MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS

Candida spp. y Cryptococcus spp.

MÉTODOS CONVENCIONALES – IDENTIFICACIÓN PRESUNTIVA

MACROMORFOLOGÍA Color de la colonia, luz reflejada, superficie, borde de la

colonia, consistencia, aspecto.

Agar harina de maíz con tween 80 al 1%, agar leche con

MICROMORFOLOGÍA tween 80 al 1%, extracto de malta al 5%.
Observar forma y tamaño de las blastoconidias, presencia de
clamidiosporas, pseudomicelio desarrollado o rudimentario.

Prueba del tubo germinativo, prueba de ureasa, prueba de

PRUEBAS BIOQUÍMICAS asimilación de trehalosa, agar cromogénico, agar opacidad,
agar tabaco, agar semilla, agar CGB (canavanina – glicina –
azul de bromotimol).

Identificación presuntiva de Candida spp.

0,3-0,5 mL- suero fetal bovino o humano - incubar a 35 °C por 1-3 h.
Observar en microscopio a 400x.
del tubo germinativo 0,3-0,5 ml-suero fetal bovino o ohumano
oohumano - incubar °C a 351-3°C por
h. 1-31-3h. h.C. dubliniensis y
0,3-0,5 mL-mL-
0,3-0,5 suero fetal bovino - incubar a 35 apor [Link]
Prueba 0,3-0,5
0,3-0,5 mL-mL- suero
suero
Prueba
suero fetal
fetal
positiva:
fetal bovino
bovino
bovino o humano
humano
Complejo
humano - incubar
-- incubar
incubar
Candida aa 35
35 °C
°C35
albicanspor°C
por 1-3
1-3
(C. h.
albicans,
Prueba del tubo Observar en en
Observar
Observarmicroscopio
Observar
0,3-0,5
ObservarmL-microscopio
en
en en microscopio
suero
microscopio a400x.
aa400x.
fetal abovino
microscopio 400x.
ao400x.
400x. humano - incubar a 35 °C por 1-3 h.
[Link]).
germinativo
Prueba
Pruebadeldel
Prueba
Prueba tubo
del
del germinativo
tubo
tubo
tubo germinativo
germinativo
germinativo
Prueba
Prueba positiva:
Prueba
Prueba
Observar
Prueba
Complejo
positiva:
positiva: Complejo
Complejo
positiva:
en Candida
Complejo
microscopio
positiva: Complejo aCandida
Candida
400x.
Candida
albicans
albicans
Candida
albicans
(C.
albicans albicans,
(C. albicans,
albicans
(C.
C.
albicans,
(C. dubliniensis
(C. albicans,
albicans,
C. C. C.
C. dubliniensis
dubliniensis y
dubliniensis
yy
dubliniensis y y C. africana).
Prueba del tubo germinativo [Link]). [Link]).
[Link]).
Prueba positiva: Complejo Candida albicans (C. albicans, C. dubliniensis y
[Link]).
[Link]).Detección de estereasa – incubar a 30 °C 48-72 h.
Detección
Detecciónde de
estereasa
estereasa – incubar a 30 °C °C48-72 h. h.
Detección
Detección de de estereasa
estereasa –– incubar
incubar
– incubaraa 30
30 a°C 48-72
3048-72
°C 48-72h. h.
Agar opacidad Detección de estereasa
Detección estereasa- C.
Diferencia
de –incubar
albicans
incubar aa30de
30°CC.°C 48-72h. h.
dubliniensis.
48-72
Agar opacidad
Agar opacidad
Agar
Agar opacidad
opacidad
Diferencia C.
Diferencia [Link]
C.
Prueba de C.
de C.
albicanspositiva: dubliniensis.
C. dubliniensis.
dubliniensis.
[Link] observa halo de opacidad alrededor de la colonia de C.
Agar opacidad Diferencia
PruebaC. albicans
Diferencia
Diferencia
Prueba positiva:
albicans
[Link]
positiva: de
albicansde
observa
se C.
observa
dedubliniensis
halo dubliniensis.
de
halo opacidad
de opacidad alrededor
alrededor de dela colonia de deC.
Agar opacidad Diferencia
Prueba
Prueba C. albicans
positiva: se se
albicans.
positiva: deobserva
observa C. dubliniensis.
halohalo
de opacidad
de opacidad alrededor
alrededorde la colonia
la de
colonia de C.
C. de C.
Prueba positiva:
albicans.
albicans.
Prueba
albicans.
se observa
positiva: se observahalo halo de opacidad
de opacidad alrededor
alrededor delalacolonia
de la colonia colonia
de C. de C. albicans.
Pineda et al
Pineda et al albicans.
albicans.
Pineda et al
Pineda et al

Medio selectivo y diferencial. Aislamiento de cultivos mixtos.

