UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Perú, Decana de América)
FACULTAD DE QUÍMICA E INGENIERÍA QUÍMICA
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA ORGÁNICA
E.P. DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
MICROBIOLOGÍA GENERAL
Práctica N.º 1
Bioseguridad. Reconocimiento de equipos de laboratorio. Preparación y esterilización
de materiales.
Horario: Jueves de 4 p.m. a 6 p.m.
Profesora: MSc Miriam Estela Memenza Zegarra
Fecha de realización: 12 de mayo del 2022
Fecha de entrega: 19 de mayo del 2022
Integrantes:
● Carlita Rodriguez Paz
● Marcos Estefano Manrique Malla
● Angela Paola Janampa Tejada
● Gianfranco Raúl Celis Alcántara
● Piero Alessandro Rengifo Portelo
● Diego Jesús Osorio Huamán
● Abner Leonard Velasquez Mamani
1. Resumen
El presente informe tiene el objetivo de conocer las normas fundamentales y acciones
que permitirán reducir y prevenir accidentes en el laboratorio de Microbiología, de manera
que podremos saber qué procedimientos realizar antes, durante y después de nuestro
trabajo dentro del laboratorio. Por ello, se tendrá en cuenta el protocolo de bioseguridad de
trabajo en el Laboratorio de Microbiología, donde se evidenciará el correcto manejo del
material biológico con la finalidad de evitar eventos desfavorables a futuro. También se
podrá familiarizar con los equipos y materiales presentes en el laboratorio. Esto mediante el
revisado de Equipos y Materiales elaborados por los estudiantes. Se presentará el
procedimiento de la metodología de la esterilización de los materiales de laboratorio, tanto
con vapor húmedo haciendo uso del equipo autoclave, como también por vapor seco
haciendo uso de un horno; y así determinar el mejor metodo para estirilizar los materiales de
acuerdo a su material de elaboración.
Para la realización del presente informe se procedió a la búsqueda de información
confiable en repositorios de universidades, artículos de investigación, algunos manuales de
bioseguridad, etc. Seguidamente, se filtró la información necesaria y relacionada con nuestro
tema a tratar. Lo que se busca con el análisis de esta información es tener conocimiento
acerca de protocolos de seguridad en el laboratorio, conocer las reglas, los posibles riesgos y
sobre todo las soluciones ante la presencia de situaciones que pueden ocasionar daños. Así
mismo, conocer el correcto procedimiento, el cuidado y manipulación de los equipos y
materiales de laboratorio.
2. Introducción
De acuerdo a la Organización Mundial de la Salud (OMS), "la bioseguridad es un
enfoque estratégico e integrado para analizar y gestionar los riesgos relevantes para la vida y
la salud humana, animal y vegetal y los riesgos asociados para el medio ambiente”.
Por tanto, entendemos que la bioseguridad es un conjunto de normas preventivas
destinadas a proteger la salud del personal operador frente a riesgos de agentes biológicos,
agentes químicos y agentes físicos del laboratorio. La protección del personal y del ambiente
del laboratorio se logra mediante la aplicación de técnicas y normativas de seguridad
establecidas entre las cuales están la utilización de equipos de protección personal (EPP)
como las batas de laboratorio, protecciones fáciles tales como gafas o máscaras para la
protección de las vías respiratorias, y la esterilización de materiales que es de suma
importancia debido a que además de eliminar la suciedad, elimina en su totalidad la
permanencia o aparición de todas las formas de vida microbiana como serían los virus,
bacterias, hongos, protozoos, etc.
En el presente informe se ha elaborado un protocolo de bioseguridad de trabajo en
Laboratorio de Microbiología y en Laboratorio de Bioseguridad Nivel III el cual tiene como
objetivo principal enseñar las precauciones, técnicas y procedimientos que se deben tomar
al momento de hacer uso del laboratorio de microbiología para así prevenir accidentes que
puedan ser ocasionados por los agentes biológicos de estudio.
Además, se han abordado temas como buenas prácticas y prácticas de seguridad en el
laboratorio, equipos de protección personal, sustancias biopeligrosas, técnicas de seguridad
en microbiología y Técnicas de seguridad en Laboratorio de Bioseguridad Nivel III tomando
el caso del Bacillus anthracis. También, se reconocieron ciertos equipos que se emplean en
los laboratorios de microbiología y se procedió a nombrarlos con sus respectivos dibujos.
