Anti-globulina humana poliespecífica

0843
Antiglobulina humana
Tests de Coombs Directo e Indirecto
Grupos sanguíneos
3. Mezclar minuciosamente e incubar a 37ºC durante 15 minutos.
Determinación cualitativa de anti-Ig G y anti-C3d humanos en 4. Lavar 4 veces los hematíes en PBS cuidando de decantar la solución salina entre
lavados y resuspendiendo el botón celular tras cada lavado. Tras el último lavado,
hematíes decantar completamente la solución salina.
IVD 5. Añadir 2 volúmenes de antiglobulina humana a cada botón celular.
6. Mezclar minuciosamente y centrifugar los tubos durante 20 segundos a 1000 rcf (g) o a
Conservar a 2-8ºC una fuerza y tiempo alternativos adecuados.
7. Resuspender cuidadosamente el botón celular y leer macroscópicamente por
PRINCIPIO DEL MÉTODO aglutinación.
Utilizando las técnicas recomendadas, los reactivos reaccionarán con inmunoglobulina y/o C. Técnica antiglobulina indirecta LISS (LISS IAT)
complemento ligados a la superficies de los hematíes, provocando la aglutinación de las 1. Preparar una suspensión al 1.5 - 2% de hematíes a testar lavados en solución lisante.
células sensibilizadas adyacentes. Las células no sensibilizadas no aglutinarán (ver 2. Depositar en un tubo identificado: 2 volúmenes del suero a testar y 2 volúmenes de la
Limitaciones). suspensión de hematíes a testar.
3. Mezclar minuciosamente e incubar a 37ºC durante 15 minutes.
SIGNIFICADO CLÍNICO
4. Seguir los pasos 4 a 7 de la técnica (NISS IAT)
En 1945 Coombs, Mourant y Race descubrieron el uso de la anti-globulina humana para la
detección de anticuerpos no aglutinantes de los hematíes. En 1957, Dacie y col. mostraron INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
que los anticuerpos de un suero de antiglobulina eran directamente contra ciertos 1. Positivo: La aglutinación de los hematíes a testar constituye un resultado positivo y
componentes del complemento. Los reactivos antiglobulina humana detectan tanto moléculas dentro de las limitaciones aceptadas para el procedimiento del test, indica la presencia
de anticuerpos no aglutinantes, como moléculas de complemento ligados a los hematíes IgG y/o complemento (C3) en los hematíes a testar.
siguiendo reacciones antígeno-anticuerpo in vivo o in vitro. 2. Negativo: La ausencia de aglutinación de los hematíes a testar constituye un resultado
negativo y dentro de las limitaciones aceptadas para el procedimiento de la técnica,
REACTIVOS
indica la ausencia en hematíes de IgG y/o complemento (C3) en los hematíes a testar.
Los reactivos Spinreact Anti-globulina humana poliespecífica contienen anti-IgG derivadas de
conejo, cuya actividad inespecífica ha sido eliminada por absorción y IgM monoclonal de ratón Estabilidad de las reacciones
anti-C3d, clon BRIC-8. Los anticuerpos son diluidos en una solución tamponada que contiene 1. Las etapas de lavado deben completarse sin interrupción alguna y la centrifugación y lectura
albúmina bovina. Cada reactivo es suministrado en la dilución óptima para su utilización en debe realizarse inmediatamente tras la adición del reactivo. Los retrasos pueden suponer la
todas las técnicas aquí recomendadas sin necesidad de diluciones o adiciones disociación de los complejos antígeno-anticuerpo, causando falsos negativos o resultados
suplementarias. Ver el lote y caducidad de cada referencia en la etiqueta del vial. positivos débiles.
2. Los resultados, de tests realizados a otras temperaturas de las aquí recomendadas, deben ser
Reactivo Color Colorante utilizado interpretados con cautela.
Antiglobulina humana verde Verde Tartracina y azul patentado LIMITACIONES
1. Los hematíes que resultan positivos por DAT debido a un recubrimiento de IgG, no
PRECAUCIONES pueden ser tipados por las técnicas Antiglobulina Indirectas.
