UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA
"riNGO MARIA
FACULTAD DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
Departamento Académico de Ciencia, Tecnología é
Ingeniería de Alimentos
''CARACTERIZACION DEL LATEX DE SANGRE DE
GRADO (Croton draconoides Muell. ~~) DE ARBOLES
DE. DIFERENTES PISOS ECOLOGICOS".
~rn~a~
Para Optar el Título de:
Ingeniero en Industrias Alimentarias
Presentado por:
Javier Pizarro U rquia
~Ulro®© M~I;!il~ ~ LPrn~ID
~®®a
UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA
Tingo lVIada
FACULTAD DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
ACTA DE SUSTENTACIÓN DE TESIS
Los Miembros del Jurado que suscriben, reunidos en acto público el18 de junio
del 2001, a horas 5:30 pm., en la Sala de Grados de la Universidad Nacional
Agraria de la Selva, ubicada en la ciudad de Tingo Maria, provincia de Leoncio
Prado, departamento de Huánuco, para calificar ia tesis presentada por el_
Bachiller en Ciencias Industrias Alimentarias: J~nrier PIZARRO URQUIA.
"CARACTERIZACIÓN DEL LATEX DE SANGRE DE
GRADO (Croton draconoides Muell Arg) DE ÁRBOLES
DE DIFERENTES PISOS ECOLÓGICOS" .
Después de haber escuchado la sustentación, las respuestas a las preguntas
formuladas, la declaran aprobada con el calificativo de Bueno, en
consecuencia el Bachiller: Ja-vier PIZARRO URQUIA, queda apto para
recibir el titulo de Ingeniero en Industrias Alimentarias del Consejo
Universitario, de conformidad con el Art.22o de la Ley .Universitaria 23733; los
artlculos 43° y 45° del Estatuto y los articules 95° y 96° del Reglamento
General de la Universidad Nacional Agraria de la Selva.
Tingo Maria, julio 02 del 2001
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_.,d'/'2:'...-
·~·
~~=-?
.lng. uriano Zav ru:Z ing. Ramón Julca Roldán
Presidente Vocal
lng. ElizabethO~~~
Asesor
Gómez
Carmen B.
DEDICATORIA.
Al divino creador.
Por iluminar mi camino y guiarme
en cada instante.
A mis queridos padres Gunter y
Ruth.
Por sus esfuerzos y sacrificios
brindados para culminar mi carrera
profesionaL
A mis hermanos Gunter, Ruth y
Jerson.
Por su permanente apoyo moral y
afecto fraterno.
.A mis abuelos. Juan y Adela.
· ,Por orientarme adecUadamente en
todo momento.
AGRADECIMIENTO.
- A la lng. Elizabeth Ordeñes Gómez, Patrocinadora del presente trabajo
de investigación.
- Al lng. Tomas Menacho Mallqui, por su apoyo en la recolección de la
materia prima.
Al Dr. Manuel Saridoval Chacón, por la orientación brindada en la
evaluación de la capacidad antioxidativa.
- A David Contreras, Gastón Zapata, Luis Becerril, Vanessa García y
amigos todos, que de una u otra forma me apoyaron en la realización del
presente estudio.
- A Judith Herrera Tito, por su apoyo incondicional en la realización de la
presente.
- A los Jefes y Técnicos de los laboratorios de: Espedrofotometríá,
Nutrición animal, Química, Suelos y Tecnología e industriás cárnicas, por
brindar las facilidades para el desarrollo de la presente Tesis. .•··
,.
IN DICE.
Pág.
RESUMEN
l. INTRODUCCION ........................................................................................ 1
11. REVJSJON BIBLIOGRAFJCA....................................................................... 3 ·
A CARACTERÍSTICAS GENERALES DEL SANGRE DE GRADO........... 3
1. Descripción botánica ............. ,........................................................... 3
2. Taxonomía. .................................................................................... 3
3. Condiciones ambientales para el desarrollo. ... . .... .. ... . .. ... .. . .... ... .... . 4
a. Clima........................................................................................ 4
b. Suelo........................................................................................ 4
4. Cosecha y manejo postcosecha. ................................................... 4
a. Cose9ha ..................................'................................................. 4
b. Manejo postcosecha. ... ..... ...... ..... .. .... ..... .. .. ...... .... ... .. ... .... ... .... . 5
5. Componentes químicos ................ :............................... :................. 5
a. Alcaloides .............................................. :., ................................ , 6
b. Lignanos. ..... ... .. .. .... ..... .... . ... ... .... .. ..... ..... ....... ..... ...... .. .... .... .... ... 7 ...
c. Flavonoides ................................................................ ~.............. 8
d. Otros compuestos ......................... :........ :................................... 10
6. Actividades biológicas ................... ~·-·····················'························ 10
B. INFORMACIÓN GENERAL SOBRE ANTIOXIDANTES. ........................ 11
1. Radicales libres ...................................................................... ,........ 11
2. Formación de los radicales libres. ·········'······························'·········· 11
3. Radicales libres de importancia biológica. . ..... ...... ... .... ...... ..... ........ 12
4. Antioxidante. _'_ ............................... _................. ___ .. _.............. __________ . _ 13
5. Actividad de los antioxidantes. ...... .... .. .. .......... ..... ..... .... .. .. ..... .... .... . 13
6. Principales antioxidantes ........................ : .................... ,................... 14
a. Beta caroteno ...................................................... ,... ..... ... .... ... ... ... 15
b. Vitamina E................................. _................ ______ ..... _................ ____ . 15
c. Vitamina C. ... .... .... ..... ... ...... .... ...... .... ....... ... ..... ..... ... .... ... .... .. . ... .. 16
d. Oligoelementos ................ :~---························-····························· 16
C. IMPORTANCIA DE LOS MINERALES EN LAS PLANTAS ................. ,.. 16
1. · Nitrógeno ......................................................................................... 17
2. Calcio .......................... ___ .............. _. _____ . __ ...... :. _______ . _____ ........ _. __ .. ____ . _ 17
3. Magnesio ................................................................................... ~-.... 18
4. Sodio .... _·_ .......................................................................................·.. 18
5. Potasio ........ .-................................................................................... 18
6. Cobre ................................................................................ ;............. 18
7. Hierro ............................................................................. :.................. 19
8. Zinc ............. _...................................... _.........·.................... _....... _...... 19
Manganeso ................................... ................. ~ ..........-....................... 19
1
9.
D. ASPECTOS GENERALES SOBRE ECOLOGÍA. .: ................. ;............... 20
1. Definición. ... .... .... . .... ...... .... .. . .... . ..... . ... ..... .... ..... .. ...... ... .. .. ... .... .. ..... .. 20
2. El ambiente con relación a las plantas. .. .. .. .. .. .. .. ... .. .. .. .. .. ... ... ... .. .. .... 20
3. Factores que influyen en el tipo y desarrollo de la
vegetación ............................................................................. _·_........ 21
a. Factores fisiográficos. .... ... .... .... ... .. .. .... ...... .... ......... .... ... .... .... ..... 21
b. Factores edáficos ....................................................................... . 24
c. Factores bióticos .............................................. , ......................... . 24
d. Factores ambientales ................................................................. . 25.
L . "t . ' 25
e. a prec1p1 ac1on. ···················'·····················································
f. Humedad relativa ....................................................................... . 26
111. MATERIALES Y METODOS ...................................................................... . 27
A. LUGAR Y FECHA DE EJECUCiÓN ..................................................... . 27
B. RECOLECCION DE MATERIA PRIMA. ............................................... . 27
1. Aserradero ............. ·.· ....................................................................... . 27
2. Pumahuasi ......................... :............................................................ . 28
3. Divisoria ......................................................................................... . 28
C. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS. ······································:..····· 29
1. Equipos de laboratorio .................................................................... . 29
2. Materiales de laboratorio ...................... ,......................................... . 29
3. Reactivos y soluciones ................................................................... . 30
D. MÉTODOS DE ANÁLISIS .................. : ................................................. . 31
1. Análisis químico proximal. .......................... :................................... . 31
a. Humedad ..................................................................................... . 31
b. Grasa. ········································································-~·-············· 31
c. Cenizas totales. ·······················'·············-~·-······························· 31
d. Proteína ..................................:-;'.. ,.................·............................... . 31
e. Fibra ............................................................................................ 32
f. Carbohidratos .. ,.................................................. , ...................... . 32
2. Análisis de minerales. _.................... ___ .............. ________ ._. _...... _____________ 32
a. Determinación de calcio y magnesio ............................ _............. 32
b. Determinación de Sodio, Potasio, Hierro, Cobre, Zinc y
Manganeso. ............. .......... ........................... ........ ............. ... ... . .. 34
3. Evaluación de la capacidad antioxidativa. .. ...... .... .. .... ...... .. ......... ..... 37
E METODOLOGÍA EXPERIMENTAL ······································-~-------········ 37
1. Análisis químico proximal. ............................................................... 37
2. Análisis de minerales ............ --~........................................................ 38
3. Evaluación de la capacidad antioxidativa. . ..... .... ...... .................. .... .. 38
a. Determinación del porcentaje de inhibición del radical libre,
DPPH ...................................................·....................................... 38
b. Determinación del coeficiente de inhibición (IC 50 ). ·················-~---- 39
IV. RESULTADOS Y DISCUSION .................................................................... 41
A CARACTERIZACIÓN QUÍMICO PROXIMAL DEL LÁTEX DE SANGRE
DE GRADO ............................................................................................ 41
1. Contenido de humedad.................................................................... 41
2. Contenido de proteína .................................. :.................................. 43
3. Contenido de grasa. ....................................................................... 47
4. Contenido de fibra. ··································'······································ 48
5. Contenido de ceniza. .............................. .......... .............................. 50
6. Contenido de carbohidratos. ........................................................... 51
7. Contenido químico proximal en promedio del látex de sangre de
grado. ·········································'···················································· 53
B. DETERMINACION MINERALES DEL LATEX DE SANGRE DE
GRADO................................................................................................. 54
1. Contenido de calcio .. :.................................... ,................................ 54
2. Contenido de magnesio. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. ... .. . 58
3. Contenido de sodio ............................................................... ,......... 61
4. Contenido de potasio. ..................................................................... 62
5. Contenido de cobre ........... ,.. ... .. .. ... .. .. .. ... .. .. .. .. .. .. .. .. ... .. .. ... .. . .. ... .. .. .. 65
6. Contenido de hierro. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. ... .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. . 67
7. Contenido de zinc .................... ,....................................................... 70
8. Contenido de manganeso. .. .. .. ...... .. .... .. .. .... .. .. .. .... .. .. .... .... .... .... .. .. .. 72
9. Contenido de minerales en promedio del látex de sangre de
grado ........................................................................................... ~..... 74
C. EVALUACIÓN DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDATIVA DEL LÁTEX DE
SANGRE DE GRADO ........................................ :................................... 75
1. Inhibición del radical libre, DPPH .............................. ,.................... 76
2. Determinación del coeficiente de inhibición (ICso) ... ~;....................... 77
V. CONCLUSION ....................................................·.... ...... ... ..... ... ...... ..... .. . 85
VI. RECOMENDACIÓN ........................................................... :.................. · 87
VIl. BIBLIOGRAFIA. .. . .. .... .. ... .. . ..... ...... . .. .. ...... .. .. .... ... .. .... ................... .... .. . .. 88
VIII. ANEXOS ... ·..... ,......... ;............................................................................ .94
INDICE DE CUADROS.
Pag.
Cuadro 1. Radicales libres de importancia biológica....................................... 12
Cuadro 2. Principales defensas de los antioxidantes ....... ;............................... 14
Cuadro 3. Parámetros para las lecturas de calcio y magnesio .............. ;........ 33
Cuadro 4. Solución estándar para el Na, K, Cu, Fe, Zn y Mn...... .... ................ 35
- Cuadro 5. Parámetros para las lecturas de Na, K, Cu, Fe, Zn y Mn.......... ...... 36
Cuadro 6. Contenido de humedad del látex de sangre de grado por piso
ecologico y edad del árbol.............................................................. 41
Cuadro 7. Contenido de humedad del látex de sangre de grado por edad del
árbol. .......................................·........................................................ · 42
Cuadro 8. Contenido de proteína del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.............................................................. 44
Cuadro 9. Contenido de proteína del látex de sangre de grado por piso
ecológico ......................................... ~·'...................·........................... 45
Cuadro 10. Contenido de proteína del látex de grado por' edad del árbol........ 46
Cuadro 11. Contenido de grasa del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol... ................................................ :.: ... :.... 47
Cuadro 12. Contenido de fibra del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol............................................................... 49
Cuadro 13. Contenido de ceniza del látex de sangre dé grado por piso .
ecológico y edad del árbol.............................................................. 50
Cuadro 14. Contenido de carbohidrato deLiátex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.............................................................. 51
Cuadro 15. Contenido de carbohidrato del látex de sangre de grado por edad
del árbol. .................. :...................................................................... 52
Cuadro 16. Contenido químico proximal en promedio del látex de sangre de
grado.............................................................................................. 54
/ Cuadro17. Contenido de calcio del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.............................................................. 55
Cuadro 18. Contenido de calcio del látex de sangre de grado por piso
ecológico........................................................................................ 56
Cuadro 19. Contenido de calcio del látex de sangre de grado por edad del
árbol. ......·...............................................................·......................... 57
Cuadro 20. Contenido de magnesio del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.............................................................. 59
Cuadro 21. Contenido de magnesio del látex de sangre de grado por piso
' .
ecológico......................................................................................... 60
Cuadro 22. Contenido de sodio del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol. ....................................... ~ ........... ~......... 61
Cuadro 23. Contenido de potasio del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol... ................................ ,.......................... 62
Cuadro 24. Contenido de potasio del látex sangre de grado por piso
ecológico......................................................................................... 63
Cuadro 25. Contenido de potasio del látex de sangre de grado por edad del
árbol................................................................................................ 64
Cuadro 26. Contenido de cobre del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol. ............. ;............................................... 65
Cuadro 27. Contenido de cobre del látex de sangre de grado por piso
ecológico........................................................................................ 66
/ Cuadro 28. Contenido de hierro del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.............................................................. 68
Cuadro 29. Contenido de hierro del látex de sangre de grado por piso
ecológico........................................................................................ 69
Cuadro 30. Contenido de zinc del látex de sangre de grado por piso ecológico-
y edad del árbol................................................................................ 70
Cuadro 31. Contenido de zinc del látex de sangre de grado por piso
ecologrco..... .. ....... .... ....... ... .. ...... ......... ......... ......... ....... ............ ...... 71
Cuadro 32. Contenido de manganeso del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol... .......................................................... . 73
Cuadro 33. Contenido de manganeso del látex de sangre de grado por edad
del árbol.......................................................................................... 74
Cuadro 34. Contenido de minerales en promedio del látex de sangre de
'
grado .................................... :························································· 75
Cuadro 35. Efecto del látex de sangre de grado en la inhibición del DPPH.... 76
Cuadro 36. Evaluación de la capacidad antioxidativa del látex de sangre de
grado por piso ecológico y edad del árbol...................................... 79
Cuadro 37. Evaluación de la capacidad antioxidativa del látex de sangre de
grado por piso ecológico................................................................ 81
Cuadro 38. Evaluación de la capacidad antioxidativa del látex de sangre de
grado por edad del árbol................................................................ 83
Cuadro 39. Capacidad antioxidativa en promedio del látex de sangre de
grado.............................................................................................. 84
INDICE DE FIGURAS.
Pág.
Figura 1. El alcaloide taspina ·-----------·-·-·-···-·-·-------·--·-·--'·-------,-------------- 6
Figura 2. Ellignano 3, 4-0-dimetilcedrusina ---------------------·----------------·- 7
Figura 3. Estructura del 2-fenilcromano (flavano) ................................ 8
Figura 4. Proantocianidina oligomérica, "SP-303 .. .............. ................. 9
Figura 5. Diagrama experimental para el análisis químico proximal,
minerales y evaluación de la capacidad antioxidativa del
látex de sangre de grado---------------------------,------------------------- 40
Figura 6. Curvas de degradación del DPPH por acción del látex de
sangre de grado .. .. .. .. . .. .. .. .. .. .. .. .... .. .. .. .. .. ..... ... .. ... ... ... .. .. .. .. .. . 77
Figura 7. Coeficiente de inhibición (IC 50) del DPPH por el látex de
sangre de grado................................................................... 78
.··~·
RESUMEN.
Sangre de grado (Croton draconoides Muell. Arg) es un árbol que crece en los
bosques húmedos de la Amazonía Peruana, cuyo látex tiene valor económico
debido a sus propiedades medicinales.
Con el objetivo de caracterizar el l'átex de sangre de grado se consideró el ·
análisis químico proximal, minerales y evaluación de la capacidad antioxidativa;
para esto se colectaron muestras de t'res pisos ecológicos de Terraza alta a
650 m.s.n.m de Colina baja a 800 m.s.n,m. y de Montaña alta a 1600 m.s.n.m.
de árboles de cuatro a seis años y mayores de seis años de edad; los análisis
fueron realizados en los laboratorios de: Espectrofotometría, Nutrición animal,
Química y Suelos de la Universidad Nácional Agraria de la Selva, en el periodo
de Julio a Diciembre del 2000.
