TECNICAS DE

LABORATORIO
IMPORTANTE:
El personal de laboratorio de Parasitología debe tener
conocimientos, entrenamiento especializado y experiencia
practica. Además de la capacidad de RECONOCER e
IDENTIFICAR los estadios diagnósticos del Parásito. Debe
estar familiarizado con los procedimientos y técnicas de
recolección, fijación , y métodos de examen de cada tipo
de muestra recibida en el laboratorio.
EXAMEN DE MATERIA FECAL:
Es el mejor recurso para el diagnostico de las parasitosis intestinales; no solo por su
bajo costos sino también por su sensibilidad y especificidad permitiendo identificar
Protozoos Intestinales (formas vegetativas, prequísticas y quísticas) y Helmintos
(huevos, larvas y gusano adultos).

EXAMEN EN EXAMEN ESCOBILLADO ANAL

FRESCO SEREADO O TEST DE GRAHAM

Métodos de concentración

Flotación Sedimentación
EXAMEN EN FRESCO:
o Consiste en la ultima muestra de la recolección del examen seriado.
o Pequeña porción de MF recolectado en un frasco limpio y seco SIN CONSERVANTES.
o Remitido al laboratorio de inmediato: MF líquida = 30 min
MF semisólida = 60 min
MF solida = 2 hs
o Observación inmediata: identifica formas móviles de Protozoarios (Trofozoítos) y Helmintos
(Larvas).
Microscopía: Entre porta y cubre objeto colocar una pequeña porción de MF, observamos en
10 x - 40 x.
Reactivos: solución fisiológica, Lugol (el m.o muere y se pierde la movilidad).
o El éxito de la detección Parasitaria esta relacionado con la intensidad de la infección.
COPROPARASITOLÓGICO SERIADO:
o La presencia de parásitos en MF es cíclico, por ello aumentamos la posibilidad de hallazgo
recolectando de cada deposición una pequeña porción durante 5 a 7 días consecutivos o de
días diferentes deposiciones en un lapso no mayor a 15 días.
o Paciente debe defecar en un recipiente limpio, luego pasar una pequeña porción (cucharita
de te o café) al frasco limpio de boca ancha, CON CONSERVANTE (solución formolada al
5%) y rotulado.
no del suelo - no del inodoro - no del pañal
o Muestra a recoger: zonas de partes blandas, moco, pus o sangre, y/o parásitos adultos.
o Indicación al paciente para evitar interferencia: ayuno relativo de ciertos alimentos desde el
día anterior al inicio de la recolección, recomendando alimentos pobres en fibras, evitar
medicamentos a base de carbón, bismuto o laxantes oleosos.
o Identificamos: prequistes y quistes de protozoarios; huevos y larvas de helmintos.
TELEMANN MODIFICADO (1901)
1. Homogenización de la muestra con varilla de vidrio.
2. Filtrar a través de un embudo con DOBLE gasa en un tubo cónico plástico con tapa a rosca
para centrifuga. Se filtran 9 ml de materia fecal formolada.
3. Agregar a la materia fecal filtrada 1 a 2 ml de Éter Sulfúrico o Acetato de Etilo (destruye
moléculas grasas y nitritos).
4. Cerrar y agitar enérgicamente.
5. Centrifugar a 1000 – 1500 rpm durante 3 a 5 min.
6. Descartamos el sobrenadante con un golpe seco (en un frasco o bidón de desechos)
7. Colocar una gota del sedimento con una gota de Lugol (resalta estructuras) entre porta y
cubre objeto.
8. Observamos al microscopio en 10 x – 40 x .
 PRINCIPIO: CONCENTRAR LOS PARASITOS PRESENTES A TRAVES DE LA CEN TRIFUGACIÓN, EL SEDIMENTO
CONCENTRA TODOS LOS PARÁSITOS DE LA MUESTRA: QUISTES DE PROTOZOARIOS, OOQUISTES DE COCCIDIOS,
HUEVOS Y LARVAS DE HELMINTOS.

