27 de febrero del 2023
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA GENERAL
PRÁCTICA # 7
DETERMINACIÓN DE LAS PROPIEDADES QUÍMICAS DE LAS
PROTEÍNAS
Integrantes del equipo:
Abril Payan Gastelum – 216354
Itzel Janeth Lucero Ramírez 224283
Jennifer Denisse Cardenas Mendez 224105
Abraham Macías Vicuña 229117
ÍNDICE
Introducción…………………………………………………………………………….1
Objetivo…………………………………………………………………………………1
Materiales y métodos…………………………………………………………………1
Resultados……………………………………………………………………………..2
Discusión……………………………………………………………………………….4
Conclusión……………………………………………………………………………..5
Cuestionario……………………………………………………………………………6
Bibliografía……………………………………………………………………………..8
ÍNDICE DE FIGURAS Y TABLAS
Tabla I. Tabla de materiales y reactivos…………………………………………...1
Tabla II. Preparación de tubos del experimento 1………………………………..2
Figura 1. Tubos sometidos a la prueba de solubilidad del albuminato…………3
Tabla III. Características observadas en los tubos y sus puntos isoeléctricos…3
INTRODUCCIÓN
En esta práctica veremos y llevaremos a cabo la determinación de un punto
isoeléctrico, pero para empezar ¿Qué es un punto isoeléctrico? Pues para
entender esto tenemos que saber que la carga neta (suma de todas las cargas
positivas y negativas de la cadena lateral de aminoácidos) de las proteínas
depende del pH, y en el punto de neutralidad (punto isoeléctrico) las cargas ácidas
y básicas de las cadenas laterales de la proteína están en equilibrio por lo que no
se atraen a un campo eléctrico, dicho esto la carga total de la proteína depende
del pH mismo de esta y de los números relativos de cada aminoácido que la
compone y así cuando el pH de la solución es de cero ósea que iguala las cargas
negativas de las positivas y así contestando a la pregunta a este valor de pH se le
llama punto isoeléctrico o pH isoeléctrico (Koolman & Röhm, 2004; Peña, et al.,
2004) .
Una vez explicado esto en la práctica se busca encontrar el punto isoeléctrico por
adición de un ácido de una proteína por adición de un ácido para ver los cambios
de esta.
OBJETIVO
Al término de la práctica, el alumno será capaz de describir el efecto de los
solventes sobre las propiedades electroquímicas de las proteínas de diferente PM
de acuerdo a las siguientes variables.
MATERIALES Y MÉTODOS
Reactivos Materiales
Albuminato 0.1N 10 tubos de ensayo
Acido acético 0.01N 1 Gradilla
Ácido acético 0.1N 3 pipetas de 10ml
Acido acético 1.0N 1 pipeta de 5ml
1
2 pipetas de 1ml
3 propipetas verdes
2 propipetas azules
Tabla I. Tabla de materiales y reactivos.
Colocamos agua destilada en 10 tubos de ensayo y poniendo los
volúmenes que venían en el manual
Pusimos ácido acético 0.01N en los tubos de ensayo 1-2
Después pusimos ácido acético 0.1N en los tubos de ensayo 3-8
Para después poner ácido acético 1N en los tubos de ensayo 9 y 10
Por último, colocamos albúminato en todos los tubos de ensayo y tomamos
fotos antes y después de mezclarlos
RESULTADOS
En este experimento se determinó el punto Isoeléctrico de la Albúmina por adición
de un ácido.
Se prepararon una serie de tubos como se indica en la tabla para poder observar
los resultados que obtuvimos en la práctica.
Ac. Acético Ac. Acético Ac. Acético Albuminato
Tubo pH Agua
0.01N 0.1 1.0N 0.1N
1 8.38 0.62 0 0 1.0
2 7.75 1.25 0 0 1.0
3 8.75 0 0.25 0 1.0
4 8.5 0 0.5 0 1.0
5 8.0 0 1.0 0 1.0
6 7.0 0 2.0 0 1.0
7 5.0 0 4.0 0 1.0
8 1.0 0 8.0 0 1.0
2
9 7.4 0 0 1.6 1.0
10 5.8 0 0 3.2 1.0
Tabla II. Preparación de tubos del experimento 1.
