Laboratorio de Química Orgánica
CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN:
APLICACIÓN A LA SEPARACIÓN DE COMPUESTOS ORGANICÓS
MARCO TEÓRICO
INTRODUCCIÓN
La cromatografía es una técnica que permite separar los componentes de una mezcla. Esta
separación se logra utilizando un sistema bifásico: fase estacionaria donde se retienen los compuestos
a separar y fase móvil que desplaza de forma diferencial los compuestos a través de la fase
estacionara. Dependiendo de la naturaleza de las fases, se pueden distinguir distintos tipos de
cromatografía:
Cromatografía sólido-líquido: la fase estacionaria es un sólido y la móvil un líquido.
Cromatografía líquido-líquido: ambas fases son líquidos y en la estacionaria el líquido se ancla a un
soporte sólido.
Cromatografía líquido-gas: la fase estacionaria es un líquido no volátil sobre soporte sólido y la fase
móvil un gas.
Cromatografía sólido-gas: la fase estacionaria es un sólido y la móvil un gas. La mezcla a separar se
deposita sobre la fase estacionaria y la fase móvil atraviesa el sistema desplazando los componentes
de la mezcla a distintas velocidades que dependen de la afinidad de los mismos por cada una de las
fases (Figura 11). Se denomina elución a la migración de los componentes de la mezcla a lo largo de
la fase estacionaria impulsados por la móvil.
Existen otras clasificaciones para los distintos tipos de cromatografía:
A) En función de la interacción que se establece entre los componentes de la mezcla y las fases móvil
y estacionaria:
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* Cromatografía de adsorción: se producen interacciones de tipo polar siendo la fase estacionaria un
sólido.
* Cromatografía de partición: la separación se basa en las diferencias de solubilidad de los
componentes de la mezcla entre las dos fases siendo ambas líquidas. Cuando la estacionaria es
menos polar que la móvil se denomina cromatografía en fase inversa.
* Cromatografía de intercambio iónico: se producen intercambios entre iones presentes en la fase
estacionaria y los del compuesto orgánico solubilizado e ionizado en la fase móvil.
B) En función del tipo de soporte empleado para la fase estacionaria:
* Cromatografía en columna: utiliza como soporte una columna de vidrio.
* Cromatografía en capa fina: el soporte es una placa de vidrio, aluminio o plástico.
La cromatografía se puede emplear para:
-Conocer el número de componentes de una mezcla e identificarlos por comparación con patrones,
Cromatografía Analítica.
-Separar mezclas de compuestos y como método de purificación, Cromatografía Preparativa
CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN
La cromatografía de adsorción emplea una fase estacionaria sólida de carácter polar,
ADSORBENTE y una fase móvil líquida, ELUYENTE. Se utiliza tanto con fines analíticos como
preparativos y la separación de los componentes de la mezcla viene determinada por las
interacciones polares de los componentes de la misma con las fases estacionaria y móvil. Por lo
tanto, los compuestos más difíciles de separar mediante este tipo de cromatografía, serán aquellos
que tengan una polaridad muy similar.
FASE ESTACIONARIA: ADSORBENTE Está constituida por un sólido poroso, finamente
granulado, con centros activos polares en su superficie donde se adsorben las moléculas de los
compuestos que se van a cromatografiar. Cuanto menor sea el tamaño de partícula de este material
mayor será la capacidad de adsorción. La adsorción se debe a interacciones intermoleculares del tipo
dipolo-dipolo, dipolodipolo inducido o enlaces de hidrógeno entre el adsorbente y el soluto. El
adsorbente más utilizado es la gel de sílice (Figura 12) donde las interacciones tienen lugar entre los
grupos Si—OH y Si—O—Si; también se emplea con relativa frecuencia alúmina (Al2O3).
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Figura 12.- Estructura del gel de sílice e interacciones con algunos compuestos polares El adsorbente
debe ser inerte con las sustancias a cromatografiar. El gel de sílice presenta carácter ácido y la
alúmina puede adquirirse con carácter neutro, ácido o básico.
