Extracción de ADN
Cristina de los Ángeles Cabrera Véliz, María José González-Rubio Garcés, Marisa
Fernanda Regalado Oviedo y Ana Isa Defás Rizzo
Biotecnología, Universidad Politécnica Salesiana
Biología
Ing. Verónica Montenegro
Guayaquil, Ecuador
16 de marzo del 2023
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Introducción
El ácido desoxirribonucleico (ADN) es una biomolécula de especial importancia,
porque en ella se encuentran los genes, los cuales son transmitidos de generación en
generación. Son la unidad básica de la herencia en los seres vivos. El ADN está presente
en el núcleo de todas las células eucariotas, y porta la información genética en todo ser
vivo. Además, contiene información para controlar la síntesis de enzimas y proteínas de una
célula u organismo.
Antecedentes
Durante la interfase del ciclo celular, el ADN presenta una estructura fibrilar que se
denomina cromatina, mientras que durante la división celular el ADN se condensa formando
los cromosomas.
Teniendo en cuenta que la interfase ocupa la mayor parte del tiempo del ciclo de una
célula, se puede suponer al tratar una muestra, que la mayoría de sus células se
encuentran en interfase y, por tanto, su ADN está en forma de cromatina.
La cromatina es la forma en la que se presenta el ADN en el núcleo celular.
Para observar, debemos romper diferentes barreras que lo protegen, como son la
membrana plasmática y después la nuclear, ya que, en las células eucariotas, la mayor
parte del ADN se encuentra en el núcleo. Y si además se trata de una célula vegetal, como
es el nuestro caso, también tenemos que destruir la pared vegetal. La sal y el jabón nos
ayudarán en esta función.
Unidas al ADN se encuentran unas proteínas que debemos romper para aislar la
molécula de ADN. Esto lo lograremos gracias a las enzimas artificiales que añadiremos con
el zumo de piña, y después las podremos ver con ayuda del alcohol, ya que en agua esta
molécula es soluble, pero no precipita.
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Objetivo del proyecto
El objetivo principal es dar a conocer que cada uno de nosotros poseemos una
información genética (ADN), dicha información está en personas, animales, frutas,
vegetales. Además daremos a conocer en sencillos pasos cómo obtener el ADN.
Desarrollo de la investigación
Definiciones
Mitosis: Es el proceso por el cual una célula duplica sus cromosomas y luego los secreta,
produciendo dos núcleos idénticos durante la preparación para la división celular.
Meiosis: Es el tipo de división celular que crea óvulos y espermatozoides. La mitosis es un
proceso fundamental para la vida. Durante la mitosis, una célula duplica todo su contenido,
incluyendo sus cromosomas, y se divide para formar dos células hijas idénticas.
Interfase: Es la fase del ciclo celular en la cual una célula típica pasa la mayor parte de su
vida. En esta fase, la célula copia su ADN en preparación para la mitosis. Es la fase
metabólica de la célula, en la cual la célula obtiene nutrientes y los metaboliza, crece, lee su
ADN.
Filamentos: Los filamentos intermedios son componentes del citoesqueleto cuya principal
misión es permitir a las células o estructuras celulares soportar tensiones mecánicas.
División celular: Debido a la división celular, se produce el crecimiento de los seres vivos.
En los organismos pluricelulares este crecimiento se produce gracias al desarrollo de los
tejidos y en los seres unicelulares mediante la reproducción asexual.
Cromatina: La cromatina es la forma en la que se presenta el ADN en el núcleo celular.
Ácidos nucleicos: Los ácidos nucleicos son macromoléculas constituidas por una unión
mediante enlaces químicos de unidades menores llamadas nucleótidos. Los ácidos
nucleicos están presentes en el núcleo de las células
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Metodología de la investigación
Nuestra investigación es de estudio experimental y explicativo. Es experimental
porque seguimos un proceso de manipulación y control para obtener resultados
cuantificables con los debidos pasos de la experimentación que seguimos.
Y es explicativo porque hemos tomado del experimento las diferentes formas de
ejemplificación sencillas para poder desarrollar la información y dar a conocer las formas de
divulgación y los resultados obtenidos.
Diseño experimental
Para la elaboración de nuestro proyecto los materiales que utilizamos fueron: una
cebolla, bicarbonato de sodio, sal común, orceína, alcohol isopropílico, jabón líquido
lavaplatos, jugo de piña y los materiales que encontramos en el laboratorio para probar,
medir y pesar las sustancias.
Iniciamos nuestro experimento preparando la solución tampón, la cual está
compuesta por: 50 ml de agua destilada, 0,5 gramos de sal, 0,1 gramo de bicarbonato de
sodio y 2 ml de jabón líquido lavaplatos.
Pesamos la sal y el bicarbonato en una balanza analítica para mayor precisión, y
una vez realizado este paso, vertemos los solventes y los 2 ml del jabón lavaplatos en los
50 ml de agua destilada, revolvemos todo sin hacer mucha espuma y la llevamos a
refrigeración junto con el alcohol isopropílico hasta cuando se lo necesite.
Continuamos cortando el corazón de la cebolla en pequeñas piezas, para que se
facilite el poder triturar en el mortero con un poco de agua destilada, y lo que necesitaremos
será el líquido que secreta la cebolla una vez triturada.
En un vaso de precipitación colocamos 5 ml del triturado celular, más 10 ml de la
solución tampón y 2 ml del jugo de piña, para luego revolver a movimiento constante por
dos minutos
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Finalizados los dos minutos filtramos la nueva solución y recogemos con una pipeta
aforada, 5 ml de la solución molecular y la depositamos en un tubo de ensayo, añadiendo
10 ml del alcohol isopropílico previamente enfriado y lo dejamos reposar 10 minutos.
