UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA Y METALURGIA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA QUÍMICA

QUÍMICA ORGÁNICA II (QU-243)

PRACTICA N° 6
IDENTIFICACIÓN Y REACCIONES DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

PROFESOR DE TEORÍA: Ing. Alcira Irene, Córdova Miranda

PROFESOR DE PRÁCTICA: Ing. Alcira Irene, Córdova Miranda
ESTUDIANTES:
- Corilla Loa Jaharish Rolando
- Candiotti Silvera Nick Adonai
- Canchohuaman Simon Milca Gady
- Escalante Espino Climis Clinton
DIA DE PRÁCTICA: martes HORA: 4:00 A 7:00pm
FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRACTICAS: 03/01/2023
FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: 10/01/2023

AYACUCHO - PERÚ
2022
OBJETIVOS
- Identificar aminoácidos y proteínas con los distintos métodos de identificación y reconocer
cual es el más efectivo para cada una de ellas.
- Reconocer la parte que reacciona con los reactivos de reconocimiento
- Entender la importancia de la desnaturalización proteica y sus características físicas
MARCO TEORICO
PRUEBA DE BIURET
La reacción o prueba de Biuret es un método que detecta la presencia de compuestos de tres o más
enlaces peptídicos y, por tanto, sirve para todas las proteínas y péptidos cortos. El reactivo de Biuret
consiste en una solución acuosa de sulfato cúprico (𝐶𝑢𝑆𝑂4 ) en medio alcalino (𝑁𝑎𝑂𝐻). Este reactivo da
un ensayo positivo con los enlaces peptídicos entre aminoácidos, cuando la solución queda de color
violeta. Esto se debe a que el cobre tiene la propiedad de formar iones complejos, especialmente entre
los enlaces peptídicos.

PRUEBA DE NINHIDRINA
Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo libre, reaccionan con
la ninhidrina. La positividad se manifiesta por la aparición de un color violáceo o amarillo. Debido a que
las proteínas y los aminoácidos poseen esta característica, la reacción sirve para identificarlos.
PRUEBA DE MILLON
La reacción es debida a la presencia del grupo hidroxifenílico (𝐶6 𝐻4 𝑂𝐻) en la molécula proteica.
Cualquier compuesto fenólico no sustituido en la posición 3,5 como la tirosina, fenol y timol, dan
positiva la reacción. El mecanismo de la reacción es poco conocido, posiblemente por la formación del
complejo óxido de mercurio y fenol.

REACCION XANTOPROTÉICA
Es una reacción que reconoce los aminoácidos que poseen el grupo bencénico (tirosina, fenilalanina,
triptófano). Las proteínas que tienen en su composición estos aminoácidos también darán la reacción.
La positividad se reconoce por la aparición de un color amarillo o verde debido a la formación de
nitrocompuestos.

MATERIALES Y REACTIVOS

materiales reactivos
- Tubos de ensayo - Clara de huevo
- Pinzas - Serina
- Baño maría - Leucina
- Mechero - Asparagina
- Vaso precipitado - Etanol
- Varilla de agitación - Ácido clorhídrico
- Ácido nítrico concentrado
- Hidróxido de sodio
- Sulfato cúprico
- Ninhidrina
- Reactivo de millón
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
ENSAYO N°1. COAGULACIÓN
Disponer de 6 tubos de ensayo, a cada uno echar 2 mL de la solución de clara de huevo. El primer tubo
calentar lentamente y observar, al segundo tubo agregar 4 mL de etanol, al tercero añadir gotas de
ácido clorhídrico concentrado, al cuarto agregar ácido nítrico concentrado y al quinto agregar 1 mL de
NaOH al 40%. El sexto tubo se usa para comparar. Observar y anotar los casos en los que se ha habido
coagulación.

Resultados de la practica en orden de izquierda a derecha

Coagulación
proteína calor etanol 𝐻𝐶𝐿 𝐻𝑁𝑂3 𝑁𝑎𝑂𝐻
Clara de Si coagula Si coagula Si coagula Si coagula Coagula
huevo parcialmente
Observaciones :
- las soluciones tratadas precipitan a la proteína de la clara de huevo.
- La efectividad de la coagulación es dependiente de la pureza del reactivo a tratar.
- La coagulación sucede por la desnaturalización de las proteínas, cambiando su geometría
molecular y perdiendo características físicas, esta desnaturalización puede ocurrir por el
aumento de temperatura, acción química, como la reacción de un ácido, o simplemente por
la agitación de esta.
ENSAYO N°2. REACCION DE BIURET
En un tubo de ensayo echar 1 mL de la solución de clara de huevo, agregar 1 mL de NaOH al 40%, luego
añadir gota a gota una solución de sulfato cúprico al 1%, agitar y continuar añadiendo hasta notar
cambio. Repetir el ensayo con los aminoácidos: serina, leucina, asparagina.