Para el análisis químico proximal se determinaron por métodos de la AO.AC.;
para la humedad método de estufa (1997). 23,003; para grasa método de
soxhlet (1971 ). 935,60; para cenizas totales método de calcinación directa
(1971). 942,50; para proteína método semi microkjeldahl (1991). 991,29; para''
fibra (1991). 991 ,29; y para carbohidratos se determinó por diferencia de los
demás componentes (Hart y Fisher, 1991). Para el análisis de minerales el
método seguido fue por espectrofotometría de absorción atómica recomendado
por la A.O.AC (1994), los códigos del método de cada elemento se describe a
continuación: Calcio y magnesio 991 ,25; Sodio 976,35; Potasio 986, 15; Hierro
1
990,05; Cobre 960,40; Zinc 969,39 y Manganeso 930,34. Y para la evaluación
de la capacidad antioxidativa el método utilizado fue el DPPH (1, 1-diphenyl -2-
pícrílhydrazyl), por espectrofotometría de luz visible (Longitud de onda a 515
nm). Este método consiste en el secuestro del radical libre DPPH in vitro,
haciendo reaccionar soluciones del látex con la solución estándar de DPPH
(100 J..LM).
Los resultados de los análisis determinados fueron evaluados aplicando el
diseño estadístico completo al azar con arreglo factorial de 3*2, con 3
repeticiones, para los niveles donde eXIstió significancia estadística se evaluó
mediante la prueba de Duncan (P<0,05).
Los resultados obtenidos del presente estudio mostraron valores de
concentración muy variados, presentando el piso ecológico de _Terraza alta
(650m.s.n.m.) un mayor contenido en: Calcio (560,53 mg/100g), magnesio
(75,03 mg/100g), hierro (1,28 mg/100g) y una mayor eficiencia en capacidad de
inhibir el radical libre DPPH (IC 50 = 13,33 ~tg/ml); el piso ecológico de Colina
baja (800 m.s.n.m.) un mayor contenido en potasio (27,31 mg/100g); y el piso
ecológico de Montaña alta (1600 m.s.n.m.) un mayor contenido en: Proteína
i
(1,79%), cobre (0, 18 mg/100g) y zinc (0,07 mg/100g); Por edad del árbol los .:-/
mayores de seis años de edad, presentaron un menor contenido de humedad
(67,89%), un mayor contenido de proteína (1 ,72%), de carbohidratos (27, 62%),
de potasio (24,30 mg/1 OOg), de manganeso (0,33 mg/1 OOg) y una mayor
eficiencia en capacidad de inhibir el radical libre DPPH (ICso = 13,85 1-lQ/ml),
que los árboles de cuatro a seis años de edad .
. 1.
Obteniendo un promedio general en composición químico proximal de 67,81%
de humedad; 1,52% de proteína; 2,11% de grasa; 0,35% de fibra; O, 17% de
ceniza y 26,04% de carbohidratos; en la concentración de minerales 512,69
mg/1 OOg de calcio; 71,54 mg/1 OOg de magnesio; 5,43 mg/1 OOg de sodio; 20,79
mg/100g de potasio; O, 12 mg/100g de cobre; 0,83 mg/100g de hierro; 0,06
. mg/1 OOg de zinc y 0,28 mg/1 OOg de fnanganeso; y en la capacidad
antioxidativa el coeficiente de inhibición (IC 50 ) fue 14,1 O )lg/ml.
SUMMARY.
Sangre de grado (Croton draconoides Muell. Arg) is a tree that grows in the
Peruvian Amazon basin and its sap has an economical value because of its
medicinal properties. The objective of this study was to characterize the sap
of sangre de grado in terms of its chemical proximal analysis, mineral
composition, and antioxidant activity. The sap was collected from three
different ecological altitudes (areas) ranging from 650, 800 and 1600 nieters
above sea leve! (m.s.n.m.). The trees were selected according to their age in
two groups: 1) 4 -6 years and 2) older than 6 years old. The analysis were
carried out from July- December of 2000 in the Spectrophotometry, Nutrition,
Chemistry and Soil Laboratories of Universidad Nacional Agraria de la Selva,
Tinge Maria. Peri.J.
The chemical proximal analysis was done using the AOAC method
previously described, humidity ·by method 23,003 (1997), fat by soxhlet
method 935,60 (1971 ), ash method 942,,50 (1971 ); protein by microkjeldahal
method 991,29 (1991), fiber by method 991,29_(1991), carbohydrates by
difference from the other components as indicated by (Hart and Fisher,· ../
1991 ). Mineral analysis was performed by atomic . absorption
spectrophotometry as recommended by the AOAC (1994). The code for the
methods used were: Calcium and Magnesium 991 ,25; Sodium 976,35;
Potassium 986,15; lron 990,05; Copper 960,40; Zinc 969,39 and Manganese
930,34. The antioxidant activity was· assessed by using the free radical
DPPH (1, 1-diphenyl -2- picrilhydrazyl), the inhibition was quantified by
spectrophometry at 515 nm.
The statistical analysis of the results from the different assays were
performed using a completely randomized design arranged in a factorial
experiment 3 x 2, the number of replicates was three. Post analysis was
performed using the Duncan test {P<0,05). The results for the ecological
altitude of 650 m.s.n.mm that were greater than the other two areas were as
follows: Calcium (560.53 mg/1 OOg), Magnesium (75.03 mg/1 OOg), lron (1.28
mg/1 OOg), and the ICso value to inhibit DPPH was 13.33 ¡..tg/ml. For the
ecological altitude of 800 m.s.n.m. th"~ results thát were higher than the other
two areas were as follows: Potassium (27.31 mg/100g). For the ecological
altitud e of 1600 m. s. n. m., it was observed that the sap from this are a was
higher in protein (1. 79%), Copper (0.18 mg/1 OOg) and Zinc (0.07 mg/1 OOg)
compared to the other two areas. According to the age of the trees we found
out that the sap from older trees (> 6 years old) had lower humidity (67. 89
%), greater protein content (1. 72%), carbohydrates (27.62%), Potassium
(24.30 mg/1 OOg), Manganese (0.33 mg/1 OOg), and a better efficiency to
inhibit DPPH (IC 50 =13.85 JlQ/ml) than 4-6 years old trees.
In general the sap of sangre de grado had the following resuits (average), for
chemical proximal analysis: humidity 67.81 %; protein 1.52%; fat2.11 %; fiber
0.35%; ash 0.17%, carbohydrates 26.04%; mirierais: Calcium 512.69
•• 1 •
ing/1 OOg; Magnesium 71.54 mg/.1 OOg; Sodium 5.43 mg/1 OOg; Potassium
20.79 mg/100g; Copper 0.12 mg/100g; Íron 0.83 mg/100g; Zinc 0.06
mg/100g and Manganese 0.28 mg/100g. The capadty to inhibit DPPH was
14. 1O ~tgfml.
l. INTRODUCCION.
Sangre de grado (Croton draconoides Muell_ Arg) es un árbol que crece en
los bosques húmedos de .la Amazonía Peruana, cuyo látex tiene valor
económico debido a sus propiedades medicinales.
La región Rupa Rupa o selva alta en especial la provincia de Leoncio Prado
está conformado por valles, comprendidas desde planos aluviales y terrenos
::-:-:'
pantanosos hasta regularmente accidentados, en cuya vegetación forestal se
encuentran un sin número de plantas medicinales, entre ellas: Ojé (Ficus
anthefmintica), marañan (Anacardium accidenta/e L), pan de árbol
(Artocarpus incisa), uña de gato (Un~aria tomentosa), sangre de grad~ entre
otros_ A este último desde tiempos inmemoriables, los habitantes de esta
zona le dan usos tradicionales como: para mejorar la fertilidad, para
controlar la tuberculosis, para la cicatrización de heridas, para la diarrea,
para la fiebre entre otros usos_
El aumento de su demanda en los últimos años tanto en el mercado nacional .. ·
como Internacional, hace necesario realizar trabajos de inve:stigadón que
permitan determinar sus diferentes componentes;. tales como: químico
proximal, minerales y evaluación de la capacidad antioxidativa; que hoy en
día no es conocido en base a una investigación científica.
-2-
1
El presente trabajo de investigaci~n se llevó a cabo entre los meses de Julio
a Diciembre del 2000, planteándonos la siguiente hipótesis:
Los pisos ecológicos y la edad del árbol influyen en la_ composición
químico proximal, concentración de minerales y capacidad antioxidativa
del látex de sangre de grado.
Teniendo como objetivos:
Caracterizar el látex de sangre de grado de árboles de cuatro a seis años
y mayores de seis años, procedente de diferentes pisos ecológicos
(Terraza alta, Colina baja y Montaña alta) considerando análisis químico
proximal y minerales.
Evaluar la capacidad antioxidativa del látex de sangre de grado.
11. REVISION BIBLIOGRAFICA.
· A. CARACTERÍSTICAS GENERALES DEL SANGRE DE GRADO.
1. Descripción botánica.
Arbol de hasta 25 m de altura; el látex de color rojo oscuro; hojas con
ti"ichomas estrellados, fruto capsular con tres valvas. El género Croton
está conformado por árboles pequeños y medianos; monoicos; con
:~·
savia de color amarillo - rojizo; hojas enteras, dentadas, raramente
lobuladas; inflorescencia en racimos o espigas axilares o terminales;
fruto esquizocárpico; semillas lisas o con una pequeña carúncula
notoria, (Meza, 1999).
2. Taxonomia.
Cronquist, A citado por Meza (1999); menciona que el sangre de
grado tiene la siguiente clasificación taxonómica:
Rey no Vegetal.
/
•/
Sub reynd Fanerogama.
División Magnoliophyta.
Clase Magnoliopsida. ·
Sub clase Rosidae.
Orden Euphorbiales.
'
Familia Euphorbiaceae.
Género Croton.
Especie Croton draconoides, Muell. Arg.
-4-
3. Condiciones ambientales para el desarrollo.
a. Clima.
El sangre de grado se desarrolla en climas cálidos con alta
humedad relativa; temperatura media anual entre 17.7 y 30 oc;
precipitación pluvial entre 2000 a 3300 mm/año; nivel altitudinal
entre 300 a 2080 m.s.n.m. (Rengifo y Cerruti, 1997).
b. Suelo.
El sangre de grado se desarrolla bien en suelo arcilloso
moderadamente ácidos (5,6 a 6,0) a ligeramente alcalinos (7,4 a
7,8), con abundante o escasa materia orgánica, con buen drenaje
y aireación, (Rengifo y Cerruti, 1997).
4. Cosecha y manejo postcosecha. ·
a. Cosecha.
Técnicas de extracción.
Las técnicas para la extracción más conocidas son dos: La
primera que consiste en cortar el árbol y realizar. la colección
en árbol caído mediante .cortes eri .espiral y la segunda sin
derribar el árbol, realizando cortes en espiral ó cortes en
forma de V, sobre la corteza del fuste, (Rengifo y
Cerruti, 1997).
-5-
Factores que influyen en el rendimiento.
El árbol empieza a producir látex a partir del cuarto año de
edad y los factores que influyen en el rendimiento son:
radiación solar, follaje, diámetro de árbol, ángulo de corte,
precipitación y fase lunar, (Estrella, 1995).
b. Manejo postcosecha.
Meza (1999); Rengifo y· Cerruti (1997), mencionan algunas
recomendaciones que se deben tener en cuenta después de la
extracción del iátex para determinar su calidad y pureza.
Evitar colectar el látex en días lluviosos porque el agua altera
la densidad.
Evitar mezclar el látex con tierra u otras impurezas.
Envásar el látex en galones de plástico limpio y seco
herméticamente cerrados, almacenar en lugares frescos por
no más de dos meses ya que esto también afectará su
calidad. _.-·
La adición de aguardiente en pequeña cantidad, evitará que el
látex se cristalice.
5. Componentes químicos.
Desde el punto de vista fitoquímico el sangre de grado tiene tres
principales componentes; una fracción alcaloidea representado por el
alcaloide taspina, algunos lignanos y una fracción fenólica del tipo
protoantocianidico, (Pieters et al, 1993).
-6-
a. Alcaloides.
Los alcaloides constituyen un grupo de compuestos secundarios
que contienen nitrógeno en su molécula, a menudo formando
parte de un anillo heterocíclico y la mayoría, como su propio
nombre lo indica (alcaloide = parecido a álcali), son básicos, son
compuestos blancos cristalinos con poca solubilidad en agua,
(Azcon, 1996).
Del género Croton se han aislado más de 30 alcaloides, 22 con
estructura conocida, siendo las principales la solutaridina,
sinoacutina, sparciflorina y el más importante encontrado en el
látex de sangre de grado Taspina, (Rengifo y Cerruti, 1997).
Taspina.
Taspina es un alcaloide que tiene la fórmula empírica C2oH1gNOs
cuya fórmula estructural se muestra en la siguiente figura.
Figura 1. El alcaloide Taspina.
Fuente: Pieters et al, 1993.
-7-
Es un compuesto ópticamente inactivo de color amarillo claro y
con un punto de fusión de 370 oc; el compuesto es insoluble en
agua, soluciones álcali, soluciones de amoniaco, alcohol o
acetona y soluble en cloroformo y dicloroetano, (Meza, 1999).
b. Lignanos.
Son estructuras que integran dos unidades de fenilpropanoide y
que se forman por la dimerización redt.ictiva de dos ácidos o
alcoholes cinámicos. Se encuentran distribuidos en numerosas
familias de plantas superiores y son generalmente, componentes
de resinas, (Azcon, 1996).
Del látex de sangre de grado se han aislado dos lignanos
dihidrobenzofuranos; el 3',4-0..;dimetilcedrusina (Figura 2) y el 4-
0-medtilcedrusina, ( Pieters et al, 1993).
OH_ ....-·
Figura 2. Ellignano 3',4-0-dimetilcedrusina.
Fuente: Pieters et al, 1993.
-8-
c. Flavonoides.
Son compuestos de 15 carbonos que se encuentran en todo el
reino vegetal, siendo muchos de ellos fácilmente reconocibles
como pigmentos de las flores en la mayoría de angiospermas. Su
estructura química se basa en el anillo de flavano sustituido tal
como se muestra en la siguiente figura, (Salisbury, 1994).
Figura 3. Estructura del2-fenilcromano (flavano).
Fuente: Azcon, 1996.
El anillo A es casi siempre de fluoroglucinol, mientras que el anillo
B puede presentar diversas modificaciones. Ambos anillos están
unidos por una cadena de tres átomos de C que sueie cerrarse
formando el ciclo del pirano, (Azcon, 1996).
El látex de sangre de grado contiene proantocianidinas como
1
constituyentes principales que pueden llegar hasta el 90% de su
peso seco; De ella se ha aislado una proantocianidina oligomérica
que han denominado SP-303 (Figura 4) que es la más importante
-9-
por su actividad contra una gran variedad de virus. Además de
ella se han aislado ( + ) - catequinas, ( - ) - epicatequinas, ( + ) -
galocatequina, ( - ) - epigalocatequinas ·y las proantocianidinas
B- 1 y B- 4, (Caí et al, 1991).
. R
OH
OH
HO
OH
OH
OH
HO
········OH
R
OH
OH
OH
HO
"··..··OH
OH
R = H ó OH
Figura 4. Proantocianidina oligomérica, SP-303.
Fuente: Cai et al, 1991.
- 1o-
d. Otros compuestos.
Estudios preliminares mostraron que el látex de sangre de grado
presenta las siguientes características: No es hidrosoluble, pero
soluble en metano!, su pH promedio es de 4.4, su gravedad
específica es de 1.12, su viscosidad de 330 y presenta un
promedio de 29.64% de materia seca; Además contiene taninos
con un 54% en materia seca, azúcares con un 4% en materia
seca, estableciendo la presencia de lactosa, galactosa y ramnosa
y compuestos fenólicos como el ácido gálico y saponinas en
concentraciones bajas.
Además se encontraron agentes tumorales como: Tropa no, lndol
aporfina, quinoleína, piridona, antraquinonas, triterpenoides,
ácidos grasos insaturados y epoxiácidos grasos, (Meza, 1999) y
(Rengifo y Cerruti, 1997).
6. Actividades biológicas.
Meza (1999), menciona que el látex de sangre de grado presenta una
serie de metabolitos secundados . con propiedades · biológicas
importantes como:
- Actividad anti-inflamatoria.
- Actividad cicatrizante.
Citoxicidad.
Estimulación del crecimiento celular.
- 11 - .
- Actividad antimicrobialés y antivirales.
- Actividad antioxidante.
Entre las patologías tratadas en medicina general se hallan:
Inflamaciones dérmicas y vías respiratorias, reumatismo, úlceras
gastrointestinales, anemia, enfermedades degenerativas y diversas
tumoraciones, procesos virales, entre otros, (Estrella, 1995).
B. INFORMACIÓN GENERAL SOBRE ANTIOXIDANTES.
1.. Radicales libres.
Los radicales libres son átomos o moléculas que contienen uno o más
electrones desapareados; son qulmicamente inestables, altamente
reactivos y pueden causar severas lesiones a los tejidos vivos. El
daño que los _radicales libres pueden causar a los sistemas biológicos
deriva de su habilidad para generar perturbadoras reacciones
químicas en cadena, en su intento por recobrar la estabilidad de los
electrones, (Reilly y Bulkley, 1990).
2. Formación de los radicales libres.
Los sistemas biológicos producen radicales libres mediante diversas
reacciones, procesos oxidativos normales dentro de las células.
Fuentes exógenas incluyen a los efectos de la radiación ioriizante
sobre las moléculas orgánicas y a la degradación térmica de la materia
orgánica (como la combustión del tabaco). La energía proveniente de
estas fuentes puede romper uniones químicas para formar radicales.
- 12-
Los radicales también pueden producirse por reacciones redox
(reducción - oxidación) que incluyen la transferencia de un electrón
catalizado por medio de varios; iones metálicos o por enzimas,
(Diplock, 1991 ).
3. Radicales libres de importancia biológica.
Una gran variedad de procesos metabólicos derivan de la producción
de radicales libres y compuestos reactivos de oxígeno, (Reilly y
Bulkley, 1990). En el siguiente cuadro, se muestran los radicales libres
de importancia biológica.
Cuadro 1. Radicales libres de importancia biológica.
