UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN

INGENIERÍA QUÍMICA

LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA

“INVESTIGACIÓN PREVIA : “ Cromatografía en capa fina ”

ALUMNOS:
FLORES MARTINEZ ERICK
SALDAÑA GARCIA SANTIAGO ROMAY

DOCENTEs:
GÓMEZ ANZALDO LAURA
GARCÍA ESTRADA JOSÉ GUADALUPE

EQUIPO 5
GRUPO:2451 A

SEMESTRE 2023-II
1. Objetivo (s)
● Utilizar la cromatografía como un método de separación de compuestos de una
mezcla, además de utilizarla como posible método de purificación o identificador de
estos.
● Identificar las características y los factores que intervienen en la técnica de
cromatografía de capa fina
2. Define los siguientes términos:
● a) Cromatografía: La cromatografía es un método muy utilizado en todas las
ramas de la ciencia que permite la separación, identificación y determinación de los
componentes químicos en mezclas complejas.
Para ello emplea el principio de la retención selectiva, que consiste en el distinto
comportamiento de los componentes de una mezcla sobre un soporte específico
(como un papel, un gas, un líquido, una resina) y una fase líquida o gaseosa que
fluye a través del soporte. En general, todos los tipos de cromatografía dependen de
una serie de instrumentos, compuestos químicos y determinada tecnología.

● b) Fase móvil: La fase móvil se trata de un fluido que penetra a través o a lo largo
del lecho estacionario moviéndose en una dirección determinada. Este fluido en
cuestión puede tratarse de un líquido, un gas o un fluido supercrítico.
La fase móvil, por lo tanto, es un momento o etapa que se usa para portar la mezcla
y que se lleva a cabo a través de una columna cromatográfica y de la fase
estacionaria. De hecho, el estado físico de la fase móvil delimita, marca y determina
la primera división de los métodos cromatográficos.

● c) Fase estacionaria: La fase estacionaria consiste en una capa delgada de un

adsorbente (como por ejemplo gel de sílice, alúmina o celulosa) depositada sobre un
soporte plano como una placa de vidrio, o una lámina de aluminio o de plástico.

● d) Revelador: Un revelador es un reactivo que se utiliza para dar color a una

sustancia incolora. También se denomina colorante, reactivo revelador o reactivo
tintóreo. La mayoría de los reveladores son destructivos y reaccionan con la
sustancia del papel o la placa. El uso de un revelador ayuda a localizar manchas en
una hoja de papel o en una placa de TLC.

3. Realiza una tabla que describa las características de compuestos que pueden ser
empleados

Caracteristicas del eluyente Características del absorbente

Menos polar que la fase estacionaria Componente polar sólido.

Líquido o gas. Debe ser inerte con las sustancias a
Los componentes que se desplacen con analizar y no actuar como catalizador en
mayor velocidad serán los menos polares. reacciones de descomposición.
Eluyentes polares rompen mejor las El tamaño de las partículas del adsorbente:
uniones muestra-fase estacionaria. cuanto más finamente dividido esté mayor
Eluyentes no polares no rompen las será su adhesión al soporte.
uniones muestra-fase estacionaria.
 Polaridad de los compuestos orgánicos en orden creciente:
hidrocarburos < olefinas < flúor < cloro < nitro < aldehído
aldehído < éster < alcohol < cetonas < aminas < ácidos < amidas

Sustancias que pueden utilizarse Sustancias que pueden utilizarse

como eluyentes como adsorbente

La gel de sílice se utiliza para Gel de sílice (SiO2)

separar sustancias más polares Alúmina (Al2O3)
como:
● Alcoholes
● Aminas.
● Ácidos carboxílicos.
La alúmina anhidra es el más activo
de los dos, es decir, es el que retiene
con más fuerza a los compuestos; por ello
se utiliza para separar compuestos
relativamente apolares

como fase móvil y fase estacionaria, así como ejemplos de sustancias químicas que pueden
utilizarse, como fase móvil y fase estacionaria
4. Métodos cromatográficos:
● Cromatografía de reparto: La cromatografía de líquidos de alta eficacia
(HPLC) más empleada en la actualidad es la cromatografía de reparto, en la cual la
fase estacionaria es un líquido retenido sobre un soporte sólido y la separación se
debe a la diferente distribución del analito entre la fase móvil y la fase estacionaria:

1. Cromatografía líquido-líquido: la fase estacionaria líquida se retiene

en las partículas de relleno mediante adsorción física.
2. Cromatografía de fase unida químicamente: la fase estacionaria establece
enlaces con la superficie del soporte.

La primera resulta problemática en la elución en gradiente y por pérdida de fase

estacionaria, por lo que la cromatografía de fase unida químicamente es la más
utilizada.

