Práctica # 2
¿Cómo usar el microscopio?
Fecha: 20- Octubre-2022
Nombres: Ana Carolina Polo Molinares, María Camila Ramos Jirado
1. PROPÓSITO
Adquirir habilidad en el uso de una herramienta que permitirá reconocer parte del mundo
microscópico existente.
2. MATERIALES QUE DEBE TRAER AL LABORATORIO:
• Bata, guía de laboratorio en su carpeta respectiva y lapicero (cada estudiante) •
Recorte de papel periódico
• Agujas
• Tijeras
• Láminas y laminillas (mínimo Dos de cada una)
• Gotero
• Limpión
• Corcho de vino
• Cuchillas (tipo gillette) Información bibliográfica (artículos, libros o fuentes de
información que le permitan desarrollar eficientemente la guía)
Apoyados en los medios y recursos tecnológicos brindados por el Departamento de
Virtualización y Comunicaciones de la Universidad, te invito a que observes el siguiente
video para enriquecer tu proceso de aprendizaje.
Copia la URL en tu navegador: [Link]
(Microscopía)
Copia la URL en tu navegador: [Link] (Instrumentos de
Laboratorio)
3. PROCESO
3.1 Desarrollo aspectos teóricos sobre microscopía
Revise información relacionada con la historia de la invención del microscopio y en media
página, escriba las ideas principales que leyó sobre esta temática:
Su nombre, producto de laboratorio, está formado por dos palabras griegas: Micros
(pequeño) y scopeo (observación).
El microscopio fue inventado por Zacharias Janssen en 1590.
En 1665 Robert Hooke observó con un lente un delgado corte de corcho y notó que el
material era poroso; contiene cavidades poco profundas a modo de celditas a las que
llamó células. Se trataba de la primera observación de células muertas. Unos años más
tarde, Marcello Malpighi, anatomista y biólogo italiano, observó células vivas. Fue el
primero en estudiar tejidos vivos al microscopio.
A mediados del siglo XVII el neerlandés Anton van Leeuwenhoek, utilizando microscopios
simples de fabricación propia, describió por primera vez protozoos, bacterias,
espermatozoides y glóbulos rojos. El microscopista Leeuwenhoek, sin ninguna
preparación científica, puede considerarse el fundador de la bacteriología. Tallaba él
mismo sus lupas, sobre pequeñas esferas de cristal, cuyos diámetros no alcanzaban el
milímetro (su campo de visión era muy limitado, de décimas de milímetro). Con estas
pequeñas distancias focales alcanzaba los 275 aumentos. Observó los glóbulos de la
sangre, las bacterias y los protozoos; examinó por primera vez los glóbulos rojos y
descubrió que el semen contiene espermatozoides. Durante su vida no reveló sus
métodos secretos, y a su muerte, en 1723, 26 de sus aparatos fueron cedidos a la Royal
Society de Londres.
Durante el siglo XVIII continuó el progreso y se lograron objetivos acromáticos por la
asociación de Chris Neros y Flint Crown, obtenidos en 1740 por H. M. Hall y mejorados
por John Dollond. De esta época son los estudios efectuados por Isaac Newton y
Leonhard Euler. En el siglo XIX, al descubrirse que la dispersión y la refracción se podían
modificar con combinaciones adecuadas de dos o más medios ópticos, se lanzan al
mercado objetivos acromáticos excelentes.
Durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos mecánicos que aumentaron
su estabilidad y su facilidad de uso, aunque no se desarrollaron por el momento mejoras
ópticas. Las mejoras más importantes de la óptica surgieron en 1877, cuando Ernst Abbe
publicó su teoría del microscopio y, por encargo de Carl Zeiss, mejoró la microscopía de
inmersión sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de
2000. A principios de los años 1930 se había alcanzado el límite teórico para los
microscopios ópticos, no consiguiendo estos aumentos superiores a 500X o 1000X. Sin
embargo, existía un deseo científico de observar los detalles de las estructuras celulares
(núcleo, mitocondria, etc.).
El microscopio electrónico de transmisión (TEM) fue el primer tipo de microscopio
electrónico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la
muestra, consiguiendo aumentos de 100.000X. Fue desarrollado por Max Knoll y Ernst
Ruska en Alemania en 1931. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio
electrónico de barrido
4. RESPONDA LAS SIGUIENTES PREGUNTAS
4.1 ¿Por qué considera que es importante aprender a manejar un microscopio?
