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Reporte 5

El proceso de PCR consta de tres etapas: desnaturalización, hibridación y elongación. En la desnaturalización, el ADN se separa en dos cadenas a alta temperatura. En la hibridación, los cebadores se unen al ADN molde a baja temperatura. En la elongación, la polimerasa añade nucleótidos complementarios creando copias de ADN. Estas tres etapas constituyen un ciclo que copia el fragmento de ADN molde.

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Reporte 5

El proceso de PCR consta de tres etapas: desnaturalización, hibridación y elongación. En la desnaturalización, el ADN se separa en dos cadenas a alta temperatura. En la hibridación, los cebadores se unen al ADN molde a baja temperatura. En la elongación, la polimerasa añade nucleótidos complementarios creando copias de ADN. Estas tres etapas constituyen un ciclo que copia el fragmento de ADN molde.

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Reporte 5: reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

¿Cuáles son las etapas de la PCR y qué sucede en cada una de ellas?

El proceso se lleva a cabo en tres fases:


→Desnaturalización, hibridación y elongación.
 En primer lugar, es necesario que el DNA se desnaturalice, es decir, que las dos
cadenas de DNA se separen. Esta es la primera fase que se conoce como
desnaturalización y se lleva a cabo elevando la temperatura a alrededor de 94°C.
 En el siguiente paso consiste en un descenso de la temperatura para permitir que
los cebadores se unan por complementariedad al DNA molde. Esta segunda fase
se conoce como hibridación. Temperaturas habituales en esta fase oscilan entre
35 y 60°C
 Por último, en la fase de elongación o extensión, la enzima polimerasa incorpora
nucleótidos complementarios a partir del extremo 3’ libre de la región en que
han hibridado los cebadores. La temperatura a la que se lleva a cabo esta fase
depende de la enzima polimerasa empleando; si se utiliza taq polimerasa la
temperatura de elongación suele ser de 72°
Por estas tres fases constituyen un ciclo de la [Link] consiguen una copia de un
pequeño fragmento del DNA molde. En este primer ciclo, los fragmentos generados
no tienen el mismo tamaño: la copia de cada una de las cadenas se inicia, a partir del
extremo 3’, en el punto en el que el cebador hibrida con el DNA molde y termina en
el momento en el que la enzima polimerasa no es capaz de añadir más nucleótidos
(es decir, que la nueva cadena formada no tiene un tamaño definido).

Función de los siguientes componentes de la PCR

ADN MOLDE: Se refiere a la cadena de ADN de cadena sencilla que es utilizada para
sintetizar otra molécula de ADN de cadena sencilla o de ARN. Se refiere a la cadena
de ADN de cadena sencilla que es utilizada para sintetizar otra molécula de ADN o
de ARN complementaria.

PRIMERS:Un partidor, cebador, iniciador o primer es una cadena de ácido nucleico o


de una molécula relacionada que sirve como punto de partida para la replicación del
ADN.

ADN POLIMERASA: Son enzimas que catalizan la síntesis de moléculas de ADN a


partir de desoxirribonucleótidos. Tienen un papel clave en la replicación
del ADN permitiendo el paso de información genética a las células hijas de generación
en generación.

dNTP: son nucleótidos que sirven para generar las nuevas cadenas de ADN.

¿Cuál es la importancia del magnesio en la PCR?

→Es un cofactor necesario para la actividad enzimática de las DNA polimerasas. La


concentración óptima de MgCl2 debe determinarse empíricamente para cada
polimerasa, secuencia y par de cebadores.
¿Qué variantes a la técnica convencional de PCR existen?
→Las variantes más empleadas de la PCR: la RT-PCR, la anidada, la multiplex y
la PCR cuantitativa.

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