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Practica Estriado en Placa
Lastra Jimenez Lucia Rebeca, Garcia de la Cruz Victor, Diaz
Soberano David Eliel, Jimenez Morales Romel David.
Universidad Juarez Autónoma de Tabasco.
Profa.: Yolanda Cordova Bautisa.
27/09/2021
[Link]
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Resumen.
Se entiende que la bioquímica como una disciplina científica integradora que elabora el
estudio de las biomas y biosistemas. Integra de esta forma las leyes químico-físicas y la
evolución biológica que afectan a los biosistemas y a sus componentes. Lo hace desde un
punto de vista molecular y trata de entender y aplicar su conocimiento a amplios sectores de
la medicina (terapia genética y biomedicina), la agroalimentación, la farmacología.
Al estudiar la bioquímica observamos la composición química de los seres vivos,
especialmente las proteínas, carbohidratos, lípidos y ácidos nucleicos, además de otras
pequeñas moléculas presentes en las células y las reacciones químicas que sufren estos
compuestos (metabolismo) que les permiten obtener energía (catabolismo) y generar
biomoléculas propias (anabolismo). La bioquímica se basa en el concepto de que todo ser
vivo contiene carbono y en general las moléculas biológicas están compuestas principalmente
de carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno, fósforo y azufre.
Se utiliza métodos y técnicas importantes, las cuales son estriar una placa de agar o de
sangre. Hay dos tipos de estriado, una para el cultivo de nuevas colonias y una para el
aislamiento de colonias individuales. Además, hay dos tipos de métodos de estriado para el
aislamiento.
Técnicas estériles:
Las placas de Petri son un ambiente rico en nutrientes, por lo que es importante la
utilización de técnicas estériles en todo momento. Nunca dejes a una placa de Petri abierta.
Siempre expón a tu asa de inoculación a las llamas antes y después de transferir las bacterias
de un medio a otro. Algunos laboratorios pueden requerir el uso de una máscara o trabajar
dentro de una campana de tiro descendente para reducir al mínimo los contaminantes
ambientales.
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Técnica de estriado básico:
Calienta el asa de inoculación hasta que quede de color rojo intenso para eliminar
cualquier microorganismo. Deja que el asa se enfríe durante 20 o 30 segundos, pero no lo
soples para no reintroducir microorganismos. Recoge una muestra del cultivo bacteriano a
partir de un caldo o una placa de Petri. No necesitas de una presencia bacteriana visible.
Levanta la tapa de la placa de Petri que vas a sembrar en un ángulo de 45 grados, coloca el
asa en la parte de atrás del plato, toca con el asa en el medio y pásalo a través de la
superficie de la placa con un movimiento en forma de S desde atrás hacia adelante. Algunos
laboratorios pueden querer que gires la placa a 90 grados y repitas el procedimiento de
inoculación para una cobertura completa.
Métodos:
Estriar para aislar:
Estriar para aislar implica una sola inoculación de una sección de la placa de Petri y a
continuación, disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la sección inicial de dos o
tres secciones adicionales, achicando eficazmente la población de microorganismos.
Generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las bacterias, los bacteriólogos
también utilizan este método para aislar una línea de bacterias que nacen de un solo
progenitor.
Estriado en T:
Para llevar a cabo con precisión un estriado en T, dibuja una "T" en la parte posterior
de la placa de Petri. Voltea la tapa de la placa hacia abajo y, con un marcador permanente,
divídela por la mitad. A continuación, dibuja una línea divisoria en una de las mitades para
dividirla hasta formar una "T". Gira la placa de manera que la sección más grande quede a tu
derecha. Inocula el asa de acuerdo con el procedimiento anterior. Levanta la tapa e inocula el
medio con el barrido en forma de S, pero no cruces la línea media. Vuelve a calentar el asa
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para matar cualquier microorganismo. Gira el asa a la izquierda hasta que la primera de las
secciones más pequeñas quede en la esquina inferior derecha. Comienza barriendo en forma
de S en la esquina derecha de la primera sección que estriaste, en la nueva sección. Pon el
asa al calor de la llama hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier
microorganismo. Gira la placa una vez más y repite el barrido en S de la segunda sección a
través de la tercera.
