra Candida, sin embargo el efecto de inhibición es menor que el de la
nistatina (100 mg/mL); un aumento en la dosis de medicación podría alcanzar
una actividad similar a la del medicamento.

En referencia a los promedios de los halos de inhibición obtenidos según el

ANAVA existen diferencias entre las cepas evaluadas, sin embargo la prueba
discriminatoria de Tukey (0.5), indica que esta diferencia no es significativa;
en relación a las diferentes concentraciones del extracto, se pudo observar
que sí existen diferencias significativas, notándose que a medida que
aumenta la concentración existe mayor susceptibilidad, demostrándose que la
susceptibilidad de Candida albicans resistente a la nistatina es directamente
proporcional a la concentración del extracto de Allium sativum L.

La CMI obtenida en este estudio fue de 3,125 uL/mL, coincidiendo con los
reportes de otras investigaciones que obtuvieron CMI de 0.125 ug / mL, 0.128
mg/ mL - 1.024 mg / mL, 0.5 – 1 mg/mL; estos experimentos fueron realizados
con extracto etanólico de Allium sativum. Los resultados sugieren al extracto
de ajo como agente antimicótico prometedor.

Los resultados obtenidos en el presente trabajo, demuestran la

susceptibilidad de Candida albicans resistente a la nistatina procedente de
infecciones vaginales, frente al extracto acuoso del bulbo de Allium sativum L.
contribuyendo en la investigación de nuevas alternativas para la terapia
antimicótica.

41
 VI. CONCLUSIONES

Al realizar el estudio sobre el efecto inhibitorio del extracto acuoso de Allium sativum
L. frente a cepas de Candida albicans resistentes a la nistatina obtenidas del
Hospital Regional Docente Las Mercedes se concluye que:

- Las cepas en estudio (C1:3729 - C2:3709 - C3:3414 - C4:3690) de Candida

albicans resistente a la nistatina son susceptibles al extracto acuoso del bulbo
de Allium sativum L. a concentraciones de 25 uL/mL; 50 uL/mL; 75 uL/mL; 100
uL/mL y 150 uL/mL, lo cual fue evidenciado por la presencia de halos de
inhibición, notándose que la cepa más resistente fue la C1:3729 con un halo
de inhibición de 27,66 mm y la cepa más susceptible es la C4:3690 con un halo
de inhibición de 33,16 mm.

- Con respecto a la CMI del extracto acuoso del bulbo de Allium sativum L. sobre
cepas de Candida albicans resistente a la nistatina, se concluyó que la cepa
más resistente C1:3729 es inhibida a una concentración mínima de 12,5
uL/mL; mientras que la cepa más sensible C4:3690 se inhibió a una
concentración mínima de 3,125 uL/mL.

42
 VII. RECOMENDACIONES

- Continuar con el trabajo de investigación ya realizado, enfatizando en el

estudio de los beneficios que posee Allium sativum L, evaluar la variedad de
propiedades que ofrece dicha planta y enfrentarla a otros microorganismos.

- Realizar otros tipos de extracciones con la finalidad de optimizar la obtención

de los principios activos.

- Realizar ensayos en animales de experimentación con la finalidad de evaluar si

existe efecto citotóxico por parte de la planta en estudio.

- Continuar con trabajos de investigación que nos permitan descubrir nuevos

tratamientos con la finalidad de validar el uso de plantas medicinales.

43
 VIII. RESUMEN

El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo determinar el efecto

inhibitorio In Vitro de las cepas de Candida albicans resistente a la nistatina frente al
extracto acuoso del bulbo de Allium sativum L.

Se trabajó con 4 cepas de Candida albicans (C1:3729 - C2:3709 - C3:3414 -

C4:3690) y 5 concentraciones diferentes del extracto acuoso del bulbo de Allium
sativum L. (25 uL/mL, 50 uL/mL, 75 uL/mL, 100 uL/mL, 150 uL/mL), considerando
tres repeticiones por cada cepa, se realizaron un total de 60 evaluaciones.

Las cepas de Candida albicans se identificaron por medio de la prueba del tubo
germinativo según lo establecido en la Norma Técnica Peruana N° 44 del
INS/CNSP, formación de clamidosporas, crecimiento en caldo de Urea Stuart y
aislamiento e identificación en Chromogenic Candida Agar (CCA). Además de la
obtención del extracto acuoso del bulbo de Allium sativum L.

La prueba de susceptibilidad de las cepas de Candida albicans resistente a la

nistatina frente al extracto acuoso de Allium sativum L. se realizó mediante el
método de Disco de difusión (INS/CNSP), y para la evaluación de la CMI se trabajó
con el método de macrodilución en tubo según Norma Técnica Peruana N° 30 del
INS.

