Fijadores químicos simples
9 pag.
Encuentra más documentos en
MECANISMO DE
CARÁCTERÍSTICAS GENERALES
ACCIÓN
• Formaldehído La fijación se produce por DESNATURALIZACIÓN de las proteínas, por medio de la RUPTURA DE LOS PUENTES DE
Por
• Glutaraldehído HIDRÓGENO (que les dan la estructura helicoidal) y por la formación de una MALLA POLIPEPTÍDICA generada por
RETICULARIZACIÓN
• Paraldehído enlaces químicos. El fijador actuaría como puente entre moléculas adyacentes, formando la red. En general son
DE LAS PROTEÍNAS
• Tetróxido de osmio aldehídos o potentes oxidantes como el tetróxido de osmio.
• Alcohol etílico Son sustancias altamente higroscópicas, que actúan ELIMINANDO TANTO EL AGUA LIBRE COMO EL AGUA LIGADA a las
Por
• Alcohol metílico moléculas proteicas. Este cambio proteico PROVOCA UNA DESNATURALIZACIÓN, con alteraciones en la organización y
DESHIDRATACIÓN
• Acetona estructura celular.
TISULAR
• Cloroformo Es frecuente el ENDURECIMIENTO TISULAR por la deshidratación.
Por Los fijadores contemplados en este grupo son de carácter ÁCIDO. Se emplean formando parte de MEZCLAS FIJADORAS.
• Ácido acético CAMBIOS DEL Tienen una GRAN VELOCIDAD DE PENETRACIÓN en los tejidos y algún poder DECALCIFICADOR. Las soluciones coloidales
• Ácido tricloroacético ESTADO COLOIDAL que forman las proteínas precipitan en presencia de estos fijadores ácidos, que DISMINUYEN EL pH de la disolución
• Ácido crómico DE LAS PROTEÍNAS hasta alcanzar el punto isoeléctrico de las moléculas en disolución coloidal. LAS MOLÉCULAS QUEDAN CON CARGA
NETA CERO.
El agente fijador es un CATIÓN METÁLICO, fundamentalmente cromo o mercurio, o un derivado orgánico como el ácido
• Cloruro de mercurio o Por pícrico, que FORMA CON LOS TEJIDOS PROTEINATOS METÁLICOS O PICRATOS. Estos agentes fijadores poseen una
sublimado
FORMACIÓN DE GRAN VELOCIDAD DE FIJACIÓN, ya que la formación de las sales se produce instantáneamente. Sin embargo, se origina
• Dicromato potásico SALES CON LOS un efecto barrera porque los PROTEINATOS formados en superficie actúan como OBSTÁCULO MECÁNICO,
• Ácido pícrico TEJIDOS DIFICULTANDO LA PENETRACIÓN del fijador. La precipitación metálica produce además un GRAN ENDURECIMIENTO,
• Acetato de uranilo lo cual obliga a emplearlo en mezclas fijadoras que amortigüen este efecto.
Encuentra más documentos en
FORMALDEHÍDO
Gas tóxico, muy irritable. Se disuelve fácilmente en agua. Penetra 5 mm por cada 4 h aproximadamente a temperatura ambiente. Según el tamaño de
la muestra y la temperatura, el grado de penetración del fijador establecerá un tiempo mínimo de 4 a 24 h estándar para biopsias, y 48 h o más para
piezas enteras. Al 35-40% es formalina pura o formol. Relación muestra fijador 1/10-20. Las muestras no deben superar los 5 mm de espesor. Se utiliza
al 10%. Conserva proteínas y grasas. Apenas modifica hidratos de carbono.
CARACTERÍSTICAS
Reacciona con grupos amino, estableciendo puentes de metileno entre proteínas, formando uniones cruzadas (cross-linking). Produce un anclaje del
citoesqueleto en los tejidos, manteniendo así la forma de la célula. Por medio de los enlaces cruzados, las proteínas pueden perder su conformación
espacial y así alterarse su actividad antigénica, impidiendo el reconocimiento de anticuerpos específicos. Para evitar esto se pueden realizar métodos
de reconversión antigénica. La cantidad de uniones cruzadas dependen de: la concentración, el pH, la temperatura, el tiempo de acción del fijador.