FASE MOVIL: ELUYENTE Es un disolvente en el que los componentes de las mezclas son, al
menos, parcialmente solubles. Al aumentar la polaridad del disolvente aumenta la velocidad de
elución de los compuestos de la mezcla. Se puede utilizar un único disolvente o una mezcla de
disolventes e incluso llevar a cabo la elución con un gradiente de polaridad aumentando
progresivamente la proporción del disolvente más polar.
RETENCIÓN Las moléculas de soluto S se adsorben en los centros polares de la fase estacionaria
X y, a medida que se produce la elución, van siendo desplazadas por las moléculas de disolvente/s
que constituyen la fase móvil M. La retención de un soluto se puede justificar por la competencia
que se establece entre S y M por adsorberse a los centros polares X, es decir, depende de los valores
de las constantes de los equilibrios:
Que están en función de: Polaridad del compuesto a eluir que depende de sus grupos funcionales
Naturaleza del adsorbente Naturaleza del disolvente
ORDEN DE POLARIDAD DE LOS COMPUESTOS ORGÁNICOS:
Ácidos carboxílicos > Fenoles > Alcoholes y Tioles > Aminas > Ésteres > Aldehídos y Cetonas >
HC. Aromáticos > HC. Halogenados > Éteres > Hidrocarburos Insaturados > Alcanos
■=> Cuanto más polar sea un compuesto más se retendrá en la fase estacionaria. Por ejemplo, se
retiene más un alcohol que un hidrocarburo.
ORDEN DE POLARIDAD DE LOS ELUYENTES MÁS HABITUALES:
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H20 > CH3-OH > (CH3)2CH-OH > CH3-CN > Dioxano > CH3COOEt > THF > CH2CI2
(Cloruro de metileno) > CHCI3 (Cloroformo) > CCI4 (Tetracloruro de carbono) > CH3(CH2)4CH3
■=> Para un mismo compuesto, un aumento en la polaridad de la fase móvil hace que se se desplace
con más facilidad de la fase estacionaria. Por ejemplo, se eluirá más rapidamente una amina en
acetonitrilo que en hexano
> Para compuestos poco polares, que se retienen poco en el adsorbente, se utilizan eluyentes apolares
o poco polares como, por ejemplo, hexano.
> Para compuestos muy polares, que quedan muy retenidos en el adsorbente, se emplean eluyentes
muy polares como, por ejemplo, metanol o mezclas metanoldiclorometano.
> Para compuestos de polaridad media se emplean eluyentes de polaridad intermedia y son muy
aconsejables en estos caso las mezclas en distintas proporciones de hexanoacetato de etilo
CROMATOGRAFÍA ANALÍTICA EN CAPA FINA (TLC)
La fase estacionaria (adsorbente) se encuentra depositada, formando una capa fina de un espesor
uniforme sobre una placa de vidrio, plástico o una lámina metálica. La mezcla a analizar se deposita
con un capilar a una pequeña distancia del borde inferior de la placa (Figura 13) y se introduce en
una cubeta donde está la fase móvil (eluyente), que ascenderá a lo largo de la capa por capilaridad
eluyendo a los componentes de la mezcla a distintas velocidades, lo que provoca su separación
(Figura 14). Cuando el frente del disolvente se encuentra a ª 0.5 cm del borde superior, se saca la
placa de la cubeta, se marca hasta donde ha llegado el eluyente y se deja secar para, a continuación,
proceder al la visualización de las manchas correspondientes a los productos cromatografiados.
Determinación del Rf Se conoce como Rf (rate factor) la relación entre las distancias recorridas por
un compuesto y por el disolvente desde el origen del cromatograma. Rf = Distancia recorrida por el
compuesto Distancia recorrida por el disolvente Cada compuesto en unas condiciones
cromatográficas determinadas: adsorbente, disolvente, temperatura, etc..., tiene un valor constante
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y característico de Rf. Sin embargo, solo se pueden establecer comparaciones entre los Rf de dos
compuestos cuando los dos se eluyan juntos en la misma placa. La distancia recorrida por el
compuesto se mide desde el centro de la mancha (Figura 15)
Visualización del Cromatograma
■=> Con luz UV (ultravioleta).- Las placas suelen llevan incorporado un indicador fluorescente que
absorbe luz UV y emite luz visible, generalmente verde. Cuando se cromatografían sustancias que
absorben en el UV donde se encuentra el compuesto no absorbe el indicador y como resultado vemos
una mancha que indica su presencia.