Una vez ya preparados los tubos y mezclados, observamos minuciosamente los
mismos, somo se observa en la figura para poder describir su solubilidad.
Figura 1. Tubos sometidos a la prueba de solubilidad del albuminato.
En este experimento no se observó ningún cambio relativo o significativo en la
solubilidad del albuminato a excepción de 3 tubos. A continuación, se presentan
los resultados obtenidos en esta prueba en la tabla.
TUBO pH SOLUBILIDAD
Sin cambios, apariencia transparente sin presencia de
1 6.1076
precipitado.
Sin cambios, apariencia transparente sin presencia de
2 5.8030
precipitado.
Presenta precipitación, suspensión de sedimentos,
3 5.5020
coloración blanca y más espesor.
Presenta más precipitación, poca suspensión de
4 5.2010 sedimentos, burbujas en la parte superior, coloración
turbia y más espesor.
5 4.9 Coloración turbia.
Sin cambios, apariencia transparente sin presencia de
6 4.5990
precipitado.
Sin cambios, apariencia transparente sin presencia de
7 4.2979
precipitado.
3
Sin cambios, apariencia transparente sin presencia de
8 3.9969
precipitado.
Sin cambios, apariencia transparente sin presencia de
9 3.6958
precipitado.
Sin cambios, apariencia transparente sin presencia de
10 3.3948
precipitado.
Tabla III. Características observadas en los tubos y sus puntos isoeléctricos.
¿Cuál es el punto isoeléctrico de la proteína?
En el experimento de la determinación del punto isoeléctrico del albuminato de
sodio, se determino entre un valor de 6. a 3.
DISCUSIÓN
1. ¿Cuál es el efecto de la adición de una sal metálica a una solución
proteínica?
El proceso de solubilización por sales se puede describir como la unión
adicional de la sal al dominio hidrofílico de las proteínas, permitiendo la
resolubilización al aumentar la carga de las proteínas, lo que ocasiona un
término de repulsión electrostática proteína-proteína elevado (CR, EAB, M,
WO, & MPC, 2006).
2. ¿De qué factores depende la solubilidad de una proteína en el agua?
La solubilidad de una proteína está influenciada por los siguientes factores:
(a) su composición en aminoácidos (una proteína rica en aminoácidos
polares es en general más soluble que una rica en aminoácidos
hidrofóbicos); (b) su estructura tridimensional (las proteínas fibrosas son en
general menos solubles que las globulares); (c) el entorno de la propia
proteína. En este último sentido, podemos decir que los principales factores
ambientales que influyen en la solubilidad de una proteína son los
siguientes: (1) la temperatura; (2) la constante dieléctrica del medio; (3) el
pH del mismo; y (4) la fuerza iónica. Esta práctica se va a referir
esencialmente a esta última (Lifeder, 2020).
3. Explique en términos fisicoquímicos el efecto que provoca la adición de un
ácido o una base fuerte.
Dado que la adición de un ácido fuerte provoca la disminución del pH,
dCa/dpH es negativo y la capacidad tampón siempre es positiva. Donde
4
dCa es el número de moles por litro del ácido fuerte que se añaden a la
disolución reguladora (Campillo Seva, 2011).
4. Explica cómo afecta un cambio en la constante dieléctrica del agua a la
solubilidad de una proteína.
Al añadir solventes orgánicos disminuye la solubilidad de las proteínas, ya
que se reduce la constante dieléctrica del medio, es decir, se aumenta la
fuerza de atracción entre los iones de las proteínas aumentando la
interacción proteína y disminuyendo la interacción proteína agua. La
temperatura también influye en la solubilidad de las proteínas (León, 2013).
5. ¿Qué relación existe entre el punto isoeléctrico y la solubilidad de una
proteína?
La solubilidad de una proteína es mínima en su punto isoeléctrico, ya que
su carga neta es cero y desaparece cualquier fuerza de repulsión
electrostática que pudiera dificultar la formación de agregados.