● Cromatografía de intercambio iónico: La cromatografía de intercambio iónico

se lleva a cabo con empaques de columna que tiene grupos funcionales cargados
unidos a una matriz polimérica. El mecanismo de retención más común es el
intercambio simple de los iones de la muestra y de la fase móvil con el grupo
cargado de la fase estacionaria.
En el caso de empaques cargados negativamente sirven para intercambiar especies
catiónicas. Los empaques cargados positivamente se utilizan para el intercambio
con especies aniónicas. Ambos grupos funcionales están totalmente disociados. Así,
sus propiedades de intercambio son independientes del pH de la fase móvil.

● Cromatografía de adsorción: En la cromatografía de adsorción o cromatografía

líquido-sólido, es la fase estacionaria en un sólido, habitualmente sílice, aunque en
algunas ocasiones se emplea alúmina finamente dividida
 El fundamento de la cromatografía de adsorción es similar al de la cromatografía de
reparto en fase normal (de hecho el reparto muchas veces se debe a la adsorción).
En este caso, el índice de polaridad descrito para la cromatografía de reparto
también puede servir de orientación, sin embargo, en cromatografía de adsorción es
más conveniente aplicar la denominada fuerza eluyente (εº) de los disolventes , que
es la energía de adsorción por unidad de área. Los valores de εº de los disolventes
dependen del adsorbente empleado como fase estacionaria, y para la sílice son 0’8
veces mayores que para la alúmina.

● Cromatografía en capa fina o capa delgada: La cromatografía en capa fina se

basa en la preparación de una capa, uniforme, de un adsorbente mantenido sobre
una placa de vidrio u otro soporte. Los requisitos esenciales son, pues, un
adsorbente, placas de vidrio, un dispositivo que mantenga las placas durante la
extensión, otro para aplicar la capa de adsorbente, y una cámara en la que se
desarrollen las placas cubiertas. Es preciso también poder guardar con facilidad
las placas preparadas y una estufa para activarlas.
● Cromatografía en columna: Es quizás el método más general, utilizado para la
separación, a la vez que para la purificación, de diferentes compuestos orgánicos
que se encuentren en estado sólido o líquido. En este tipo de cromatografía, la fase
estacionaria utilizada, es decir, el absorbente, se coloca en el interior de una
columna de vidrio, la cual finaliza con una llave para controlar el paso de sustancias
al exterior de la columna. La fase estacionaria se impregna con el eluyente o fase
móvil. Seguidamente la mezcla orgánica que nos interesa separar la depositamos
por la parte superior de la fase estacionaria, y así la fase móvil podrá ir atravesando
el sistema.
● Cromatografía líquida: La fase móvil es un disolvente o mezcla de disolventes y
la fase estacionaria un sólido que interactúa con las sustancias que se desea
separar (cromatografía líquido-sólido), o bien un líquido inmiscible con la fase móvil,
depositado en la superficie de un sólido (cromatografía líquido-líquido). Esta forma
de cromatografía puede realizarse con diferentes arreglos experimentales: en
columna, en capa delgada o en papel.
● Cromatografía de gases: En este caso la fase móvil es un gas inerte (helio o
nitrógeno) y la fase estacionaria es un sólido (cromatografía gas-sólido) o un líquido
“sostenido” por un sólido inerte (cromatografía gas-líquido). Este tipo de
cromatografía siempre es en columna, ya que es la única manera de que la fase
móvil gaseosa se mantenga fluyendo, confinada dentro del sistema.
● Cromatografía gas-líquido: Este tipo de cromatografía siempre es en columna,
ya que es la única manera de que la fase móvil gaseosa se mantenga fluyendo,
confinada dentro del sistema. La columna puede estar rellena con la fase
estacionaria, en forma semejante a la cromatografía líquida, o bien la fase
estacionaria puede depositarse sobre las paredes de un tubo muy delgado
(0.25mm de diámetro) y largo (hasta 100m). Este tipo de columnas se conocen
como columnas capilares y proporcionan la mayor capacidad de separación.
 ● Cromatografía en papel: Es un proceso muy utilizado en los laboratorios para
realizar análisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica potente no requiere
de ningún tipo de equipamiento. La fase estacionaria está constituida simplemente
por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando
pequeñas gotas de la disolución y evaporando el disolvente. Luego el disolvente
empleado como fase móvil se hace ascender por capilaridad. La separación se
realiza en función de la afinidad de los solutos con las dos fases, las más solubles
en agua se quedarán cerca del punto donde se aplicó la muestra, y las menos
solubles en agua y más solubles en el disolvente llegarán más lejos. Las
sustancias separadas se identifican mediante diversos procedimientos físicos o
químicos

5. ¿Cómo preparar una placa para cromatografía en capa fina?

Una placa de CCF es una lámina de vidrio, metal o plástico recubierta con una capa
delgada de un sólido adsorbente (gel de sílice o alúmina). Se deposita una pequeña
cantidad de la muestra problema en disolución en un punto en la parte inferior de la placa.
Entonces la placa se introduce en una cubeta cromatográfica, de forma que sólo la parte
inferior de la placa queda sumergida en el líquido. Este líquido o eluyente es la fase móvil y
asciende por la placa de CCF por capilaridad.