1. Los reactivos son sólo para uso en diagnóstico in vitro. 2. Un DAT positivo por sensibilización con complemento puede no reflejar la fijación in
2. Si el vial del reactivo está roto o agrietado, descartar inmediatamente su contenido. vivo de complemento, si las células a atestar provienen de una muestra coagulada
3. No utilizar reactivos caducados. (ver la etiqueta de vial). refrigerada.
4. No utilizar reactivos que presenten precipitados. 3. Lavados inadecuados en técnicas antiglobulina indirectas pueden neutralizar el reactivo
5. La manipulación del reactivo debe realizarse con la apropiada indumentaria de protección, tales antigobulina humana.
como guantes desechables y bata de laboratorio. 4. Tras completar la fase de lavado, el exceso de fase salina residual puede diluir la
6. Los reactivos han sido filtrados a través de cápsulas de 0.2 µm para reducir la carga biológica. antiglobulina humana, reduciendo su potencia.
Una vez abierto el vial, el contenido debe permanecer viable hasta la fecha de caducidad,
5. Un resultado negativo por técnicas antiglobulina directa no excluye necesariamente un
siempre y cuando no haya una marcada turbidez la cual podría ser indicativa de deterioración o
contaminación del reactivo.
diagnóstico clínico del Síndrome hemolítico ABO del Recién Nacido o Anemia
7. Los reactivos contienen < 0.1% de azida sódica. La azida sódica puede ser tóxica, si se ingiere Hemolítica Autoinmune. Tampoco no descarta de HDN, especialmente si se sospecha
y puede reaccionar con cobre o plomo de las tuberías y formar azidas metálicas explosivas. En de incompatibilidad ABO.
caso de eliminación del producto, hacerlo con abundante agua del grifo. 6. Puede también ocurrir falsos resultados positivos o negativos debido a:
8. Ningún método puede garantizar que los productos derivados de fuentes humanas o animales  Contaminación de los materiales del test
están libres de enfermedades infecciosas. Manipular y desechar con precaución los viales y su  Conservación inadecuada, concentración celular, tiempo o temperatura de
contenido. incubación
9. Para mayor información sobre la eliminación del producto o descontaminación en caso de  Centrifugación inapropiada o excesiva
derrame, ver las fichas de seguridad.
7. El usuario es responsable del funcionamiento de los reactivos en cualquier otro método
NOTAS distinto de los mencionados aquí.
1. Se recomienda la utilización de un control positivo (Anti-D débil 0.1 IU/mL) y un control 8. Cualquier desviación de las técnicas, aquí detalladas, debería ser validada antes de su
negativo (suero inerte) para testar de forma paralela en cada lote de tests. Los tests utilización9.
deben considerarse inválidos si los controles no muestran los resultados esperados. CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
2. Las técnicas antiglobulinas sólo pueden considerarse válidas si todos los tests 1. Los reactivos han sido caracterizados para todos los procedimientos aquí
negativos reaccionan positivamente con hematíes sensibilizados con IgG.
mencionados.
3. En las técnicas recomendadas un volumen es aproximadamente 40µl utilizando el 2. Préviamente a su liberación, cada lote de Spinreact Antiglobulina humana es testado a
gotero suministrado.
través de las técnicas recomendadas frente a un panel de hematíes Anti-D, Anti-K y
4. La utilización de los reactivos y la interpretación de los resultados deben llevarse a
Anti-Fya, a fin comprovar la adecuada reactividad.
cabo por personal cualificado y formado de acuerdo a los requisitos del país dónde los
3. La potencia anti-IgG y anti-C3d ha sido testada frente al estándar de referencia de
reactivos están siendo utilizados. El usuario debe determinar la idoneidad de los potencia mínima, Anti-AHG 96/666,procedente del National Institute of Biological
reactivos para otras técnicas.
Standards and Controls (NIBSC).
CONSERVACIÓN 4. La potencia anti-C3d está demostrada en tests que emplean células recubiertas con
No congelar. Los viales de reactivo deben ser conservados a 2-8ºC. Almacenamientos C3.
prolongados, a temperaturas fuera de este rango, pueden provocar una aceleración de la 5. La presencia de aglutininas contaminantes heteroespecíficas o de anticuerpos anti-C4d
pérdida de reactividad. ha sido excluida en tests que emplean hematíes de todos los grupos ABO y células
recubiertas con C4.
MATERIAL NECESARIO 6. No se ha establecido la reactividad de cualquier Anti-IgM, Anti-IgA o Anti-componentes
 Tubos de vidrio (10 x 75 mm o 12 x 75 mm). de cadena ligera, que pudieran estar presentes.