• Es un muy buen fijador único y es el más barato.
• No endurece excesivamente los tejidos y es un buen antimicrobiano.
• Provoca escasa retracción tisular (por endurecimiento).
• Posee una velocidad de penetración intermedia.
VENTAJAS • Excelente fijador para tejido adiposo y para lípidos en general.
• Es compatible con la mayor parte de las tinciones.
• Se puede acelerar o retrasar la fijación mediante la temperatura:
➢ Ambiente – 36 h
➢ 35°C – entre 12 y 24 h
➢ 55°C – 3 h
• Por acción de la luz y el oxígeno atmosférico puede transformarse progresivamente en ácido fórmico. Debe guardarse en frascos opacos o
emplearse en forma de solución neutra o tamponada.
• Se consume durante el proceso de fijación, por lo cual debe encontrarse siempre en exceso.
• Posee baja presión osmótica (el agua es arrastrada hacia el interior del tejido, produciendo su hinchamiento –edema–).
• Desprende vapores irritantes.
• Puede originar pigmento formólico tras una utilización prolongada (a partir del ácido fórmico). Este dificulta la observación microscópica.
DESVENTAJAS
Este pigmento se elimina con el tratamiento de los cortes en:
1. Solución alcohólica saturada de ácido pícrico (10-12 g en alcohol 95-100°) – 5 minutos. O solución alcohólica alcalina de Verocay (1 parte de
hidróxido de Potasio al 1% en 99 partes de alcohol etílico 80°), o solución alcohólica alcalina de Kardasewitsch (1-5 partes de hidróxido de
amonio en 95-99 partes de alcohol etílico 70°).
2. Agua destilada, 2 baños
5 minutos cada uno
3. Alcohol 70°, 1 baño
Encuentra más documentos en
SOLUCIONES FIJADORAS SIMPLES QUE CONTIENEN FORMALDEHÍDO
Se utiliza para prevenir el efecto osmótico que provoca el empleo de disoluciones de formaldehído en agua destilada.
FORMOL SALINO
Preparación: disolver 9 g de cloruro sódico en 1 L de formol al 10%.
Preparación: Al formol 10% se le agrega una pequeña cantidad de carbonato cálcico para neutralizar el exceso de ácido fórmico generado
FORMOL NEUTRO
por la oxidación espontánea del formaldehído.
Es la solución más utilizada para prevenir el choque osmótico que provoca la disolución de formalina en agua destilada, así como el
depósito de pigmento formólico (que ocurre a un pH inferior a 6).
Preparación: como amortiguador se emplea el tampón fosfato calibrado con pH 7.0-7.2 según la siguiente fórmula:
FORMOL TAMPONADO • Formaldehído 38-40% .......................... 100 ml
• Agua destilada ………………………………….. 900 ml
• Fosfato sódico monobásico ………………. 4.0 g
• Fosfato sódico dibásico (anhidro) ……… 6.5 g
Se emplea fundamentalmente para fijar tejido nervioso en la preparación de algunas técnicas de impregnación argéntica.
FORMOL ÁCIDO
Preparación: añadir 1 parte de ácido acético glacial a 99 partes de formol 10%. Así se consigue un pH en torno a 2.
Los iones de calcio previenen la difusión de los fosfolípidos y estabilizan las moléculas enzimáticas.
FORMOL CÁLCICO
(solución de Baker) Preparación: añadir cloruro de calcio a 1% a una solución de formol neutro o tamponado al 10%.
Encuentra más documentos en
GLUTARALDEHÍDO
Es un líquido oleoso cuya disolución comercial se encuentra al 25%. Este forma más uniones cruzadas que el formaldehído, causando desnaturalización
CARACTERÍSTICAS
de las proteínas por alteración de la estructura alfa hélice.
Se utiliza en concentración entre 1 y 3%.
• Fija rápidamente y es un excelente fijador para microscopía electrónica.
VENTAJAS • Excepcional capacidad para preservar la morfología celular.