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link para video explicativo:

https://youtu.be/JW4x23uapHU
METODO DE WILLIS (1921)-FLOTACION EN SAL
1. Con el sedimento obtenido de la técnica de Telleman.
2. Agregar 3 – 4 ml de solución sobresaturada de cloruro de sodio y homogeneizar.
3. Completar con la misma solución hasta el borde del tubo y cubrir con el
cubreobjeto asegurando que estén en contacto.
4. Dejar en reposo durante 20 min dando tiempo a que las partículas parasitarias
floten.
5. Colocar una gota de lugol sobre el portaobjeto
6. Cuidadosamente retirar el cubreobjeto de la boca del tubo y colocarlo sobre la
gota de lugol del porta objeto.
7. Observar al microscopio con objetivo 10 x – 40 x .
PRINCIPIO: EN LA SOLUCIONES CON ALTA DENSIDAD RELATIVA QUISTES Y /O HUEVOS SE DESPRENDEN DE LAS
PARTÍCULAS FECALES, Y ASCIENDEN PEGÁNDOSE AL CUBREOBJETO.
ESTA TÉCNICA NO DETECTA HUEVOS MUY PESADOS U OPERCULADOS.

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MÉTODO DE SHETHER (1923) - FLOTACIÓN EN AZÚCAR
1. Homogeneizar la MF con varilla de vidrio.
2. Filtrar a través de un embudo con doble gasa en un tubo de centrifuga 9 ml.
3. Agregar 1 – 2 ml de éter sulfúrico o acetato de etilo, cerrar y agitar.
4. Centrifugar 1000-1500 rpm durante 3 a5 min.
5. Descartar el sobrenadante con un golpe seco.
6. Tomar una porción del sedimento y re suspenderlo en 1 ml de solución de azúcar.
7. Dejar reposar 3 min.
8. Tomar una muestra de la superficie de la mezcla con pipeta Pasteur y realizar un
preparado entre porta objeto y cubre objeto.
9. Observar al microscopio con 40 x.
PRINCIPIO: MÉTODO DE FLOTACIÓN EN BÚSQUEDA DE COCCIDIOS ( CRYPTOSPORIDIUM SSP., ISOSPORA BELLI,
CYCLOSPORA SPP.) UTILIZANDO UNA SOLUCIÓN CONCENTRADA DE SACAROSA CON UNA D ENSIDAD APROX. 1300 G/L.
LOS OOQUISTES SE CONCENTRAN EN LA SUPERFICIE DE LA SOLUCIÓN Y SE OBSERVAN DE COLOR ROSADO MUY
REFRINGENTES Y CON LA MEMBRANA BIEN DEFINIDA.

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MUESTRA SERIADA PARA EXAMEN DE ZONA PERIANAL.

Procedimiento especifico para buscar Enterobius vermicularis / Oxiuros,

pudiendo hallar raras veces huevos de áscaris Lumbricoides y de Tenia spp.
Como los huevos no se encuentran en exámenes habituales de heces la forma
mas confiable para detectarlos es a través de la Técnica de Graham o el
Escobillado Perianal.
El fundamento de estas técnicas se basa en el proceso de ovipostura, ya que
la hembra sale a la luz del ano depositando los huevos en sus alrededores. Es
difícil localizar a la hembra debido a que pone los huevos y muere.
TEST DE GRAHAM-MÉTODO DE LA CINTA ADHESIVA
1. Realizar la toma de muestra por la mañana al despertar, sin moverse de la cama, sin
higiene previa.
2. Se despega la cinta adhesiva del portaobjeto colocándola en el mango de una cuchara o
en un bajalengua, con la parte adhesiva hacia afuera.
3. Separando las nalgas del paciente y presionando suavemente la cinta sobre la superficie
perianal.
4. Pegar nuevamente la cinta sobre el portaobjeto.
5. Repetir esta metodología 5 días consecutivos, una vez corrido los 5 días enviar al
laboratorio.
6. Laboratorio: Microscopia 10 x - 40 x
ESCOBILLADO ANAL
1. Realizar la toma de muestra por la mañana al despertar, sin moverse de la cama,
sin higiene previa.
2. Separando las nalgas del paciente y frotando suavemente con el hisopo o gasa
sobre la superficie anal y en los pliegues perianales.
3. Colocarlos en un frasco limpio con conservantes.
4. Repetir esta metodología 5 días consecutivos, una vez corrido los 5 días enviar al
laboratorio.
5. Laboratorio: se homogeniza la muestra con una varilla de vidrio, trasvasar el
liquido a un tubo cónico de centrifuga, tapamos bien y centrifugamos a 1000-
1500 rpm, desechamos el sobrenadante, vemos el sedimento entre porta y
cubreobjeto al Microscopio en 10 x – 40 x.
CONSERVANTES MAS UTILIZADOS:
Conservantes Ventajas Desventajas
Solución salina § Fácil preparación § Inadecuado para preservación de trofozoítos de protozoarios
formolada § Fijador multipropósito § No apropiado para algunas coloraciones permanentes
(5 o 10%) § Larga duración § Puede interferir con técnicas de PCR luego de tiempo prolongado de
§ Buen preservante para quistes de protozoarios, larvas y huevos de fijación
helmintos
§ Apropiado para procedimientos de concentración
§ Apropiado para coloraciones ácido-alcohol resistentes, safranina y
cromotropo
§ Compatible con inmunoensayos