Fórmula Radical
Anión radical superóxido
Radical hidroxilo
Radical peroxilo
Oxígeno singlete*
Peróxido de hidrógeno*
Fuente: Reilly y Bulkley, 1990.
*Considerados radicales libres por su alta reactividad química.
- 13-
4. Antioxidante.
Antioxidante es aquel compuesto que inhibe las reacciones de
oxidación sin importar el mecanismo de acción, (Badui, 1998). Los
compuestos antioxidantes, defienden a las células anulando la
actividad de los radicales libres y, r'netabolitos reactivos del oxígeno
producidos ya sea internamente o bien externamente a partir de la
contaminación del medio ambiente o de los precursores alimenticios,
(Singh y Gaby, 1991).
Katz et al (2000), menciona que los antioxidantes protegen y reducen
la formación de radicales libres y oxígeno reactivo por la
descomposición de Peróxidq de hidrógeno sin la generación de
radicales,_ está dada por la inhibición activa del oxigeno libre por
atrapar e inhibir los radicales antes de que ellos lleguen a la célula del
destino.
5. Actividad de los antioxidantes.
La actividad neutralizante que ejercen los antioxidantes sobre los
radicales libres depende de su capacidad de absorber la energía de
los radicales libres sin desencadenar efectos nocivos para los tejidos
circundantes. Los seres humanos al igual que los organismos
superiores poseen una serie de mecanismos de defensa que permiten
neutralizar la energía de los radicales libres. Los procesos normales
de defensa de los antioxidantes, se vuelven importante en aquellos
individuos con mayor riesgo de contraer enfermedades inducidas por
- 14-
radicales libres, (Singh y Gaby, 1991 ), en el siguiente cuadro, se
muestran los principales antioxidantes.
Cuadro 2. Principales defensas de los antioxidantes.
· Enzimáticas No enzimáticas
Catalasa. Beta caroteno.
Glutatión-peroxidasa. Vitamina E.
Superóxidos-dismutasas. Vitamina A.
Enzimas secundarias. Oligielementos.
Glutatión.
Uratos.
Proteínas plasmáticas.
Flavonoides.
Sustancias sintéticas.
Ubiquinoles.
Fuente: (Singh y Gaby, 1991 ).
6. Principales antioxidantes.
Entre los principales antioxidantes se encuentran los siguientes
compuestos que a continuación describiremos:
- 15-
a. Beta caroteno.
El beta caroteno es un miembro de la familia de los carotenoides,
compuestos que son sintetizados en la naturaleza solamente por
los vegetales, (Foote, 1976).
Es la provitamina más potente que rinde dos equivalentes de
vitamina A, (Fenema, 1993). Existen evidencias contundentes que
sugieren que el beta ca~_~teno activa la función inmunológica,
independientemente de cualquier actividad vitamínica, posiblemente
en base a su capacidad para neutralizar a los radicales libres y en
especial al oxígeno singlete, (Bendich, 1991 ).
b. Vitamina E.
Debido a su estructura química actúa como antioxidante celular y
reduce los niveles de peróxido provenientes de la oxidación de los
ácidos grasos insaturados linoleico y linolénico, protege los
eritrocitos de la hemólisis y mantiene la actividad testicular,
....
(Belitz, 1988).
La vitamina E (alfa tocoferol) impide la oxidación química y por
consiguiente la modific~ción tóxica de numerosos constituyentes
celulares esenciales. Siendo la principai vitamina antioxidante
liposoluble transportada por la sangre. La vitamina E se encuentra
localizada principalmente en· la membrana celular y en las
lipoproteínas del plasma. Además actúa en sinergia con el beta
caroteno impidiendo la oxidación, (Singh y Gaby, 1991 ).
- 16-
c. Vitamina C.
La vitamina C (ácido ascórbico) es uno de los más poderosos
agentes reductores conocidos en los tejidos humanos. Es el
principal antioxidante hidrosoluble, ejerce sus efectos benéficos
fundamentalmente en los compartimentos acuosos de las células,
(Diplock, · 1991 ). La mayor concentración se halla en las
suprarrenales y la hipófisis, (Belitz, 1988).
d. Oligoelementos.
Los oligoelementos son cuerpos simples (metales y metaloides)
que se encuentran en proporciones pequeñas en el organismo y
que son indispensables para el normal crecimiento, desarrolló, ciclo
reproductivo y funcionamiento del cuerpo humano.
Los oligoelementos pertenecen al grupo de defensa de
antioxidantes no enzimáticos, pE;jro su actividad es además facilitar
la producción de enzimas antioxidantes, (Singh y Gaby, 1991 ).
C. IMPORTANCIA DE LOS MINERALES EN LAS PLANTAS.
Los minerales se han clasificado funcionalmente en dos grupos: Los que
participan en la estructura de un compuesto importante y los que tienen
una función activadora de enzimas. No hay una función clara entre estas
funciones ya que varios elementos forman parte estructural de enzimas
esenciales y ayudan a catalizar la reacción química en la que participa la
- 17-
enzima, (Salisbury, 1994). Entre ellas podemos mencionar a los
siguientes:
1. Nitrógeno.
El nitrógeno tiene un lugar especial en la nutrición no sólo debido a su
elevado requerimiento por las plantas sino porque está casi
completamente ausente de la roca madre de la cual se forman los
suelos, (Bidwell, 1979).
Es de importancia en las plantas por que forma dei 16 al 18% de las
proteínas, siendo el elemento principal del protoplasma, ácidos
nucleicos y muchas otras sustancias importantes; su absorción lo
realiza la planta a través del suelo en forma de N03- ó - NH4+,
(Fassbender, 1975) y (Lachica, 1985).
2. Calcio.
Este elemento abunda en la mayoría de los suelos y las plantas
raramente muestran deficiencias en condiciones naturales; el calcio
controla la absorción del agua por los coloides celulares, reduce la·'
respiración en las plantas, inter\tiene eh. la traslocaCión de los
carbohidratos y azúcares hacia· los órganos de reserva, es un
componente de las deshidrogenasas, se piensa que pueden tener
interrelación con la formación de reguladores del crecimiento, se dice
que este elemento contribuye a neutralizar la acidez execiva que
puede originarse en la intimidad celular, (Bidwell, 1979) . Su absorción
por la planta es vía radicular en forma de Ca++, (Lachica, 1985).
- 18-
3. Magnesio.
Es un nutriente esencial en los vegetales. Esto lo comprueba el hecho
de ser uno de los constituye:ntes de la clorofila, protoclorofila, pectina y
fitina, además mejora la movilidad y utilización del fósforo y del hierro,
es un componente y cofactor de muchas enzimas, (Jacob, 1973). Es
absorbida vía radicular en forma de Mg ++, (Lachica, 1985).
4. Sodio.
Se ha descubierto su utilidad en el crecimiento de muchas plantas,
particularmente ias halófilas, parecen requerir este elemento para una
glucólisis eficiente, además bajo condiciones de deficiencia potásica el
sodio puede asumir ciertas fÚnciones químico- coloidales del p·otasio,
(Bidwell, 1979) y (Jacob, 1973).
5. Potasio.
El potasio juega un papel esencial en ei mantenimiento de la presión
osmótica celular y de los vasos conductores, favoreciendo la
..
absorción del agua por la raíz, también interviene en la activación de
numerosos sistemas enzimáticos, promueve ia actividad fotosintética,
contribuye a la formación de antocianinas, (Rojas, 1985). Su absorción
1
por la planta es a través de la raíz en forma de K+, (lachica, 1985).
6. Cobre.
Esté elemento lo requieren también las plantas para sus procesos de
oxidación y reducción. Actúa como componente de las fenolasas, de la
- 19-
lacasa y de la oxidasa del ácido ascórbico, · y su papel como parte
integrante de estas enzimas representa probablemente la función más
importante en las plantas, se han podido identificar diversas proteínas
que contienen cobre, las cuales poseen un carácter enzimático,
(Devlin, 1976) y (Jacob, 1973).
7. Hierro.
Se requiere más hierro que ningún otro micronutriente, el rol principal
es su participación en procesos de óxido reducción, especialmente en
mitocondrias y cloroplastos, forma el núcleo dei citocromo, promueve
la formación de la clorofila, forma parte de enzimas que intervienen en
el sistema respiratorio, (Fassbender, 1975) y (Rojas, 1985). Este
elemento. es asimilado por la planta como He 2 + o como quelátos,
(Lachica, 1985).
8. Zinc.
El zinc actúa principalmente como componente metálico de una serie
de enzimas, siendo la más importante la anhidrasa carbónica y',·
algunas deshidrogenasas, también parece estar implicado en la
síntesis de proteínas, así como en la formación de semillas y granos,
(Bidwell, 1979) y (Lachica, 1985).
9. Manganeso.
El manganeso demuestra ser esencial para algunas reacciones del
metabolismo de la planta, es también un elemento imprescindible en la
-20-
formación de la clorofila, en la reducción de nitratos y en la
respiración, (Jacob, 1973). Este elemento se presenta en diversas
formas en el suelo, ei ión manga~eso reducido Mn 2 + es la forma en
que generalmente se absorbe, (Bidwell, 1979).
D. ASPECTOS GENERALES SOBRE ECOLOGÍA.
1. Definición.
Ecología es la ciencia que estudia los sistemas ecológicos con el fin
de que conociendo su funcionamiento, se evite su degradación, se
posibilite su restauración o se asegure su equilibrio en el marco de un
aprovechamiento compatible con el desarrollo integral del hombre
actual y de las generaciones futuras, (Romanyk, 1990). Está
relacionada en primer lugar con las interacciones entre cinco de los
niveles de organización de la materia: organismos, poblaciones,
comunidades, ecosistema y la ecosfera, (Tyler, 1994).
2. El ambiente con relación a las plantas. ·
.•'
Todos los fenómenos fisiológicos de las plantas dependen directa o
indirectamente de los factores ambientales; Los factores ecológicos
pueden clasificarse generalmente en directos e indirectos: Entre los
factores directos se consideran: Temperatura, luz, agua, suelo y
factores bióticos; mientras que en los de acción indirecta se pueden
citar: Precipitación pluvial, altitud, latitud y topografía, (Tisdale, 1991 ).
- 21 -
Es necesario destacar que los bosques y árboles desempeñan una
función básica en distintos sistemas de producción del suelo y del
agua para su utilización con fines agrícolas, proporcionan alimentos
varios, como frutas, raíces y h~:mgos que aumentan la ingesta
alimentaria; aportan forraje nutritivo durante las estaciones secas y
desempeñan una importante función ecológica, en cuanto dan agua,
mejoran el microclima, reducen los efectos de los vientos, evitan la
sequía y controlan la erosión del suelo, (Moscoso, 1991 ).
Además los bosques y los árboles proporcionan combustible a partir
de la leña, aportan una fuente de medicina y favorecen la
biodiversidad, son hábitat para la población y la fauna silvestre, y
sobre todo facilitan ingresos y empleo a las familias campesinas, lo
cual puede constituir también la única actividad lucrativa disponible
para las personas que no poseen tierras o de escasos recursos,
(Odum, 1996).
3. Factores que influyen en el tipo y desarrollo de ia vegetación.
¡/
/
a. Factores fisiográficos.
Los factores fisiográficos dentro de. las grandes regiones
climáticas tienen su efecto sobre el clima local y el suelo, y como
consecuencia determinará el desarrollo de una serie de
asociaciones vegetales cada Una de las cuales tiene una distinta
fisonomía que determina un tipo de bosque (bosque aluvial,
transicional, de colina alta, baja, aguajal) y en generál las
-22-
asociaciones topográficas son definidos por efectos fisiográficos,
(Oaubenmire, 1990).
Entre. los factores fisiográficos tenemos:
i. Altitud.
Para Daubenmire (1990), las regiones climáticas sufren
modificaciones por altitud, estos efectos son mayores en las
partes altas que en las· bajas. Por ello podemos manifestar lo
siguiente:
La radiación solar es más intensa en las partes altas que
en las bajas.
La temperatura del suelo disminuye con el aumento de la
altitud.
La atmósfera es menos densa en las altas elevaciones.
En la acción Indirecta de la altitud sobre los árboles, tenemos.
Crecimiento de altura de los árboles es menor, los tallos
toman forma más cónicas y no cilíndricas, debido a la
poca altura.
El periodo de desarrollo se prolonga, es decir, .los árboles
necesitan más años para llegar a su madurez en áreas de
altura.
- 23-
La calidad de la madera es baja y sus usos limitados para
leña, carbón, etc.
ii. Pendiente.
Daubenmire ( 1990), indica que la pendiente o gradiente
puede ser definido como el ángulo formado entre la superficie
del suelo y la horizontal. Su influencia radica en lo siguiente:
Insolación sobre ~el suelo, determina la temperatura y
humedad del suelo ..
Influencia de la luz, viento y la nieve.
La profundidad y contenido del agua del suelo está
directamente relacionados con la gradiente (suelos menos
profundos y gradientes mayores, árboles delgados y en
mayor número, poco gruesos).
Frecuentemente los suelos con poca pendiente no tienen
buen drenaje y tiene la tendendá a formarse de humus no
descompuesto.
Las pendientes se pueden agrupar de acuerdo a los grados
de gradiente en: suaves, medias, excesivas, muy excesivas y
escarpadas.
iii. Exposición.
Daubenmire (1990), indica que la exposición de un sitio
determinado está dado de acuerdo a la orientación de la
-24-
superficie del suelo. Es la dirección de la gradiente del terreno.
La exposición de una gradiente determina la cantidad de luz
solar recibida por uh sitio; esto, a su vez, modifica el contenido
de humedad y la temperatura del suelo y del aire.
b. Factores edáficos.
La composición florística de las formaciones, o sea el tipo de
vegetación o el tipo de bosque está influenciado en su carácter
específico por otro grupo de factores que son los edáficos, entre
los que se encuentra el suelo, que tienen mayor influencia en la
impresión de carácter del tipo de bosque dentro de una formación
climática. (Daubenmire, 1990).
Dentro de una región climática determinada, el crecimiento de la
vegetación variará dependiendo de las condiciones del suelo, la
topografía y los factores del suelo, por lo tanto son útiles para
establecer diferencias particUlares entre asociaciones vegetales,
(Ríos, 1989).
c. Factores bióticos.
Daubenmire (1990), manifiesta que los factores bióticos adquieren
importancia ya que los insectos y animales afectan los bosques
de varias maneras. Todas estas influencias de los organismos
vivos sobre el bosque son consideradas como factores bióticos y
se puede ordenar como sigue. ·.
-25-
Relación del espacio de crecimiento expresado como
competencia.
Interrelación entre planta.
' '
Interrelación entre plantas y animales, particularmente el
efecto de los animales.
Interferencia por el hombre.
d. Factores ambientales.
Spurr y Burton (1982), manifiestan que. la temperatura media
anual de un lugar es una función de la altitud y latitud; Este
elemento meteorológico, que es uno de los más empleados para
definir los requerimientos térmicos de los cultivos, no expresa
otras características de las manifestaciones térmicas, como las
condiciones externas de la temperatura y las oscilaciones de ésta
en el tiempo, características que constituyen factores importantes
para el desarrollo de las plantas.
e. La precipitación.
Daubenmire (1990) y Hair (1987), manifiestan que cuando el aire
. '
está completamente saturado de humedad (contiene la máxima
cantidad de vapor de agua) y se produce Un pequeño
enfriamiento, provoca la precipitación, en el trópico la forma más
común es la lluvia.
- 26-
~ste fenómeno natural es fundamental para la clasificación de la
vegetación en latitudes grandes y dispersas, y la falta o
abundancia de esta ejerce gran influencia en la fisonomía de la
vegetación del mundo.
f. Humedad relativa.
Daubenmire (1990) y Hair (1987), mencionan que la humedad
relativa es el porcentaje de vapor de agua que existe en el aire
comparado con el total que podría haber a la misma temperatura.
La humedad relativa define una variabilidad de regiones
geográficas en el trópico, tales como los bosques lluviosos que se
caracterizan con valores de humedad relativa de 80 a 100%, las
secas con 50% y las áridas con menos de 20%.
Hair (1987), menciona que la humedad atmosférica es un factor
que define la vegetación, la temperatura como factor puede definir
las diferentes fajas o pisos ecológicos: tropical, subtropical,
montano, montano bajo, alpino, nival, etc; Pero este factor no es
suficiente para determinar el tipo de formación ecoiógica de una
región, por que se debe considerar
.
la. humedad dada por la
precipitación, que define la fisonomía de las regiones del mundo,
desde· fas humedades hasta las áridas ydesérticas.
111. MATERIALES Y METODOS.
A. LUGAR Y FECHA DE EJECUCIÓN.
El presente trabajo se realizó en los Laboratorios de: Espectrofotometría,
Nutrición animal, Química y Suelos, de la Universidad Nacional Agraria de
la selva, que se encuentra ubicada en la Ciudad de Tingo María, Distrito
de Rupa Rupa, Provincia de Leoncio Prado, Departamento Huánuco,
Región Andrés Avelino Cáceres~ situada a 660 m.s.n.m, con una
humedad relativa promedio anual de 84% y temperatura promedio anual
de 24 oc.
El estudio se llevó a cabo en el periodo comprendido entre los meses de
Julio a Diciembre del 2000.
B. RECOLECCIÓN DE MATERIA PRIMA.
··Las muestras del látex .de sangre de grado, fueron colectados de tres
pisos ecológicos, cuyas condiciones climáticas se describen a
continuación:
1. Aserradero. ·
Está situado a 650 m.s.n.m. con una humedad relativa promedio de
84% y una temperatura promedio anual de 24°C; Las precipitaciones
pluviales pasan de 3000 mm y casi no hay un solo mes al año sin
lluvias; Es una unidad fisiográfica de Terraza alta ( Ta ).
