Referencia: 064-PF0072 Scharlau Microbiología - Ficha Técnica
Producto: R2A Agar
Especificación
Medio sólido para la enumeración de microorganismos heterotróficos en aguas potabilizadas según el método de las farmacopeas.
Presentación
30 Placas Filtración Encajado Caducidad Almacenamiento
Placas filtración 55 mm 1 caja que contiene: 6 bolsas de plástico con 5 6 meses 2-25 ºC
con: 9 ± 1 ml placas de 55 mm ø /bolsa.
Composición
Composición (g/l):
Proteosa peptona............................0,500
Hidrolizado de caseina....................0,500
Extracto de levadura....................... 0,500
Dextrosa.......................................... 0,500
Almidón soluble............................... 0,500
Piruvato sódico................................0,300
Fosfato dipotásico........................... 0,300
Sulfato magnésico...........................0,024
Agar.................................................15,000
Descripción/Técnica
Descripción :
El Agar R2A fue propuesto en 1979 por Reasoner y Geldenreich y poco tiempo después adoptado como método alternativo por la
APHA (1985) para recuperar células estresadas en los exámenes rutinarios de aguas potabilizadas. También ha sido adoptado por la
farmacopea, para el control de agua purificada.
Habitualmente el empleo de medios de cultivo ricos en nutrientes como el PCA o el TSA permiten el crecimiento de la microbiota normal
pero no facilita la recuperación de la estresada o de la resistente a la cloración. Utilizando un medio pobre en nutrientes, como el R2A y
combinándolo con largas incubaciones a bajas temperaturas se consiguen recuperar estas células que de otro modo son difíciles de
detectar.
En el Agar R2A la peptona y el hidrolizado de caseina son las fuentes de nitrógeno, mientras que el extracto de levadura suministra las
vitaminas y otros factores de crecimiento y la glucosa constituye la fuente de carbono. El Piruvato facilita la recuperación de las células
estresadas y el almidón funciona como detoxificante. El sulfato magnésico y el fosfato potásico aportan los iones necesarios para
mantener la presión osmótica y el agar-agar es el agente solidificante.
Técnica:
Las muestras de agua deben examinarse lo antes posible y si se han de demorar más de seis horas es imprescindible refrigerarlas,
pero no más de 30 horas, pasadas las cuales la muestra se considera inadecuada.
Después de filtración de la muestra a través de una membrana de 0.45 micras de diámetro, colocar ésta sobre la superficie del medio
de cultivo.
Con este medio se suele hacer una incubación a 35ºC durante 72 horas como mínimo pero mejor si se prolonga hasta 5 ó 7 días. Si la
incubación se hace entre 20 y 25ºC, que es lo recomendado, el tiempo mínimo será de 5 días y la lectura definitiva a los 7 días. En
todas estas incubaciones a tiempo prolongado, deben tomarse las debidas precauciones para evitar el excesivo desecado de las
placas.
Los microorganismos que no están estresados o los de crecimiento rápido, en estas condiciones de cultivo, suelen producir colonias
mucho más pequeñas que en los medios y condiciones habituales.
Hacer recuento de todas las colonias desarrolladas en la superfície de la membrana.
Calcular la carga bacteriana por ml de muetra considerando el volumen filtrado y la dilución y expresar el resultado en UFC/ml.
Página 1 / 2 Fecha revisión:29/01/22
Referencia: 064-PF0072 Scharlau Microbiología - Ficha Técnica
Producto: R2A Agar
Control de Calidad
Control Físico/Químico
Color : Amarillo pálido pH: 7,2 ± 0,2 a 25ºC
Control de Fertilidad
Filtración con Membrana; rango 10-100 UFC (Productividad) según Farm. Eur.
Aerobiosis. Incubación a 32,5 ± 2,5ºC Lectura a las 24-72 h para bacterias y 5-7 días para hongos y levaduras
Metodología analítica acorde con ISO 11133:2014/A1:2018; A2:2020
Ps. aeruginosa y E. coli doble temp. incubación 30-35 °C / 20-25 °C
Control micobiológico según ISO 11133:2014/ A1:2018; A2: 2020.
Microorganismo Desarrollo
®
Ps. aeruginosa ATCC 9027, WDCM 00026 Bueno (≥70%)
Bacillus subtilis ATCC® 6633, WDCM 00003 Bueno (≥70%)
Escherichia coli ATCC® 8739, WDCM 00012 Bueno (≥70%)
Aspergillus brasiliensis ATCC® 16404, WDCM 00053 Bueno (≥70%)
Candida albicans ATCC® 10231, WDCM 00054 Bueno (≥70%)
Staphylococcus aureus ATCC® 6538, WDCM 00032 Bueno (≥70%)
E. coli ATCC® 8739 (20-25ºC) Bueno (≥70%)
Ps. aeruginosa ATCC® 9027 (20-25ºC) Bueno (≥70%)
Control de Esterilidad
Incubación 48 horas a 30-35 ºC y 48 horas a 20-25 ºC: SIN CRECIMIENTO
Verificación a 7 días tras incubación en las mismas condiciones.
Bibliografia
· ATLAS, R.M. (1995) Handbook of Media for Environmental Microbiology. CRC Press. Boca Raton. Fla. USA.
· CLESCERI, L.S., A.E. GREENBERG and A.D. EATON (1998) Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 20th
ed. APHA Washington D.C. USA.
· EATON, A.D., A.E. GREENBERG and L.S. CLESCERI (1995). Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 19th
ed. APHA Washington D.C. USA.
· EUROPEAN PHARMACOPOEIA. 6th ed. Suppl 6.3 (2009) General Monographs. Water for injections. (pg. 4339) EDQM. Council of
Europe. Strasbourg.
· GREENBERG, A.E., R.R. TRUSSELL and L.S. CLESCERI (1985). Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater.
16th ed. APHA-AWWA-WPCF. Washington D.C. USA.
· REASONER, D.J. and E.E. GELDREICH (1979) A new Medium for the enumeration and subculture of bacteria from potable water.
Abstracts of Annual Meeting. ASM 79th Meeting. Paper #N7.
· Van SOETSBERGER, A.A. and C.H. LEE (1969) Pour plates or streak plates?. Appl. Microbiol. 18:1092 -1094.
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