MIF § Componentes para fijación y coloración de los organismos § No apropiado para coloración permanente con técnica tricrómica
(merthiolate-iodoformaldehído) § Fácil preparación § Inadecuada conservación de morfología de trofozoítos
§ Larga duración § Iodo interfiere con técnicas que utilizan colorantes fluorescentes
§ Útil para estudios a gran escala § Iodo puede causar distorsión de Protozoarios
§ Apropiado para procedimientos de concentración

SAF § Fácil preparación  Requiere aditivos (ej.: albúmina-glicerina) para la adhesión de las
(acetato de sodio-ácido § Fijador multipropósito muestras al portaobjetos
acético-formaldehído) § Larga duración § Coloraciones permanentes no tan buenas como con PVA
§ Apropiado para procedimientos de concentración
§ Apropiado para coloraciones ácido-alcohol resistentes, safranina y
cromotropo
§ Compatible con inmunoensayos

PVA  Buen preservante para trofozoítos y quistes de protozoarios  Inadecuada preservación de la morfología de huevos de helmintos,
(alcohol polivinílico) § Fácil preparación de preparados para coloraciones permanentes larvas, coccidios y microsporidios
(la solución preserva los organismos y favorece su adhesión al § Contiene cloruro mercúrico
portaobjetos) § Difícil de preparar en el laboratorio
§ Muestras preservadas se mantienen estables por varios Meses § Menos aplicable a procedimientos de concentración
§ No compatible con inmunoensayos
§ No apropiado para coloraciones ácido-alcohol resistentes,
safranina y cromotropo

Solución de dicromato  Útil para el estudio de coccidios  No es fijador

de potasio § Apropiado para esporulación
§ Impide el crecimiento bacteriano
COLORACIONES
Tipo de coloración objetivo Coloración de

Provisorias o de Resaltar algunas  Lugol

preparados húmedos estructuras  MIF
 Tionina
 Eosina
 Azul de Metileno
Permanentes Preparados  Col. Kinyoun modificado – -ooquistes color rojo
estables y para observar quistes de vinoso-fucsia.
permanentes coccidios. -Fondo azulado

 Coloración Tricromica- -citoplasma-verde-azul

identifica amebas y con matiz purpura
protozoarios -cromatina cuerpos
cromatoideos, glóbulos
rojos y levaduras-rojo o
purpura oscuro
-Fondo -verde
MÉTODOS DE RECUENTO:
Utilizados para investigar poblaciones parasitadas y ver carga parasitaria en un
paciente infectado por helmintos.
Basándose en que el conteo de huevos por gramo de heces provee un razonable
acercamiento al número de gusanos adultos en el intestino. Estos datos son
importantes para evaluar la relación entre carga parasitaria y síntomas, la acción de
los medicamentos antiparasitarios y para evaluar la importancia de la polución de los
suelos.
 Técnica de Stoll
 Técnica de Recuento en cámara - Mc Master
 Técnica de Kato - Katz
MÉTODOS PARA CONCENTRACIÓN Y CULTIVO DE LARVAS:
Métodos utilizados para aumentar la sensibilidad diagnosticas. Procedimientos
realizados en laboratorios de 2° nivel de complejidad hospitalaria.

 Técnica de Baermann (1917).

 Técnica de Baermann Modificada.
 Técnica de Harada-Mori (1955).
 Técnica de Placa de Agar.
 Cultivo en Carbón.
CONCLUSIÓN: COPROPARASITOLÓGICO MÍNIMO
1. Observación Macroscópica.
2. Observación Microscópica Directa - en
fresco.
3. Concentración : Telemann modificado -
Willis – Sheater.
4. Coloraciones: húmedas y permanentes.
5. Cuantificación: Stoll – Kato-Katz.
GRACIAS