La solubilidad de una proteína depende del pH isoeléctrico. Un cambio de
pH en una sola unidad puede provocar que la proteína se convierta 10
veces más soluble (Martínez Augustin & Martínez de Victoria Muñoz, 2006).
6. ¿Qué es la ecuación de Henderson-Hasselbach y en qué casos está
indicado utilizarse?
La ecuación de Henderson - Hasselbach tiene una gran utilidad para
predecir en qué condiciones se hallan los ácidos disueltos en las soluciones
que se encuentran en los seres vivientes. Permite predecir el grado de
disociación que tiene un ácido débil, dependiendo del pH de la solución en
la que se encuentre disuelta (Martínez Guerra, 2014).
7. Diga si es posible tener dos proteínas con puntos isoeléctricos muy
alejados solubles en un mismo solvente ¿por qué?
Si, por que se disuelven al tener puntos isoeléctricos diferentes, el pH va a
estar alejado de estos, y la solubilidad aumenta cuando el pH se aleja del
punto isoeléctrico (Daina galindo, 2019).
CONCLUSIÓN
En este experimento de la determinación de punto isoeléctrico nos salió muy bien
ya que todo lo que se empleó se midió lo más minuciosamente para que todo
saliera muy bien, lo que aprendimos en esta practica fue que depende mucho las
propiedades químicas de las proteínas ya que de estas condiciones depende el
5
pH de la reacción tales si son hidrofóbicas, hidrofílicas e iónicas. Mientras
realizábamos el experimento nos dimos cuenta de que dependiendo la
concentración del ácido acético al momento de hacer acción con el agua
oxigenada y con el aluminato la solución se hacía un poco más espesa desde el
tubo uno hasta el tubo número diez iba cambiando, subiendo su espesor,
haciendo que estas mezclas sean más solubles (Galindo, 2019).
CUESTIONARIO
1. Las proteínas Bence Jones precipitan a una temperatura mayor de 60°C.
Las Crioglobulinas precipitan a una temperatura de 4°C. La albúmina de
huevo precipita a una temperatura mayor de 90°C y también precipita a un
pH menor de 4.5. Explique el comportamiento de cada una de estas
proteínas tomando en cuenta los siguientes parámetros: Fuerza iónica del
solvente, interacciones electrostáticas soluto-solvente, agentes
desacoplantes de la interacción soluto-solvente.
Las proteínas de Bence Jones son complejos proteicos derivados de
inmunoglobulinas, estos tienden a precipitar a una temperatura mayor de 60
grados porque al aumentar temperatura la energía cinética de las moléculas
aumenta lo que dificulta la formación de enlaces estables entre solutos y
disolvente, además de esto debido al carácter anfipático de las proteínas al
producir enlaces inestables esta sufre cambios estructurales que producen la
interacción del medio hidrófobo con el entorno acuoso lo que produce una
precipitación de la proteína. Las crioglobulinas se precipitan debido a que al
estar en bajas temperaturas los enlaces no son posibles de realizar y la
energía cinética de las moléculas es tan baja que no existe suficiente energía
entre sí para la realización de atracciones electroestáticas. En el caso de la
albumina, esta se ve afectada por el pH ya que esto afecta la envoltura acuosa
y las cadenas laterales de los aminoácidos constituyentes de las proteínas de
tal modo que las interacciones iónicas y electroestáticas se vuelven difíciles de
6
realizar y esto lleva a que la solubilidad sea mínima (Haldeman-Englert MD,
Turley Jr PA-C, & Novick BSN MSN, 2022).
2. Mencione que propiedades fisicoquímicas de la albúmina le permiten
interaccionar y transportar cualquier compuesto incluyendo hidrofóbicos a
través de un medio acuoso.
Es una molécula altamente soluble, que a pesar de su elevada carga negativa
puede ligarse reversiblemente tanto con cationes como con aniones, lo que
hace posible que su situación sea óptima para poder transportar o inactivar una
serie de sustancias como metales pesados, drogas, tinturas, ácidos grasos,
hormonas y enzimas (CORDERO, MONTERO, & MURILLO , 2019).