-28-
2. Pumahuasi.
Está situado a 800 m.s.n.m. con una humedad relativa promedio de
84%, con temperaturas medias entre 22 y 25°C, la precipitación
promedio anual es de 3200 a 3800 mm, con épocas marcadas
comprendida entre noviembre y mayo de abundantes lluvias; Es una
unidad fisiográfica de Colina baja ( Cb ).
3. Divisoria.
Está situada a 1600 m.s.n.m., con una humedad relativa media anual
entre 85 a 99%, presenta una temperatura niedia anual de 20°C, la
precipitación promedio anual es de 3200 a 3800 mm, con una época
lluviosa entre los meses de octubre y abril; Es una unidad fisiográfica
de Montaña alta ( MA ).
Se colectaron seis muestras por piso ecológico, las muestras fueron
extraídas en horas de la mañana (entre 6:00 A.M. a 8:30 A.M.), sin
derribar el árbol, mediante el corte en espiral, método recomendado por,
(Rengifoy Cerruti, 1997).
Las muestras fueron colectados en envases de. plástico, con un contenido
de 50 mi aproximadamente cada uno, luego transportados
herméticamente cerrados hasta llegar al laboratorio para sus respectivos
procedimientos de análisis.
-29-
C. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS.
1. Equipos de laboratorio.
Balanza analítica eléctrica, sensibilidad 0.0001 g. EE.UU. Marca
sortorius.
Equipo de filtración a vacío.
Equipo de reflujo para determinación de fibra.
Equipo de titulación.
Equipo digestor de proteína
Equipo extractor soxlhet.
Espectrofotómetro de absorción atómica. Modelo video 12.
U.S.A.
Espectrofotómetro de luz visible. Modelo 200 (Milton Roy
Company, New York. USA).
Estufa tipo LP 201/AL con temperatura máxima 200 oc.
Mufla. Marca Esztewrg·on, temperatura regulable de O a 1200 oc.
2. Materiales de laboratorio.
Balones de vidrio, capacidad. 100, 500 y 1000 mi.
Buretas, fiolas, pipetas y goteros.
Campana de desecación.
Crisoles de porcelana, tubos de ensayo y espátulas.
- 30-
Fiolas, capacidad. 25, 50, 500 y _1 000 mi.
Micropipetas, capacidad_ 5- 50, 50- 200 y 2 00- 1000 ¡..tl.
Pesa filtros y pinzas metálicas.
Probetas, capacidad. 50,100 y 500 mi.
Vasos de precipitación, capacidad_ 50, 100, 250, 500 y 1000 mi.
3. Reactivos y soluciones.
Acido bórico al 2%.
Acido clorhídrico al 1O% y 50%.
Acido sulfúrico al 1.25% y 98%.
Bicarbonato de sodio al 0_5 M_
Etanol ábsoluto al 95%.
Hexano.
Hidróxido de sodio al 1.25% y 40%.
Indicador mixto: anaranjado de metilo más azul de metileno_
Indicador de fenolftaleína al 1%.
Mezclas catalíticas (Sulfato de cobre+ Sulfato de potasio).
Oxido de lantano al 0.1 N_
Solución patrón de minerales (Calcio, Magnesio, Sodio, Potasio,
Cobre, Hierro, Zinc, Manganeso)_
- 31 -
D. MÉTODOS DE ANÁLISIS.
1. Análisis químico proximal.
a. Humedad.
Se determinó en una estufa a presión atmosférica, a 70 oc por 24
horas, método recomendado por la AOAC. (1997). 23,003.
b. Grasa.
Se determinó por medio de un equipo tipo soxhlet, cuya
extracción se procede con el exceso de un disolvente (Hexano),
recién condensado frente a la muestra seca, método
recomendado por la AOAC. (1971 ). 935,60.
c. Cenizas totales.
Se utilizó el método de calcinación directa recomendado por la
AOAC. (1971 ). 942.50. Se fundamenta en la oxidación de la
materia orgánica a ceniza ,sometiéndola a una ignición a
temperatura de 550 a 600 oc.
d. Proteína.
Se utilizó el método semi microkjeldahal, que consiste en la
determinación del nitrógeno total el cuál es multiplicado por el
factor 6.25, método recomendado por la AOAC. (1991). 991,29.
- 32-
e. Fibra.
Se determinó por el método de la AOAC. (1991 ). 930,20. Que
consiste en la separación de muestra insoluble tratado con ácido.
f. Carbohidratos.
Se determinó por diferencia de los demás componentes (Hart y
Fisher, 1991).
2. Análisis de minerales.
a. Determinación de calcio y magnesio.
El método seguido fue por espectrofotometría de absorción
atómica recomendado por la AOAC. (1994). 991,25.
i. Preparación de la curva patrón.
Para la curva estándar de calcio y magnesio, se utilizaron
soluciones stock de 1000 ppm; á partir de esta se prepararon
soluciones de O, 1 ; 0,2 y 0,3 ppm ·para calcio y O, 1 ; 0,2 y
0,4 ppm para magnesio ; todas las soluciones fueron·'
preparados con óxido de lantano al 0,1 N.
~ .
Los parámetros considerados en el equipo para las iecturas
de calcio y magnesio se muestran en el siguiente cuadro.
- 33-
Cuadro 3. Parámetros para las lecturas de calcio y magnesio.
Parámetros Calcio Magnesio
Longitud de onda 422,8 nm 285,2 nm
Fuente de luz Cátodo Ca Cátodo Mg
Energía 7MA 3 MA
Slit o abertura -~ 320 um 320 um
Sensibilidad . 0,05 ¡.¡g/ml 0,003 ¡.¡g/ml
Llama Aire - acetileno Aire- acetileno
1nterferencia P04 3 - Aluminio
Fuente: Catalogo del equipo_
ii. Preparación de las muestras (Solución madre para Ca y
Mg).
Las muestras llegadas al laboratorio fueron tratados de la
siguiente manera:
Se pesó 3 mi aproximadamente del látex de sangre de grado,
en crisoles previamente tratados en solución de HCi al 1O%
por un tiempo de 16 horas, lavados con agua desionizado,
secados, codificados y pesados. Luego se llevaron a la estufa
a 70 oc durante 24 horas hasta que alcancen un peso
constante. Posteriormente se colocaron en una placa
- 34-
calentadora para quemar la materia orgánica, seguidamente
se llevaron a una mufla' por 16 horas a 550°C para la
calcinación respectiva, una vez obtenido la ceniza se procedió
a la solubilización en una placa calentadora agregando 5 mi
de HCI al 50% dejando evaporar hasta ia mitad del volumen
inicial, luego se agregó HCI al 1O% hasta un volumen
equivalente a los dos tercios de la capacidad del crisol,
dejando evaporar hasta que alcance las tres cuartas partes
del volumen, luego se agregó óxido de lantano al O, 1N
aproximadamente dos tercios del volumen del crisol, se filtró
con papel Wathman No 42 en pequeños vasos de
precipitación, se enjuagó bien cada crisol e inmediatamente
se enrasó a 25 mi.
iii. Lectura de muestras.
Las muestras se prepararon a partir de la solución madre; y
fueron diluidos con oxido de lantano al O, 1 N en una relación
de 1 : 200.
b. Determinación de Sodio, Potasio, Hierro, Cobre, Zinc y
Manganeso.
El método seguido para la determinación de estos elementos fue
por espectrofotometría de absorción atómica recomendado por la
AOAC ( 1994), los códigos del método de cada elemento se
- 35-
describe a continuación: Sodio 976,35; Potasio 986, 15; Hierro
990,05; Cobre 960,40; Zinc 969,39 y Manganeso 930,34.
i. Preparación de la curva patrón.
Para la curva estándar de cada elemento se utilizaron
soluciones stock de 1ooo ppm, a partir de estas se realizaron
las soluciones estándares tal como se muestran en el siguiente
cuadro.
Cuadro 4. Solución estándar para el Na, K, Cu, Fe, Zn y Mn.
Na K CLJ Fe Zn Mn
Estándar
(ppm) (ppm) (ppm) (ppm) (ppm) \ppm)
S1 0,2 . 0,5 1,O 1 ,O 0,2 0,5
S2 0,5 1,O 2,0 2,0 0,5 1,0
S3 1,0 2,0 4,0 5,0 1,0 3,0
Fuente: Catalogo del equipo.
Luego se realizó las iecturas de las concentraciones para
establecer la curva patrón.
Los parámetros considerados en el equipo para las lecturas de
estos elementos se muestran en el siguiente cuadro.
- 36-
Cuadro 5. Parámetros para las lecturas de Na, K, Cu, Fe, Zn y
Mn.
Parámetros Na K Cu Fe Zn Mn
Longitud de
589 766,5 324,7 248,3 213,9 279,5
onda (nm)
Fuente de luz
Na ...... ..,.
K Cu Fe Zn Mn
(cátodo)
Energía (MA) 8 7 5 8 3 5
Slit o abertura
160 320 320 80 320 160
(u m)
Sensibilidad
0,001 0,01 0,03 0,04 0,008 0,02
(~g/ml)
Llama A-Ac A-Ac A-Ac A-Ac A-Ac A-Ac
Interferencia Nitrato * Ninguno Ninguno * Fe y Ni
Fuente: Catalogo del equipo. :
* No especifica.
iL Preparación de la muestra.
Las muestras para el análisis de Na, k, Cu, Fe, Zn y Mn fueron
preparados de manera similar que para el calcio y magnesio,
siendo la única diferencia que para estos minerales se enrasó
con agua desionizado.
. -.37-
iii. Lectura de muestras.
Para el Cu, Fe, Zn y Mn no se hicieron diluciones, para el Na y
K se prepararon diluciones en una relación de 1 : 1O.
3. Evaluación de la capacidad antioxidativa.
El método utilizado es el DPPH (1, 1-diphenyl -2- picrilhydrazyl), por
· espectrofotometría de luz visible. (Longitud de onda a 515 nm)
Este método consiste en el secuestro del radical libre DPPH in vitre,
haciendo reaccionar soluciones del látex de sangre de grado con la
solución standard de DPPH (1 00 ¡..tM). Registrando la absorbancia
cada minuto. La absorbancia de la solución standard fueron
registradas por 15 minutos con el fin de evaluar su estabilidad.
E. METODOLOGÍA EXPERIMENTÁL.
1. Análisis químico proximal.
Para la determinación de los componentes de humedad, grasa,
ceniza, proteína, fibra y carbohidratos se planteó el diagrama
experimental mostrado en la figura 5, el látex analizado procedió de
tres pisos ecológicos, seis muestras por piso ecológico, tres de
árboles de cuatro a seis años y tres de árboies mayores de seis años.
Los resultados de los análisis determinados fueron evaluados
aplicando el diseño estadístico completo al azar con arreglo factorial
- 38-
de 3*2, con 3 repeticiones, para los niveles donde existió significancia
estadística se evaluó mediante la prueba de Duncan (P<0,05).
2. Análisis de minerales.
Para la determinación del contenido de calcio, magnesio, sodio,
potasio, cobre, hierro, zinc y manganeso se trabajó siguiendo el
diagrama experimental mostrado en la figura 5. El diseño estadístico
utilizado fue el mismo que para el análisis químico proximal.
3. Evaluación de fa capacidad antioxidativa.
Para la evaluación de la capacidad antioxidativa se trabajó siguiendo
el diagrama experimental mostrado en la figura 5, El diseño estadístico
utilizado fue el mismo que para el análisis químico proximal, para ello
se realizaron las siguientes evaluaciones:
a. Determinación del porcentaje de inhibición del radical libre,
DPPH.
En esta etapa se determinó para cada muestra a concentraciones
de 30, 20, 1o y 5 J.!Q/ml los porcentajes de inhibición.
La determinación del porcentaje de inhibición se hicieron en base
a los datos provenientes del espectrofotómetro (Anexo XVI).
- 39-
b. Determinación del Coeficiente de inhibición (ICso).
Mediante el gráfico concentración versus porcentajes de
inhibición, se obtuvieron las curvas de ajuste mediante el cual se
estimaron los IC5o-
... ..-
9
P1 P2 P3
E1 E2 E1 E2 E1 E2
1R21
Leyenda. ·
M.P Materia Prima (Látex).
P1, P2, P3 Piso ecológico.
E1, E2 Edades.
R1, R2, R3 Repeticiones .
. . Figura s·. Diagrama experimental para el análisis químico proximal, minerales y evaluación
de la capacidad antioxidatiVa del látex,de sangre de grado.
IV. RESULTADOS Y DISCUSION.
A. CARACTERIZACION QUIMICO PROXIMAL DEL LATEX DE SANGRE
DE GRADO.
1. Contenido de humedad.
a. Contenido de humedad dei látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
El contenido de humedad del látex de sangre de grado por piso
ecológico (Ta) a 650 m.s.n.m, (Cb) a 800 m.s.n.m y (MA) a 1600
m.s.n.m. y edades del árbol entre 4 a 6 y mayores de 6 años, se
presentan en el siguiente cuadro.
Cuadro 6. Contenido de humedad del látex de sangre de grado por
piso ecológico y edad del árbol.
Piso Ecológico Humedad (%)
Unidad '
(m.s.n.m) 4-6 (años) > 6 (años)
fisiográfica
Ta 650 72,04 ±0,7 a 67,64 ± 0,5 a
Cb 800 71,10±1,1a 68,39 ± 0,3 a
MA 1600 72,04 ± 0,7 a 67,64 ± 0,5 a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen .de los
experimentos, cada uno analizado por seis veces promedios por piso
ecológico y edad del árbol con diferentes superíndices en una misma columna
(P < 0.05).
-42-'
Realizado el análisis de varianza (Anexo 1), para los árboles de 4 a
6 años y mayores de 6 años en los pisos ecológicos, no se
encontró diferencia estadística significativa.
Meza (1999), reporta que el látex de sangre de grado tiene un
contenido de humedad de 70.36%, comparado con nuestro
resultado (67.64% min. y 72.04% max.) se observó pequeñas
diferencias numéricas, a~estas variaciones se atribuye el lugar de
colección, donde las interacciones clima, suelo y planta son
diferentes, tal como lo reporta Tyler (1994).
b. Contenido de humedad del látex de sangre de grado por
edad del árbol.
En el siguiente cuadro, se muestran los resultados del contenido
de humedad del látex de sangre de grado por edad del árbol.
Cuadro 7. Contenido de humedad del látex de sangre de grado
por edad del árbol. '
-··
Edad del árbol (años) Humedad ( % ) ·
4-6 71,73±0,5a
>6 67,89 ± 0,3 b
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de ios
experimentos, cada uno analizado por 18 veces, promedio por edad del árbol
con diferentes superíndices en una mísma cblumna (P < 0.05).
-43-
Realizado el análisis de varianza (Anexo 1), se encontró diferencia
estadística altamente significativa. Al efectuarse la comparación
de promedios mediante la prueba de Duncan, se observó que los
árboles de 4 a 6 años presentaron un mayor promedio (71, 73%)
que los árboles mayores de 6 años (67,89%), siendo
estadísticamente diferentes (P > 0,05). Al respecto Winter (1981 ),
menciona que las plantas jóvenes tienen un sistema de sostén
principalmente de células turgentes con paredes delgadas;
Además Romanyk (1990) menciona que al aumentar la edad la
espesura de la masa forestal diminuye así como la presión de
turgencia de las células debido a que existe una mayor pérdida de
agua por transpiración.
2. Contenido de proteína.
a. Contenido de proteín~ del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
El contenido de proteína del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol se presenta en el cuadro 8.
Realizado el análisis de varianza (Anexo 11), se _encontró
diferencia estadística altamente significativa por piso ecológico y
edad del árbol, se observó que entre los dos grupos de árboles
analizados el piso ecológico (MA). presentó el mayor promedio
(1 ,33% y 2,25%).
-44-
Cuadro 8. Contenido de proteína del látex de sangre de grado
por piso ecológico y edad del árbol.
Piso Ecológico Proteína ( % )
Unidad (m.s.n.m) 4-6 (años) > 6 (años)
fisiográfica
Ta 650 1,29 ±O, 1 a 1,38 ± 0,0 b
Cb 800 1,32±0,1 a 1.,51 ± 0,1 b
MA 1600 1,33 ± 0,0 a 2,25 ± 0,0 a
Los vé¡lores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experini~ntos, cada uno analizado por seis veces promedios por piso
ecológico y edad del árbol con diferentes superíndices en una misma columna
(P < O.OS). . -
Probablemente la diferencia coh respecto a los demás pueda
deberse a que las plantas tengan diferentes sistemas de ralees
para anclarsé al suelo y sumi~istrar agua y nutrientes del mismo
en áreas con condiciones climáticas dife_rentes, tal como lo reporta
/
Tyler (1994).
b. Contenido de proteína del látex de sangre de grado por piso
ecológico.
El contenido de proteína del íatex de sangre de grado por piso
ecológico se muestra en el siguiente cuadro.
-45-
Cuadro 9. Contenido de proteína del látex de sangre de grado
por piso ecológico.,
Piso Ecológico
Proteína ( % )
Unidad fisiográfica (m.s.n.m)
1,34 ± 0,0 b
Ta 650
Cb 800 1,43 ±O, 1 b
MA 1600 1,79±0,2a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por doce veces, promedios por piso
ecológico con diferentes superíndices en una misma columna (P < 0.05).
Realizado el análisis de varianza (Anexo 11), se encontró diferencia
estadística significativa. Al , efectuarse la comparación de
promedios mediante la prueba 'de Duncan. Se observó que el piso
ecológico (MA) presentó el mayor promedio (1, 79%) y fue
estadísticamente diferente a los otros dos (P<0,05).
¡.•
Rojas (1985),. menciona ~ue el origer del nitrógeno parte
constitutiva de las proteínas es la materia orgánica, por lo que un
. . .
suelo con bajo contenido de materia orgánica se puede explicar en
parte el mal crecimiento y desarrollo de Una planta. Los tres pisos
ecológicos (Ta), (Cb) y (MA) presentan suelos con un contenido
medio de materia orgánica (Anexo XVII), en este último la materia
orgánica se mantendrá debido a las condiciones climáticas,
además el factor de mineralización es menor de 2 %.