■=> Con un agente revelador.- Se emplea cuando las sustancias no absorben radiación UV. El
revelador reacciona con los productos absorbidos dando lugar a compuestos coloreados y por tanto
se utilizará uno u otro en función del compuesto que se quiera visualizar. Algunos ejemplos: H2SO4
concentrado en etanol para azúcares, ninhidrina para aminoácidos y yodo para compuestos
insaturados y aromáticos. Aplicaciones de la TLC (CCF) La CCF es una técnica cualitativa muy
utilizada en los laboratorios de Química Orgánica para: * Determinar el número de componentes de
una muestra: Precaución si solo hay una mancha muy retenida o aparece junto al frente del
disolvente hay que probar otro eluyente (Figura 16).
* Comprobar la pureza de un compuesto: aparecerá una sola mancha. Se debe comprobar que solo
hay una mancha utilizando distintos eluyentes. * Determinar la identidad de dos compuestos: Hay
que tener precaución, pues valores de Rf iguales (o prácticamente iguales) para dos compuestos en
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una misma placa no garantizan inequívocamente su identidad. En la misma placa hay que
cromatografiar una mezcla de los compuestos cuya identidad se quiere comprobar (Figura 17).
* Seguir la evolución de una reacción: cada cierto tiempo se cromatografían en una misma placa los
reactivos y la mezcla de reacción (Figura 18).
* determinar el disolvente más apropiado para llevar a cabo una separación mediante una
cromatografía preparativa (en columna o en placa) * Seguir el progreso de una cromatografía en
columna (CC) (Figura 19)
Tanto para determinar la pureza como la identidad de los compuestos se debe realizar la corrida en
3 sistemas diferentes, variando fase móvil o fase estacionaria.
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CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA (CC)
Es el método más utilizado para la separación y purificación de compuestos orgánicos, sólidos o
líquidos, a escala preparativa. La fase estacionaria (adsorbente) se coloca en una columna de vidrio
que termina en un estrechamiento con una llave y se impregna con el eluyente (fase móvil). La
mezcla a separar se deposita en la parte superior de la columna y la fase móvil atraviesa el sistema
(Figura 20). Los compuestos se van eluyendo disueltos en el eluyente, se van recogiendo
ordenadamente en fracciones de pequeño volumen (1,2,….) y se analizan por CCF (Figura 18). Los
productos van saliendo de la columna según su polaridad, primero salen los menos polares que son
los menos retenidos por el adsorbente y los últimos los más polares por su mayor retención en la fase
estacionaria. El adsorbente más utilizado para este tipo de cromatografía es la gel de sílice y en
segundo lugar la alúmina. El tamaño de partícula del adsorbente es importante para la separación y
su elección depende en gran medida de que la elución de la cromatografía se realice por gravedad o
a media presión (flash chromatography). En una elución a media presión se pueden emplear tamaños
de partícula más pequeños, que permiten una separación más eficaz. Sin embargo, en una elución
por gravedad el uso de tamaños de partícula pequeños impediría el flujo del disolvente. Antes de
realizar una separación en cromatografía de columna hay que elegir adecuadamente el disolvente
haciendo ensayos en CCF.
CROMATOGRAFIA EN PAPEL
La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis
cualitativos ya que es sencilla de implementar y no requiere de equipamiento sofisticado. En esta
técnica la fase estacionaria está constituida simplemente por una tira o circulo de papel de filtro.
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La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de una solución de la muestra y
evaporando el disolvente luego de cada aplicación. Luego el disolvente o mezcla de disolventes
empleada como fase móvil (eluyente) se hace ascender por capilaridad. Para esto se coloca una
porción del papel en contacto con la fase móvil dentro de un recipiente que la contiene (cámara de
desarrollo). Después de unos minutos, cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al borde
extremo del papel, se retira el papel y seca.