Pineda et al

Medio
Medioselectivo y diferencial.
selectivo yy diferencial. Aislamiento
Aislamiento de decultivos mixtos.
Medio selectivo diferencial. Aislamiento de cultivos
cultivos mixtos.
mixtos.
Pineda et al

MedioIncubar
selectivo
Medio
35 35
°C y diferencial.
selectivo
Incubar
24-72 h.y 35
diferencial. Aislamiento
°C 24-72 Aislamiento
h. de cultivos decultivos
de cultivos mixtos. Incubar a 35 °C 24-72 h.
mixtos.
Agar cromogénico para Incubar
Medio 35 °C
°C 24-72
Incubarselectivo
Identificación
h.
y diferencial.
24-72 h. Aislamiento mixtos.
35presuntiva
24-72 [Link] algunas especies de Candida.
Incubar
Identificación 35 °C 24-72
presuntiva
Identificación h.
algunas especies de de
depresuntiva algunas especies de Candida.
Identificación presuntiva de algunas especies Candida.
de
Agar lavaduras
cromogénico
Agar
Agar para
cromogénico
cromogénico levaduras
para para levaduras
levaduras Incubar
Identificación°C presuntiva algunas especies de Candida.
Candida.
Agar cromogénico para levaduras CHROMagar Identificación
CHROMagar TM
CHROMagar Candida presuntiva
TM Candida
TM Candida
CHROMagar Plus,
Plus, de
es
es
Plus,
TM algunas
escapaz
capaz
capaz
Candida de especies
deidentificar
identificar
identificar
de
Plus,identificar de
esCandida. forma dedeidentificar
Candida.
de forma
capaz forma
presuntiva
forma presuntiva
C.
presuntiva C. auris C.
[Link] presuntiva
deC.
Agar
Agarcromogénico
cromogénico para
para levaduras
levaduras
Identificación
CHROMagar
CHROMagar
auris.
presuntiva
TM Candida
TM Candida
de algunas
Plus, es
Plus, es
especies
capaz de
capaz de
de de
identificar de
presuntiva
forma presuntiva C.
auris.
CHROMagar
auris. TM Candida Plus, es capaz de identificar de forma presuntiva
auris. C.
auris.
auris.
Diferencia C. C.
Diferencia albicans
albicans/ C./ C.
dubliniensis.
dubliniensis.
Diferencia [Link]:
albicans
Diferencia C. albicans
Diferencia decolonia
C.
/ C. dubliniensis.
C. dubliniensis.
albicans / borde
C. festoneado
dubliniensis.
Agar
Agar
Agar
Agar tabaco
tabaco
tabaco
tabaco modificado
modificado
modificado
modificado
Candida
Candida
Diferencia
Candida
Diferencia
Candida dubliniensis:
C. C.
dubliniensis: albicans
dubliniensis:
colonia
albicans
colonia
colonia
marrón,
C. marrón,
/ C./dubliniensis.
marrón,
marrón,
borde
dubliniensis.
borde
borde
colonia
festoneado
festoneado
marrón,
y rugosa.
yy rugosa.
festoneado
borderugosa. y rugosa.y rugosa.
AgarAgar
Agar
Agar
Agar
Agar tabaco
semilla
semilla
tabaco modificado
alpiste
alpiste
modificado
semilla
tabaco alpiste
modificado
Candida
Candida
Candida
Candida
Candida
albicans: colonia
albicans:
dubliniensis:
dubliniensis:
dubliniensis:
blanca,
colonia
coloniablanca,
colonia borde
marrón,
albicans: colonia blanca, borde regular,
regular,
borde
marrón, regular,
borde [Link].
festoneado
festoneado
lisa. yfestoneado
rugosa.
y rugosa.
Agar semilla alpiste CandidaCandida
albicans: colonia
Candida blanca,
albicans: borde
colonia regular,
blanca, borde [Link], lisa.
Agar
AgarAgar semilla
semilla
semilla alpiste
alpiste Candida albicans:
albicans: colonia
colonia blanca,
blanca, bordeborde regular,
regular, lisa. lisa.