Finalmente, se elaboraron recomendaciones generales sobre la preparación y empleo
del material de microbiología antes y después de su esterilización. Todas las actividades
practicadas permitieron que adquiramos conocimientos acerca de la microbiología.
3. Marco teórico
3.1. Buenas prácticas de laboratorio
Los materiales empleados en los laboratorios antes y después de sus usos deben ser
esterilizados, mientras que los desechos generados deben eliminarse correctamente
3.2. Prácticas de seguridad en Laboratorio
Según la OMS (2011), las prácticas de laboratorio deben ser realizadas y supervisadas
por una persona calificada en microbiología. De acuerdo a los microorganismos que se
manejan se deben tener zonas de manejo y almacenamientos adecuados.
3.3. Equipo de protección personal (EPP)
Bata para prevenir el contacto con sustancias químicas, gafas de seguridad para proteger los
ojos de salpicaduras, mascarillas para evitar la inhalación de vapores y calzado grueso.
3.4. Sustancias Biopeligrosas:
3.4.1. Laboratorio de Bioseguridad
-Nivel de bioseguridad 1 (BSL-1):Representa un nivel inicial estándar sin barreras primarias
o secundarias específicamente recomendadas, excepto los lavamanos.
-Nivel de bioseguridad 2 (BSL-2):Aplica a laboratorios que traten agentes de riesgo leve, que
estén relacionados con la afección humana y que tengan gravedad variable.
-Nivel de bioseguridad 3 (BSL-3):En este nivel de bioseguridad se enfatiza en las barreras
tanto primarias como secundarias para la protección humana en áreas cercanas al
experimento, a la sociedad y al ambiente de la exposición de aerosoles infecciosos.
-Nivel de bioseguridad 4 (BSL-4):Está dirigido a trabajar con agentes altamente peligrosos o
tóxicos, los cuales representan grave peligro individual, alta capacidad de transmisión a
través del aire y para los cuales no existe cura aparente.
3.4.2. Grupos de Riesgo
-Grupo de riesgo 1 (RG1):Factores no asociados con enfermedades en seres sanos. Ej:
Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, algunas cepas de Escherichia coli.
-Grupo de riesgo 2 (RG2):Factores asociados con enfermedades humanas poco graves, Ej:
Campylobacter jejuni, Helicobacter pylori, Neisseria gonorrhoeae.
-Grupo de riesgo 3 (RG3):Factores asociados con enfermedades graves, ej: Coxiella burnetii,
Mycobacterium.
-Grupo de riesgo 4 (RG4): Agentes que causan enfermedades sumamente graves Ej:, Ébola,
Marburg, Lassa y otros virus.
3.5. Técnicas de seguridad en Microbiología
- Rigurosa asepsia al momento de manejar cultivos de microorganismos.
- Saber cómo utilizar los instrumentos y equipos antes de iniciar las prácticas.
- En caso de derrame, reportar el incidente de inmediato con el encargado.
3.6. Técnicas de seguridad en Laboratorio de Bioseguridad Nivel III. (Caso
Bacillus anthracis)
3.6.1. Laboratorio de bioseguridad nivel III
La denominación “nivel 3 de bioseguridad” se aplica a los laboratorios que manipulen
agentes peligrosos con potencial de causar enfermedades graves por su inhalación. Se debe
dar la manipulación de patógenos exclusivamente dentro de la tapa de flujo Laminar de nivel
2 para evitar el contacto con manchas o aerosoles. El área de trabajo debe desinfectarse antes
y después de su uso. Los materiales deben ser desechables y los residuos biológicos deben
posteriormente ser descontaminados. Y como medida de seguridad, debe haber barreras
secundarias adecuadamente implementadas.
3.6.2. Bacillus anthracis, Seguridad en laboratorio
-Cuando las formas vegetativas de las bacterias se exponen al ambiente, se da la formación
de endósporas centrales, las cuales pueden durar años en este mismo.
-Requerimiento de un nivel de bioseguridad 3, para su empleo en prácticas y contención,
incluyendo los laboratorios de experimentación animal.
-Utilización de máscaras de filtro P2 o P3.