Transcurrido el tiempo podemos observar las estructuras de ADN liberadas de su
núcleo celular; son partículas pequeñas que flotan en el precipitado de la solución, debido a
que el alcohol es menos denso que el agua y el ADN es insoluble al alcohol. A partir de ahí,
observamos las muestras en el microscopio.
Muestra 1: En esta muestra no tuvimos mayor observación del ADN, porque
utilizamos Tinción de Gram, comúnmente usado para detectar bacterias en posibles
infecciones.
Muestra 2: En esta muestra aplicamos Orceína a un objetivo de 40x, que es un
colorante vegetal extraído de los líquenes y es parte del grupo de la oxazina. Aquí pudimos
observar las ramificaciones del ADN.
Muestra 3: Aquí aplicamos igualmente Orceína y lo observamos en el objetivo 10x,
logrando ver el ADN aglomerado; esto se da porque el ADN es compactado por proteínas
histonas formando nucleosomas, que son los principales componentes de la cromatina.
De esta manera damos por concluido nuestro proyecto en el laboratorio.
Preguntas referentes al experimento
¿Cómo afecta al resultado el agitar con fuerza la mezcla?
El agitar con fuerza puede provocar que todo el resto del filtrado de la mezcla se
combine con el alcohol y no nos permita los resultados deseados.
Al usar el jabón, también podemos provocar mucha espuma, lo que no nos permitirá
continuar con la experimentación.
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¿Qué función tiene la sal, el detergente y el alcohol?
La sal y el detergente ayuda a romper todo lo que protege el ADN como la
membrana plasmática, celular e inclusive la pared celular de las células vegetales. Los
iones salinos se unen a las cargas negativas del ADN lo que permite su disolución. Por otro
lado, el detergente mezclado con zumo de piña, sal y bicarbonato de sodio (solución
tampón) ayuda a lisar (romper) las membranas y todo lo que protege al ADN diluyendo las
proteínas, los fosfolípidos y las grasas que conforman a las membranas.
El alcohol permite el precipitado del ADN, ya que es insoluble en altas
concentraciones de sal y alcohol, pero soluble en agua. Esto nos permite obtener unas finas
hebras blancas de ADN.
¿Por qué es necesario romper las membranas celulares y dejar libres los núcleos?
Es importante porque así podemos observar con mayor facilidad el ADN, pues la
mayor parte del ADN se encuentra en el núcleo cubierta de membranas y, en el caso de la
célula vegetal, de una pared celular.
¿Por qué se forman los aglomerados de ADN?
Al dejar totalmente aislado el ADN, todos los filamentos del ADN se unen y con la
ayuda del alcohol, se forma un precipitado debido a su baja densidad, ya que en el agua los
filamentos del ADN se disuelven.
¿Cuál es la influencia de la enzima para la observación de ADN?
Las enzimas que actúan son la papaína y bromelina. Para la observación del ADN,
la papaína es importante, pues al necesitar el ADN aislado para una mejor observación bajo
el microscopio, las proteínas que están unidas a esta biomolécula deben ser eliminadas y
está enzima cumple la función requerida. El producto filamentoso obtenido de la extracción
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no es ADN puro, ya que entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. La bromelina es
una enzima proteolítica que rompe las proteínas, ayudando así a limpiar el ADN.
¿En qué momento del ciclo celular se observa la cromatina?
La cromatina la podemos observar en la Interfase, que es la serie de procesos en
donde el ADN se duplica para la formación de nuevas células. La cromatina es una
sustancia compuesta de ADN, histonas y proteínas no histónicas que contribuye a la
formación del material cromosómico en el núcleo y así formar nuevas células.
Conclusión
Como sabemos el ADN es una molécula de gran importancia compuesta de ácidos
nucleicos, ya que permite tener una identidad genética que pasará de generación en
generación. El ADN está conformado de manera específica de (A, G, C, T) lo que le permite
la síntesis de todas las proteínas y moléculas que permiten controlar y ejecutar todos los
procesos que tienen lugar en nuestro organismo. Esta información es muy valiosa y nunca
deja el núcleo, solo se obtiene una copia (ARN mensajero) en forma de instrucciones que
será enviado para la creación de proteínas.
Si llega a ver alguna alteración en su conformación, las mutaciones y las
enfermedades hereditarias serán inevitables.
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Bibliografía
Gómez Ochoa de Alda, J., Marcos-Merino, J. M., & Esteban Gallego, R. (2019). Extracción
de ADN con material cotidiano: desarrollo de una estrategia interdisciplinar a partir de sus
fundamentos científicos. Educación Química. Vol. 30. Num. 1. Extracción de ADN con
material cotidiano: desarrollo de una estrategia interdisciplinar a partir de sus fundamentos
científicos | Educación Química (unam.mx)
National Human Genome Research Institute . (2023). Ácido desoxirribonucleico (ADN).
National Human Genome Research Institute. Ácido desoxirribonucleico (ADN) (genome.gov)
Ministerio de Educación y Ciencias. (s.f). La célula: composición, estructura y función.
Proyecto Biosfera. Proyecto Biosfera (juntadeandalucia.es)
Anexos
Muestra 1:
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Muestra 2:
Muestra 3:
Presentación:https://www.canva.com/design/DAFamNXRgUk/8J2T4m0hNAP7rbNeaiVS8g/v
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