El Diseño de Investigación utilizado fue el de estímulo creciente, descrito por

(Alvitres, 1997) Y para el análisis estadístico de los datos, obtenidos en la
experimentación correspondiente se realizó un Análisis de Varianza (ANAVA), con
arreglo factorial (5x4x3); donde cinco es el número de concentraciones del extracto
acuoso del bulbo de Allium sativum L. (25 uL/mL, 50 uL/mL, 75 uL/mL, 100 uL/mL,
150 uL/mL), cuatro es el número de cepas de cultivo puro de Candida albicans y tres
es el número de repeticiones; con un nivel de confianza del 95 %, el cual se
complementó con la Prueba discriminatoria de Tukey a 0,05 nivel de significación
(STELL y TORRIE, 1983).

44
Como resultado se obtuvo que todas cepas de Candida albicans resistente a la
nistatina en estudio fueron susceptibles al extracto acuoso del bulbo de Allium
sativum L. Notándose mayor susceptibilidad de las cepas a medida de que la
concentración del extracto aumentaba, demostrándose que la susceptibilidad de
Candida albicans es directamente proporcional a la concentración del extracto de
Allium sativum L.

La Concentración Mínima Inhibitoria del extracto del bulbo de Allium sativum L.

sobre cepas de Candida albicans resistente a la nistatina se determinó utilizando la
concentración más baja (25 uL/mL) que causó susceptibilidad de todas las cepas en
estudio (C1:3729 - C2:3709 - C3:3414 - C4:3690), los valores obtenidos fueron para
la C1:3729 de Candida albicans CMI 12,5 uL/mL.; para la C2:3709 Candida albicans
CMI 6,25 uL/ mL; para la C3:3414 y C4:3690 de Candida albicans CMI 3,125 uL/ mL.

45
 IX. ANEXOS

Anexo 1. Clasificación Taxonómica de Allium sativum L.

CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA

Reino : Plantae
División : Magnoliophyta
Clase : Liliopsida
Orden : Asparagales
Familia : Amaryllidaceae
Subfamilia : Allioideae
Género : Allium
Especie : Allium sativum

Llatas S., “Botánica Fanerogámica”. Lambayeque – Perú, 2008

46
Anexo 2. Pared celular de Candida albicans.

Anexo 3. Clasificación de la Aliina

47
Anexo 4. Formación de clamidosporas de las cepas de Candida albicans.

48
Anexo 5. Tabla referencial del procedimiento para realizar la macrodilución en Caldo

C.I C.E

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

CALDO - 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
SABOURAUD mL

Solución del extracto - -

acuoso de 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Allium sativum L.

Inóculo
Candida albicans 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 -

Volumen final 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0.5

C.I = Control de inóculo

C.E = Control de esterilidad

49
Anexo 6. Prueba de susceptibilidad método de difusión en disco INS/CNSP

50
Anexo 7. Gráfico de la prueba de significancia de Tukey (0,05) de los promedios
de los diámetros de los halos de inhibición de las cepas de Candida albicans
frente al extracto acuoso de Allium sativum L.

Anexo 8. Gráfico de la prueba de significancia de Tukey (0,05) de los promedios

de los diámetros de los halos de inhibición de Candida albicans en función a las
diferentes concentraciones del extracto acuoso de Allium sativum L.

51
 Anexo 9. Comparaciones múltiples en Percentil de Dosis.

C1:3729

LD50 7.8079 LD50 Error Estándar 1.5361

LD50 LCL 5.5426 LD50 UCL 11.9266

Log10[LD50] 0.8925 Error Estándar 0.0849

Beta 2.7311 Intercepto 2.5624

Beta Error Estándar 0.4148

52
C1:3709

LD50 4.0237 LD50 Error Estándar 0.6553

LD50 LCL 2.9698 LD50 UCL 5.6077

Log10[LD50] 0.6046 Error Estándar 0.0704

Beta 3.2444 Intercepto 3.0383

Beta Error Estándar 0.4603

53
C1:3414

LD50 2.2061 LD50 Error Estándar 0.3406

LD50 LCL 1.6320 LD50 UCL 2.9823

Log10[LD50] 0.3436 Error Estándar 0.0668

Beta 3.4607 Intercepto 3.8108

Beta Error Estándar 0.4870

54
C1:3690

LD50 2.2061 LD50 Error Estándar 0.3406

LD50 LCL 1.6320 LD50 UCL 2.9823

Log10[LD50] 0.3436 Error Estándar 0.0668

Beta 3.4607 Intercepto 3.8108

Beta Error Estándar 0.4870

*. La diferencia de medias es significativa al nivel .05.

55
 X. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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