Estriado por cuadrantes:
Este es también un método de estriado para el aislamiento, pero utiliza cuatro
secciones en lugar de tres. Divide la parte inferior de la placa de Petri en cuatro partes iguales
con un marcador permanente. Utiliza los procedimientos básicos de estriado para inocular el
primer cuadrante. Trabaja en el sentido de las agujas del reloj, llevando los microorganismos
de un cuadrante a otro, como lo hiciste con el método del estratificado en T y calentando el
asa antes de inocular el siguiente cuadrante. Calienta el asa y barre en forma de S desde el
primero hasta el cuadrante adyacente.
Objetivo:
Al finalizar la práctica, se será capaz de obtener cultivos puros utilizando las diferentes
técnicas de inoculación.
Introducción:
En la naturaleza, los microorganismos se encuentran formando poblaciones mixtas
con otros tipos de microorganismos. Los cultivos de estas mezclas se llaman por ello cultivos
mixtos. Sin embargo, el conocimiento de los microorganismos se consigue mediante el
estudio de cepas aisladas, cultivadas en el laboratorio en cultivos puros. En ocasiones el
estudio molecular conduce a la caracterización de los microorganismos, aún en poblaciones
mixtas. Sin embargo, la identificación bacteriana y la caracterización completa solo es
posible tras el aislamiento de la bacteria y la obtención de cultivos puros. Por ello el primer
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problema al estudiar una bacteria es su aislamiento del resto de los microorganismos
presentes. Una vez que se ha logrado el aislamiento es posible obtener la bacteria de interés
en cultivo puro.
El aislamiento es la separación de un determinado microorganismo del resto de
microorganismos que le acompañan. El método más usual es la siembra por estría sobre un
medio de cultivo sólido adecuado dispuesto en una placa de Petri.
Para ello se toma una pequeña cantidad de muestra con un asa de platino y se reparte sobre
la superficie del medio de cultivo. Sobre el medio quedan separadas e inmovilizadas las
células bacterianas. Tras la incubación en condiciones adecuadas, cada célula viable origina
una colonia visible resultado de sucesivas divisiones celulares.
Materiales y métodos:
Los materiales utilizados son los siguientes:
Caja de Petri con medio de cultivo
Asa Bacteriológica
Mechero
Cultivo de bacterias o levadura (muestra liquida)
Tubos de ensayo
Gradilla
Se efectuó la siembra por la técnica de estría recta, para ello se esterilizo el aza
bacteriológica con el mechero después se tomó una muestra del cultivo de
bacterias, el cual se encontraba en los tubos de ensayo, una vez se obtuvo la
muestra se dejó el tubo de ensayo en la gradilla y se procedió a abrir la caja de Petri
para trazar unas líneas rectas en la superficie del medio, una vez hecho esto se
cerró la caja y se colocó en posición invertida, finalmente se esterilizo el aza
bacteriológica desde la base hacia la punta.
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Continuando con los procedimientos de siembra se procedió a efectuar la técnica de
estría continua que es una forma de estriar las placas en forma ondulada, para ello
se utilizaron los mismos procedimientos de esterilización y manejo de materiales
antes mencionados para poder proceder con este método, una vez se tuvo la placa
de Petri abierta se colocó el aza que contenía el inoculo en una posición ligeramente
inclinada en un punto de la periferia de la placa y se distribuyó el inoculo con estrías
cerradas hasta haber cubierto una tercera parte de la superficie del medio, una vez
se tubo cubierta la tercera parte del medio, se colocó el aza en forma vertical y se
trazaron estrías más separadas hasta cubrir toda la superficie. De nuevo, sal
terminar, se cerró la caja de Petri y se colocó en posición invertida terminando con la
esterilización del aza desde la base hacia la punta.