-Protección de manos: guantes y mangas impermeables, en tanto no se pueda evitar el
contacto directo con animales o agentes infectados.
-Empleo de pantalla facial al momento de la manipulación de tejidos animales para evitar
posibles salpicaduras de líquido del patógeno.
4. Materiales y Métodos
4.1. Equipos de laboratorio
4.1.1. Baño de agua
El baño de agua o también conocido como baño de maría es un equipo que nos
permite incubar muestras en agua a una temperatura constante durante un largo período de
tiempo. En cuanto a sus partes, tenemos la cubierta que nos permite mantener la
temperatura requerida en el interior del aparato y reducir el índice de evaporación. La
bandeja difusora que contiene una rejilla que impide el contacto directo entre enrollamiento
y los objetos que van a incubarse. En control de llenado y vaciado del agua, también contiene
el tanque donde se almacenan las muestras (ver figura 1).
Figura 1
Equipo de baño de agua.
Fuente: Elaboración propia.
4.1.2. Filtración
Es un equipo de laboratorio que nos permite filtrar partículas no deseadas, tenemos
el equipo de filtración por membrana que consiste en retener en su superficie aquellas
partículas que sobrepasan el tamaño dado (ver figura 2).
Figura 2
Equipo de filtración.
Fuente: Elaboración propia.
4.1.3. Espectrofotómetro
El espectrofotómetro es un equipo que nos permite medir cómo la luz es absorbida y
está constituido por un panel de control para el debido manejo de las funciones, una sala de
muestra, la perilla de ajuste para los cambios pertinentes y la varilla de muestras.
Figura 3
Equipo espectrofotómetro.
Fuente: Elaboración propia.
4.1.4. Congeladoras
A diferencia de las refrigeradoras, en las congeladoras se puede almacenar las
muestras en un tiempo más prolongado debido a que las temperaturas son más bajas.
Figura 4
Equipo congelación.
Fuente: Elaboración propia.
4.1.5. Refrigeradoras
Las refrigeradoras son equipos fundamentales de cualquier laboratorio, ya que
permite mantener es un ambiente controlado diversas muestras, teniendo en cuenta que
mientras más baja sea la temperatura, menor actividad química y biológica.
Figura 5
Equipo de refrigeración.
Fuente: Elaboración propia.
4.1.6. Cabina de flujo laminar
Una cabina de flujo laminar es aquel equipo que se emplea para realizar
procedimientos como: control microbiológico, zonas de muestreo, zonas de pesadas; así
como también en investigaciones científicas. Además, aparte de lo mencionado
anteriormente, también se usa para el cultivo de tejidos vegetales, preparación de placa de
medios, inspección de material electrónico y ensamblaje de dispositivos médicos.
Figura 6
Equipo cabina de flujo laminar.
Fuente: Elaboración propia.
4.1.7. Autoclave
Gracias al diseño que este equipo presenta, permite realizar el proceso de
esterilización con alta presión y vapor, mata organismos, incluidos virus y bacterias
peligrosos, así como también todas sus formas de esporas. Es uno de los métodos más
efectivos y conocidos.
Figura 7
Equipo autoclave.
Fuente: Elaboración propia.
4.1.8. Contador de colonias
Este equipo se usa mayormente en los laboratorios para el control de colonias de
bacterias y/o microorganismos que generalmente crecen en una placa de agar.
Figura 8
Equipo control de colonias.
Fuente: Elaboración propia.
4.1.9. Potenciómetro
Viene a ser un instrumento eléctrico que mide el pH exacto, la temperatura. Hace que
los electrolitos no se vean afectados por la introducción de gases y otros agentes como
oxidantes, reductores o materia orgánica.
Figura 9
Equipo potenciómetro.
Fuente: Elaboración propia.
4.1.10. Centrifugadora
La centrifugadora es un equipo que sirve para la separación de muestras que se
quieran llevar a analizar en el laboratorio por medio de una fuerza centrífuga para acelerar la
decantación de sus componentes o fases (en la mayoría de los casos una sólida y una líquida),
según el nivel de densidad que contenga dicha muestra.
Figura 10
Equipo de centrifugación.
Fuente: Elaboración propia.
4.1.11. Incubadora
La función principal que cumplen en el laboratorio es la de almacenar y acondicionar
el ambiente, con el fin de desarrollar de manera adecuada los microorganismos, mediante la
temperatura, presión y circulación del aire.