• Sirve para fijar animales por perfusión para patología experimental.
• Tiene una velocidad de penetración muy baja, por eso el tamaño y grosor de las muestras deben ser milimétricos.
• Al producir múltiples uniones cruzadas, no es un fijador de elección para inmunohistoquímica en microscopio óptico.
DESVENTAJAS • Produce una gran retracción y endurecimiento tisular, que impide prolongar el tiempo de fijación más allá de las 4 h.
• Su osmolaridad es muy baja, por lo que debe ser empleado en soluciones tamponadas.
TETRÓXIDO DE OSMIO
El tetróxido de osmio o ácido ósmico actúa por reticularización de las proteínas y grasas al formar peróxidos con ellas. Su versión comercial se
CARACTERÍSTICAS
encuentra en forma de cristales amarillos solubles en agua, muy volátiles y tóxicos. Como agente fijador se emplea al 1% en tampón fosfato.
• Es un excelente fijador estructural. Se utiliza en microscopía electrónica como segundo fijador y como agente de contraste.
VENTAJAS
• Es ideal para fijar lípidos complejos, especialmente esfingolípidos y esfingomielina.
• Es muy caro y se descompone en presencia de la luz, por lo que debe conservarse en recipientes opacos y en la oscuridad.
• Es muy insoluble, dificultoso de preparar en soluciones acuosas.
• Es muy tóxico. En estado cristalino emite vapores irritantes para la córnea y las mucosas respiratorias.
DESVENTAJAS • Posee muy baja capacidad de penetración, por lo que las muestras deben tener poco volumen.
• Posee escasa presión osmótica en disolución, por lo que siempre debe usarse como disolvente una solución tamponada.
• Por su gran poder oxidante, es incompatible con los fijadores reductores y con la coloración PAS.
• Dificulta la coloración nuclear.
• Inactiva casi por completo las enzimas y altera notablemente la composición antigénica tisular.
Encuentra más documentos en
ALCOHOL ETÍLICO
Es un líquido transparente, inflamable y muy volátil. Cuando se encuentra en graduación 100 se llama “puro” o “absoluto”. Como fijador químico se
CARACTERÍSTICAS usa en 70° o 90°. Preserva el glucógeno y la actividad de ciertas enzimas tisulares. Fija los pigmentos y se emplea en las extensiones citológicas. Es un
buen fijador para inmunohistoquímica.
• Fija y deshidrata el tejido al mismo tiempo.
• Posee gran velocidad de penetración.
VENTAJAS
• Precipita muy rápidamente las proteínas y el glucógeno.
• Es un potente agente bactericida y, por lo tanto, un buen conservante.
• Es un fuerte reductor, incompatible con fijadores oxidantes como el dicromato de potasio y el tetróxido de osmio.
• No fija adecuadamente la cromatina, pues disuelve los ácidos nucleicos.
• Extrae parcialmente los lípidos.
DESVENTAJAS • Endurece y contrae excesivamente los tejidos.
• Se va diluyendo al incorporar el agua que extrae de los tejidos, por lo cual pierde actividad progresivamente.
• Prepara mal la tinción porque carece de efecto mordiente.
• Suele dar origen al desplazamiento de sustancias.
ACETONA
CARACTERÍSTICAS Es un líquido transparente, inflamable y muy volátil. Se usa en métodos histoquímicos e inmunohistoquímicos, ya que preserva muy exactamente la
estructura antigénica y la actividad enzimática de estos. Se emplea generalmente sin diluir, a 4°C.
• Posee gran velocidad de penetración.
VENTAJAS
• Es la alternativa para fijar cortes congelados.
• Provoca una gran contracción tisular, y por lo tanto graves artefactos que afectan mayormente la microscopía óptica convencional.
• Debido a su rapidez de acción y a su capacidad de endurecimiento, es imprescindible controlar el tiempo de fijación, que no debe superar las 2 a
DESVENTAJAS 3 horas.
• Disuelve las grasas, a excepción de algunos lípidos complejos como los fosfolípidos y los galactolípidos.
