Universidad Autónoma de San Luis Potosí

Licenciatura de Médico Estomatologo

Embriohistología

Metodos y tecnicas de estudio

en histología, embriología e
ingeniería tisular bucodental
Capí󰉃󰉉󰈘󰈢 2
Catedrática: Dra. Ma del Pilar Medina Curiel
E.M.E. Kathya Díaz Salazar
 Gen󰈩󰈸󰇽󰈘id󰈀󰇷󰇵󰈼
El conocimiento de los tejidos se debe a la
existencia por una parte de instrumentos
amplificantes -los microscopios- y por otra,
la existencia de técnicas histológicas e
histoquímicas que hacen posible la
observación de los tejidos a través de
dichos instrumentos amplificantes.
In󰈻󰉄ru󰈚󰈩󰈞t󰈢󰈻
am󰈥󰈘󰈎fic󰇽󰈝󰉄es
Mic󰈸󰈡󰈼c󰈢󰈥i󰈡 ó󰈦t󰈏󰇹o 󰇶󰈩 l󰉊󰉛

● Puede definirse como un

instrumento amplificante que
consta de dos sistemas: un
sistema óptico y un sistema
mecánico.
● El poder de resolución de un
microscopio de luz es de 0.2
micras o 20 micras
Mic󰈸󰈡󰈼c󰈢󰈥i󰈡 󰇶󰇵 ca󰈚󰈦󰈡 󰈢s󰇹u󰈹󰈡

● Se puede observar la luz

esparcida por partículas del
objeto iluminado lateralmente
mediante un condensador.
● Las partículas aparecen como
puntos brillantes en un campo
oscuro
Mic󰈸󰈡󰈼c󰈢󰈥i󰈡 󰇶󰇵 lu󰉛 󰉉󰈘t󰈸󰇽󰉐i󰈡l󰇵󰉃a
● Se utilizan los rayos ultravioletas.
● El poder de resolución es de 0.13
a 0,15 micras.
● Se utiliza como microscopio de
fluorescencia y para detectar y
determinar la cantidad de ácidos
nucleicos que hay en la célula.
● Esta técnica recibe el nombre de
microespectrofotometría con luz
UV.
Mic󰈸󰈡󰈼c󰈢󰈥i󰈡 󰇶󰇵 f󰈗u󰈡󰈹󰇵ce󰈝󰇸󰈎󰇽

● Los objetos son iluminados por rayos

de una determinada longitud de
onda.
● Permite destacar sustancias con
autofluorescencia (fluorescencia
primaria) como las tetraciclinas y
sustancias marcadas con colorantes
fluorescentes o fluorocromos
(fluorescencia secundaria)
Mic󰈸󰈡󰈼c󰈢󰈥i󰈡 󰇸󰈢n󰇾o󰇸󰈀l
● Utiliza el laser como fuente
luminosa.
● Es un microscopio de
fluorescencia en el que la luz se
dirige hacia el punto de la
muestra a una profundidad
específica.
● La reconstrucción de la imagen
se realiza actualmente por
computador.
Mic󰈸󰈡󰈼c󰈢󰈥i󰈡 󰇵󰈘ec󰉃󰈹ón󰈎󰇹󰈢 󰇶e t󰈸󰈀󰈞s󰈚󰈏󰈼ión

● Poder de resolución de hasta 0,25 micras

que tiene por objeto visualizar la
estructura interna de la célula y los tejidos.
● La imagen se forma al atravesar un haz de
electrones. Las estructuras del corte que
absorben todos los electrones son
electrocondensadas. Las que permiten
atravesar los electrones son
electrolúcidas.
 Mic󰈸󰈡󰈼c󰈢󰈥i󰈡 󰇵󰈘ec󰉃󰈹ón󰈎󰇹󰈢 󰇶e b󰈀󰈸󰈹󰈏do
● Poder de resolución de hasta 3 micras,
que tiene por objeto visualizar
tridimensionalmente superficies de
células, tejidos y materia inerte.
● La imagen se forma al barrer un haz de
electrones punto por punto, la superficie
de la muestra en el interior de la cámara
de vacío.
● La imagen tridimensional es reflejo del
nivel de electrones secundarios emitidos
desde las diferentes profundidades
existentes.
Mic󰈸󰈡󰈼c󰈢󰈥i󰈡 󰇵󰈘ec󰉃󰈹ón󰈎󰇹󰈢 a󰈞󰈀l󰈏󰉃i󰇸󰈡