El uso del microscopio es un instrumento de precisión que permite al estudiante identificar y
describir a través del uso de las partes que componen el sistema mecánico, óptico y de
iluminación observar y describir la estructura de microorganismos.
4.2 ¿Cuál considera que ha sido el principal aporte que ha hecho esta herramienta a los
profesionales en Biología y Medicina?
El microscopio ha ayudado a estudiar organismos y partículas, invisibles a simple vista,
de las cuales no se conocía su existencia. Esto ha permitido la creación de nuevas áreas
de estudio, tanto en la biología, como en la medicina y la ciencia.
4.3 ¿Cuántas clases de microscopio conoce o existen? (Define en forma breve y
mencione ejemplos)
Microscopio óptico: Es una herramienta que permite observar elementos que no pueden
observarse o son invisibles a simple vista, a través de lentes, visores y rayos de luz, que
acercan o agrandan la imagen en escalas convenientes para su examinación y análisis.
Microscopio electrónico de transmisión: Permite el estudio a nivel ultraestructural de
material biológico (células y tejidos tanto animales como vegetales).
Microscopio electrónico de barrido: Es aquel que utiliza un haz de electrones en lugar de
un haz de luz para formar una imagen. Tiene una gran profundidad de campo, la cual
permite que se enfoque a la vez una gran parte de la muestra.
Microscopio de fluorescencia: La función más básica de un microscopio de fluorescencia
es la de permitir que la luz excitada irradie el espécimen, para luego separar la luz más
débil emitida de la imagen.
Microscopio confocal: Es un microscopio que emplea una técnica óptica de imagen para
incrementar el contraste y/o reconstruir imágenes tridimensionales utilizando un "pinhole"
espacial (colimador de orificio delimitante) para eliminar la luz desenfocada o destellos de
la lente en especímenes que son más gruesos que el plano focal.
Microscopio de efecto túnel: Es un instrumento para tomar imágenes de superficies a
nivel atómico.
Microscopio petrográfico: Tiene la capacidad de analizar ciertas características y
propiedades de una muestra utilizando luz polarizada (producida por una lámina
polaroide llamada polarizador) entre la fuente luminosa y la preparación.
Microscopio de iones en campo: Es una variedad de microscopio que puede ser usado
para visualizar la ordenación de los átomos que forman la superficie de la punta afilada
de una aguja de metal.
Microscopio compuesto: Se basa en la propiedad de algunos materiales que permiten
cambiar la dirección de los rayos de luz. Con este fin, se fabrican lentes capaces de
hacer converger o divergir los rayos de luz, generando así la imagen aumentada a partir
de distintas lentes.
Microscopio de luz ultravioleta: Es un microscopio en el que se usa la luz ultravioleta, que
es una radiación cuya longitud de onda es de aproximadamente 200 nm y en
consecuencia permite un mayor poder de resolución que la luz visible.
Microscopio de campo oscuro: Se llama así porque se coloca una placa opaca sobre el
condensador del microscopio, la cual bloquea la luz directa permitiendo sólo el paso de
los rayos luminosos difractados dentro del objetivo, resultando una imagen iluminada de
la muestra sobre un fondo oscuro.
Microscopio de contraste de fases: Permite observar células sin colorear y resulta
especialmente útil para células vivas.
5. DESARROLLO DE ASPECTOS PRÁCTICOS DE USO Y MANEJO DEL
MICROSCOPIO COMPUESTO
Los microscopios que usted manipula en el Laboratorio de Fundamentos de Biología
corresponden al microscopio compuesto óptico y el microscopio compuesto
estereoscopio.
5.1 Partes y funciones del microscopio compuesto
Dos partes importantes componen un microscopio:
• Parte mecánica: estructuras que soportan o sostienen la parte óptica. • Parte óptica:
estructuras que permiten la observación de objetos muy pequeños invisibles a nuestros
ojos.
A través del siguiente esquema y con ayuda del profesor reconozca las partes ópticas y
mecánicas del mismo con su respectiva función.
5.1.1 Fíjate bien en los lentes objetivos. ¿Cuántos tipos de objetivos encuentra en su
microscopio?