Existen una gran cantidad de técnicas cromatográficas, desde las más sencillas (cromatografía en
papel y columna) hasta versiones altamente sofisticadas que implican el uso de gases o líquidos a
alta presión y fases estacionarias con características químicas determinadas.
Todas las técnicas cromatográficas tienen el mismo fundamento teórico; una fase móvil o eluyente
(gas o líquida) que viaja a través de una fase estacionaria sólida o semisólida. La separación ocurre
debido a que algunos componentes son atraídos con más fuerza que otros hacia la fase estacionaria
mientras que otros tienen más afinidad a la fase móvil.
En la cromatografía en papel, la sustancia problema es aplicada a un trozo de papel, bien puede ser
papel especializado para cromatografía, pero también se puede emplear papel de filtro o papel
común, mientras sus constituyentes no interfieran con la elución de los componentes o interactúen
con el solvente a emplear.
La composición básica del papel es celulosa, el cual es un polímero de ß glucosa, la cual posee varios
grupos hidroxilo en su estructura, dándole la capacidad de atraer moléculas polares como la del
agua. La celulosa es denominada la fase estacionaria en la cromatografía en papel.
La fase móvil o solvente de la cromatografía en papel es menos polar y generalmente consiste en la
mezcla de uno o varios solventes orgánicos y agua. Los solventes y proporciones para emplear
dependerán tanto de la fase estacionaria como de la naturaleza de la muestra a analizar.
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La cromatografía en papel consta de tres etapas básicas.
1. Aplicación de la muestra.
2. Desarrollo del cromatograma, que consiste en la elución del solvente junto con la muestra través
de la fase estacionaria.
3. Revelado del cromatograma si es necesario y el
cálculo de los índices de retención para la
interpretación de los resultados.
Las partes de un cromatograma en papel son:
1. Solvente.
2. papel cromatográfico.
3. Muestra.
4. Puntos de aplicación de muestras
5. Frente de elución.
6. Líneas de inicio
Para obtener una medida cuantitativa y comparable de la cantidad de movimiento de un componente
en un cromatograma, se desarrolló el parámetro de índice de retención. El índice de retención (Rf)
se calcula como la razón de la distancia recorrida por una muestra desde el punto de aplicación con
respecto a la distancia recorrida por el frente de elución.
Cada índice de retención es igual para una determinada sustancia bajo las mismas condiciones
experimentales (fase estacionaria, fase móvil, etc.) siendo esta una herramienta de utilidad para la
identificación de sustancias comparando el índice de retención contra una lista de índices de
retención de sustancias conocidas reportados en literatura. La distancia recorrida se toma desde la
línea de inicio al punto medio de la mancha dejada por la sustancia.
Los pigmentos vegetales juegan distintos roles. El principal es en la consecución de la energía para
el proceso fotosintético en las hojas de la planta. También se encuentran pigmentos en otras partes,
como en las flores, donde sus colores sirven como señales para la atracción de insectos polinizadores.
Muchas familias de compuestos se han identificado como pigmentos vegetales, algunos de ellas son
las porfirinas, carotenoides, clorofilas, antocianinas y betalainas. Todas estas familias de
compuestos, gracias a sus estructuras moleculares, absorben de manera selectiva, ciertas longitudes
de onda, mientras reflejan otras, que son las percibidas como el color característico.
Todos los pigmentos tienen una solubilidad distinta en solventes no polares y una distinta afinidad
por la fase estacionaria, lo que permite su separación por cromatografía en papel
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Experiencia 1
Objetivo
▪ Separación de los pigmentos de los vegetales
Materiales
▪ 1 vaso de precipitado de 600 ml
▪ Mortero
▪ Embudo
▪ Tubo de ensayo
▪ Regla
▪ Cinta adhesiva
▪ Papel cromatográfico, papel filtro o cualquier papel abservente.