Identificación presuntiva de de
Identificación Complejo C. C.
glabrata
Identificación presuntiva
presuntiva de Complejo
Complejo C. glabrata
glabrata
Tableta ROSCO
Tableta ROSCO trehalosa
trehalosa(2.5mg)
de(2.5mg)+ 300 µLglabrata
++ 300 de de
inóculo 2 Mc Farland en
Identificación
Tableta presuntiva
Identificación
ROSCOIdentificación
Identificación presuntiva
trehalosa
presuntivade Complejo
presuntiva
Complejo
(2.5mg)
de Complejo C.
300deµL
Candida
µL de inóculo
[Link]
inóculo
glabrata 22 Mc
C. Farland
Farland en
glabrata.
glabrata
Mc en
solución fisiológica estéril. Incubar a 35 °C.
Asimilación
Asimilación rápida
Asimilación rápida
de
rápida de
trehalosa
de trehalosa
Asimilación rápida de trehalosa Tableta solución
Tableta
ROSCO
solución
Tableta
Lectura hasta
Lectura
fisiológica
ROSCO
trehalosa
Tableta
fisiológica
ROSCO
hasta2 horas.
2
estéril.
trehalosa
ROSCO
estéril.
trehalosa
horas.
Incubar
(2.5mg)
(2.5mg)
Incubar aa+ 35
(2.5mg) +
trehalosa 300
35 +°C.
300 µL
°C.
300 de
l
(2.5mg)
µLinóculo
dede 2 Mc
inóculo
+ 300
inóculoµLFarland
22 Mc
de
Mc en 2enMcen
Farland
inóculo
Farland solución
Farland en
solución fisiológica estéril. Incubar a 35 °C.
trehalosa
Asimilación
Asimilación rápida
rápida
Asimilación de trehalosa
de trehalosa
rápida de trehalosa
Lectura
fisiológicasolución
Lectura
hasta
estéril.
hasta
2 [Link]ógica
Incubar
fisiológica
solución
2 horas.
a 35
estéril. °C.
Incubar
estéril.a 35 °C. a 35 °C.
Incubar
Lectura2hasta
Lectura hasta Lectura
horas.2 horas.
hasta 2 horas.

Identificación presuntiva defenoloxidasa

Detección de enzima Cryptococcus
producida por C. neoformansspp.
y C. gattii.
Agar semilla de girasol / alpiste C. neoformans/gattii: colonias color marrón.
Agardetabaco
Agar semilla de
Detección
Detección
Detección de
de enzima
Detección
de enzima
enzima fenoloxidasa
fenoloxidasa producida
de enzimafenoloxidasa
producida por
color producida
fenoloxidasa producida
por C.
C. neoformans
neoformans yy C.
por C. por
C. gattii.
C. neoformans
neoformans
gattii.
y C. gattii. y C. gattii.
girasol/alpiste
Agar
Agar semilla
Agar
semilla de girasol
girasol // alpiste
alpiste
semilla de girasol / alpiste
C.
C. neoformans/gattii:
neoformans/gattii:
Detección colonias
colonias color
de enzima colonias
C. neoformans/gattii: fenoloxidasa marrón.
marrón.
colorproducida
marrón. por C. neoformans y C. gattii.
Agar
Agar
Agar semilla detabaco
tabaco
girasol / alpiste C. neoformans/gattii:
C. neoformans/gattii:colonias color
colonias color marrón.
marrón.
Agar tabaco
Agar tabaco
Agar tabaco

Detección
Detección de
de Cryptococcus
Cryptococcus spp.
spp.
Prueba dede
Prueba
Prueba deureasa
ureasa
ureasa Detección de Cryptococcus
Detección
Detección
Detección dedeCryptococcus spp.
de Cryptococcus spp.
spp.
Cryptococcusspp.
Prueba de ureasa
Prueba de ureasa
Prueba de ureasa
Diferencia
DiferenciaC.C.
Diferencia [Link]
neoformans (amarillo
(amarillo
neoformans(amarillo verdoso)
verdoso)
verdoso) // [Link]
[Link]
/ [Link] (azul
(azul
(azul intenso).
intenso).
intenso).
Medio
Medio CGB
Medio CGB
CGB Diferencia C. neoformans (amarillo verdoso) / [Link] (azul intenso).
Cryptococcus
Cryptococcus Cryptococcus
Cryptococcus
MedioMedio
CGB CGB Diferencia C. neoformans (amarillo verdoso) / C. gattii (azul intenso)
Cryptococcus Cryptococcus
neoformans
neoformans
neoformans ga1i
Cryptococcus ga1i
ga1i
Cryptococcus
neoformans ga1i

Diferencia C. neoformans (amarillo verdoso) / [Link] (azul intenso).

Medio CGB
Cryptococcus Cryptococcus Curso de Micología en línea
neoformans ga1i Estándares para el diagnóstico de las infecciones fúngicas:
identificación y sensibilidad de los aislamientos -2019-