● Es el MET o MEB al que se le incorporan

detectores con capacidad para captar
distintas emisiones procedentes de la
muestra.
● El registro de emisiones permite
determinar analiticamente la
composición quimica, cualitativa y
cuantitativa, de la muestra y su
distribución en el seno de la misma
 Mic󰈸󰈡󰈼c󰈢󰈥i󰈡 󰇶󰇵 fu󰈩󰈸󰉜󰇽 ató󰈚󰈎󰇸󰇽

● Permite obtener imágenes de

superficie de una alta resolución
atómica.
● La preparación de la muestra es
mínima por lo que la morfología de
superficie a observar es muy
semejante a la que existe en
condiciones fisiológicas.
 Méto󰇷󰈡󰈼 y 󰉃é󰇸ni󰇹󰈀󰈼
hi󰈻󰉄󰈡ló󰈇󰈏󰇸as 󰈩 󰈊󰈏󰈼to󰈫󰉉í󰈛󰈏ca󰈻
Las técnicas histológicas necesarias para preparar las muestras
con destino a su observación pueden ser vitales, cuando se
realizan directamente en el individuo vivo; supravitales, cuando
se estudian tejidos vivos separados del individuo; postvitales,
cuando se realizan sobre muestras de tejidos muertos fijados o
no fijados.
Los estudios sobre tejidos fijados son los que se realizan con
frecuencia y se obtienen a partir de biopsias, autopsias o
extendidos celulares o raspado.
 Téc󰈝i󰇸󰈀s 󰇵󰈝 󰈛ic󰈸󰈡󰈼c󰈢󰈥ía ó󰈦t󰈎󰇹󰇽
--TEJIDOS BLANDOS--
FIJACION
● Es el primer paso del proceso
● Se interrumpen los procesos del metabolismo celular y se
conservan de una manera fidedigna las estructuras celulares
y tisulares.
● La fijación se puede realizar mediante distintos
procedimientos que consisten en la inmersión de la muestra
en una solución fijadora que suele ser formol neutro o
tamponado. La fijación debe iniciarse lo más pronto posible
para evitar la autolisis.
● El volumen del fijador deberá ser 20 veces mayor que el
volumen de la muestra.
● Tras la fijación en formol se debe realizar un lavado con agua
para eliminar los restos de fijador.
 Téc󰈝i󰇸󰈀s 󰇵󰈝 󰈛ic󰈸󰈡󰈼c󰈢󰈥ía ó󰈦t󰈎󰇹󰇽
--TEJIDOS BLANDOS--
INCLUSIÓN:
● La inclusión más utilizada de forma rutinaria es la inclusión en parafina.
● Como la parafina no se mezcla con el agua es imprescindible retirar el agua existente en las
muestras fijadas y para ello se realiza la deshidratación.
● El agente deshidratante suele ser alcohol etílico.
● Una vez deshidratadas las piezas, se procede a su aclaramiento, es decir, a la situación del
agente deshidratante por otro que sea miscible con el medio de inclusión.
● Los productos más utilizados son el benceno, xileno y tolueno entre otros (estos son productos
tóxicos).
● La inclusión tiene por objeto la ocupación por parafina de todos los espacios de la pieza de
tejido que en vida estaban ocupados por agua.
● Finalmente se procede a la fabricación del bloque sólido que contiene la muestra
a estudiar con el microscopio.
Téc󰈝i󰇸󰈀s 󰇵󰈝 󰈛ic󰈸󰈡󰈼c󰈢󰈥ía ó󰈦t󰈎󰇹󰇽
--TEJIDOS BLANDOS--

CORTE
● Para la obtención de láminas delgadas se realiza
el corte con unos instrumentos llamados
micrótomos.
● Con estos podemos obtener láminas delgadas
que por lo general tienen un espesor entre 7 y 15
micras.
 Téc󰈝i󰇸󰈀s 󰇵󰈝 󰈛ic󰈸󰈡󰈼c󰈢󰈥ía ó󰈦t󰈎󰇹󰇽
--TEJIDOS BLANDOS--
COlORACIÓN
● El primer paso es la desparafinación.
● Para eliminar la parafina se suelen usar disolventes orgánicos tipo xileno.
Más tarde se procede la hidratación del corte en soluciones decrecientes de
etanol y como paso final agua destilada.
● La coloración más habitual es la de hematoxilina y eosina que utiliza un
colorante de carácter básico (hematoxilina) que colorea estructuras ácidas
de las células y tejidos; dichas estructuras son basófilas y un colorante ácido
(eosina) que colorea estructuras básicas que se denominan acidófilas o
eosinófilas.
 Téc󰈝i󰇸󰈀s 󰇵󰈝 󰈛ic󰈸󰈡󰈼c󰈢󰈥ía ó󰈦t󰈎󰇹󰇽
--TEJIDOS BLANDOS--

MONTAJE
● Finalmente los cortes son lavados en
agua destilada, deshidratados en
soluciones crecientes de etanol,
aclarados en xileno y cubiertos con
cubreobjetos depositando
previamente unas gotas de medio de
montaje.
Téc󰈝i󰇸󰈀s 󰈊󰈏󰈼to󰈫󰉉í󰈛󰈏ca󰈻
La histoquímica es la utilización de reacciones químicas y/o
bioquímicas en la técnica histológica para localizar ciertas
substancias o la actividad enzimática en muestras
histológicas.