▪ Espinacas u hojas verdes
Reactivos
▪ Alcohol etílico
Procedimiento
Preparación de extracto de pigmentos
Colocar en el mortero entre 5 y 10 gramos de espinacas u otro material vegetal, procurando quitar
las nerviaciones más gruesas, y 10 ml de alcohol etílico. Triturar el material vegetal son golpear hasta
obtener una coloración verde intensa en el alcohol. Esta operación se debe llevar a cabo en una
campana de extracción de gases.
Tomar el embudo y cortar un trozo de papel de filtro adecuado a su tamaño, filtrar 3 ml del extracto
de alcohol etílico recogiendo el filtrado en un tubo de ensayo.
Preparación del papel cromatográfico
Para evitar que la grasa o suciedad presentes en las manos interfieran con el cromatograma, se debe
evitar al máximo la manipulación excesiva del papel o emplear guantes. Tomar una pieza
rectangular de papel de 15 x 10 cm, colocarla de manera horizontal sobre una toalla de papel limpia
para evitar la contaminación y marcarla en la parte superior derecha.
Con ayuda de la regla y de lápiz, dibujar una línea horizontal a una distancia de 1,5 cm del borde
inferior del papel. Igualmente, en la parte superior del papel, trazar una línea horizontal a 10 cm del
borde inferior. La línea horizontal inferior es la línea de inicio y la línea horizontal inferior la línea
de finalización. Las líneas dibujadas con lápiz no se verán afectadas por los solventes
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En la línea horizontal inferior (línea de inicio) a 2,5 cm del borde dibujar una equis (x) con lápiz,
hacer 6 marcas más en la línea horizontal distantes entre sí 1.5 cm.
En cada una de las equis, colocar unas gotas de solución de alcohol y dejar secar, cuando estén secas,
agregar unas gotas más a cada una de las marcas.
Con la ayuda de dos trozos de cinta adhesiva enrollar el papel para crear un cilindro con las muestras
de tinta en la parte inferior del cilindro. Los extremos del cilindro no deben tocarse, ya que esto
generaría que el solvente no fluya de manera correcta.
Generación del cromatograma de pigmentos
En un vaso de precipitado de 600 ml, colocar 25 ml de alcohol etílico y tapar. Colocar el cilindro de
papel de manera cuidadosa, de tal forma que las marcas de las muestras (línea de inicio) queden por
encima del nivel del solvente, tapar y observar el movimiento de los pigmentos a través del papel,
esto puede tomar entre 45 a 90 minutos.
Cuando el frente del solvente alcance la línea de finalización, extraer cuidadosamente el cilindro y
dejar escurrir el exceso de solvente. Procurar solo tocar el papel en la parte superior del mismo. Abrir
el cilindro y depositarlo sobre una toalla de limpieza. Dejar secar el cromatograma en una campana
de extracción o de gases.
Después del experimento
Analizar el cromatograma obtenido y determinar la cantidad de compuestos o de familias de
compuestos con base a la cantidad de manchas y colores que se observen en el cromatograma.
Con la ayuda de la regla, determinar el punto medio de cada mancha generada. Medir la distancia
desde la línea de inicio hasta el punto medio de cada mancha. Este será la distancia recorrida por la
sustancia.
Medir la distancia desde la línea de inicio hasta la línea de finalización o hasta la distancia que
recorrió el solvente, este será la distancia del frente del solvente.
Calcular el índice de retención de cada una de las manchas o pigmentos. Comparar los valores
obtenidos entre cada muestra.
De manera aproximada la solubilidad de los pigmentos en el alcohol etílico, de mayor a menor, es
carotenos, xantofilas, clorofila b y clorofila a. Con base a esta información y a los colores observados,
clasificar las manchas del cromatograma. Indicar cuál de los compuestos o familias es mayoritaria
en la muestra.
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Recomendaciones de seguridad
En todo momento se deben utilizar los elementos de seguridad básicos en el laboratorio de química
(guardapolvo de laboratorio, guantes, etc). Los residuos generados por la práctica deben ser
dispuestos de manera adecuada según las normas de laboratorio y las normas.