Hoy en día los microscopios ópticos poseen un tambor o revólver donde se encuentran
varios objetivos. Cada uno de ellos posee lentes que permiten diferentes aumentos. Las
magnificaciones de los objetivos más usados suelen ser de 4x, 10x, 20x, 40x y 100x.
5.1.2 Reconoce las características específicas que aparecen en sus objetivos a través
del siguiente esquema
Figura 1. Características específicas de los lentes objetivos (Tomada de Histoptica)
5.1.3 Para mecanizar las partes del microscopio escriba en la siguiente tabla el nombre y
función de cada una de ellas.
Estructuras de la parte Nombre Función
mecánica
Brazo También llamado
columna o asa, es el
esqueleto del
microscopio. Es una
pieza que se
encuentra en la parte
intermedia del
aparato, conectando
todas sus partes. De
esta manera, conecta
la superficie donde se
colocará la muestra a
observar y el ocular,
parte por la que se
observará.
Tanto las lentes que
conforman el ocular
como las que se
encuentran en los
objetivos están en el
brazo del
microscopio.
Base Encontrándose en la
parte más inferior del
aparato y le da apoyo.
Acostumbra a ser la
parte más pesada de
todo el microscopio,
y es gracias a ello
que el aparato
consigue el suficiente
equilibrio para evitar
tumbarse.
Platina Es la parte en la que
se coloca la muestra
que se quiere
observar. Se trata de
una superficie plana
en la que se coloca la
tira de cristal en la
que se encuentra el
objeto minúsculo que
se desea observar.
Revolver Es una pieza giratoria
en la que se montan
los objetivos. Su
nombre se debe a
que, cuando se usa,
se mueve y suena
como el revólver de
una pistola.
Al girar el revólver,
los objetivos pasan
por el eje del tubo y
se colocan de forma
que permitan ver lo
que se encuentra en
la platina.
Tornillos El tornillo
micrométrico es un
mecanismo que se
utiliza para conseguir
un enfoque más
preciso de la muestra
a observar.
El tornillo
macrométrico permite
ajustar la posición
vertical de la muestra
con respecto al
objetivo. Este tornillo,
cuando es girado,
hace que el tubo del
microscopio se
desliza verticalmente
gracias a un sistema
similar al de una
cremallera.
Estructuras de la parte óptica Nombre Función
Objetivo Son las lentes
convergentes que son
reguladas mediante el
revólver. Estas lentes
son las que ofrecen la
primera etapa de
aumento.
Condensador Consiste en un
sistema de lentes
convergentes que
captan el haz de luz y
concentra sus rayos
de forma que se
ofrezca un mayor o
menor contraste.
Normalmente, los
rayos que emite el
foco de luz son
divergentes. Mediante
el condensador, es
posible hacer que
estos rayos sean
paralelos o, incluso,
convergentes.
En el microscopio
existe un tornillo que
sirve para regular la
condensación
lumínica. Este tornillo
puede encontrarse en
diferente lugar en
función del modelo del
aparato.
Oculares Son los sistemas de
lentes más cercanos
al ojo del observador.
Se trata de cilindros
huecos que se
encuentran en la parte
superior del
microscopio y tienen
lentes convergentes.
Estos elementos
ópticos son los que
proporcionan la
segunda etapa de
ampliación de la
imagen. Es decir,
primero la imagen es
aumentada por los
objetivos y, luego, otra
vez aumentada por los
oculares.
Foco o fuente de luz Ofrece iluminación a
la placa, suele estar
conformada por una
lámpara halógena que
se encuentra en la
base del microscopio.
La luz sale de la
bombilla y pasa a un
reflector, enviando los
rayos de luz a la
platina.
En función del tamaño
del microscopio esta
fuente de luz tendrá
un mayor o menor
voltaje. En los
microscopios más
utilizados en
laboratorios el voltaje
suele ser de 12
voltios.
Diafragma o iris Se encuentra sobre el
reflector de la luz y
debajo de la platina.
Mediante esta parte es
posible regular la
intensidad de la luz,
abriendo o cerrando el
diafragma, al igual que
el iris humano lo hace
ante la luz proveniente
del exterior. El punto
óptimo del diafragma
variará en función de
la muestra que se
tenga en la platina y el
grado de iluminación
del lugar en el que se
encuentre el
microscopio.
