Espectrometría de dispersión y de reflectancia de la radiación.
Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensión solisa se dispersa en todas
direcciones y como consecuencia se observa turbia
Se basa en la reflexión de la luz la cual se produce cuando un haz de luz incide sobre una superficie y cambia
de dirección en el mismo medio. Los analizadores que utilizan este método determinan la concentración de un
determinado analito basándose en esta propiedad de luz.
Espectroscopía Raman
La espectrometría Raman es una técnica espectroscópica utilizada en física de la materia condensada
y también en química para el estudio de los modos vibracionales, rotacionales y otros de baja
frecuencia en un sistema.
La espectroscopia Raman pertenece a la categoría de espectroscopia vibratoria. Esto significa que
analiza una muestra químicamente, mediante el uso de la luz para crear (excitar) movimiento
molecular, e interpretar esta interacción después.
Tenemos que tener claro tres conceptos
Cuando la luz interactúa con moléculas en un gas, líquido o sólido, la inmensa mayoría de los fotones
se dispersan con la misma energía que los fotones incidentes. Esto se describe como dispersión
elástica o de Rayleigh.
Un pequeño número de estos fotones, aproximadamente un fotón en diez millones, se dispersará a
una frecuencia diferente que el fotón incidente. Este proceso se llama dispersión inelástica, en la que
la frecuencia de los fotones en la luz monocromática cambia al interactuar con una muestra. Los
fotones de la luz son absorbidos por la muestra y luego reemitidos. La frecuencia de estos fotones
reemitidos se desplaza hacia arriba o hacia abajo en comparación con la frecuencia monocromática
original, lo que se denomina efecto Raman. Este cambio proporciona información sobre las
transiciones vibracionales, rotacionales y otras de baja frecuencia en las moléculas.
Normalmente, la muestra se ilumina con un rayo láser. La luz del punto iluminado se recoge con una
lente y se envía a través de un monocromador.
Las longitudes de onda cercanas a la línea láser, debidas a la dispersión elástica de Rayleigh, son
filtradas, mientras que el resto de la luz recogida se dispersa en un detector.
La dispersión Raman espontánea es generalmente muy débil y, como resultado, la principal dificultad
de la espectrometría Raman es separar la luz débil dispersada inelásticamente de la luz intensa láser
por dispersión de Rayleigh. Históricamente, los espectrómetros Raman utilizaban rejillas de
difracción holográfica y múltiples etapas de dispersión para lograr un alto grado de rechazo láser. En
el pasado, los detectores de elección para las configuraciones de dispersión Raman eran los
fotomultiplicadores, lo que daba lugar a largos tiempos de adquisición. Sin embargo, la
instrumentación moderna en casi todo el mundo emplea filtros de muesca o borde para rechazar el
láser, así como espectrógrafos y detectores CCD.
Hay diferentes tipos avanzados de espectrometría Raman, como la de superficie potenciada, la
polarizada, la estimulada, la de transmisión, la compensada espacialmente y la híperRaman
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Aplicaciones clave de la espectroscopia Raman
La espectroscopia Raman se usa en la industria para una variedad de aplicaciones
● Se utiliza comúnmente en química, ya que la información vibracional es muy específica para
los enlaces químicos de las moléculas. Por lo tanto, proporciona una huella dactilar de la
molécula que puede ser identificada. Otra forma de uso de la técnica es el estudio de cambios
en las uniones químicas, por ejemplo cuando un sustrato se añade a una enzima.
● El modo de respiración radial es una técnica de uso habitual para evaluar el diámetro de los
nanotubos de carbono
● Los analizadores de gases Raman tienen muchas aplicaciones prácticas. Por ejemplo, se usan
en medicina para el seguimiento en tiempo real de las mezclas de gases respiratorios y la
anestesia durante la cirugía.
● En física del estado sólido, la espectrometría Raman espontánea se utiliza para, entre otras
cosas, caracterizar los materiales, medir la temperatura, y encontrar la orientación
cristalográfica de una muestra.
● La dispersión Raman mediante un cristal anisotrópico da información sobre la orientación del
cristal, es decir la polarización de la luz de dispersión Raman en relación con el cristal, y la
polarización de la luz láser, pueden utilizarse para conocer la orientación del cristal, siempre
que la estructura cristalina sea conocida.