Experiencia 2
Objetivo
• Separación de los pigmentos de una tinta
Materiales
• Una tira de papel de filtro o poroso
• Marcadores/rotuladores o bolígrafos de distintos colores
• Un vaso
• Alcoholes (etanol, isopropanol, butanol, etc.)
• Agua
Procedimiento
1. Recorta una tira del papel poroso que tenga unos 2 cm de ancho y una altura un poco mayor
a la del vaso.
2. Enrolla un extremo en una varilla de vidrio (puedes fijarlo con cinta adhesiva) de tal manera
que el otro extremo llegue al fondo del vaso.
3. Pinta una mancha con un marcador negro en el extremo libre de la tira, a unos 2 cm del
borde. Procura que sea intensa, pero que no ocupe mucho espacio.
4. Vierte alcohol en el vaso hasta una altura de 1 cm, aproximadamente.
5. Coloca la tira dentro del vaso de tal forma que el extremo quede inmerso en el líquido, pero
la mancha fuera de él.
6. Para mejores resultados, puedes tapar el vaso para evitar que el alcohol se evapore.
7. Observa lo que ocurre: a medida que el alcohol va ascendiendo a lo largo de la tira, arrastra
consigo los diversos pigmentos que contiene la mancha de tinta. Como no todos son
arrastrados con la misma velocidad, al cabo de un rato se ven franjas de colores.
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CROMATOGRAFÍA PREPARATIVA EN COLUMNA
Cromatografía preparativa en columna
Material a emplear: Columna, Cuba cromatográfica, Pinza de Mohr, Vaso de precipitados,
Erlenmeyers, Probeta, Soporte universal, Agarradera, Papel de filtro, Doble nuez, Algodón, Balanza
Reactivos: Rojo de metilo, Sílicagel 60 (0.063-0.200mm) para columna Azul de metileno, Metanol
y Cloruro de metileno
Técnica
Armado de la columna:
Coloque en el fondo de la columna una pequeña torunda de algodón con la ayuda de una varilla de
vidrio. Sostenga la columna con pie universal, doble nuez y agarradera de modo que la columna
quede en posición vertical. En un erlenmeyer coloque 5g de sílica gel y luego 25ml de Cl2CH2.
Homogenice la suspensión sílica-Cl2CH2 moviendo el erlenmeyer en forma circular y vierta dentro
de la columna de forma tal que comience a drenar el Cl2CH2 de la suspensión (con la pinza de Mohr
abierta y un erlenmeyer debajo), mientras da golpecitos suaves a la columna con los dedos para que
la sílica se distribuya de manera uniforme, evitando la formación de canales o burbujas de aire. Si
quedara sílica en el erlenmeyer, resuspenda con el Cl2CH2 que ha eluido, e introdúzcala en la
columna. Una vez colocada toda la sílica deje que continúe el goteo de solvente hasta que quede
justo por encima del material de relleno, procurando que no se seque. (Si se seca, puede agregar unas
gotas de solvente y volver a golpear suavemente, para que no queden burbujas en el seno del material
de relleno).
Siembra: Tome con una pipeta 0,5ml de la mezcla de colorantes a separar disuelta en el solvente
apropiado, introduzca en la columna haciendo deslizar la muestra cuidadosamente por las paredes
internas de la misma, dejando que se deposite en la superficie del material de relleno. Este paso de
debe hacer con delicadeza para evitar que se estropee la superficie donde se siembra. Luego abra la
llave de paso inferior para que eluya ligeramente la fase móvil de manera que no se vea líquido en la
superficie y evitando a su vez que se seque totalmente. Agregue otra torunda de algodón sobre la
sílica (LUEGO DE HABER SEMBRADO) para evitar que por agregado de la fase móvil se
resuspenda la sílica.