Resultados de la practica clara de huevo, serina, leucina y asparagina

PROTEINA-AMINOACIDO REACCION DE BIURET

CLARA DE HUEVO Coloracion violeta
SERINA Coloracion azul
LEUCINA Coloracion Azul claro
ASPARAGINA Coloracion azul
Reacción:
Observaciones:

- Con la clara de huevo, la tonalidad de la muestra se torno de un violeta oscuro, pero con los
demás aminoácidos, el color fue variando en tonalidades de azul y celeste.
- La reacción de biuret se caracteriza por el color violeta después de la reacción, confirmando
así la presencia de enlaces peptídicos en la clara de huevo, mientras que en los aminoácidos
no reconoce el enlace y no forma el complejo.

ENSAYO N°3. REACCION XANTOPROTEICA

Echar en un tubo de ensayo 2 mL de la solución de clara de huevo, añadir 1 mL de HNO3 concentrado,
calentar en bañomaría por 2-3 minutos, enfriar y añadir NaOH al 40% hasta que la solución sea
fuertemente alcalina. Observar los cambios de coloración y otros detalles. Repetir el ensayo con
soluciones de aminoácidos.
PROTEINA-AMINOACIDO REACCION XANTOPROTEICA
CLARA DE HUEVO Coloracion amarilla blanquecina completa
SERINA Coloracion amarilla-transparente
LEUCINA Coloracion amarilla-transparente
ASPARAGINA Coloracion amarilla-transparente

Reacción: Resultados de la practica clara de huevo, serina, leucina y asparagina

Observaciones:
- La reacción es notoria con la muestra de clara de huevo, inicia con la coloración general de
toda la solución de un naranja amarillento, después de un tiempo, la coloración de
generaliza a un amarillo blanquecino y en la parte superior se forma un sólido-liquido de
color naranja, en las otras muestras la solución se tiño de un amarillo muy bajo, casi
incoloro, indicando que no hubo reacción.
- La reacción xantoproteica reconoce en las proteínas los aminoácidos que poseen anillos
aromáticos en su estructura, en caso de la clara de huevo, la albumina posee fenilalanina y
triptófano, aminoácidos que poseen anillos aromáticos en su estructura.

Fenilalanina y triptófano

ENSAYO N°4. PRECIPITACION DE PROTEINAS

Disponer de 6 tubos de ensayo, al primero echar 5 mL de agua, al segundo 5 mL de la solución de clara
de huevo, al tercero 5 mL de agua y 4 gotas de HCl al 10%, al cuarto 5 mL de solución de clara de huevo
y 4 gotas de HCl al 10%, al quinto 5 mL de agua y 4 gotas de solución de NaOH al 10%, al sexto 5 mL de
solución de clara de huevo y 4 gotas de NaOH al 10%. A cada tubo agregar 2 mL de solución de sulfato
de cobre al 10% y observar los resultados.

Tubo 1, 2, 3, 4, 5 y 6 respectivamente

N° tubo Precipitación de proteínas

1. Agua No precipita, coloración azul
2. Clara de huevo Precipita, formación de un enturbiamiento blanco
3. Agua y 𝐻𝐶𝑙 al 10% No precipita, coloración azul
4. Clara de huevo y 𝐻𝐶𝑙 al 10% Precipita, formación de un enturbiamiento blanco
5. Agua y 𝑁𝑎𝑂𝐻 al 10% No precipita, coloración azul
6. Clara de huevo y 𝑁𝑎𝑂𝐻 al 10% Precipita, formación de dos fases, una blanca
traslucida y azul en lo profundo
Observaciones:
- En las muestras de proteínas y aminoácidos, junto con los reactivos agregados se observa la
precipitación de las proteínas
- Esta precipitación ocurre por la acción química del sulfato de cobre y las respectivas bases y
ácidos; las proteínas se desnaturalizan y precipitan en la muestra
- Esta reacción puede ayudar a separar proteínas de muestras.
ENSAYO N°5. REACCION CON LA NINHIDRINA
En un tubo de ensayo echar 1 mL de una solución de aminoácido, luego agregar 5 gotas de la solución de
ninhidrina, calentar a ebullición por 2-5 minutos. Una coloración azul o violeta indica presencia de un
aminoácido. Repetir el ensayo con otros aminoácidos y con la solución de clara de huevo.