Figura 11
Equipo incubadora.
Fuente: Elaboración propia.
4.1.12. Horno
También llamados estufas de secado, son equipos de laboratorio que se utilizan para
secar y esterilizar diferentes recipientes de vidrio o metal. Existen básicamente dos tipos: las
que operan mediante convección natural y las que operan mediante convección forzada.
Figura 12
Equipo horno.
Fuente: Elaboración propia.
4.2. Materiales de laboratorio
4.2.1. Probeta
Recipiente Cilíndrico con base para la estabilidad. Tienen la función de medir
volúmenes exactos.
Figura 13
Probeta de 500 mL.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.2. Gradilla
Equipo de Laboratorio cuya función es mantener en posición vertical varios tubos de
prueba al mismo tiempo.
Figura 14
Gradilla.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.3. Microscopio
Instrumento cuya función es observar y analizar elementos o partículas que son
invisibles a simple vista. Consta de las siguientes partes: Ocular, tubo, Cuerpo del tubo,
Tornillo macrométrico, Revólver, Tornillo micrométrico, Objetivo, Brazo, Diafragma,
Platina, Fuentes de iluminación y Base.
Figura 15
Microscopio.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.4. Placas de Petri
Compuestas de dos cristalizadores, de los cuales el más grande hace de tapa. Tienen
la función de cultivar y aislar los microorganismos.
Figura 16
Placas de Petri.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.5. Pipeta
Tienen la función de medir con precisión y transferir líquidos.
Figura 17
Pipeta.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.6. Tubos de prueba
Recipiente de vidrio cilíndrico con un extremo abierto y el otro cerrado y redondeado,
que tiene la función de contener pequeñas muestras líquidas o sólidas.
Figura 18
Tubos de prueba.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.7. Mechero de Bunsen
Material de metal con una tuerca movediza para medir la intensidad de calor, tiene la
función de quemar y esterilizar sustancias a temperaturas de hasta 1500 °C. Consta de las
siguientes partes: Cañón o Chimenea, Toma de gas, Entrada de aire, Regulador de aire y
Regulador de gas.
Figura 19
Mechero de Bunsen.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.8. Matraz
Recipiente volumétrico útil para la preparación y almacenamiento de soluciones,
colorantes, reactivos, medios de cultivo, etc.
Figura 20
Matraz de 250 mL.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.9. Espátula Drigalsky
Se confeccionan a partir de varillas de vidrio macizo, la fracción recta y horizontal
facilita la siembra y aislamiento de bacterias por diseminación. Tiene la función de extensión
uniforme de los cultivos dentro de una placa de Petri.
Figura 21
Espátula Drigalsky.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.10. Embudo
Instrumento utilizado para canalizar líquidos y materiales sólidos granulares en
recipientes con bocas angostas y calentar muestras.
Figura 22
Embudo.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.11. Balanza analítica
Permite obtener medidas exactas de componentes químicos que son usados en el
laboratorio. Es necesario contar con un buen espacio y un correcto manejo para evitar
errores de cálculo y precisiones de medidas.
Figura 23
Balanza analítica.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.12. Cuentagotas
Como indica su nombre, se utiliza cuando se desea trasvasar pequeñas cantidades de
líquido gota a gota.
Figura 24
Cuentagotas.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.13. Bureta
Es un instrumento de vidrio cuya función es medir volúmenes de líquidos y cuenta
con una llave de paso para controlar la adición del volumen que hemos medido.
Figura 25
Bureta.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.14. Pinzas metálicas
Estas herramientas se emplean para la sujeción de otros materiales de laboratorio,
principalmente matraces y tubos de ensayo con sustancias peligrosas o que se encuentren a
altas temperaturas.
Figura 26
Pinzas metálicas.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.15. Pinzas metálicas de soporte
Estas pinzas no se usan para la movilización de materiales, en cambio, su uso es para
sostenerlos estáticos como parte de la estructura del soporte universal.
Figura 27
Pinza metálica de soporte.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.16. Espátula
Aunque vienen en distintas versiones, algunas de ellas incluyendo cucharilla, su
empleo es el mismo en todos sus tamaños, se emplean para raspar y recoger productos
químicos, principalmente en el pesaje de sustancias en polvo.