-46-
c. Contenido de proteína del látex de sangre de grado por edad
del árbol.
El contenido de proteína del látex de sangre de grado por edad
del árbol se presenta en el siguiente cuadro.
Cuadro 10. Contenido de proteína del látex de grado por edad del
árbol.
Edad del árbol (años) Proteína (%)
. b
4-6 1,31 ± 0,0
>6 1, 72 ±O, 1 a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por 18 veces, promedio por edad del árbol
con diferentes superíndices en una misma columha (P < 0.05).
Realizado el análisis de varianza (Anexo 11), se encontró diferencia
estadística altamente significativa. Al efectuarse la comparación
de promedios mediante la prueba de DUncan. Se observó que los
,,
árboles mayores de 6 años présentaron mayor promedio (1,72%),
que los árboles de 4 a 6 años (1 ;31_%) siendo estadísticas
diferentes (P<0,05). Esto indica un aumento en velocidad
respiratoria por unidad de citoplasma a medida que las células van
madurando y envejeciendo; coincidiendo con Lira (1994), quien
reporta que la intensidad respiratoria cuando es expresado en
unidades de nitrógeno proteínico, aumenta con la edad.
-47-
3. Contenido de grasa.
a. Contenido de grasa del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
El contenido de grasa del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol se presenta en el siguiente cuadro.
Cuadro 11. Contenido de grasa del látex de sangre de grado por
.~
piso ecológico y edad del árbol.
Piso ecológico Grasa (%)
Unidad (m.s.n.m) 4-6 (años) > 6 (años)
fisiográfica
Ta 650 2,12 ± 0,2 a 2,26 ±O, 1 a
Cb 800 2,02 ± 0,8 a 2,22 ± 0,3 a
MA 1600 1,89 ± 0,2 a 2,14±0,0
8
Los valores representan (promedios ± SEM) .los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por seis· veces promedios por piso
ecológico y edad del árbol con diferentes superíndices en una misma columna
(P < 0.05).
Realizado el análisis de varianza (anexo .lil), para los árboles de 4
a 6 años y mayores de 6 años en los pisos ecológicos, no se
encontró diferencia estadística significativa. Se observó que en los
dos grupos de árboles en el piso ecológico (MA). presentaron el
menor promedio (1,89% y 2,14%), posiblemente la temperatura
sea un factor para tal diferencia. Odum (1996), menciona que en
-48-
lugares altos con respecto al nivel del mar la temperatura es
menor. Al respecto Salisbury (1994), indica que el tipo de ácido
graso que se encuentra en las membranas y grasas de reserva de
los vegetales varían un poco con el ambiente en que estos crecen.
Además dice que a temperaturas bajas los ácidos grasos están
más insaturados que a temperaturas elevadas, reduciendo los
puntos de fusión de los ácidos grasos haciendo más fluida a las
membranas y es la causa de 'que en los oleosomas se presenten
aceites más que grasas sólida.
Por otro lado Badui (1994), menciona que los ácidos grasos
saturados son menos sensibles a la oxidación que los ácidos
grasos insaturados siéndo almacenados con mayor facilidad.
4. Contenido de fibra.
a. Contenido de fibra del lát~x de sangre de grado por piso
ecológico y edad del 'árbol.
•, •.·
!·/
El contenido de fibra del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol se presenta en el 'cuadro 12. ·
Realizado el análisis de vai-ianza (Anexo IV), no se encontró
diferencia estadística significativa por piso ecológico y edad del
árboL Rojas (1985), menciona que los alimentos del vegetal son
de tres tipos: Hidratos de carbono, lípidos y proteínas.
-49-
Además Badui (1994), menciona que la fibra es un filamento que
forma parte de un tejido animal o vegetal como celulosa,
hemicelulosa o pectinas.
Cuadro 12. Contenido_ de fibra del látex de sangre de grado por
piso ecológico y edad del árbol.
Piso Ecológico Fibra (%)
Unidad (m.s.n.m) 4-6 (años) < 6 (años)
fisiográfica
Ta 650 0,12±0,0b 0,33 ± 0,0 a
Cb 800 0,28 ± 0,0 b 0,50 ± 0,0 a
MA 1600 0,53 ±O, 1 a 0,35± O, 1 a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por seis veces promedios por piso
ecológico y edad del árbol con diferentes superíndices en una misma columna
(P < 0.05).
Es posible que los resultados obtenidos del contenido de fibra
sean de algunas partículas fibrosas provenientes de la corteza del
árbol que se mezclaron al colectar la muestra; metodo
recomendado por Rengifo y Cerruti (1997), ql.ie consiste en
realizar cortes en forma de espiral, sobre el fuste.
-50-
5. Contenido de ceniza.
a. Contenidq de ceniza del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
El contenido de ceniza del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol se presentan en el siguiente cuadro.
Cuadro 13. Contenido de ceniza del látex de sangre de grado por
piso ecológico y edad del árbol.
Piso Ecológico ·Ceniza (%)
Unidad (m.s.n.m) 4-6 (años) > 6 (años)
fisiográfica
Ta 650 O, 13 ± O,Ob O, 17 ± O,Oa
Cb 800 0,22 ± O,Oa 0,13±0,0a
MA 1600 0,20 ± O,Oab O, 17± O,Oa
Los valores representan (promedios ± SEM) ios datos provienen de los .
experimentos, cada uno analizado por seis veces promedios por piso ·
ecológico y edad del árbol con difer~ntes supedndices en una misma columna
(P < 0.05).
Realizado el análisis de varianza (Anexo V), no se encontró
diferencia estadística significativa. Sí observamos el Cuadro 7,
verificamos que existe un mayor porcentaje de humedad en
árboles de 4 a 6 años y por diferencia un menor contenido de
materia seca que los árboles mayores de 6 años, por lo que
podríamos atribuir que en árboles de 4 a 6 años encontraremos un
-51 -
menor porcentaje de ceniza. Ai respecto Badui (1998), menciona
que la composición de la ceniza no es necesariamente igual a la
de los componentes minerales de la muestra original, ya que
existen pérdidas por volatilización o cambios por interacción de los
constituyentes.
6. Contenido de carbohidrato.
a. Contenido de carbohidrato del látex de sangre de grado por
~'
piso ecológico y edad del árbol.
El contenido de carbohidrato del látex de sangre de grado por
'
piso ecológico y edad del árbol se presentan en el siguiente
cuadro.
Cuadro 14. Contenido de carbohidrato del látex de sangre de
grado por piso ecológico y edad del árbol.
Piso Ecológico Carbohidratos ( % )
i
;/,;
Unidad (m.s.n.m) 4-6 (años) > 6 (años)
fisiográfica
Ta 650 24,29 b 28,21 a
Cb 800 25,06 a 27.,23 b
MA 1600 24,00 b . 27,45 a
Los valores representan promedios, los datos provienen de los experimentos,
cada uno analizado por seis veces promedios por piso ecológico y edad del
árbol con diferentes superíndices en una misma columna (P < 0.05).
-52-
Realizado el análisis de varianza (Anexo VI), se encontró
diferencia estadística altamente significativa por edad del árbol.
Los resultados muestran promedios de carbohidratos bastante
altos, Al respecto Rojas (1985), menciona que de las sustancias
elaboradas que se transportan en las plantas unas nueve décimas
son hidratos de carbono, además Meza (1999), dice que los
constituyentes principales de sangre de grado son las
~·
proantocianidinas pudiendo llegar hasta el 90% de su peso seco y
estos compuestos, según Rojas (1985) son del grupo de los
glucósidos (grupo de hidratos de carbono compuesto).
b. Contenido de carbohidrato del látex de sangre de grado por
edad del árbol.
El contenido de carbohidrato del látex de sangre de grado por
edad del árbol se muestra en el siguiente cuadro.
Cuadro 15. Contenido de carbohidrato del látex de sangre de
grado por edad del árbol.
Edad del árbol (años) Carbohidratos ( % )
4-6 24,45 b
>6
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por 18 veces, promedio por edad del árbol
con diferentes superíndices en una misma columna (P < 0.05).
-53-
Realizado el análisis de varianza (Anexo VI), se encontró
diferencia estadística altamente significativa. Al efectuarse la
comparación de promedios mediante la prueba de Duncan. Se
observó que los árboles de 4 a 6 años presentaron un menor
promedio (24,45%) que los árboles mayores de 6 años (27,63%),
siendo estadísticamente diferentes (P<0,05).
Posiblemente esta diferencia se deba a que en árboles de 4 a 6
años encontramos en el látex un mayor contenido de humedad
tal como se observa en el Cuadro 7. Al respecto Molish (1985),
dice que la producción de energía en la respiración está
acompañada por una pérdida equivalente de material ocgánico
en los tejidos a pesar de que el peso fresco aumenta debido a la
absorción de agua realmente se pierde materia seca.
7. Contenido químico proximal en promedio del látex de sangre de
grado.
1
El contenido químico proximal en promedio del látex de sangre de •
grado se muestra en el sigl!iente cuadro.
-54-'
Cuadro 16. Contenido químico proximal en promedio del látex de
sangre de grado.
Componentes (%)
Humedad 69,81 ± 0,4
Proteína 1,52±0,1
Grasa 2,11 ±O, 1
Fibra 0,35 ± 0,0
Ceniza 0,17±0,0
Carbohidrato 26,04
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado 18 veces por triplicado.
B. DETERMINACION DE MINERALES DEL LATEX DE SANGRE DE
GRADO.
1. Contenido de calcio.
. .•,'
a. Contenido de calcio del iátex de sangre de grado por piso'
ecológico y edad del átboL
El contenido de calcio del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol se presentan en el cuadro 17.
Realizado el análisis de varianza (Anexo VIl), se encontró
diferencia estqdística altamente significativa por piso ecológico y
edad del árbol.
. -55-
Cuadro17. Contenido de calcio del látex de sangre de grado por
piso ecológico y edad del árbol.
Piso Ecológico Calcio (mg/1 OOg)
Unidad (m.s_n_m) . 4-6 (años) > 6 (años)
fisiográfica
Ta 650 563,10 ± 7,55 a 557,95 ± 10,07 a
Cb 800 547,44 ± 6,41 a 560,76 ± 2,62 a
MA 1600 505,77 ± 44,18 a 341,14 ± 22,38 b
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por seis veces promedios por piso
ecológico y edad del árbol con diferentes superíndices en una misma columna
(P < 0.05).
Los resultados muestran promedios de 0,34 a 0,56%
aproximadamente, dichos promedios se encuentran dentro del
rango para plantas en general que es de 0,04 a 7,0%, tal como lo
reporta Lachica (1985)_
1 • • •
Jacob (1973), menciona que de acuerdo a sus funciones, la mayor
parte del calcio se encuentra eri estado soluble ó bieri formando
-
compuestos poco estabies con los coloides del plasma, es posible
que parte de ello se encuentre en el látex tal como se reporta en
nuestros resultados.
-56-
b. Contenido de calcio del látex de sangre de grado por piso
ecológico.
En el siguiente cuadro, se muestra el contenido de calcio del látex
de sangre de grado de los diferentes pisos ecológicos.
,,
..
. ~·
Cuadro 18. Contenido de calcio del látex de sangre de grado por
piso ecológico.
Piso Ecológico
Calcio (mg/1 OOg)
Unidad fisiográfica (m.s.n.m)
560,53 ± 6,05 a
Ta 650
Cb 800
554,10 ± 3,86 ª
. b
MA 1600 423,45 ± 34,26
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por doce veces, promedios por piso
ecológico con diferentes superíndices en una misma columna (P < 0.05).
Realizado el análisis de varianza (Anexo VIl), se encontró
diferencia estadística altamente significativa. Al efectuarse la
comparación de promedios mediante la prueba de Duncan. Se
observó que ei piso ecológico (MA) presentó el menor promedio
(423,45 mg/1 OOg) siendo estadísticamente a ios otros dos
(P<0,05).
Esta diferencia se debe al factor suelo; se puede observar (Anexo
XVII) que en el piso ecológico (MA) los suelos tienen menor
-"57-
cantidad de calcio, además esta zona es más lluvioso comparado
a los pisos ecológicos (Ta) y (Cb). Al respecto Rojas (1985),
menciona que eri climas lluviosos los suelos necesitan ser
encalados constantemente.
c. Contenido de calcio dei látex de sangre de grado por edad
del árbol.
En el siguiente cuadro se,-muestra el contenido de calcio del látex
de sangre de grado por edad del árbol.
Cuadro 19. Contenido .de calcio del látex de sangre de grado por
edad del árbol.
Edad del árbol (años) Calcio (mg/1 OOg)
4-6 538,77 ± 15,34 a
>6 489,62 ± 26,12 a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por nueve veces, promedio por edad del
árbol con diferentes superíndices en una misma columna (P < 0.05).
Realizado el análisis de varianza (Anexo VIl), no se encontró
diferencia estadística significativa. Comparado los promedios, los
árboles de 4 a 6 años presentan un valor de 538,77 mg/1 OOg y los
árboles mayores de 6 años Un valor de 489,26 mg/1 OOg, existe
solamente una variación numérica entre estos dos grupos
favoreciendo a los menores. Nuestros resultados no coinciden con
-58-
lo reportado por Rojas (1985), quien menciona que el contenido de
calcio aumenta con la edad, a esto Jacob (1973), añade diciendo
qUe el calcio tiene poco· movimiento de traslación en la planta
acumulándose especialmente en los tejidos adultos.
Es posible que el contenido de calcio en mayor proporción en
árboles de mayor edad, se encuentren como elemento estructural
sólo en la pectina cálcica de la laminilla media de la pared celular,
tal como lo reporta Bidwell (1979).
2. Contenido de magnesio.
a. Contenido de magnesio del látex de sangre de grado por
piso ecológico y edad del árbol.
El contenido de magnesio del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol se presentan en el siguiente cuadro.
Realizado el análisis de varianza (Anexo VIII), se encontró
diferencia estadística altamente significativa por piso ecológico.
Los resultados muestran promedios de 0,067 a .0,075%
aproximadamente, encontrándose estos valores dentro del
promedio para plantas en general que es de 0,05 a 2% reportado
por Lachica (1985).
-59-
Cuadro 20. Contenido de magnesio del látex de sangre de grado
por piso ecológico y edad del árbol.
Piso Ecológico Magnesio (mg/1 OOg)
Unidad (m.s.n.m) 4-6 (años) > 6 (años)
fisiográfica
Ta 650 75,97 ± 1,38 a 74, 1O ± 1,54 a
. b
Cb 800 69,24 ± 0,64 70,03 ± 0,84 b
MA 1600 72,32 ± 1,27 b 67,59 ± 1,21 b
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por seis veces promedios por piso
ecológico y edad del árbol con diferentes superíndices en una misma eolumna
(P < 0.05)
Bidwell (1979), menciona que ·el contenido de magnesio se
encuentra disuelto en el jugo celular, pudiendo trasladarse
'
fácilmente por la plant~. es posible que en nuestro caso haya
sucedido este efecto.
b. Contenido de magnesio del iátex de sangre de grado por
piso ecológico.
En el cuadro 21, se muestra el contenido de magnesio del látex
de sangre de grado de los diferentes pisos ecológicos. Realizado
el análisis de varianza (Anexo VIII), se encontró diferencia
estadística altamente significativa. Al efectuarse la comparación
de promedios mediante la prueba de Duncan, se observó que en
-60-
el piso ecológico (Ta) presentó el mayor promedio (75,03
mg/1 OOg), siendo estadísticamente diferente a los demás
(P<0,05) ..
Cuadro 21. Contenido de magnesio del látex de sangre de grado
por piso ecológico.
Piso Ecológico
Magnesio (mg/1 OOg)
Unidad fisiográfica (m.s.n.m)
Ta 650 75,03 ± 1,02 a
Cb 800 69,64 ± 0,52 b
MA 1600 69,96±1,10b-
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por doce veces, promedios por piso
ecológico con diferentes superíndices en una misma columna (P < 0.05).
Esta diferencia posiblemente se debe al contenido de nutrientes
del suelo por piso ecológico. Se puede observar (Anexo XVil) que
el piso ecológico (Ta) presentan suelos Íigeratnente neutros.
Rojas (1985), menciona que el magnesio se pierde fácilmente en
el suelo lo que resulta un problema en· suelos tropicales. Es de
especular que los árboles de este piso ecológico aprovecharan los
nutrientes en mayor proporción por efecto dei pH.
- 61 -
3. Contenido de sodio.
a. Contenido de sodio del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
El contenido de sodio del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol se presenta en el siguiente cuadro.
Cuadro 22. Contenido de sodio del látex de sangre de grado por
piso ecológico y edad del árbol.
Piso Ecológico Sodio (mg/1 OOg)
Unidad (m.s.n.m) 4-6 (años) > 6 (años)
fisiográfica
Ta 650 5,52 ± 0,71 a 4,54 ± 0,26 b
Cb 800 4,79 ± 0,28 a 6,01 ± 0,55 ab
MA 1600 . . a
. 4,83 ± 0,55 6,88 ± 0,84 a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por seis veces promedios por piso ·
ecológico y edad del árbol con diferentes superíndices en una misma columna
(P < 0.05).
Realizado el análisis de varianza (Anexo IX),· ho se encontró
diferencia estadística significativa por piso ecológico 'i edad del
árbol. El sodio es n~cesario para ia · pianta, aunque algunos
autores manifiestan que este elemento no se puede precisar si es
necesario su presencia en ciertos vegetales, existen referencias
que este elemento sustituye al potasio en caso de deficiencia
-62-
asumiendo ciertas funciones químico coloidales, además Bidwell
(1979), menciona que aquellas plantas que responden al sodio
tienden a acumular grandes cantidades, mientras que otros, sin
respuesta ante él, lo absorben muy poco.