5.2 USO DEL MICROSCOPIO, MONTAJES HÚMEDOS (De acuerdo a lo presentado en
el video y con ayuda de ilustraciones se desarrollan los dibujos de las
observaciones).
Con ayuda de la Figura 2 y con el material de trabajo del que dispone, realice un montaje
húmedo de la letra "a" del recorte de periódico más pequeña que encuentre (se sugiere la
letra de los clasificados)
Figura 2. Preparación de un montaje húmedo
5.2.1 En los siguientes círculos realice esquemas de lo observado en los aumentos
usados:
5.2.2 ¿Observa la letra invertida? ¿Por qué?
Para dar respuesta de esta pregunta por favor revise información sobre la formación de
imágenes en microscopio óptico compuesto.
La imagen se ve invertida debido a que el lente del objetivo es convexo, osea que
magnifica las imágenes.
5.2.3 ¿Encuentra diferencia en las observaciones realizadas en distintos aumentos?
¿Cuál es la razón de estas diferencias?
Este proceso de aumento se puede explicar en base a la naturaleza de las lentes,
que no son más que cuerpos con la capacidad de desviar los rayos de luz. En el
caso de las lentes convergentes, los rayos que inciden de forma paralela son
desviados de modo que convergen en un punto llamada foco.
5.2.4 Realicé un corte fino de corcho y reconozca las celdillas observada por Robert
Hooke en 1665
¿Estas imágenes están invertidas?
El lente más cercano a la muestra, el objetivo, posee una distancia focal muy corta, por lo
cual la luz lo atraviesa y la imagen formada se invierte en cada ocular.
6. ESTIMACIÓN DEL TAMAÑO DE UN OBJETO MICROSCOPIO
6.1 ¿En qué unidades de longitud podría medirse el tamaño de una bacteria, virus
o microorganismo? ¿Cuáles serían las unidades y equivalencias?
El tamaño de los microorganismos se mide en micras y una micra es la
millonésima parte de un metro, es decir, la milésima de un milímetro. Los virus son
aún más pequeños y su tamaño se suele medir en milimicras.
Las unidades de medida utilizadas en microscopía para determinar las
dimensiones de los microorganismos son el micrómetro o micra (μm), el nanómetro
(nm) y el angstrom (Å).
6.2 Un microorganismo a mide 130 micras y otro microorganismo B mide 1200 A
(Angstrom) ¿Cuál es mayor? Explique su respuesta
El microorganismo A es mayor que B, ya que A mide 130 micrómetros lo que
equivale a 130000 nanómetros, por lo que, B es menor porque sus unidades son
angstrom y son más pequeñas que micrómetro y nanómetro.
6.3 Una bacteria mide 1.4 micras de diámetro: calcule su tamaño en mm y en Angstrom
-0.0014 mm y 14.000 angstrom
7. ALGUNOS PRINCIPIOS DE MICROSCOPÍA
Revise información que le permita definir los siguientes conceptos
7.1 Poder de resolución de un microscopio
Los microscopios ópticos tienen un límite máximo de resolución de 0,2 µm. El poder de
resolución es la distancia mínima a la que se pueden discriminar dos puntos. Este límite
viene determinado por la longitud de onda de la fuente de iluminación, en este caso la luz
visible.
7.1.1 ¿Cuál sería el poder de resolución del ojo humano?
Según un estudio, el ojo humano captura imágenes a una resolución equivalente a 576
megapíxeles. Hay alrededor de 6 millones de conos o células sensibles a la luz en cada
retina y entre 90 y 126 millones de bastones, las células responsables de la visión en
condiciones de baja luminosidad.
7.1.2 ¿Cuál sería el poder de resolución de un microscopio electrónico?
El poder de resolución teórico de un microscopio electrónico es de 0,02 Å. Sin embargo,
por diversos problemas de construcción se consigue en los mejores microscopios una
resolución de 1 - 2 Å (0,1 - 0,2 nm).
7.1.3 En el microscopio óptico compuesto ¿Qué factores determinan el poder de
resolución?