● Las imágenes espectroscópicas Raman es una nueva técnica en el análisis de los materiales
extraterrestres como los meteoritos, polvo interplanetario y muestras de material cometario
● Las fibras activas Raman, como la aramida y el carbono, tienen modos vibracionales que
muestran un cambio en la frecuencia Raman con estrés aplicado. Las fibras de polipropileno
también exhiben cambios similares..
● La espectrometría Raman compensada espacialmente (SORS), que es menos sensible a las
capas superficiales que la espectrometría Raman convencional, se puede utilizar para
descubrir la falsificación de medicamentos sin necesidad de abrir su embalaje interior, y para
monitorización no invasiva de tejido biológico.
● La espectrometría Raman se puede utilizar también para investigar la composición química de
documentos históricos, como el Libro de Kells, y contribuir al conocimiento de las
condiciones sociales y económicas en el momento en que los documentos fueron producidos.
Esto es especialmente útil porque la espectrometría Raman es una forma no invasiva que
permite preservar este tipo de materiales.
tiene muchas otras aplicaciones ya que considerando sus beneficios como la capacidad de hacer
pruebas no destructivas, su selectividad, la habilidad de utilizar muestras con poca o nula preparación
y sus flexibilidad para realizar análisis cuantitativos y cualitativos es fácil entender porque es utilizada
en diversas areas de investigacion, la ciencia medica y la industria
TURBIDIMETRÍA
La turbidimetría es una técnica analítica de medición que determina cuánto se atenúa
un haz de luz que se traslada a través de una suspensión. Esta atenuación se produce
gracias a los fenómenos de absorción y dispersión que experimenta la luz debido a las
partículas.
Entonces, se pueden deducir las dimensiones de las partículas presentes en una
suspensión mediante la medición de la turbidez que hay en esta. En este sentido, este
procedimiento se usa para cuantificar la absorción y dispersión de la luz: se
demuestra su dependencia de las dimensiones de las partículas y de la concentración
de estas en la suspensión.
Asimismo, los métodos analíticos basados en la turbidimetría poseen ciertas ventajas,
como por ejemplo: cortos tiempos de análisis, simplicidad experimental, costos
reducidos (con relación a otros procesos), ausencia de daño a la muestra y
eliminación de la necesidad de calibrar.
Fundamento
Las partículas suspendidas en un medio liquido generan una turbidez
que reduce la cantidad de luz que puede atravesarla. A mayor turbidez la luz
transmitida es menor, por lo que puede establecerse una relación entre la
concentración de una solución y la luz que puede pasar a través de ella.
Instrumentación
El turbidimetro detecta la luz transmitida a través de una solución
para determinar la concentración de partículas presentes en dicha solución. El
detector se sitúa en línea con el rayo incidente puesto que la luz transmitida no se
desvía de la trayectoria original.
Aplicaciones.
No es un método muy sensible, por lo que es utilizado para cuantificar concentraciones relativamente
elevadas.
● Detección de contaminantes
Esta técnica de medición posee una gran cantidad de aplicaciones, entre las que
destacan la detección de contaminantes en forma de trazas en una variedad de
muestras y la estimación de las dimensiones de las partículas en diversos fluidos.
● Cuantificar células
Además, la turbidimetría es empleada en el campo de la biología para cuantificar las
células presentes en determinadas soluciones, y en la observación de cultivos
microbiológicos para la fabricación de fármacos antibióticos.
● Inmunoturbidimetría
En el área de la química que estudia el diagnóstico de tipo clínico, se utiliza el
método de inmunoturbidimetría en la estimación de las estructuras proteicas de tipo
sérico.
● Control de calidad del agua
Por otro lado, la turbidimetría es empleada en el control de la calidad del agua para
estimar la cantidad de partículas suspendidas en aguas de origen natural, al igual que
en el agua de las corrientes de procesamiento.
● Medición de cantidad de azufre en muestras de petróleo
De la misma manera, se utiliza este método analítico para estimar la cantidad de
azufre presente en muestras de petróleo, carbón y otras sustancias de naturaleza
orgánica; en este caso, se produce una precipitación del azufre en forma de sulfato de
bario.