4. Contenido de Potasio.
a. Contenido de potasio del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
El contenido de potasio del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol se presentan en el siguiente cuadro.
Cuadro 23. Contenido de potasio del látex de sangre de grado
por piso ecológico y edad del árbol.
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por seis veces promedios por piso
ecológico y edad del árbol con diferentes superindices en una misma columna
(P < 0.05).
-63-
Realizado el análisis de varianza (Anexo X), se encontró diferencia
estadística significativa por piso ecológico y edad del árboL Los
resultados mostraron concentraciones menores de potasio (0,012
a 0,037%) a lo reportado por Lachica (1985), quien menciona que
el contenido de potasio en plantas en general varía entre O, 1 a
12%. Esta inferioridad posiblemente se deba a que las
concentraciones de potasio más elevados se encuentren en las
regiones meristemáticas tai como lo reporta Devlin (1976).
b. Contenido de potasio dei látex de sangre de grado por piso
ecológico
En el siguiente cuadro, se muestra el contenido de potasio del
látex de sangre de grado de los diferentes pisos ecológicos.
Cuadro 24. Contenido de potasio del látex sangre de grado por
piso ecológico.
Piso Ecológico
Potasio (mg/1 OOg)
Unidad fisiográfica (m.s.n.m)
Ta 650 12,65 ± 0,57 b
. a
Cb 800 27,31 ± 4,41
MA 1600 22,41 ± 2,75 a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por doce veces, promedios por piso
ecológico con diferentes superíndices en una misma columna (P < 0.05).
-64-
Realizado el análisis de varianza (Anexo X), se encontró diferencia
estadística altamente significativa. Al efectuarse la comparación
de promedios mediante la prueba de Duncan. Se observó que el
piso ecológico (Ta) presentó el menor promedio (12,65 mg/1 OOg),
siendo estadísticamente diferente a los demás (P<0,05). Es
posible que esta diferencia se deba al factor suelo entre pisos
ecológicos, al respecto Jacob (1973), menciona que en suelos
ligeros o arenosos es frecuente la deficiencia de este elemento
debido a su solubilidad y a la facilidad con la que puede lavarse de
ellos.
c. Contenido de potasio del látex de sangre de grado por edad
del árbol.
En el siguiente cuadro se muestra el contenido de potasio del
látex de sangre de grado por edad del árbol.
Cuadro 25. Contenido de potasio del látex de sangre de grado
por edad del árboL
Edad del árbol (años) Potasio (mg/1 OOg)
4-6 17,29 ± 1,43 a
>6 24,30 ± 3,56 a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por 18 veces, promedio por edad del árbol
con diferentes superíndices en una misma columna (P < 0.05).
-65-
Realizado el análisis de varianza (Anexo X), no se encontró
diferencia estadística significativa. Se observó que entre los dos
grupos de árboles analizados los de 4 a 6 años presentaron el
menor promedio (17,29 mg/1 OOg). Al respecto Jacob (1973),
menciona que el calcio y el potasio tienen efecto antagónico, esto
puede ser verificado en el cuadro 19, donde observamos que el
calcio es menor para los árboles mayores.
5. Contenido de cobre.
a. Contenido de cobre del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol. ,
El contenido de cobre del látex de sangre de grado P<?r piso
ecológico y edad del árbol se presentan en el siguiente cuadro.
Cuadro 26. Contenido de cobre del látex de sangre de grado por
piso ecológico y edad del árbol.
Piso Ecológico Cobre (mg/1 OOg)
Unidad (m.s.n.m) 4-6 (años) > 6 (años)
fisiográfica
. '•: b ' b
Ta 650 0,09 ± 0,00 · O, 12 ± 0,02
Cb 800 O, 10 ± 0,02 b 0,09 ± 0,01 b
MA 1600 0,17 ± 0,03 a 0,19 ± 0,03 a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por seis veces promedios por piso
ecológico y edad del árbol con diferentes superíndices en una misma columna
(P < 0.05).
-66-
Realizado el análisis de varianza (Anexo XI), se encontró
diferencia estadística altamente significativa por pisos ecoiógicos.
Los resultados muestran promedios de 0,09 a O, 19 mg/1 OOg.
Salisbury ( 1994), menciona que las plantas rara vez tienen
deficiencia de Cobre, en parte por que lo requieren en cantidades
muy pequeñas.
b. Contenido de cobre del látex de sangre de grado por piso
ecológico
En el siguiente cuadro se muestra el contenido de cobre del látex
sangre de grado de los diferentes pisos ecológicos.
Cuadro 27. Contenido de cobre del látex de sangre de grado por
piso ecológico.
Piso Ecológico
Cobre (mg/100g)
Unidad fisiográfica (m.s.n.m)
' . . b
Ta 650 0,10 ± 0,01
Cb 800 0,10±0,01b
MA 1600 . a
O, 18 ± 0,02
Los valores representan (promedios ± SEM) · los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por doce veces, promedios por piso
ecológico con diferentes superíndices en una misma columna (P < 0.05).
-67-
Realizado el análisis ·de varianza (Anexo XI), se encontró
diferencia estadística altamente significativa. Al efectuarse la
comparación de promedios mediante la prueba de Duncan. Se
observó que el piso ecológico (MA) presentó el mayor promedio
(O, 18 mg/1 OOg), siendo estadísticamente diferente a los otros dos.
Posiblemente esta diferencia se deba al factor suelo, al respecto
Jacob (1973), menciona que el agua del suelo es un factor
limitante que de una u otra forma se presenta una deficiencia de
este elemento.
6. Contenido de hierro.
a. Contenido de hierro del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
El contenido de hierro del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol se presentan en el cuadro 28.
Realizado el análisis de varianza (Anexo XII), se encontró
diferencia estadística altamente significativa por piso ecológico. _•.
Los resultados muestran promedios muy inferiores de hierro (de
' .
0,47 a 1,41 mg/1 OOg de materia frésca), a lo reportado por
Lachica (1985), quien menciona un cohtenido de hierro para
plantas ehtre 250 a 1000 mg/1 OOg de materia seca.
-68-
Cuadro 28. Contenido de hierro del látex de sangre de grado por
piso ecológico y edad del árbol.
Piso Ecológico Hierro (mg/1 OOg)
Unidad (m.s.n.m) 4-6 (años) > 6 (años)
fisiográfica
Ta 650 1,41 ±0,15a 1,34 ± 0,29 a
Cb 800- 0,47 ± 0,07 b 0,87 ± 0,11 a
MA 1600 0,54 ± 0,05 b 0,55 ±O, 12 a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por seis veces promedios por piso
ecológico y edad del árbol con diferentes superíndices en una misma columna
(P < 0.05)
Posiblemente tal inferioridad se deba a que el hierro en el látex es
menor de lo necesario que en la plantas en general, esto puede
explicarse en cierta forma a lo reportado por Bidwell (1979}, quien
menciona que el hierro posee una baja capacidad de traslación en
la planta, además que su deficiencia puede ser compensado con
un incremento de oxidasas no férricas cuya acción puede
reemplazarce parcialmente con lá de ias ehzimas respiratorias que
contienen hierro.
b. Contenido de hierro del látex de sangre de grado por piso
ecológico.
En el siguiente cuadro se muestra el contenido de hierro del látex
de sangre de grado de los diferentes pisos ecológicos.
-69-
Cuadro 29. Contenido de hierro del látex de sangre de grado por
piso ecológico.
Piso Ecológico
Hierro (mg/1 OOg)
Unidad fisiográfica (m.s.n.m)
1,28 ±O, 16 a
Ta 650
Cb 800 0,67 ± 0,09 b
. b
MA 1600 0,54 ± 0,06
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por doce veces, promedios por piso
ecológico con diferentes superíndices en una misma columna (P < 0.05).
Realizado el análisis de varianza (Anexo XII), se encontró
diferencia estadística altamente significativa. Al efectuarse la
comparación de promedios mediante la prueba de Duncan. Se
observó que el piso ecológico (Ta) presentó el mayor promedio
(1 ,28 mg/1 OOg), siendo estadísticamente diferente a ios otros dos
(P<0,05).
Bidwell (1979), menciona que los suelos que presentan exceso de
otros minerales pueden ser deficientes en hierro por precipitación
de éste en forma inaprovechable, es· posible que este efecto haya
ocurrido en los pisos ecológicos (Cb) y (MA).
- 70-
7. Contenido de zinc.
a. Contenido de zinc del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
El contenido de zinc del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol se. presenta en el siguiente cuadro.
~t '
Cuadro 30; Contenido de zinc del látex de sangre de grado por
.~
piso ecológico y edad del árbol.
Piso Ecológico Zinc (mg/1 OOg)
Unidad (m.s.n.m) 4-6 (años) > 6 (años)
fisiográfica
0,06 ± 0,01 a 0,04 ± 0,00 a
Ta 650
Cb 800 0,03 ± 0,00 b 0,05 ± 0,01 a
MA 1600 0,07 ± 0,01 a 0,07 ± 0,01 a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los .:
experimentos, cada uno analizado por seis .·veces promedios por piso'
ecológico y edád del árboi con diferentes superiridices en una misma coiLimna
(P < 0.05).
Realizado el análisis de varianza (Anexo XIII), se encontró
diferencias estadísticas significativas por pisos ecológicos. Los
resultados muestran concentraciones de zinc muy inferiores (0,03
a o, 07 mg/1 OOg de materia· fresca) a lo reportado por La chica
· (1985) quien menciona que la concentración de zinc en plantas
varía entre 200 a 1000 mg/1 OOg de materia seca.
- 71 -
Es posible que esta inferioridád se deba a lo reportado por Bidwell
(1979), quien menciona que una deficiencia de este elemento
· puede traducirse · en un sustancial incremento de compuestos
nitrogenados solubles.
b. Contenido de zinc del látex de sangre de grado por piso
ecológico.
En el siguiente cuadro se-:-muestra el contenido de zinc del látex de
sangre de grado de los diferentes pisos ecológicos.
Cuadro 31. Contenido de zinc del látex de sangre de grado por
piso ecológico.
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por doce veces, promedios por piso
ecológico con diferentes superíndices en una misma columna (P < 0.05).
Realizado el análisis de varianza (Anexo XIII), se encontró
diferencia estadística significativa.
- 72-
Al efectuarse la comparación de promedios mediante la prueba de
Duncan. Se observó que el piso ecológico (MA) es diferente
estadísticamente (P < 0,05) al piso ecológico (Cb).
Bidwell (1979), menciona que el zinc está ampliamente distribuido
en los suelos, pero como muchos otros metales llegan a ser
menos aprovechables conforme aumenta el pH, es posible que
este efecto haya ocurrido en nuestro caso, esto se puede verificar
en el Anexo XVII donde se puede observar que los suelos del piso
ecológico (MA) tiene un pH menor que los suelos del piso
ecológico (Cb).
8. Contenido de manganeso.
a. Contenido de manganeso del látex de sangre de grado por
piso ecológico y edad del árbol.
El contenido de manganeso de.l látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol se presenta en el cuadro 32.
Realizado el análisis de vananza (Anexo XIV), se encontró
diferencia estadística ·significativa por edad dei árbol. Los
resultados muestran promedios de manganeso muy inferiores
(O, 16 a 0,43 mg/1 OOg de materia fresca) a lo reportado por
Lachica (1985), quien menciona que el contenido de manganeso
~n la planta varía de 1500 a 3000 mg/1 OOg de materia seca
- 73-
Cuadro 32. Contenido de manganeso del látex de sangre de
grado por piso ecológico y edad del árboL
Piso Ecológico Manganeso (mg/1 OOg)
Unidad (m.s.n.m) 4-6 (años)·. > 6 (años)
fisiográfica
650 0,26 ± 0,01 a O, 16 ± 0,01 b
Ta
Cb 800 0,24 ± 0,07 a 0,38 ± 0,09 a
MA 1600 0,21 ± 0,03 a 0,43 ± 0,05 a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por seis veces promedios por piso
ecológico y edad del árbol con diferentes superíndlces en una misma columna
(P < 0,05).
Devlin ( 1976), menciona que el manganeso puede ser sustituido
por otros cationes divalentes, como el Mg++, Co++, zn++ y Fe++,
siendo la_sustitución más frecuente por el magnesio.
b. Contenido de manganeso dei .látex de sangre de grado por
edad del árbol.
En el cuadro 33, se muestra el contenido de manganeso del látex
de sangre de grado por edad del árboL
Realizado el análisis de varianza (Anexo XIV), no se encontró
diferencia estadística significativa.
- 74-
Cuadro 33. Contenido de manganeso del látex de sangre de
grado por edad del árbol.
Edad del árbol (años) Manganeso (mg/1 OOg)
4-6 0,24 ± 0,02 a
>6 0,33 ± 0,04 a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por 18 veces, promedio por edad del árbol
con diferentes superíndices en una misma columna (P < 0.05).
Los árboles de 4 a 6 años presentaron un menor promedio (0,24
mg/1 OOg), que los árboles mayores de 6 años (0,33 mg/1 OOg).
Al respecto Bidwell (1979), menciona que la movilidad del
manganeso es compleja y depende de la especie y la edad de la
planta, pudiendo aparecer síntomas de deficiencia primero en
hojas jóvenes ó maduras.
9. Contenido de minerales en promedio del iátex de sangre de.<·'
grado.
El contenido de minerales en pron;1edio dei látex de sangre de grado
se muestra en el siguiente cuadro.
- 75-
Cuadro 34. Contenido de minerales en promedio del látex de sangre
de grado.
Componentes mg/100g.
Calcio.
512,69 ± 15,6
Magnesio. 71,54 ± 0,7
Sodio. 5,43 ± 0,3
Potasio. 20,79 ± 2,0
Cobre. 0,12±0,1
Hierro. 0,83 ± 0,1
Zinc. 0,06 ± 0,0
·-
Manganeso.
0,28 ± 0,0
Los valores representan (promedios :± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado 18 veces por triplicado.
C. EVALUACIÓN DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDATIVA DEL LATEX DE
SANGRE DE GRADO.
La capacidad antioxidativa del látex de sangre de grado fue evaluada
• 1
mediante la acción de inhibir el radical libre DPPH.
- 76-
1. Inhibición del radical libre, DPPH.
Las soluciones del látex de sangre de grado al reaccionar con el
radical libre (DPPH) durante 15 minutos mostraron absorbancias
diferentes (Anexo XVI); se observó que la capacidad de inhibición
.,
estuvo con relación a la concentración, tal como se observa en el
siguiente cuadro.
Cuadro 35. Efecto del látex de sangre de grado en la inhibición del
DPPH.
Concentración (¡..tg/ml) Absorbancia (515 nm) Inhibición (%)
2
o 1,051 N.D -
5 0,824 21,598
10 0,674 35,875
20 .0,402 61,751
30 0,162 84,589
.i
Los valores representan % de inhibición proveniente de los experimentos, cada
uno analizado por triplicado. ·
N.D , representa la absorbancia del DPPH (100 ~tM) como control sin reaccionar
2
con el látex de sangre de grado.
Se puede observar que a mayor concentración del látex existe una
menor absorbancia. Al respecto Walton (1983), menciona que
existen desviaciones de la ley de Beer en la que se basa la absorción
de la luz; a causa de la reacción de las especies absorbentes de luz,
este efecto se puede distinguir mejor en la siguiente figura.
- 77-
E 1.2
e
lO
,.--
1.0 ••••••••••••• •• • •
lO 0.8
ro
·u 0.6
e
ro OA
_o
'-
oC/) 0.2
_o
<( 0.0
1 2 3 4 5 6 7 a 9 1o 11 12 13 14 15 16
Tiempo (minutos)
1-+- O(Ug/ml) --B- 30(Ug!mJ) .....tr- 20(Ug/ml) -~-1 O(Ug/ml) - - 5(Ug/ml) 1
Figura 6. Curvas de degradación del DPPH por acción del látex de
sangre de grado.
2. Determinación del Coeficiente de inhibición (ICso).
La curva ajustada para estimar el coeficiente de inhibición (ICso), fue
una ecuación polinómica (figura 7). Al respecto Sachs (1978),
menciona que el coeficiente de determinación (~); cuanto más
perfecto es el ajuste de la línea de regresión a los puntos más cerca
está~ de 1. En muchas ocasiones se desprende de la representación··
gráfica que para describir no va a servir ninguna recta de regresión, a
menudo es una función de segUndo grado la que se ajusta lo
suficiente a la situación real dado.
- 78 -'•
100 -------·--------·-·------------------·-----------------
80
e
·O
·u
:a
~ 40 y= -0.0276x2 + 3.5832x + 1.7291
. R2 = 1
20
o 5 10 15 20 25 30 35
Concentración (ug/ml)
1 ~~· Curva inicial -Curva ajustada 1
Figura 7. Coeficiente de inhibición (IC 50 ) del DPPH por el látex de
sangre de grado.
.·
a. Evaluación de la capacidad antioxidativa del látex de sangre · ·
de grado por piso ecológico y edad del árbol.
La evaluación de la capacidad antioxidativa del látex de sangre de
grado por piso ecológico y edad del árbol se presentan en el
siguiente cuadro.
- 79-
Cuadro 36. Evaluación de la capacidad antioxidativa del látex de
sangre de grado por piso ecológico y edad del árbol.