Para la técnica de estrías en cuadrantes se utilizaron los mismos procedimientos de
esterilización y manejo de equipo, una vez tomada la caja de Petri, antes de abrirla,
se trazaron cuadrantes en la base de la caja (es decir, en la parte de abajo),
después se tomó la muestra del inoculo con el aza ya esterilizada y se colocó en un
punto de la periferia del primer cuadrante, se trazaron estrías cerradas hasta casi
llegar al centro de la placa (en el primer cuadrante) sin tocar las líneas divisorias, se
tapó la caja, se giró en a la posición del segundo cuadrante, se esterilizo el aza de
nuevo, una vez frio el aza se tomó inoculo de la última estría del primer cuadrante y
se estrió el segundo cuadrante.
o Se repitió el mismo procedimiento para los siguientes dos cuadrantes habiendo
tomado el inoculo el cuadrante anterior. Cuando se terminó de inocular la
placa se cerró y se colocó de manera invertida sobre la mesa terminando con
la esterilización del aza.
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Se continuo con el método de estría en cuadrante radial habiendo seguido los
procedimientos de esterilización y manejo de equipo se procedió a tomar la caja de
Petri, una vez abierta se distribuyó el inoculo hasta aproximadamente la tercera
parte de la caja mediante estrías cerradas, se tapó la caja y se giró
aproximadamente noventa grados con respecto a la zona a estriar, una vez hecho
esto se procedió a estriar la segunda sección hasta una tercera parte del área y se
tuvo cuidado de no tocar las estrías previas, se cerró la caja y se giró de nuevo unos
90 grados, se continuo con el mismo procedimiento dos veces más, se cerró la caja
y se colocó en forma invertida para terminar con el procedimiento de esterilización.
Utilizando los métodos de esterilización y manejo de equipo se continuó con el
método de estría cruzada, que es un método variante del método en cuadrante
radial, cuando se tuvo la caja abierta se estrió el primer sector y se esterilizó el aza,
se dejó enfriar y se cruzó la parte final de las ultimas estrías y se procedió a estriar la
segunda sección, este procedimiento se repitió en las siguientes secciones.
Resultado y Discusión:
Ya sea observando e investigando, mediante este proceso se pueden obtener en cajas
sembradas por extensión y estriado. Así, de esa manera obteniendo morfológicamente las
colonias.
Independientemente de la técnica que se emplee, la finalidad de la siembra por estría
ondulada en caja es la obtención de colonias aisladas.
Estría recta: se observan características metabólicas o efecto antagónico
Estría adulada: en cualquiera de sus modalidades ya sea, continua, en cuadrante, cuadrante
radial o cruzada; se asegura la dilución progresiva de la muestra en la superficie del agar lo
que permite tener colonias aisladas.
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Siembra por estrías
Estría recta
Estría ondulada
Estría continua
Estría en cuadrantes
Estría en cuadrantes radial
Estría cruzada
Conclusión:
Para finalizar como ya vimos existen diferentes medios y técnicas de cultivo son
esenciales en un laboratorio de microbiología de un hospital, pues sirven para identificar las
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bacterias causantes de las enfermedades infecciosas del aparato digestivo y los antibióticos a
los que son sensibles esas bacterias, por ello su funcionamiento se ve más aplicado en esa
área. De esta manera ayuda mucho pues así se pueden ser detectadas a tiempo.
La siembra por estría permite aislar las bacterias que dan lugar a colonias separadas y
posteriormente, transfiriendo una sola colonia a un medio nuevo, se permite el desarrollo de
un cultivo puro bacteriano. Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de
muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su
desarrollo y multiplicación.
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Referencias:
Canal Amrita Vlab. (5 de Mayo de 2017). Streak Plate Method [Archivo de Vídeo]. YouTube.
[Link]
Canal Mary Carmen Urzua. (17 feb. 2013). SIEMBRA POR ESTRIA EN PLACA [Archivo de
Vídeo]. YouTube. [Link]