Nefelometría
Definición
Se define como la detección de la energía lumínica dispersa o reflejada hacia un detector que no se
encuentra en el camino del haz luminoso. Las mediciones nefelométricas son más adecuadas para
medir muestras cuya concentración de partículas es baja, lo que da lugar a una débil dispersión de la
luz.
Fundamento
Determina la concentración de partículas mediante la medida de la cantidad de luz dispersada en un
ángulo determinado (normalmente entre 15º y 90º)
Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensión de partículas sólidas,
se dispersa en todas las direcciones y se aprecia turbidez.
En el momento en el cual un haz de luz choca contra las partículas de una sustancia en suspensión, la
dirección de propagación del haz cambia su dirección. Este efecto depende de los siguientes aspectos:
1. Dimensiones de la partícula (tamaño y forma).
2. Características de la suspensión (concentración).
3. Longitud de onda e intensidad de la luz.
4. Distancia de la luz incidente.
5. Ángulo de detección.
6. Índice de refracción del medio.
Instrumentación
El nefelómetro es un instrumento utilizado para medir partículas suspendidas en una muestra líquida
o en un gas. De modo que una fotocelda colocada en un ángulo de 90° con respecto a una fuente
luminosa detecta la radiación por las partículas presentes en la suspensión.
la luz reflejada por las partículas hacia la fotocelda depende de la densidad de las partículas.
A. Fuente de radiación
En nefelometría es de vital importancia
disponer de una fuente de radiación con una
gran potencia lumínica. Existen diferentes
tipos, que van desde lámparas de xenón y
lámparas de vapor de mercurio, lámparas
halógenas de wolframio, radiación láser, entre
otros.
B. Sistema monocromador
Este sistema está ubicado entre la fuente de la radiación y la cubeta, para que de esta manera se evite
la incidencia sobre la cubeta de radiaciones con diferentes longitudes de onda en comparación con la
radiación deseada.
De otra manera, reacciones de fluorescencia o efectos de calentamiento en la solución provocarían
desviaciones de la medida.
C. Cubeta de lectura
Es un recipiente generalmente prismático o cilíndrico, y puede tener diferentes tamaños. En éste se
encuentra la solución en estudio.
D. Detector
El detector se encuentra situado a una distancia específica (generalmente muy cerca de la cubeta) y
es el encargado de detectar la radiación dispersada por las partículas de la suspensión.
Aplicaciones
Aplicaciones clínicas:
En la práctica clínica, la Nefelometría es utilizada principalmente para:
★ Contar células sanguíneas distinguiendo los distintos tipos de células de la sangre.
★ Contar células de un tipo específico.
★ Determinar inmunoglobulinas IgE, IgA, IgM, IgG total, complemento C3 y C4, proteínas
plasmáticas, antiestreptolisina O, factor reumatoideo, Haptoglobina, Alfa1-antitripsina,
proteína C reactiva y otras proteínas plasmáticas.
★ Medir complejos antígeno – anticuerpo.
★ Efectuar análisis de enzimas que actúan sobre distintos sustratos.
Detección de complejos inmunes
Cuando una muestra biológica contiene un antígeno de interés, éste se mezcla (en una solución
buffer) con un anticuerpo para formar un complejo inmune.
La nefelometría mide la cantidad de luz que se dispersa por la reacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ac),
y de esta manera se detectan los complejos inmunes.
Este estudio puede ser llevado a cabo por dos métodos:
Nefelometría del Punto Final:
Esta técnica puede ser utilizada para el análisis del punto final, en la cual el anticuerpo de la muestra
biológica estudiada es incubado por veinticuatro horas.
El complejo Ag-Ac es medido utilizando un nefelómetro y la cantidad de luz dispersada es
comparada con la misma medida llevada a cabo antes de la formación del complejo.
Nefelometría cinética
En este método, la tasa de la formación de complejos es monitoreada de forma continua. La tasa de
reacción depende de la concentración del antígeno de la muestra. Acá las medidas se toman en
función al tiempo, por lo cual la primera medida es tomada al tiempo “cero” (t=0).
La nefelometría cinética es la técnica más utilizada, ya que el estudio puede llevarse a cabo en 1 hora,
en comparación al largo periodo de tiempo del método del punto final. La relación de dispersión se
mide justamente después de agregar el reactivo.
Por lo tanto, siempre que el reactivo sea constante, la cantidad del antígeno presente se considera
directamente proporcional a la relación de cambio.
