PRÁCTICA 9 OBTENCIÓN DE ADN
Equipo 04: Tiburcio Pérez Mariana Elizabeth, Rangel Sandoval Diana Jocelyn, Vega González
Mónica Jimena, Rodriguez Cordova Cinthya Lizett.
1PM5
Profesor: Torales Cardeña Azael
Competencia. El alumno extrae ADN a partir de un tejido vegetal.
Procedimiento
CUESTIONARIO:
1.- ¿Cuál es la acción del EDTA, del cloruro de sodio y del SDS en la práctica?
EDTA – Quelante. Compuesto químico que se une con firmeza a los iones metálicos.
Cloruro de Sodio – Nos sirvió para obtener una solución en equilibrio de cargas para tener un
medio estable. Hace que el ADN se haga menos soluble en el extracto celular. EL ADN tiene carga
negativa debido a los grupos fosfato de su estructura. Cuando se añade sal, los iones sodio con
carga positiva son atraídos por la carga negativa del ADN, neutralizándose la carga del ADN. Esto
permite a las moléculas de ADN unirse entre sí en vez de repelerse unas a otras.
SDS – Detergente. Es el que rompe la membrana de la célula lipídica.
Durante el proceso de lisis las interacciones entre las moléculas que conforman la pared, la
membrana celular y nuclear se modifican o destruyen permitiendo que los ácidos nucleicos se
liberen. Se utilizan soluciones básicas, detergentes o agentes caotrópicos que permiten disolver la
membrana celular, así como inhibidores para inactivar las enzimas que degradan el ADN. Muchas
soluciones de lisis contienen también EDTA, que forma un complejo con los iones de Mg2+ e
impide el funcionamiento de las DNasas. Los componentes celulares no solubles como el material
fibroso y proteínas que permanecen en solución se separan del ADN por centrifugación.
2.- ¿Qué son y cuál es la función de las endonucleasas?
Son enzimas que son capaces de cortar cadenas de ADN en puntos intermedios de la misma,
mediante la rotura del enlace fosfodiéster.
3.- ¿Qué propiedad tiene el ADN que puede precipitar en presencia de alcohol?
El ADN y otros componentes celulares, como lípidos, azúcares y proteínas, se disuelven en la
solución de lisis. El ADN tiene carga negativa debido a los grupos fosfato de su estructura, y esta
carga eléctrica es lo que hace soluble a esta molécula. Cuando se añade sal a la muestra, los iones
sodio con carga positiva son atraídos por las cargas negativas del ADN, neutralizando la carga del
ADN. Esto permite a las moléculas de ADN unirse en vez de repelerse entre sí. La adición de
alcohol frío precipita el ADN dado que es insoluble en altas concentraciones de sal y alcohol. El
ADN precipitado forma unas finas hebras blancas y visibles en el límite de separación de la fase de
alcohol, mientras que el resto de las sustancias permanecen disueltas.
4.- El ADN obtenido por este método no se encuentra puro. ¿Qué otras sustancias se extraen
junto con el ADN?
Biomoléculas, la membrana y proteínas
5.- ¿Cuál es la longitud real del ADN y debido a que se puede replegar tanto como para caber en
el núcleo de una célula?
El ADN si se extendiera podría llegar a medir 2 metros. Gracias a la cromatina, el ADN queda
replegado y condensado para que pueda caber en un espacio tan minúsculo.
6.- Mencione algún método que nos ayude a comprobar que las fibras obtenidas son
efectivamente de ADN.
Electroforesis
La aplicación de la electroforesis en la separación de ácidos nucleicos permite hacer tareas
simples, como verificar su síntesis o integridad, y complejas, como seguir los pasos enzimáticos de
modificación durante la construcción de elaboradas colecciones de ADN. Su fundamento químico
reside en que los ácidos nucleicos son polímeros de carga negativa unidos por enlaces covalentes
fosfodiéster. De esta manera, el ADN y el ARN se moverán en un campo electroforético hacia el
polo positivo.
La matriz sólida preferida para separar los ácidos nucleicos es la agarosa pues da una capacidad de
separación adecuada para la mayoría de las actividades rutinarias. Además, puede ser flexibilizada
con la concentración utilizada. La electroforesis en agarosa es accesible debido a su bajo costo, a la
diversidad de diseños de cámaras, y a que es fácil de preparar (Brody y Kern, 2004). El uso de
acrilamida como matriz sólida, en lugar de la agarosa, aumenta la resolución a la escala de pares
de bases y se aplica en el monitoreo de los pequeños ARNs, la separación de moléculas durante la
secuenciación y en la separación de moléculas de pesos moleculares similares pero diferente
composición de nucleótidos en gradientes desnaturalizantes (Stellwagen, 2009; Barrera–Figueroa
et al., 2011).
El ARN necesita un agente desnaturalizante en la matriz debido a que al ser de cadena sencilla
puede hibridarse consigo mismo modificando su tamaño molecular aparente (Gerard y Miller,
1997). Frecuentemente se usa formaldehído o urea como agente desnaturalizante para romper los
puentes de hidrógeno intramoleculares. Por otra parte, la visualización de los ácidos nucleicos en
la electroforesis necesita de un agente. Estos son generalmente compuestos químicos de
estructura plana que se intercalan entre los enlaces de hidrógeno de los ácidos nucleicos, por
ejemplo, bromuro de etidio o SYBR green. Cuando estas moléculas se excitan con luz ultravioleta
emiten fluorescencia que indica la posición de los ácidos nucleicos, la cual está en función de su
tamaño molecular (Zipper et al., 2004).
Bibliografía
Alberto Checa Rojas. (2017). Extracción de ADN. 2022, Diciembre 10, [Link] Sitio web:
[Link]
[Link]
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893X2013000200009#:~:text=Estos%20m%C3%A9todos%20son%3A%20electroforesis%2C
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