Piso Ecológico IC so (¡..tg/ml)
Unidad (m.s.n.m) 4-6 (años). > 6 (años)
fisiográfica
13,41 ± 0,9 ab 13,26 ±O, 1 a
Ta 650
. b
Cb 800 13,03 ± 0,9 14,56 ± 0,7 a
MA 1600 16,59 ± 1,0 a 13,74 ± 0,3 a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por triplicado promedios por piso ecológico
y edad del árbol con diferentes superindices en una misma columna (P-< 0.05)
Realizado el análisis de varianza del IC 5 o del látex de sangre de
grado por piso ecológico en árboles de 4 a 6 años se encontró
diferencia estadística significativa (Anexo XV), en la capacidad de
inhibir el 50% el radical libre DPPH (Cuadro 36). Al efectuarse la
comparación de promedios, mediante la prueba de Duncan, se.' . .·
observó que los árboles de 4a 6 años en el piso ecológíco (Cb).
presenta el menor promedio (13,03 ¡..tg/ml), es decir son más
eficientes (P < 0.05) en su capacidad de inhibir DPPH,
requiriéndose menor cantidad dei látex de sangre de grado
1
comparado a los árboles del piso ecológico (MA). que requiere
16,59 ¡.1g/ml de látex de sangre de grado para alcanzar el ICso.
- 80-
Brand et al (1995), menciona que el IC 50 es el coeficiente de
inhibición para que un compuesto inhiba el 50% de los radicales
libres (DPPH) en un tiempo determinado, por ello podemos decir
que en el piso ecológico (Cb). encontramos un látex más eficiente.
Se ha reportado que la planta obtiene un mayor porcentaje de
productos catabólicos definidos también como productos
secundarios (compuestos fenólicos, flavonoides, taninos,
alcaloides, etc) e inciusive se indica que la más alta pureza del
látex proviene de suelos arcillosos de colina baja (Salsbury, 1991;
Meza, 1999). Esto puede deberse según Rojas (1985), que los
suelos arcillosos abastecen a la planta con mayor agua y durante
mas tiempo. Además se puede observar (Anexo XVII) que en los
suelos del piso ecológico (Cb) presentan un mayor porcentaje de
materia orgánica.
Por otro lado los árboles de sangre de grado mayores de seis
años en función a los pisos ecológicos .realizado el análisis de
varianza (Anexo XV) no se encontró diferencia estadística, la cual
se puede atribuir que las plantas adultas según Salisbury (1991)
tienen mas reservas que una planta joven ya que estas últimas
presentan una mayor actividad metabólica aumentando en
volumen, peso, número de células, cantidad de protoplasma y
complejidad.
- 81 -
b. Evaluación de la capacidad antioxidativa del látex de sangre
de grado por piso ecológico.
En .el siguiente cuadro, se muestran los resultados de la
evaluación de la capacidad antioxidativa del látex de sangre de
grado de los diferentes pisos ecológicos.
Cuadro 37. Evaluación de la capacidad antioxidativa del látex de
sangre de grado por piso ecológico.
Piso Ecológico
IC so (~tg/ml)
Unidad fisiográfica (m.s.f1.m)
a-
Ta 650 13,33 ± 0,4
Cb 800 13,79 ± 0,6 a
MA 1600 15,17±0,8a
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por seis veces, promedios por piso
ecológico con diferentes superindices en Lina misma columna W <0.05). ..·
Realizado el análisis de varianza, · no se ·encontró diferencias
estadísticas significativas (Anexo XV). Al comparar los promedios
de IC 50 del piso ecológico Ta (13,33 ~g/ml) con el piso ecológico
MA ( 15, 17 ~g/mi) se encontró que a menor altura el létex tiene
una mayor ICso. Al respecto Meza (1999), menciona que, los
constituyentes del látex varían bastante dependiendo del lugar de
colección y que, en la naturaleza los constituyentes del alcaloide
- 82-
Taspina en los árboles presentan una gran variación de un área a
otra. Esto puede . deberse, según Daubenmire (1990) que, la
composición del aire atmosférico cambia sus proporciones
sustancialmente sólo con la altitud, sabiendo que en razón directa
de ella disminuye el contenido en oxígeno y que esta situación va
siendo progresivamente !imitadora para los organismos animales y
vegetales.
Por otro lado Keith (1994), menciona que el rendimiento que
alcance una. planta ya sea en frutos, resina, hojas, etc, depende
de una serie de factores, unos son inherentes al vegetal mismo y
están relacionados con su potencial genético, otros son de tipo
externo y están relacionados con las características del suelo, las
condiciones meteoroiógicas y la técnica agronómica.
c. Evaluación de la capacidad antioxidativa del látex de sangre
de grado por edad del árbol.
En el siguiente cuadro, se mi.Jestrari los resultados de la
evaluación de la capacidad antioxidativa de la sangre de. grado por
edad del árbol.
- 83-
Cuadro 38. Evaluación de la capacidad antioxidativa del látex de
sangre de grado por edad del árbol.
Edad del árbol (años) IC so ütg/ml)
4-6 14,34 ± 0,7 a
>6 13,85 ± 0,3 a
Los valores representan (promedios ± SEM) Íos datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado por nueve veces, promedio por edad del
árbol con diferentes superíndices en una misma columna (P < 0.05).
Realizado el análisis de varianza (Anexo XV), no se encontró
diferencia estadística significativa. Comparando los promedios del
IC 50 , los árboles mayores de 6 años presentan un valor de
13,85~tg/ml y los árboles de 4 a 6 años un valor de 14.34 ~g/ml.
Existe solamente una diferencia numérica en el ICso entre los dos
grupos de árboles evaluados, favoreciendo a los árboles adultos.
Al respecto Tisdale (1991) menciona .que, las plantas jóvenes
necesitan mayor cantidad de agua disponible en el suelo que las'.
plantas adultas ya que estas últimas. poseen una menor tasa de
crecimiento vegetativo y disponen de· un sistema radicuiar más
extenso que las plantas jóvenes. Meza (1999) supone que,
posiblemente también haya mayor dilución debido al porcentaje
del contenido de agua y disminución de la concentración ó pureza
de los metabolitos secundarios. Es de especular que la diferencia
-84-
cronológica de edad entre estos grupos no sea un factor muy
decisivo en la determinación de la eficiencia de control del DPPH.
d. Capacidad antioxidativa en promedio del látex de sangre de
grado.
En el siguiente cuadro, se muestra la evaluación de la capacidad
antioxidativa en promedio del látex de sangre de grado.
Cuadro 39. Capacidad antioxidativa en promedio del látex de
sangre de grado. ,
Capacidad antioxidativa (Jlglml)
ICso 14,10 ± 0,4
Los valores representan (promedios ± SEM) los datos provienen de los
experimentos, cada uno analizado 18 veces por triplicado.
V. CONCLUSION.
De acuerdo a los resultados obtenidos en el presente trabajo de
investigación, se pudo llegar a las siguientes conclusiones:
La composición químico proximal, concentración de minerales y
capacidad antioxidativa del látex de sangre de grado por piso ecológico
fue muy variado; presentando el piso ecológico de Terraza alta (650
m.s.n.m.) un mayor contenido en: Calcio (560,53 mg/100g), magnesio
(75,03 mg/100g), hierro (1,28 rilg/100g) y una mayor eficiencia en
capacidad de inhibir el radical libre DPPH (IC 5 o = 13,33 ,....gtml); el piso
ecológico de Colina baja (800 m.s.n.m.) un mayor contenido en potasio
(27,31 mg/100g); y el piso ecológico de Montaña alta (1600 m.s.n.m.) un
mayor contenido en: Proteína (1,79%), cobre (O, 18mg/1 OOg) y zinc
(0,07mg/1 OOg).
El látex de los árboles de sangre de grado mayores de seis años de
edad, presentaron un menor contenido de humedad (67,89 %), un mayor
contenido de proteína (1,72%), de carbohidratos (27, 62%), de potasio
(24,30mg/1 OOg), de manganeso (0,33 mg/1 OOg) y una mayor eficiencia
en capacidad de inhibir el radical libre DPPH (ICso = 13,85 ¡._tg/ml), que
los árboles de cuatro a seis años de edad.
En promedio general el látex de sangre de grado presentó la siguiente
composición: Químico proximal; Humedad 67,81%; Proteína 1,52%;
Grasa 2,11%; Fibra 0,35%; Ceniza 0,17% y Carbohidratos 26,04%;
- 86-
Minerales: Calcio 512,69 mg/100g; Magnesio 71,54 mg/100g; Sodio 5,43
mg/100g; Potasio 20,79 mg/100g; Cobre O, 12 mg/100g; Hierro 0,83
mg/100g; Zinc 0,06 mg/100g y Manganeso 0,28 mg/100g; El coeficiente
de inhibición (IC 50 ) de la capacidad antioxidativa fue 14,1 O f.lQ/ml.
( '
VI. RECOMENDACJON.
Establecer modelos de investigación in vivo para evaluar la capacidad
antioxidativa del látex de sangre de grado.
Realizar trabajos de investigación en cuanto a evaluación de capacidad
antioxidativa que permitan comparar variedades de sangre de grado
(Croton draconoides y Croton lechlen).
Realizar trabajos de investigación especialmente en la región Rupa
Rupa, que permitan relacionar el suelo y la composición de minerales en
el látex de sangre de grado.
-
Investigar la función que cumple el látex de sangre de grado en el árbol
· así mismo la función fisiológica que desempeñan los minerales en el
látex.·
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VIII. ANEXOS.
Anexo l.
Análisis de varianza de humedad del. látex de sangre de grado.
Análisis de varianza de humedad del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
---- -- ·-- ·-- --- -·-- ·-- --
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 0,079 0,040 0,02 N.S
Edad 1 132,716 132,716 51,37 **
Piso*Edad 2 5,723 2,862 1'11 N.S
Error experimental 30 77,509 2,584
Total 35 216,028
C.V = 2,3 R-Square = 0,64 Mean= 69,81 Root MSE = 1,61
Análisis de varianza de humedad del látex de sangre de grado P<?r piso
ecológico en árboles de 4 a de 6 años .
. - --
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
4 a 6 años 2 3,576 1,788 0,45 N.S
Error experimental 15 59,377 3,959
Total 17 62,952
c.v = 2,77 R-Square = 0,06 Mean= 71,73- Root MSE = 1,99
Análisis de varianza de humedad del látex de sangre de grado por piso
ecológico en árboles mayores de 6 años.
-
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
> 6 años 2 2,227 1'114 0,92 N.S
Error experimental 15 18,132 1,210
Total 17 20,359
C.V = 1,62 R-Square =O, 12 Mean= 67,89 Root MSE = 1,1 o
Análisis de varianza de humedad del látex de sangre de grado por edad
de árbol.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Edad 1 132,716 132,716 54,16 **
Error experimental 34 83,312 2,450
Total 35 216,028
C. V= 2,24 R-SqLiare = 0,61 Mean= 69,81 Root MSE = 1,57
Anexo 11.
Análisis de varianza de proteína del látex de sangre de grado.
Análisis de varianza de proteína del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
-
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 1,340 0,700 7,05 **
Edad 1 1,452 1,452 14,62 **
Piso*Edad 2 "1 ,237 0,619 6,23 **
Error experimental 30 2,980 0,100
Total 35 7,069
C.V = 20,82 R-Square = 0,58 Mean= 1,51 Root MSE = 0,32
Análisis de varianza de proteína del látex de sangre de grado por piso
ecológico en árboles de 4 a de 6 años .
. -
Fuente de variación GL se .. CM Fe Sig.
4 a 6 años 2 0,004 0,002 0,09 N.S
Error experimental 15 0,362 0,024
Total 17 0,366
C. V= 11,93 R-Square = 0,01 Mean= 1,31 Root MSE = 0,16
Análisis de varianza de proteína del látex de sangre de grado por prso
ecológico en árboles mayores de 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
> 6 años 2 2,581 1,290 7,59 *
Error experimental 15 2,549 0,170
Total 17 5,130
C.V = 23,94 R-Square = 0,50 Mean= 1,72 Root MSE =0,41
Análisis de varianza de proteína del látex de sangre de grado por piso
ecológico.
--
Fu ente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 1,375 0,687 4,03 *
Error experimental 33 5,626 O, 170
Total 35 7,001
C.V = 27,21 R-Square = 0,20 · Mean= 1,52 Root MSE = 0,41
Análisis de varianza de proteína del látex de sangre de grado por edad de
árbol.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Edad 1 1,505 1,505 9,31 **
Error experimental 34 5,495 O, 162
Total 35 7,001
c.v = 26,49 R-Square = 0,22 Mean= 1,52 Root MSE = 0,40
Anexo 111.
Análisis de varianza de grasa del látex de· sangre de grado.
Análisis de varianza de grasa del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 O, 191 0,095 0,37 N.S
Edad 1 0,359 0,359 1,40 N.S
Piso*Edad 2 O, 113 0,006 0,02 N.S
Error experimental 30 7,671 0,256
Total 35 8,233
C.V = 23,96 R-Square = 0,07 Mean= 2,11 Root MSE = 0,51
Análisis de varianza de grasa del látex de sangre de grado pqr piso
ecológico en árboles de 4 a de 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
4 a 6 años 2 O, 150 0,074 0,22 N.S
Error experimental 15 5,046 0,336
Total 17 5,195
c.v = 29,85 R-Square = 0,03 Mean= 2,01 Root MSE = 0;58
Análisis de varianza de grasa del látex de sangre de grado por piso
ecológico en árboles mayores de 6 años.
-
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
> 6 años 2 0,055 0,027 O, 16 N.S
Error experimental 15 2,625, 0,175
Total 17 2,680
C. V= 29,85 R-Square = 0,03 Mean= 2,01 Root MSE =0,58
Anexo IV.
Análisis de varianza de fibra del látex de sangre de grado.
Análisis de varianza de fibra del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
Fu ente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 0,306 0,132 3,30 N.S
Edad 1 0,060 0,060 1,50 N.S
Piso*Edad 2 0,300 O, 150 3,74 *
Error experimental 30 1,207 0,040
Total 35 1.875
C. V= 57,11 R-Square = 0,36 Mean= 0,35 Root MSE = 0,200
Análisis de varianza de fibra del látex de sangre de grado por piso
ecológico en árboles de 4 a 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
4 a 6 años 2 0,504 0,252 8,30 *
Error experimental 15 0,456 0,030
Total 17 0,960
C.V =56, 16 R-Square = 0,53 Mean:::: 0,31 Root MSE =O, 17
Análisis de varianza de fibra del látex de sangre de grado por piso
ecológico en árboles mayores de 6 años.
Fuente de variación GL SC·':,11)
.,1
CM Fe Sig.
> 6 años 2 0,103 0,051 1,03 N.S
Error experimental 15 0,752 0,050
Total 17 0,854
C.V = 57,09 R-Square = O, 12 Mean= 0,39 Root MSE = 0,22
Anexo V.
Análisis de varianza de ceniza del látex de sangre de grado.
Análisis de varianza de la ceniza del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 0,007 0,004 0,70 N.S
Edad 1 0,007 0,008 1,49 N.S
Piso*Edad 2 "0,025 0,013 2,50 N.S
Error experimental 30 O, 153 0,005
Total 35 0,194
C.V = 42,15 R-Square = 0,21 Mean= O, 17 Root MSE = 0,07
Análisis de varianza de ceniza del látex de sangre de grado por piso
ecológico en árboles de 4 a 6 años.
-
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
4 a 6 años 2 0,026 0,013 2,76 N.S
Error experimental 15 0,072 0,005
Total 17 0,098
C. V= 1,62 R-Square =O, 12 Mean= 67,89 Root MSE = 1, 1O
Análisis de varianza de ceniza del látex de sangre de grado· por piso
ecológico en árboles mayores de 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
> 6 años 2 0,006 0,003 0,59 N.S
Error experimental 15 0,082 0,005
Total 17 0,088
C. V= 47,62 R-Square = 0,07 Mean= O, 16 Root MSE = O, 70
Anexo VI.
Análisis de varianza de carbohidrato del látex de sangre de grado.
Análisis de varianza de carbohidratos del látex de sangre de grado por
piso ecológico y edad del árbol.
Fu ente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 1,819 0,090 0,42 N.S
Edad 1 90,937 90,937 42,24 **
Piso*Edad 2 4,912 2,456 1,14 N.S
Error experimental 30 64,587 2,153
Total 35 162,255
C.V= 2,3 R-Square = 0,64 Mean= 69,81 Root MSE = 1,61
Análisis de varianza de carbohidrato del látex de sangre de grado por
piso ecológico en árboles de 4 a 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
> 6 años 2 40,993 20,497 13,807 **
Error experimental 15 22,278 1,485
Total 17 63,271
cv = 4,83 R-Square = 0,65 Mean = 25,21- Root MSE = 1,22 _:
¡
Análisis de varianza de carbohidrato del látex de sangre de grado por
piso ecológico en árboles mayores de 6 años .
...
Fu ente de variación GL se CM Fe Sig.
> 6 años 2 35,102 17,551 6,72 **
Error experimental 15 39,190 2,613
Total 17 74,292
C. V= 6,02 R-Square = 0,47 Mean = 26,87 Root MSE =1,62
Análisis de varianza de carbohidrato del látex de sangre de grado por
edad del árbol.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Edad 1 90,937 90,937 43,35 **
Error experimental 34 71,318 2,098
Total 35 162,255
C. V= 5,56 R-Square = 0,56 Mean= 26,04 Root MSE = 1,45
Anexo VIl.
Análisis de varianza de calcio del látex de sangre de grado.
Análisis de varianza de calcio del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
-
Fu ente de variación ' GL se CM Fe Sig.
Piso 2 143594,770 71797,385 27,00 **
Edad 1 24481,766 2448,766 9,21 **
Piso*Edad 2 57.436,992 28718,496 10,80 **
Error experimental 30 79782,119 2659,404
Total 35 . 305295,646
c.v = 10,06 R-Square = 0.74 Mean= 512,69 Root MSE = 51,57
Análisis de varianza de calcio del látex de sangre de grado por piso
·ecológico en árboles de 4 a 6 años .