Muestras de la clara de huevo, serina, leucina

PROTEINA-AMINOACIDO REACCIONy asparagina respectivamente
CON NINHIDRINA
CLARA DE HUEVO Coloración rojo oscuro con formación blanca en la base
SERINA Coloracion Azul oscura
LEUCINA Coloración azul oscuro-claro en la base
ASPARAGINA Coloracion purpura oscura
Reacción:
Observaciones:
- En dos aminoácidos la coloración si es azul, como indica el ensayo, pero en los otros dos que
son la asparagina y la clara de huevo, la coloración difiere entre un rojo y purpura.
- La reacción con ninhidrina localiza al amoniaco, aminas primarias o secundarias libres, y da
la coloración característica de esta prueba. Esta reacción sirve para identificar proteínas y
aminoácidos.
- En todas las muestras la ninhidrina reacciono de forma adecuada, confirmando la
composición de los aminoácidos y proteínas.
ENSAYO N°6. REACCION DE MILLON
En un tubo de ensayo echar 2 mL de la solución de clara de huevo, agregar 5 gotas del Reactivo de
Millon y calentar en un baño de agua hirviendo por 10 minutos, enfriar a temperatura ambiente y
agregar 5 gotas de solución de nitrato de sodio. La aparición de un color rojo ladrillo indica un resultado
positivo.

Observaciones:
- La reacción da resultado positivo, se formo un solido purpura-rojizo, confirmando la
efectividad de la reacción, primero se formó un precipitado blanco y al calentarse este
cambio de color a purpura-rojizo.
- La reacción de millón identifica aminoácidos azufrados y arginina, como la albumina,
proteína de la clara de huevo, contiene arginina, la reacción es positiva.

CONCLUCIONES:

- La coagulación ocurre por la desnaturalización de las proteínas, es por esto que cambian sus
propiedades físicas.
- La reacción de biuret identifica enlaces peptídicos propios de las proteínas.
- Las proteínas precipitan por la acción química de las bases, ácidos, etc.
- La precipitación de proteínas se puede utilizar para separar estas de una solución.
- La ninhidrina localiza a las aminas primarias, secundarias y al amoniaco, formando así la
coloración violeta que confirma la reacción.
- La reacción de millón identifica a los aminoácidos azufrados y la arginina; esta reacción es
ideal para identificar proteínas pues casi todas poseen arginina en su estructura.
CUESTIONARIO:
1. ¿Es adecuada la reacción de ninhidrina para distinguir aminoácidos de proteínas? Explique.

Si es una buena opción para identificar aminoácidos y descartar proteínas, pues el resultado de
reacción entre una proteína y un aminoácido es muy diferente, en la práctica, los aminoácidos
en la reacción se pintaron de distintas tonalidades de azul-purpura, mientras que la proteína
formaba un enturbiamiento blando en la base y era de un color rojizo.

2. Explique el uso y la importancia de la reacción de Biuret

La reacción de biuret es importante para poder identificar proteínas pues esta reacción nos
indica la presencia de enlaces peptídicos con los cuales forma el complejo violeta, la reacción
consiste en la formación de un complejo de coordinación que le da la coloración propia a la
reacción.

3. ¿Con que reacción distinguiría usted, un aminoácido de una proteína?

Para distinguir un aminoácido de una proteína usaría la reacción de ninhidrina, que identificaría
los aminoácidos con la coloración azul de la reacción, o también podría usar la reacción de
biuret, que me diferenciaría la proteína del aminoácido.

4. Escriba la formula estructural de la tirosina e identifique el grupo responsable de la reacción

de Millon.

La parte que reacción con el reactivo es el radical del aminoácido, en este caso es el 4-metilfenol

5. ¿Qué otros aminoácidos dan positiva a la reacción de Millon?

La prueba de millón identifica aminoácidos azufrados como por ejemplo, la metionina y la
cisteina

Metionina
 cisteina

6. ¿La Lisina podría dar positiva a la reacción Xantoprotéica? ¿Por qué?

La reacción xantoproteica se caracteriza por identificar aminoácidos con anillos aromáticos en

su estructura, la lisina no posee un anillo aromático, por lo tanto, no podría reconocerla

Lisina

BIBLIOGRAFIA
- [Link]
%20o,debe%20ingerirse%20con%20la%20dieta).
- [Link]
- QUIMICA ORGANICA. L.G Wade
- QUIMICA ORGANICA. Paula Yurkanis Bruice.