De esta manera se pueden observar la hemoglobina y sus

derivados, la melanina, la lipofuscina, el hierro, el calcio, el
ARN, etc..

Durante las últimas décadas se ha producido un gran avance

en el desarrollo de las técnicas denominadas
inmunocitoquímicas, que tienen por base la utilización de
antisueros o anticuerpos específicos contra los componentes
celulares o tisulares que se quieren identificar.
 Tej󰈎󰇷󰈢󰈼 du󰈸󰈡󰈼
Para obtener láminas delgadas de los tejidos
mineralizados pueden utilizarse distintos métodos. El
primero consiste en descalcificar y ablandar dichos
tejidos tras la fijación e incluirlos en parafinas para ser
cortados y teñidos.

El segundo método consiste en la inclusión del tejido

duro dejado sin descalcificar. Para conseguir cortar
láminas delgadas sin descalcificar es necesario utilizar
en vez de parafina o celoidina una sustancia que sea
mucho más dura y utilizar un microtomo motorizado
con una cuchilla de carburo de tungsteno que
permite realizar cortes a una velocidad lenta y
constante.
Méto󰇷󰈡󰈼 y 󰉃é󰇸ni󰇹󰈀󰈼
en 󰈎󰈝󰈈󰇵ni󰈩󰈸í󰇽 󰉄is󰉉󰈗󰇽󰈹
 Téc󰈝i󰇸󰈀s 󰇷󰇵 󰇸ul󰉃󰈎󰉐󰈢 ce󰈗󰉉󰈘󰇽r
Las células madre pueden ser mantenidas y cultivadas en el
laboratorio.

Las células pueden obtenerse a partir de muestras de biopsia

obtenidas de los tejidos de un individuo, del cordón umbilical de un
recién nacido o de un embrión en desarrollo.

Los métodos de aislamiento más utilizados son los métodos

enzimáticos y las técnicas de explante.
Los métodos enzimáticos, las muestras biológicas son tratadas
enzimáticamente para eliminar la matriz extracelular y aislar las
células de interés.
Las técnicas de explante consisten en la utilización de fragmentos
de tejido de tamaño microscópico que son directamente
mantenidos en cultivo.
Una vez extraidas, se mantienen en cultivo en el laboratorio.
Bi󰈡m󰇽󰉃e󰈹󰈎󰇽le󰈻
Son compuestos de origen natural o sintético que se
utilizan con frecuencia en ingeniería tisular para sustituir la
matriz extracelular del tejido a reproducir.

Indicadores de calidad:
1. Biocompatibilidad o aceptación por el organismo
receptor: Hace referencia a la capacidad del material
de integrarse al organismo.
2. Ausencia de toxicidad o efectos secundarios
indeseables.
3. Ser quimicamente estable o inherte.
4. Cumplir los requerimientos biomecánicos necesarios
para llevar a cabo su función en el organismo.
5. Facilidad de producción y procesamiento.
Téc󰈝i󰇸󰈀s 󰇷󰇵 e󰈞s󰈀󰈚󰇻l󰇽󰈑e 󰉙 󰈀s󰈢󰇹i󰈀󰇸󰈏ón 󰇷e
co󰈚󰈦󰉉󰇵s󰉃o󰈼 t󰈎󰈻󰉊󰈘ar󰈩󰈻
En odontología es frecuente la necesidad de asociar un componente tisular
de tipo epitelial constituido por una única población celular, y de un
componente de tipo conectivo, formado por células inmersas en una matriz
celular.
Para el ensamblaje y el mantenimiento de los distintos componentes
tisulares, lo más habitual es utilizar biorreactores.
Los biorreactores son sistemas que mantienen un ambiente biológicamente
activo y permiten el cultivo y desarrollo de estructuras biológicas complejas.
El método denominado aire-líquido favorece la estratificación y la
maduración del epitelio de los tejidos generados mediante ingeniería tisular.
G󰈤A󰉎󰈾󰉚S