El poder de resolución es la distancia mínima a la que se pueden discriminar
dos puntos. Este límite viene determinado por la longitud de onda de la fuente
de iluminación, en este caso la luz visible. Contiene normalmente dos sistemas
de lentes: el objetivo y el ocular.
7.2 Poder de aumento de un microscopio
El aumento total de un microscopio podemos calcularlo como el producto del aumento del
objetivo por el aumento del ocular. Este aumento total será negativo lo que nos indicará
que la imagen final dada por el microscopio es invertida.
7.2.1 ¿De qué depende el aumento total de una muestra que usted esté observando en el
microscopio compuesto?
Para determinar el aumento de cualquier imagen se necesita multiplicar el aumento del
ocular por el aumento del objetivo. Si existen lentes auxiliares en un microscopio de
disección, el aumento debe ser multiplicado por el del ocular y el del objetivo.
7.2.2. ¿Cuál sería el aumento total del corte de corcho que usted observó con el objetivo
4X?
7.2.3 ¿Y cuál sería con el de 10X y 40X?
8. OBSERVACIÓN CON EL OBJETIVO DE 100X (OBJETIVO DE INMERSIÓN O
HÚMEDO)
Utilice un montaje húmedo de un cabello o hilo de color, haga el enfoque en objetivo de
4X y luego proceda con 10X y 40X, para enfocar en 100X baje un poco la platina, mueva
el revólver de manera que pueda agregar una pequeña gota de aceite de inmersión sobre
el cubre objeto. Posteriormente, gire el revólver y posiciónelo en el objetivo de inmersión.
Suba lentamente la platina hasta que el objetivo de inmersión toque el aceite. Mire a
través del ocular y enfoque con el tornillo micrométrico.
RECUERDE MANTENER EL OBJETIVO DE 100X LIMPIO ANTES Y DESPUÉS DE SU
OBSERVACIÓN.
100X
9. DESARROLLO DE ASPECTOS PRÁCTICOS DE USO Y MANEJO DEL
MICROSCOPIO ESTEREOSCOPIO
El microscopio estereoscopio permite ver estructuras difíciles de apreciar a simple vista,
generalmente utiliza luz reflejada y es muy utilizado para la disección de ejemplares
biológicos, para examinar insectos, plantas, fósiles, minerales, etc.
Coloca los nombres respectivos al siguiente esquema reconozca las partes y funciones
del microscopio estereoscopio
Use un insecto (vivo o muerto) y manipúlelo con ayuda del estereoscopio
9.1 ¿Esta imagen está invertida?
¿Por qué?
10. COMPARACIÓN ENTRE MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO Y MICROSCOPIO
ESTEREOSCOPIO
Completa La siguiente tabla respecto de la comparación entre los dos microscopios
usados, adicione otras características según su criterio
Característica Microscopio Microscopio
compuesto óptico estereoscopio
Aplicación El microscopio compuesto se utiliza para trabajar con
u óptico utiliza lentes para muestras que tienen mayor
ampliar las imágenes de los necesidad de ser
objetos observados. diseccionadas para ver con
más detalle las partes
pequeñas que las
componen, sean de
plantas, insectos e incluso
paneles electrónicos.
Imagen que produce Bidimensional Tridimensional
Forma en que la luz llega Luz transmitida Luz reflejada
a la muestra
Aumentos El aumento obtenido con Es verdad que existen
estos microscopios es microscopios
reducido, debido a la estereoscópicos que
longitud de onda de la luz pueden proporcionar un
visible que impone aumento de hasta 300x.
limitaciones.
11. CONCLUSIÓN
En un párrafo de 5 líneas escribe una conclusión general de lo aprendido en la práctica
# 2.
Bueno, en esta práctica aprendimos sobre la evolución del microscopio y los tipos que
existen de este, sus partes, sus funciones, como usarlo e hicimos varios experimentos
utilizando el microscopio, también observamos cosas en uno de los experimentos como
la letra a invertida, aprendimos el por qué se veia asi, fue una experiencia muy buena.
12. LITERATURA SUGERIDA COMO CONSULTA
• Cazelles- Osorio A y J. C Gutiérrez. 2002. Manual de experiencias de laboratorio para
Biología general y celular. Universidad del Atlántico, Barranquilla – Colombia.
• Freeman, S. 2011. Biological Science. 4th edition Person Editorial. New York. 1122p