Encuentra más documentos en
ÁCIDO ACÉTICO
Es un líquido transparente. En estado puro se llama “ácido acético glacial”. Por debajo de los 10°C tiende a solidificarse en forma de agujas cristalizadas
CARACTERÍSTICAS
muy cáusticas. Se utiliza diluido en concentraciones entre el 1 y el 5%, y formando parte de mezclas fijadoras o soluciones decalcificantes.
• Es un fijador ideal para nucleoproteínas y ácidos nucleicos.
VENTAJAS • Por no ser higroscópico, produce en los tejidos cierto edema intersticial que compensa la excesiva retracción causada por otros agentes
fijadores.
• Es un mal fijador de membranas y citoplasma celulares.
DESVENTAJAS • Destruye las mitocondrias.
ÁCIDO TRICLOROACÉTICO
Se encuentra en forma de cristales incoloros solubles muy cáusticos. Se emplea en disolución, en concentraciones entre el 2,5 y el 5%. Se utiliza para
CARACTERÍSTICAS precipitar macromoléculas tales como proteínas, ADN y ARN. Su sal de sodio se utiliza como herbicida. Las soluciones que contienen ácido
tricloroacético se usan como ingrediente para el tratamiento de las verrugas.
• Fija adecuadamente todo tipo de estructuras nerviosas.
VENTAJAS
• Actúa como medio decalcificador.
• Disuelve las nucleoproteínas y ácidos nucleicos.
DESVENTAJAS • Produce un hinchamiento excesivo de los tejidos, que provoca numerosos artefactos tras la deshidratación previa a la inclusión en parafina.
ÁCIDO CRÓMICO
CARACTERÍSTICAS Se obtiene por disolución de cristales de anhídrido crómico en agua. Se emplea en disoluciones al 2% formando parte de mezclas fijadoras.
• Es un excelente fijador estructural.
VENTAJAS
• Por ser un fuerte agente oxidante, actúa como mordiente en tinciones que emplean colorantes básicos.
• Es incompatible con fijadores reductores como el formol y los alcoholes.
DESVENTAJAS • Posee una escasa velocidad de penetración.
• Impregna de una coloración verdosa los tejidos, por lo que hay que lavarlos abundantemente en agua destilada tras usar este ácido.
Encuentra más documentos en
CLORURO MERCÚRICO O SUBLIMADO
Se encuentra en forma de un polvo blanquecino muy tóxico. El efecto fijador se consigue por la combinación de los iones de mercurio con los grupos
CARACTERÍSTICAS ácidos de las proteínas, especialmente con los de carácter carboxílico, hidroxilo, sulfhidrilo y residuos fosfóricos de las nucleoproteínas. Se utiliza en
solución acuosa saturada.
• Es un excelente fijador de los caracteres morfológicos celulares, de elección para patologías hematopoyéticas y renales.
• Permite la observación de finos detalles nucleares y citoplasmáticos.
VENTAJAS • Es un excelente mordiente. Produce una intensa y brillante coloración nuclear y citoplasmática.
• Post-fijación, los tejidos pueden conservarse indefinidamente en alcohol 70-80°
• No es un buen bactericida.
• Por su escasa capacidad de penetración, requiere un fraccionamiento delgado (no más de 5 mm de espesor).
• Si se prolonga la fijación, contrae y endurece los tejidos dificultando mucho la obtención de los cortes en el micrótomo. Por esto no debe
DESVENTAJAS extenderse el tiempo de fijación a más de 4 a 6 h.
• Da origen a precipitados metálicos de color pardo sobre los tejidos, que dificultan su observación microscópica. Deben tratarse para la
eliminación de los precipitados con soluciones alcohólicas yodadas como el Lugol.
• Por la intensa eosinofilia citoplasmática que provoca, puede dificultar el reconocimiento de las zonas de necrosis tisular.