3. El punto Isoeléctrico de la Gelatina es de 4.7 y el de la colágena es de 8.4.
Se sabe que la colágena es una proteína fibrilar precursora de la gelatina.
Explique porque hay una diferencia tan grande entre los puntos
isoeléctricos de ambas.
El punto isoeléctrico del colágeno nativo ocurre con un pH de
aproximadamente 9. La gelatina se produce por la hidrólisis parcial del
colágeno. La gelatina tipo A, producida mediante el procedimiento ácido, tiene
un IEP entre 8 y 9. La gelatina alcalina (tipo B) tiene un IEP entre 4,8 y 5,4.
Estas diferencias son el resultado de la desaminación parcial de glutamina y
asparagina, respectivamente, en ácido glutámico y ácido aspártico en el
tratamiento previo alcalino de materias primas (Abend, Teetz, & Van Elsacker,
2020).
4. El Ac. tricloroacético, el Ac. sulfosalicílico y el Ac. fosfotúngstico tienen la
propiedad de precipitar proteínas. Cuál es el mecanismo fisicoquímico que
ocurre en esta precipitación.
Las moléculas de proteína pierden su carga neta y ya no son efectivamente
solvatadas, sino que interaccionan entre ellas formando aglomerados cada vez
más grandes, produciéndose la eventual precipitación. Se desnaturalizan
(Curiosoando.com, 2019).
7
5. Especifique cual es el efecto del plomo sobre las propiedades
electroquímicas de las proteínas de la sangre.
El plomo tiene una alta afinidad por los grupos sulfhídricos, puede inactivar
enzimas en especial las que están involucradas en la síntesis del grupo hemo (
Greenwood & Earnshaw, 1997).
6. Determine el efecto del litio cuando se encuentra en altas concentraciones
sobre las proteínas de las células nerviosas.
Altera el transporte de sodio en células nerviosas y musculares, también
provoca reducción en la concentración de catecolaminas, mediada
posiblemente por el efecto del ion litio (Li+) en la adenosina trifosfato Na+K+
(Na+, K+, ATPasa) para producir un aumento en el transporte transneuronal de
membrana del ion sodio (Arreguín Espinosa, Arreguín, & Castañón Olivares,
1999).
BIBLIOGRAFÍA
Greenwood, & Earnshaw. (1997). Chemistry of the Elements. School of Chemistry,
University of Leeds, U.K.: Butterworth-Heinemann.
Abend, S., Teetz, J. C., & Van Elsacker, M. (2020). PROPIEDADES DE LA
GELATINA. Mannheim: GELITA Improving Quality of Life.
Arreguín Espinosa, R., Arreguín, B., & Castañón Olivares, L. R. (1999). La
bioquímica del litio y su utilización en pacientes con desórdenes mentales.
Journal of the Mexican Chemical Society, 133-136.
Campillo Seva, N. (2011). EQUILIBRIOS Y VOLUMETRÍAS ÁCIDO-BASE. Murcia:
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CR, V., EAB, B., M, C., WO, A., & MPC, S. (2006). Efectos de la sal sobre la
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hidrolizados trípticos. Brasil: Depto. de Alimentos/Fac. de Farmácia/UFMG.
Curiosoando.com. (13 de noviembre de 2019). "Desnaturalización de proteínas:
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https://curiosoando.com/que-es-la-desnaturalizacion-de-proteinas
Galindo, D. (03 de Septiembre de 2019). Course Hero. Obtenido de Menos
solubles a altas concentraciones de sal Es la manera mas comun de...:
https://www.coursehero.com/file/p5eptcc/menos-solubles-a-altas-
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Haldeman-Englert MD, C., Turley Jr PA-C, R., & Novick BSN MSN, T. (2022).
Proteína de Bence Jones (en orina). UC San Diego Health: The StayWell
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Koolman J., Röhm C.H. Bioquímica: Texto y atlas. Madrid, España: Panamericana,
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Martínez Guerra, J. J. (2014). LIBRO ELECTRÓNICO DE BIOQUÍMICA.
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Peña A., Arroyo A., Gómez A., Tapia R. Bioquímica. México: Limusa, 2004.