Desarrollo:
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Tome 30 ml de la primera fase móvil (Cl2CH2:MeOH, 30:1) en una probeta graduada y agregue en
porciones a la columna. Deje eluir recogiendo el eluato 1 en un erlenmeyer y agregando siempre fase
móvil para que no se seque la parte superior de la columna. Luego tome 40 ml de la segunda fase
móvil (Cl2CH2:MeOH, 30:10) en la probeta graduada y agregue en porciones a la columna del
mismo modo que en el paso anterior, recogiendo el eluato 2 en otro erlenmeyer o vaso de
precipitados. Como los compuestos son coloreados, las bandas observadas en la columna, que
avanzan con diferente movilidad, se ven a simple vista. Por lo tanto el eluato se recoge
fraccionándolo en erlenmeyers de acuerdo a la forma en que los compuestos van saliendo de la
columna.
Tome tres fracciones: la que corresponde al primer colorante (Eluato 1), la fracción intermedia entre
ambos y la que corresponde al segundo colorante (Eluato 2). Analice mediante cromatografía en
capa delgada (TLC)
CROMATOGRAFÍA ANALÍTICA EN CAPA DELGADA
Experiencia 1
Identificación de los colorantes por TLC.
Fase estacionaria: Cromatofolio cubierto de sílica gel sin indicador de fluorescencia.
Fase móvil: Cl2CH2:MeOH (9:1). Siembra: a) Testigo de Rojo de metilo, b) Testigo de Azul de
metileno, c) Eluato 1 y d) Eluato 2.
Revelado: Luz visible.
Dibuje el resultado obtenido y analice los resultados.
Figura 1: Placa Cromatográfica Figura 2: Cuba Cromatográfica
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Experiencia 2
Cromatografía en capa delgada de la aspirina (ácido acetilsalicílico) obtenida en una práctica
anterior
1. Prepare una cámara para la cromatografía de capa fina utilizando una solución 8:2 v/v hexano-
acetato de etilo como fase móvil (se agrega en la cuba una cantidad suficiente como para que se
cubra el fondo y se la tapa dejándola así unos minutos, hasta que se sature con los vapores de la
mezcla).
2. Siempre se debe correr la muestra frente a testigos (ácido salicílico y ácido acetilsalicílico). En este
caso como las sustancias son sólidas disuélvalas en unas gotas de la fase móvil, generando una
solución saturada.
3. Trace con lápiz una línea a 3 – 5 mm del borde de la placa, cuidando que la altura del solvente en
la cuba cromatográfica se encuentre por debajo de esta línea de siembra), y equidistantes entre sí (ver
figura).
4. Siembre sobre la placa de sílica gel, utilizando capilares diferentes para las muestras y testigos por
separado.
5. Dejar ascender el solvente por la placa hasta que se encuentre entre 1 y 0,5 cm de su borde superior.
En ese instante, retire la placa de la cuba y compare los resultados obtenidos, teniendo en cuenta la
forma en la que corren los testigos, ilustrado en la figura siguiente:
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6. Las manchas se ubican utilizando la lámpara UV. Analice el revelado.
CUESTIONARIO
1- ¿Qué métodos de separación conoce?
2- Defina cromatografía. ¿Cuáles son los distintos métodos cromatográficos y qué fundamentos
tiene cada uno?
3- ¿Cuál es la diferencia entre absorción y adsorción?
4- Mencione adsorbentes para TLC.
5- ¿Cuáles son los componentes de un sistema cromatográfico?
6- ¿Qué es el soporte, y qué es el adsorbente en una TLC? Mencione ejemplos.
7- ¿Qué diferencias y similitudes existen entre cromatografía en capa delgada, en papel y en
columna?
8- ¿Qué importancia tiene la saturación de la cuba con el solvente a usar en el desarrollo antes
de realizar la cromatografía en placa?
9- ¿Puede usarse este método como criterio de identificación y/o pureza? Fundamente
10- ¿Qué es el desarrollo y elución de un cromatograma?
11- ¿Qué es el revelado de un cromatograma? ¿Qué es un revelador universal? ¿Qué es un
revelador específico? ¿En qué casos se utilizan reveladores?
12- ¿La cromatografía en capa delgada puede tener utilidad para cuantificar una sustancia?
13- ¿Cuál es la importancia de la homogeneidad en el armado de la fase fija en la cromatografía
en columna?