Figura 28
Espátula.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.17. Lima
Tiene la función de refinar o cortar materiales de metal o vidrio, existen diferentes
tipos de lima que varían en su forma para un empleo especializado en la manera del refinado
o en el cortado en una forma particular.
Figura 29
Lima.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.18. Frasco lavador
Está hecho de plástico o vidrio, tiene forma de botella y cuenta con una manguera de
látex, que le ayuda en su tarea de lavado de recipientes de vidrio en el laboratorio.
Figura 30
Frasco lavador.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.19. Escobilla
Consta de un mango de alambre enrollado con un cepillo en uno de sus extremos, y se
emplea en la limpieza de tubos de ensayo y recipientes de vidrio del laboratorio de difícil
limpieza por su tamaño o forma.
Figura 31
Escobilla.
Fuente: Elaboración propia.
4.2.20. Mechero de alcohol
Consiste principalmente en un recipiente de vidrio con una tapa rosca del que sale
una mecha y en su interior cuenta con alcohol, se usa en el laboratorio para calentamientos
menores o de baja intensidad y es ideal para prácticas de laboratorio básicas o demostrativas.
Figura 32
Mechero de alcohol
Fuente: Elaboración propia.
4.2.21. Termómetro
Es un tubo fabricado en vidrio que en su interior tiene mercurio que se llega a
extender y dilatar con los cambios de temperatura, permitiendo ver las mediciones en una
escala graduada.
Figura 33
Termómetro
Fuente: Elaboración propia.
4.3. Métodos para esterilizar materiales de laboratorio
4.3.1. Esterilización por Autoclave
Este método consiste en combinar altas temperaturas con el vapor presurizado para
descontaminar los materiales de laboratorio, es el método más accesible y de fácil
manipulación. (ver figura 34)
4.3.2. Esterilización por Cámara a Vapor Seco o Estufa Poupinell
Se aplica mediante hornos o contenedores conectados a corriente para así generar
calor mediante las altas presiones y por supuesto, las altas temperaturas. Se lleva a cabo en
materiales sensibles al vapor de agua como los metales y/ o vidrios. (ver figura 35)
Figura 34:
Diagrama de Esterilización en Autoclave
Fuente: Elaboración propia basada en: Silvestre et. al. (2009), López y García (2013)
Figura 35
Diagrama de Esterilización en Cámara a Vapor Seco (Estufa Poupinell).
Fuente: Elaboración propia basada en López y García (2013).
5. Conclusiones
● En cualquier tipo de práctica o estudio en laboratorio es imprescindible el
conocimiento específico de los instrumentos y su función, tal como los mencionados
anteriormente: gradilla, placas Petri, espátula, pinza, escobilla, mechero; así como los
de medición: probetas, buretas, potenciómetro, espectrofotómetro; almacenadores
(congeladoras, refrigeradoras) y esterilizadores como el autoclave y la cámara de
vapor seco u horno, también llamado estufa.
● Para poder realizar los estudios en laboratorio, se requiere siempre de normas y
equipos de protección personal, ya que se suele manipular instrumentos con
sustancias que pueden ser tóxicas, inflamables o explosivos; y además presentar
microorganismos contaminantes causantes de diversas enfermedades incluso graves.
Esto depende del Nivel de bioseguridad, puesto que al aumentar determinado nivel
existe mayor riesgo, como por ejemplo, el nivel III, donde ya se utilizan las llamadas
cámaras de bioseguridad y otros medios de contención para prevenir alguna
propagación.
● Otro punto importante mencionado en este informe es la esterilización: aquel proceso
que elimina por completo los agentes contaminantes y patógenos (bacterias, hongos,
etc.) en los instrumentos de laboratorio, el cual puede realizarse mediante autoclave
(vapor de agua) y mediante cámara a vapor seco o estufa (vapor seco), el cual este
último se realiza a mayores temperaturas y es más duradero. Antes de emplear
alguno de estos métodos, se debe estudiar y conocer previamente la naturaleza del
instrumento o material a esterilizar para saber a cuál de las dos técnicas encaja.
● Se debe tomar en cuenta que el término desinfección es solamente una eliminación o
limpieza parcial de un material, formando así parte de todo el proceso de
esterilización.
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