... -
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
4 a 6 años 2 10538,450 5269,225 1,29 N.S
Error experimental 15 61507,396 4100,493
Total 17 72045,846
C.V=11,89 R-Square = O, 15 Mean= 538,77 Root MSE = 64,04
Análisis de varianza de calcio del látex de sangre de grado. por piso
ecológico en árboles mayores de 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
> 6 años 2 190493,311 95246,656 78,18 **
Error experimental 15 18274,724 1218,315
Total 17 208768,035
C.V= 7,17 R-Square = 0,91 Mean= 486,615 Root MSE = 34,90
Análisis de varianza de calcio del látex de sangre de grado por piso
ecológico.
Fuente de variación· GL se CM Fe Sig.
Piso 2 143594,770 71797,385 14,65 **
Error experimental 33 161700,877 4900,027
Total 35 305295,646
C.V = 13,65 R-Square =0,47 Mean= 512,69 Root MSE = 70,00
Análisis de varianza de calcio del-látex de sangre de grado por edad del
árbol.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Edad 1 24481,766 24481,766 2,96 N.S
Error experimental 34 280813,881 8259,232
Total 35 305295,646
C. V= 17,73 R-Square =0,08 Mean= 512,69 Root MSE =90,88
Anexo VIII.
Análisis de varianza de magnesio del látex de sangre de grado.
Análisis de varianza de magnesio del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
Fu ente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 219,994 109,997 13,03 **
Edad 1 33,804 33,805 4,00 N.S
Piso*Edad 2 45,631. 22,816 2,70 N.S
Error experimental 30 253,328 8;444
Total 35 552,758
C.V = 4,06 R-Square = 0,54 Mean= 71,54 Root MSE = 2,91
Análisis de varianza de magnesio del látex de sangre de grado por piso
ecológico en árboles de 4 a 6 años.
Fuente de variación GL se, CM Fe Sig.
4 a 6 años 2 136,165 68,082 8,7 **
Error experimental 15 117,343 7,83
Total 17 253,507
C. V= 3,86 R-Square = 0,54 Mean= 72,51- Root MSE =2,80
Análisis de varianza de magnesio del látex de sangre de grado por piso
ecológico en árboles mayores de 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
> 6 años 2 129,461 64,730 7,14 **
Error experimental 15 135,985 9,066
Total 17 265,446
c.v = 4,27 R-Square = 0,49 Mean = 70,57 Root MSE = 3,01
Análisis de varianza de magnesio del látex de sangre de grado por piso
ecológico.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 219,994 109,997 10,91 **
Error experimental 33 332,764 10,084
Total 35 552,758
C. V= 4,44 R-Square = 0,40 Mean= 71,54 Root MSE = 3,18
Anexo IX.
Análisis de varianza de sodio del látex de sangre de grado.
Análisis de varianza del análisis de sodio del látex de sangre dé grado por
piso ecológico y edad del árbol.·
Fu ente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 4,117 2,058 1,05 N.S
Edad 1 5,198 5,198 2,65 N.S
Piso*Edad 2 14,754 7,377 3,76 *
Error experimental 30 58,911 1,964
Total 35 82,980
C.V = 25,82 R-Square = 0,29 Mean= 5,53 Root MSE = 1,40
Análisis de varianza de sodio del látex de sangre de grado por piso
ecológico en árboles de 4 a 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
4 a 6 años 2 2,023 1,012 0,57 N.S
Error experimental 15 26,845 1,79
Total 17 28,868
c.v::;: 26,51 R-Square == 0,07 Mean= 5,05 · Root MSE = 1,34
•'
Análisis de varianza de sodio del látex de sangre de grado por piso
ecológico en árboles mayores de 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
> 6 años 2 16,848 8,424 3,94 N.s
Error experimental 15 32,066 2,138
Total 17 48,914
C.V = 25,18 R-Square = 0,34 Mean =5,81 Root MSE =·1 ,46
Anexo X.
Análisis de varianza de potasio dei látex de sangre de grado.
Análisis de varianza del análisis de potasio del látex de sangre de grado
por piso ecológico y edad del árbol.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 1337,131 668,565 8,22 *
Edad 1 441,938 441,938 5,43 *
Piso*Edad 2 717,616 358,808 4,41 *
-··--
Error experimental 30 2441,405 61,380
Total 35 4938,091
c.v = 43,39 R-Square = 0,51 Mean= 20,79 Root MSE = 9,02
Análisis de varianza del potasio del látex de sangre de grado por piso
ecológico en árboles de 4 a 6 años.
-
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
4 a 6 años 2 206,017 103,009 3,68 *
Error experimental 15 419,719 27,98
Total 17 625,736
C. V= 30,60 R-Square = 0,33 Mean= 17,29 Root MSE = 5,2
Análisis de varianza de potasio del látex de sangre de grado por piso
ecológico en árboles mayores de 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
> 6 años 2 1848,730 924,365 6,86 **
Error experimental 15 2021,686 134,779
Total 17 3870;416
c.v = 47,78 R-Square = 0,48 Mean =24,30 Root MSE = 11,61
Análisis de varianza de potasio del látex de sangre de grado por piso
ecológico.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 1337,131 668,565 6,13 **
Error experimental 33 3600,960 109,120
Total 35 4938,091
C. V= 50,24 R-Square =0,27 Mean =20,79 Root MSE = 10,45
Análisis de varianza de potasio del látex de sangre de grado por edad del
árbol.
.. ..
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Edad 1 441,938 441,938 3,34 N.S
Error experimental 34 4496,152 132,140
Total 35 4938,091
C. V= 55,31 R-Square = 0,09 Mean= 20,79 Root MSE = 11,50
Anexo XL
Análisis de varianza de cobre del látex de sangre de grado.
Análisis de varianza del análisis de cobre del látex de sangre de grado por
piso ecológico y edad del árbol.
---
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 0,051 0,026 9,65 **
Edad 1 0,001 0,001 0,42 N.S
Piso*Edad 2 -0,002 0,001 0,39 N.S
Error experimental 30 0,080 0,003
Total 35 0;134
c.v = 40,12 R-Square = 0,41 Mean= 0,13 Root MSE = 0,05
Análisis de varianza de cobre del látex de sangre de grado por piso
ecológico en árboles de 4 a 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
4 a 6 años 2 0,025 0,012 0,86 *
Error experimental 15 0,031 0,002
'
Total 17 0,056
C.V = 37,19 R-Square = 0,44 Mean= 0,12 Root MSE = 0,05
Análisis de varianza de cobre del látex de sangre de grado.· por piso
ecológico en árboles mayores de 6 años.
--
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
2 0,029 0,014 4,47 .*
> 6 años
Error experimental 15 0,049 0,003
Total 17 0,078
C.V = 42,36 R-Square = 0,37 Mean =0,13 Root MSE = 0,06
Análisis de varianza de cobre del látex de sangre de grado por piso
ecológico.
-
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 0,051 0,026 10,21 **
Error experimental 33 0,083 0,003
Toté;JI 35 0,134
C.V = 39,01 R-Square = 0,38 Mean= 0,13 Root MSE = 0,05
Anexo XII.
Análisis de varianza de hierro del látex de sangre de grado.
Análisis de varianza de hierro del látex de sangre de gradó por piso
ecológico y edad del árbol.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 3,672 1,836 13,14 **
Edad 1 0,019 0,019 O, 14 N.S
Piso*Edad 2 .. .0,696 0,348 2,49 N.S
Error experimental 30 4,190 0,140
Total 35 8,577
C.V = 45,03 R-Square = 0,51 Mean= 0,83 Root MSE =0,37
Análisis de varianza de hierro del látex de sangre de grado P<?r piso
ecológico en árboles de 4 a 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
4 a 6 años 2 3,319 1,660 27,60 **
Error experimental 15 0,902 0,060
Total 17 4,221
C.V = 30,39 R-Square = 0,79 Mean= 0,81 Root MSE = 0,24
Análisis de varianza de hierro del látex de sangre de grado. por piso
árboles mayores de. 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
> 6 años 2 1,048 0,524 2,39 N.S
Error experimental 15 3,288 0,219
Total 17 4,336
C.V = 54,89 R-Square = 0,24 Mean =0,85 Root MSE = 0,47
Análisis de varianza de hierro del látex de sangre de grado por piso
ecológico.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 3,672 1,836. 12,35 **
Error experimental 33 4,905. O, 149
Total 35 8,577
C. V= 46,46 R-Square = 0,43 Mean= 0,83 Root MSE = 0,39
Anexo XIII.
Análisis de varianza de zinc del látex de sangre de grado.
Análisis de varianza de zinc del látex de sangre de grado por piso
ecológico y edad del árbol.
-
Fuente de variación GL ·se CM. Fe Sig.
Piso 2 0,004 0,002 3,59 *
Edad 1 0,000 0,000 0,03 N.S
Piso*Edad 2 _0,002 ' 0,001 2,00 N.S
Error experimental 30 0,018 0,000
Total 35 0,025
C. V= 44,93 R-Square = 0,27 Mean= 0,06 Root MSE = 0,02
Análisis de varianza de zinc del látex de sangre de grado po~ piso
ecológico en árboles de 4 a 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
4 a 6 años 2 0,004 0,002 3,55 N.S
Error experimental 15 0,008 0,001
. Total 17 0,011
C.V = 41,43 R-Square = 0,32 . Mean,= 0,05 Root MSE = 0,02
,,
Análisis de varianza de zinc del látex de sangre de grado . por piso
ecológico en árboles mayores de 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
> 6 años 2 0,003 0,002 2,26 N.S
Error experimental 15 0,011 0,001
Total 17 0,014
C. V= 48,00 R-Square = 0,23 Mean= 0,06 Root MSE = 0,03
Análisis de varianza de zinc del látex de sangre de grado por piso
ecológico.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 0,004 0,002 3,48 *
Error experimental 33 0,021 0,001
Total 35 0,025
c.v = 45,63 R-Square =O, 17 Mean= 0,05 Root MSE = 0,03
Anexo XIV.
Análisis de varianza de manganeso dei látex de sangre de grado.
Fu ente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 O, 101 0,050 3,06 N.S
Edad 1 0,071 0,071 4,32 *
Piso*Edad 2 0,172 . 0,086 5,22 *
Error experimental 30 0,494 0,016
Total 35 0,838
C. V= 45,66 R-Square = 0,41 Mean= 0,28 Root MSE =O, 13
Análisis de varianza del manganeso del látex de sangre de grado por
piso ecológico en árboles de 4 a 6 años.
- -.
Fuente de variación GL se, CM Fe Sig.
4 a 6 años 2 0,006 0,003 0,28 N.S
Error experimental 15 O, 171 0,011
Total 17 0,178
C. V= 45,18 R-Square = 0,04 Mean= 0,24 Root MSE = O, 11
Análisis de varianza de manganeso del látex de sangre de grado por piso
ecológico en árboles mayores de 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
> 6 años 2 0,267 O, 133 6,19 *
Error experimental 15 0,323 0,021
Total 17 0,589
C.V = 45,05 R-Square = 0,45 Mean =0,33 Root MSE = 0,15
Análisis de varianza de manganeso del látex de sangre de grado por edad
del árbol.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Edad 1 0,071 0,071 3,16 N.S
Error experimental 34 0,767 0,023
Total 35 0,838
C. V= 53,08 R-Square = 0,08 Mean= 0,28 Root MSE =O, 15
Anexo XV.
Análisis de varianza para la evaluación de la capacidad antioxidativa
del látex de sangre de grado.
Análisis de varianza de la capacidad antioxidativa del látex de sangre de
grado por piso ecológico y edad del árbol.
Fu ente de variación GL se. CM Fe Sig.
Piso 2 10.887 5.444 3.46 N.S
Edad 1 1.075 1.075 0.68 N.S
Piso*Edad 2 f4.712 7.356 4.68 *
Error experimental 12 18.872 1.573
Total 17 45.546
c.v = 8.9 R-Square =0.59 Mean= 14.10 Root MSE =1.25
Análisis de varianza de la capacidad antioxidativa del látex de sar19re de
grado por piso ecológico en árboles de 4 a 6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
4 a 6 años 2 23.018 11.509 4.5 *
Error experimental 6 15.329 2.555
Total 8 38.347
C.V=11.14. R-Square =0.6 Mean= 14.34. Root ÍVISE =1.60
.Análisis de varianza de la capacidad antioxidativa del látex de sangre de
grado por piso ecológico en árboles mayores de .6 años.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
> 6 años 2 2.581 1.291 2.19 N.S
Error experimental 6 3.542 0.590
Total 8 6.124
1
C. V= 5.55 R-Square =0.42 Mean= 13.85 Root MSE =0. 77
Análisis de varianza de la capacidad antioxidativa del látex de sangre de
grado por piso ecológico.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Piso 2 10.887 5.444 2.36 N.S
Error experimental 15 34.659 2.311
Total 17 45.546
C. V= 10.87 R-Square =0.24 Mean= 14.10 Root MSE =1.52
Análisis de varianza de la capacidad antioxidativa del látex de sangre de
grado por edad del árbol.
Fuente de variación GL se CM Fe Sig.
Edad 1 1.075' 1.075 0.39 N.S
Error experimental 16 44.471 2.779
Total 17 45.546
C.V = 11.83 R-Square =0.02 Mean= 14.10 Root MSE =1.67
Anexo XVI.
Lecturas de Absorbancia.
Lecturas de absorbancia del látex de sangre de grado a diferentes concentraciones.
DPPH 30!J.g/ml 20~tg/ml 1Opg/ml 5 !J.g/ml
n R R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3
o 1.063 0.633 0.593 0.635 0.731 0.772 0.753 0.860 0.823 0.860 0.937 0.906 0.916
1 . 1.060 0.353 0.336 0.396 0.549 0.565 0.552 0.802 0.717 0.753 0.862 0.873 0.859
2 1.058 0.306 0.297 0.340 0.510 0.524 0.512 0.763 0.709 0.733 0.867 0.863 0.852
3 1.055 0.276 0.271 0.307 0.489 0.500 0.492 0.753 0.717 0.726 0.862 0.855 0.857
4 1.054 0.256 0.251 0.279 0.474 0.486 0.486 0.749 0.715 1 0,715 0.859 0.850 0.849
S 1.051 0.240 0.237 0.252 0.466 0.471 0.465 0.738 0.710 0.704 0.858 0.845 0.839
6 1.051 0.227 0.226 0.232 -- OA58 0.460 0.454 0.729 0.706- 0.696 0.855 0.842 0.837
7 1.050 0.217 0.216 0.214 0.451 0.452 0.443 0.723 0.701 0.689 0.853 0.838 0.833
8 1.049 0.209 0.207 0.202 0.447 0.444 0.435 0.717 0.697 -0.683 0.849 0.834 0.832
9 1.049 0.200 . 0.199 0.191- 0.440 0.437 0.421 0.712 0.693 0.677 0.847 0.832 0.828
. 10 1.048 0.195 0.192 0.183 0.435 0.430 0.414 0.708 0.690 0.672 0.844 0.830 0.827
11 1.046 0.191 0.186' 0.176 0.429 0.425 0.409 0.703 0.688 0.669 0.842 0.828 0.824
12 1.047 0.187 0.180 0.169 0.425 0.419 0.403 0.701 0.684 0.664 0.840 0.825 0.822
13 1.047 0.175 0.175 0.163 0.420 0.414 0.398 0.697 0.681 0.661 0.838 0.824 0.821
14 1.045 0.17.1 0.171 0.157 0.415 0.410 0.394 0.695 0.678 0.657 0.836 0.823 0.818
15 . 1.046 0.167 0.166 - 0.153 0.412 0.406 0.389 0.692 0.676 0.654 0.835 0.821 0.817
Promedios de lecturas de absorbencia del látex de sangre de grado a
diferentes concentraciones.
DPPH 30119/ml 20 119/ml 10 119/ml 5119/ml
N R R1+R2+R3 R1+R2+R3 R1+R2+R.3 R1+R2+R3
o 1.063 0.620 0.752 0.848 \.. . 0.920
1 1.060 0.362 0.555 0.757 0.865
2 1.058 0.314 0.515 0.735 0.861
3 1.055 0.285 0.494 0.732 0.858
4 1.054 0.262 0.482 0.726 0.853
5 1.051 0.243 0.467 0.717 0.847
6 1.051 0.228 lJ.457 1 0.710 0.845
7 1.050 0.216 0.449 0.704 0.841
8 1.049 0.206 0.442! 0.699 0.838
9 1.049 0.197 0.433 0.694 0.836
10 1.048 0.190 0.426 0.690 0.834
11 1.046 0.184 0.421 0.687 0.831
12 1.047 0.179 0.416 0.683 0.829
13 1.047 0.171 0.411 0.680 0.828
14 1.045 0.166 0.406 0.677 0.826
15 1.046 0.162 0.402 0.674 0.824
PROMEDIO 1.051
%1NHIBICION 84.586 61.751 35.871 21.598
,...
ANEXO XVII
UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA
11
~
TINGO MARIA
Facultad de Agronomía- Laboratorio del Análisis de Suelos
Av. Universitaria s/n Telf. (0.64) 562341 .<\nexo 283 Fax (064) 561156 Aptdo 156
ANALISIS DE SUELOS
Procedencia ......................... Tingo María ................................... Solicitante: JAVIER PIZARRO URQUIA
p CATIONES me/100
ANALISIS MECMHCO
CLASE MATERIA NTTROGENO
ppm CAMBIABLES
Sf:C]-. ARENA LIMO ARCILLA TEXTURAL -O...y ORGANICA
~ Ca+ Mg K Al -<H A •• OleE
% 'Yo % % % K20 '\=a. Mg.
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OBSERVACIONES: Muestreado por el Tecnic:o .jel Labcratorio de Suelos -UNAS
FECHA: m,JGO MAPIP,, 25 DE M.'\ YO DEL :20(21
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