HEMOGLOBINA Ref.
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Instrucciones de Uso
Finalidad . Sistema para la determinación de la hemoglobina en No refrigerar el reactivo. No almacenar en frasco de plástico.
muestras de sangre total por reacción colorimétrica de punto final.
Lo reactivo no abierto, conservado en las condiciones especificadas, es
estable hasta la fecha de expiración impresa en su rótulo. Durante el
[Solamente para uso diagnóstico in vitro.]
manipuleo, el reactivo está sujeto a contaminaciones de naturaleza
química y microbiana que pueden provocar reducción de la estabilidad.
Principio . El Fe (II) del heme de la hemoglobina, oxihemoglobina y
carboxihemoglobina es oxidado para el estado férrico por el ferricianuro,
Material necesario y no suministrado
formando hemiglobina (Hi), que se combina con el cianuro ionizado para
producir cianuro de hemiglobina (HiCN), que es medido en 540 nm. 1. Fotómetro capaz de medir con exactitud la absorbancia entre 520 y
550 nm.
Caracteristicas del sistema . El pH del Reactivo de Color es más
2. Pipetas para medir muestras y reactivo.
bajo para acelerar la velocidad de la reacción. Fue también añadido un
detergente no iónico para prevenir la aparición de turbiedad. 3. Cronómetro.
4. Estándar de Hemoglobina Ref. 47.
La comparación entre las imprecisiones encontradas en la repetitividad y
en la reproducibilidad demuestra que el sistema de medición es bastante
Muestra
robusto en las regiones de concentraciones significativas para uso
clínico, indicando que tiene un desempeño muy seguro en el día a día. Se debe de crear un Procedimiento Operacional Estándar (POE) que
establezca procedimientos adecuados para recogida, preparación y
El sistema es fácilmente aplicable a analizadores automáticos y almacenamiento de la muestra. Subrayamos que los errores debidos a la
semiautomáticos capaces de medir con exactitud la absorbancia en muestra pueden ser bastante mayores que los errores acaecidos durante
540 nm. el procedimiento analítico.
Metodologia . Cianuro de hemiglobina (HiCN). Usar sangre total (citrato, EDTA o oxalato), que puede ser almacenado
como mínimo 7 dias a 4 ºC.
Reactivos Valores de hemoglobina falsamente elevados pueden ocurrir con el uso
de torniquete por tiempo prolongado.
1. 1 - Reactivo de Color - Concentrado - Conservar entre 15 - 25 ºC.
Contiene ferricianuro de potasa 60,7 mmol/L, cianuro de potasa Como ningún test conocido puede asegurar que muestras de sangre no
76,8 mmol/L y surfactante. transmiten infecciones, todas ellas deben ser consideradas como
No refrigerar. Veneno - Manejar con cautela. potencialmente infectivas. Así siendo, deberan ser manipuladas
siguiendo las normativas establecidas para biosseguridad.
Lo reactivo no abierto, conservado en las condiciones especificadas, es
estable hasta la fecha de expiración impresa en su rótulo. Durante el Para deshacerse de los reactivos y el material biológico, sugerimos
manipuleo, el reactivo está sujeto a contaminaciones de naturaleza aplicar las normativas locales, regionales o nacionales de protección
química y microbiana que pueden provocar reducción de la estabilidad. ambiental.
Precauciones y cuidados especiales Interferencias
No utilizar el Reactivo de Color de uso cuando se muestre turbio o Valores de Bilirrubina de hasta 38 mg/dL y Triglicéridos hasta 250 mg/dL
desteñido. no producen interferencias significativas.
Se deben de aplicar los cuidados habituales de seguridad en la Valores de Triglicéridos mayores que 250 mg/dL producen resultados
manipulación de reactivos. falsamente elevados.
El reactivo contiene cianuro de potasa que es veneno. Se debe de tomar Preparacion del reactivo de color . Añadir el contenido de un
cuidado para evitar la ingestión y en caso de contacto con los ojos, lavar frasco (10 mL) a 990 mL de agua destilada o desionizada y mezclar.
inmediatamente con gran cantidad de agua y procurar ayuda médica. Estable 6 meses en frasco ámbar, entre 15 - 25 ºC.
No deshacerse del reactivo de color concentrado, de uso o el utilizado en El agua debe de tener una resistividad ≥1 megaohms o una conductividad
la dosificación en pilas y recipientes que contengan residuos de ácido ≤1 microsiemens y concentración de silicatos <0,1 mg/L.
sulfúrico.
01 Espanhol - Ref.: 43
No refrigerar. No almacenar en frasco de plástico. Calibración
Procedimiento Trazabilidad del Sistema
La absortividad milimolar de la hemoglobina es utilizada como sistema de
referencia para la calibración del ensayo. La calibración del fotómetro
utilizado es trazable al Standard Reference Material (SRM) 931 del
Test
National Institute of Standards and Technology (NIST).
Reactivo de color de uso 5,0 mL
Sangre total 0,02 mL Calibraciones manuales
Calibración de 2 puntos:
Cuando el control interno de la calidad indicar;
Homogeneizar y esperar 5 minutos. Determinar la absorbancia del test en Cuando utilizar nuevo lote de Reactivos o cuando cambiar de frasco;
540 nm o filtro verde (520 a 550), ajustando el cero con agua destilada.
El color es estable por varias horas. Obtener el valor en g/dL, utilizando el
factor de calibración obtenido con el Patrón de Hemoglobina-Labtest Linealidad
(Ref. 47). El resultado de la medición es lineal hasta 25 g/dL.
El procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros
Control interno de la calidad . El laboratorio debe mantener un
cuyo volumen mínimo de solución para lectura es igual o menor que
programa de control interno de calidad que defina con claridad los
5,0 mL. Se debe de hacer una verificación de la necesidad de ajuste del
reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para
volumen para el fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y reactivo
especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones
pueden ser modificados proporcionalmente sin perjuicio para el
correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados
desempeño del test y el procedimiento de cálculos se mantiene
para evaluar la imprecisión e desviaciones de calibración. Se sugiere que
inalterado. En caso de reducción de los volúmenes, es fundamental que
las especificaciones para el coeficiente de variación máximo y el error
se observe el volumen mínimo necesario para la lectura fotométrica. 3,4
total sean basados en los componentes de la variación biológica (VB) .
Volúmenes de la muestra menores que 0,01mL son críticos en
aplicaciones manuales y se deben de usar con cautela porque aumentan
la imprecisión de la medición.
Valores de referencia . Estos valores se deben de usar tan solo a
modo de orientación. Se recomienda que cada laboratorio establezca, en
la población atendida, su propia banda de valores de referencia.
Calculos
Hombres . 12,5 a 17,5 g/dL
El cálculo se debe de hacer utilizando el producto Patrón de Hemoglobina
Labtest (Ref. 47). Mujeres . 11,5 a 15,5 g/dL
Absorbância del test
Conversión . Unidades Convencionales (g/dL) x 0,621 = mmol/L
Hemoglobina (g/dL) = x 10
Absorbância do patrón 5
Caracteristicas del desempeño
Ejemplo
Exactitud . En dos muestras con valores iguales a 7,3 y 8,0 g/dL se
Absorbancia del test = 0,364 añadieron cantidades distintas del analito, obteniéndose recuperaciones
Absorbancia del Patrón = 0,280 de entre 99 y 103%. El error sistemático proporcional medio, obtenido en
un valor del 10,0 g/dL fue igual al 0,1 g/dL o 1%.
0,364
Hemoglobina (g/dL) = X 10 = 13
0,280 Especificidad . El método propuesto fue comparado con un método
similar, utilizando 80 muestras con valores situados entre el 5,0 y
Debido a la gran reproducibilidad que puede ser obtenida con la 24,9 g/dL. La comparación resultó en la ecuación de la regresión: y =
metodología, se puede utilizar el método del factor. 1,03x - 0,23 y un coeficiente de correlación (r) igual a 0,986. El error
sistemático total (constante y proporcional) verificado en el limite de
10
decisión (10 g/dL), fue igual al 0,07 g/dL o 0,7%. Como las muestras
Factor de Calibración =
Absorbancia del Patrón fueron seleccionadas aleatoriamente en pacientes de ambulatorio y
pacientes hospitalizados, se puede inferir que el método tiene una
Hemoglobina (g/dL) = Absorbancia del test x Factor especificidad metodológica adecuada.
Ejemplo
Repetitividad - imprecisión intra-ensayo
10 CV (%)
N Media DE
Factor = = 35,7
0,280 Muestra 1 20 9,6 0,12 1,2
Muestra 2 20 17,1 0,23 1,4
Hemoglobina (g/dL) = 0,364 x 35,7 = 13
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Reproducibilidad - imprecisión total Referencias
N Media DE CV (%)
1. Drabkin DL., Austin JH. J Biol Chem [Link].
Muestra 1 20 9,1 0,15 1,5
Muestra 2 20 16,5 0,23 1,4 2. Henry RJ, Cannon DC, Winkelman JW. Clinical Chemistry, Principles
and Technics, 2nd Ed. New York, Harper & Row, 1974.
Sensibilidad metodológica . Una muestra proteica sin contener 3. Westgard Jo, Groth T. Clin Chem 1981;27:493-501.
Hemoglobina fue utilizada para calcular el límite de detección del ensayo,
habiendo sido encontrado un valor igual a 0,39 g/dL, equivalente al 4. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular,
promedio de 20 ensayos más dos desviaciones estándar. Utilizándose la B a s e d e D a t o s d e Va r i a c i ó n B i o l ó g i c a . D i s p o n í v e l
absorbancia del patrón como parámetro, el límite de detección em:<[Link] ticle/ar ticleview/330/1/170>
fotométrica es 0,04 g/dL, correspondiendo a una absorbancia igual a (acesso em 04/2006).
0,001.
5. Labtest: Datos de Archivo.
Efectos de la dilución de la matriz . Dos muestras con valores
iguales a 27,4 y 24,0 g/dL fueron utilizadas para evaluar la respuesta del Presentación
sistema en las diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/L (0,85%).
Usando factores de dilución que variaron de 2 a 4, se encontraron Producto Referencia Contenido
recuperaciones de entre 100 y 109%. Hemoglobina 43 1 2 x 10 mL
Observaciones
Están disponibles las aplicaciones para sistemas automáticos.
1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores
fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de Informaciones al consumidor
resultados correctos.
[Términos y Condiciones de Garantía]
2. El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos y Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto dentro de
precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa las especificaciones hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos,
potencial de errores analíticos. El agua desionizada o destilada utilizada siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en
en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así, los rótulos y en estas instrucciones sean seguidos correctamente.
para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en
enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad ≥1 [Link] o
conductividad ≤1 microsiemens/cm y concentración de silicatos Labtest Diagnóstica S.A.
<0,1 mg/L. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones, Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - [Link]
deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los Servicio de Apoyo al Consumidor e-mail: sac@[Link]
resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer
un programa de control de la calidad del agua.
Revisión: Junio, 2009 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
Ref.: 010414 Reproducción bajo previa autorización
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04 Espanhol - Ref.: 43