DICROMATO POTÁSICO
Es un polvo de color naranja intenso que reacciona con las proteínas para formar cromatos. Tiene gran poder oxidante. En contacto con sustancias
orgánicas puede provocar incendios. Se utiliza en dilución acuosa entre el 1 y el 2% y formando parte de mezclas fijadoras. El pH óptimo de actuación
CARACTERÍSTICAS
para este fijador es de 4.4. Se obtiene mediante cloruro de potasio, dicromato de sodio, tostado de cromito y carbonato de potasio a una temperatura
entre 90 y 100°C. Se debe mantener en recipientes bien tapados, alejados de materiales combustibles, protegidos del calor y en lugares secos.
• Produce un fuerte efecto mordiente al oxidar los grupos alcohólicos de las grasas y los polisacáridos a aldehídos, e incrementa la basofilia de las
proteínas cuando se emplea a un pH muy ácido. Es aconsejable utilizarlo en mezclas fijadoras como amortiguador de la intensa eosinofilia
citoplasmática que provocan otros fijadores (por ejemplo, el cloruro mercúrico).
VENTAJAS • Es un excelente fijador para los lípidos complejos y, por lo tanto, para la mielina, las mitocondrias y el aparato de Golgi, que los contienen en
abundancia.
• Su utilización es indispensable para demostrar la reacción cromafín y realizar las técnicas de Golgi para impregnación argéntica de las células del
sistema nervioso central.
Encuentra más documentos en
• Por ser un fuerte oxidante es incompatible con agentes reductores como alcoholes y formaldehído.
• Posee una baja velocidad de penetración y endurece escasamente los tejidos
• Provoca artefactos tisulares como aparición de vacuolas citoplasmáticas, retracciones y cambios en la morfología nuclear.
DESVENTAJAS • En soluciones no acidificadas, el dicromato disuelve la cromatina. Por esto es necesario asociarlo con ácido acético o tricloroacético en mezclas
fijadoras.
• Post-fijación, los tejidos deben ser lavados en solución salina o tamponada para evitar el depósito de pigmento verde.
ÁCIDO PÍCRICO
Se encuentra en forma de agujas cristalizadas de color amarillo, muy tóxicas y explosivas. Actúa coagulando las proteínas por medio de la formación
CARACTERÍSTICAS
de picratos, que les confieren gran afinidad por los colorantes ácidos. Se utiliza en solución acuosa saturada al 2%.
• Es un excelente fijador estructural que conserva muy adecuadamente la composición proteica de los tejidos.
• Produce una óptima contracción de los tejidos (controlando adecuadamente el tiempo de fijación).
VENTAJAS • Posee muy buena velocidad de fijación.
• No disuelve el glucógeno ni los lípidos (es el fijador ideal para estas sustancias).
• Posee una leve acción decalcificante.
• Posee gran estabilidad en soluciones.
• En estado puro es explosivo si se somete a la acción del calor. Debe mantenerse alejado de fuentes de calor.
• Si se prolonga el tiempo de fijación (4-18 h según el tamaño de la muestra), provoca una excesiva retracción tisular.
• Disuelve precipitados cálcicos y hemosiderina.
DESVENTAJAS • No puede ser utilizado para fijar ciertos tejidos porque los hace frágiles y quebradizos para el corte.
• Si el ácido pícrico no es completamente eliminado antes de la inclusión, provoca un continuo deterioro de la estructura tisular. La eliminación se
efectúa mediante lavados sucesivos en alcohol etílico 70-80° o en solución saturada de carbonato de litio en alcohol 70°
• Es incompatible con la inclusión en celoidina.
ACETATO DE URANILO
Se presenta en forma de cristales amarillos muy solubles en agua y que se descomponen con la luz. Su empleo está actualmente restringido a las
CARACTERÍSTICAS
técnicas de microscopía electrónica, en las que se usa como agente de contraste suplementario. Se utiliza en disolución acuosa al 2-5%.
Encuentra más documentos en
BIBLIOGRAFÍA
Arrington, J., Mills, B., Prophet, E. y Sobin L. (1995). Métodos Histotecnológicos. Washington, D.C.: Registro de Patología
de los Estados Unidos de América.
García del Moral, R. (1993). Laboratorio de anatomía patológica. Madrid: Interamericana de España, McGraw-Hill.
Encuentra más documentos en