 Centrífuga de tubos. 7. El Control de Calidad de los reactivos se llevó a cabo utilizando hematíes lavados dos
 Pipetas volumétricas. veces en PBS, previa utilización.
 Tampón fosfato salino (PBS): NaCl 0.9%, pH 7.0 ± 0.2 a 22ºC ± 1ºC. 8. Los reactivos cumplen las recomendaciones de la última versión de las Guías para los
 Hematíes sensibilizados con IgG Servicios de transfusión de sangre del Reino Unido.
 Suero de anticuerpo inerte.
 Anti-D débil. BIBLIOGRAFÍA
 Baño caliente o incubador de calor seco equilibrado a 37ºC ± 2ºC. 1. Coombs RRA, Mourant AE, Race RR. A new test for the detection of weak and “incomplete” Rh
 Lavador de células Coombs antibodies. Brit J Exp Pathol. 1945; 26:255.
 Solución lisante (LISS), ej.: REF de Spinreact. 1700080. 2. Wright MS, Issit PD. Anti-complement and the indirect antiglobulin test. Transfusion 1979; 19:688-694.
3. Howard JE, Winn LC, Gottlieb CE, Grumet FC, Garratty G, Petz LD. Clinical significance of the anti-
MUESTRAS complement components of anti-globulin antisera. Transfusion 1982: 22:269.
4. Howell P, Giles CM. A detailed serological study of five anti-Jka sera reacting by the antiglobulin
Las muestras deben tratarse asépticamente en EDTA para prevenir la unión in vitro del technique. Vox. Sang. 1983; 45: 129-138.
complemento y analizarse en 24 horas. En caso que el EDTA no esté disponible, es preferible 5. Issitt PD, Smith TR. Evaluation of antiglobulin reagents. A seminar on performance evaluation.
muestras tratadas en ACD. CPD o CPDA-1, que muestras coaguladas, Si sólo se dispone de Washington, DC. American Association of Blood Banks. 1976; 25-73.
muestras coaguladas, no refrigerar antes de analizar. Todas las muestras de sangre deben 6. The Department of Health and Social Security. Health Services Management Antiglobulin Test. False
ser lavadas con PBS al menos dos veces antes de realizar el test. negative results, HN (Hazard) (83) 625 Nov 1983.
7. Bruce M, Watt AH, Hare W, Blue A, Mitchell R. A serious source of error in antiglobulin testing.
Transfusion 1986; 26: 177-181.
PROCEDIMIENTO 8. The anti-complement reactivity low ionic methods as published by FDA. Recommended Methods for Anti-
A. Técnica antiglobulina directa (DAT) Human Globulin Evaluation (revision October 1984).
9. Dynan PK. Evaluation of commercially available low ionic strength salt (LISS) solutions. Med Lab Sci
1. Lavar 4 veces en PBS los hematíes a testar, cuidando de decantar la solución salina (1981) 381: 13-20.
entre lavados y resuspendiendo el botón celular tras cada lavado. Tras el último lavado, 10. Voak D, Downie DM, Moore BPL, Ford DS, Engelfreit CP, Case J. Replicate tests for the detection and
decantar completamente la solución salina. correction of errors in anti-human globulin (AHG) tests: optimum conditions and quality control.
2. Añadir 2 volúmenes de antiglobulina humana a cada botón celular. Haematologia 1988; 21(1): 3-16.
3. Mezclar minuciosamente y centrifugar los tubos durante 20 segundos a 1000 rcf (g) o a 11. Guidelines for the Blood Transfusion Service in the United Kingdom. H.M.S.O. Current Edition.
12. British Committee for Standards in Haematology, Blood Transfusion Task Force. Recommendations for
una fuerza y tiempo alternativos adecuados. evaluation, validation and implementation of new techniques for blood grouping, antibody screening and
4. Resuspender cuidadosamente el botón celular y leer macroscópicamente por cross matching. Transfusion Medicine, 1995, 5, 145-150.
aglutinación.
B. Técnica antiglobulina indirecta (NISS IAT) PRESENTACIÓN
1. Preparar una suspensión al 2-3% de hematíes lavados en PBS. Anti globulina humana (Coombs) Ref: 1700051 10 ml
2. Depositar en un tubo identificado: 2 volúmenes del suero a testar y 1 volumen de la
suspensión de hematíes a testar.

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