A medida que el eluyente pasa por el lugar donde está la mancha de la mezcla problema se
establece un equilibrio entre las moléculas de cada uno de los componentes en la mezcla
que son absorbidas y las que se encuentran en disolución.

En principio, los componentes se diferenciarán en solubilidad y en la fuerza de su adsorción,

de forma que unos componentes se desplazarán más que otros. Cuando el eluyente llega a
la parte superior de la placa, ésta se saca de la cubeta, se seca, y los componentes
separados de la mezcla se visualizan.

6. ¿Cómo se prepara una columna?

La muestra que se quiere separar se deposita en la parte superior de este soporte. El resto
de la columna se llena con el eluyente (disolvente que constituye la fase móvil) que, por
efecto de la gravedad, hace mover la muestra a través de la columna. Se establece un
equilibrio entre el soluto absorbido en la fase estacionaria y el disolvente eluyente que fluye
por la columna. Debido a que cada uno de los componentes de una mezcla establecerá
interacciones diferentes con la fase estacionaria y la móvil, serán transportados a diferentes
velocidades y se conseguirá su separación. Así, de manera similar a otros tipos de
cromatografía, las diferencias en las velocidades de desplazamiento a través del medio
sólido se corresponden con diferencias en los tiempos de elución por la parte inferior de la
columna para cada uno de los componentes de la muestra original, que se recogerán en
fracciones diferentes.
La polaridad del eluyente afecta las velocidades relativas con las que los diferentes
componentes de la mezcla se mueven en la columna. Los disolventes polares compiten
más eficientemente con las moléculas polares de una mezcla por los lugares polares del
adsorbente. Por lo tanto, un disolvente polar desplazará las moléculas, incluyendo las más
polares, rápidamente a través de la columna. Si el disolvente es muy polar la elución será
muy rápida y generalmente habrá poca separación de los componentes de la mezcla. Si por
el contrario el disolvente es muy apolar, no eluyen los compuestos de la columna. Por lo
tanto, la elección del eluyente es crucial para el éxito de la cromatografía en columna. A
menudo se utiliza un gradiente creciente de polaridad para la elución. La CCF se utiliza para
determinar y elegir el sistema disolvente adecuado para cada separación.
7. Tipos de reveladores y ejemplos
Los reveladores más comunes para cromatografía en capa fina son las
manchas de color. Las incoloras pueden revelarse mediante:
● a) Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase
estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F25a ó F366), el
número que aparece como subíndice nos indica Ia longitud de onda de
excitación del indicador utilizado.
● b) La introducción de la placa en vapores de yodo: se introduce durante
unos minutos la placa en un tanque que contenga unos cuantos cristales de yodo, se
observan manchas de tonos pardos que desaparecen cuando se saca la placa del
tanque, por lo tanto se recomienda marcar las manchas con un lápiz para que
tengamos una posterior referencia.
● c) El rocío con una solución de agua H2SO a 1:1 (dentro de un
compartimiento especialmente protegido y bajo una campana de extracción de
gases). Después calentar intensamente, por ejemplo, con un mechero. hasta
carbonizar los compuestos.

8. Propiedades de reactivos y productos

CLOROFORMO Líquido incoloro, olor dulce Carcinógeno humano

característico, muy volátil. potencial. LD50 (en ratas): 1
Punto de fusión: -63.5 oC g/Kg.
Punto de ebullición: 61.26ºC LDLo (oral en humanos):
Miscible con etanol, benceno, 140 mg/Kg LCLo (inhalado
éter dietílico, éter de petróleo, en humanos): 25000 ppm/5
tetracloruro de carbono, min
disulfuro de carbono y LC50 (inhalado en ratas):
acetona 47.7mg/m3 Irritación a ojos
de conejos:148 mg; 20
mg/24h. Moderada.

METANOL LD50 oral (rata): 1187 - 2769

Líquido incoloro, de olor mg/kg
pungente Punto de fusión: LD50 der (conejo): > 2000
-97.8 °C mg/kg
Punto de ebullición (°C): 64.7 LC50 inh. (rata, 4hs.): 85,3
(760 mm de Hg).Solubilidad mg/l
(20°C): Miscible en agua,
etanol, éter, acetona y
cloroformo
Soluble en la mayoría de los
solventes orgánicos
9. Diagrama de flujo del procedimiento experimental ecológico

10. Referencias
● "Cromatografía". Autor: Dianelys Ondarse Álvarez. De: Argentina.
Para: [Link]. Disponible en: [Link]
Última edición: 15 de julio de 2021. Consultado: 14 de marzo de 2023
● Chemistry Libre Texts, Organic Lab Techniques, Chromatography, TLC,
Visualising TLC Plates. Lisa Nichols [Fecha de acceso: 10 de marzo de 2023].