CFGS LABORATORI CLÍNIC I BIOMÈDIC
MP3UF2RA4
Actividades Clonación
1. ¿Qué es la clonación molecular? Enumera sus ventajas como técnica de amplificación de ADN.
¿Qué dos elementos son imprescindibles para clonar una molécula de ADN?
2. Define los siguientes conceptos:
a) Vector de clonación.
b) Vector recombinante.
c) Vector de expresión.
d) Célula hospedadora.
3. Dibuja un esquema de un vector de clonación plasmídico con sus componentes principales
y explica la función de cada uno de ellos.
4. Di si son verdaderas o falsas las siguientes afirmaciones:
a) Mediante el proceso denominado transformación, cualquier bacteria puede captar
e internalizar moléculas de ADN desnudas presentes en el medio externo.
b) La transfección es un método para introducir vectores recombinantes en bacterias
infectándolas con un virus.
c) La introducción de vectores recombinantes en células hospedadoras mediante virus
se denomina transducción.
d) En la electroporación, la introducción de vectores recombinantes en bacterias se consigue
mediante un láser que produce nanoporos en la pared y en la membrana plasmática.
5. Una suspensión de sensible a la ampicilina, la tetraciclina, el cloranfenicol y la lactosa negativa
se transforma con un vector recombinante, obteniéndose una mezcla de bacterias no
transformadas y transformadas con el vector recombinante o con el vector no recombinante.
Explica cómo realizarías la selección e identificación de los clones recombinantes en los
siguientes supuestos:
a) El vector es un plásmido con un gen de resistencia a la ampicilina, un gen de resistencia a
la tetraciclina y un polylinker en el centro del gen de resistencia a la ampicilina.
b) El vector es un BAC con un gen de resistencia al cloranfenicol, un gen letal para la bacteria y
un polylinker en el centro del gen letal.
c) El vector es un cósmido con un gen de resistencia a la tetraciclina, un gen LacZ y un
polylinker en el centro del gen de resistencia a la tetraciclina.
d) El vector es un plásmido con un gen de resistencia a la ampicilina, el gen que codifica para
la GFP y un polylinker en el centro del gen GFP.
6. Haz un mapa conceptual que esquematice el proceso de clonación de una molécula de ADN
utilizando un plásmido como vector. Suponiendo que el plásmido contiene un gen de
resistencia a la ampicilina y el gen LacZ con una diana de restricción en su interior, completa el
mapa conceptual utilizando los siguientes textos: Ligasa. Enzima de restricción. Ampicilina.
Plásmido recombinante. Fragmentos de ADN con extremos cohesivos Plásmido linearizado con
extremos cohesivos. Bacterias transformadas. Colonias con vector recombinante. X-gal. Colonias
con vector no recombinante. A la izquierda del esquema indica las fases del proceso de
clonación, utilizando los siguientes textos: Transformación. Digestión. Selección e identificación.
Ligación.
7. Se ha transformado una cepa de sensible a la ampicilina y la lactosa negativa con un plásmido
recombinante que tiene un gen de resistencia a la ampicilina, un gen LacZ y un en el centro del
gen de resistencia a la ampicilina. La transformación se realizó añadiendo 20 μl de una
solución de plásmido con una concentración de 0.03 μg/μl a 500 μl de suspensión bacteriana.
A continuación se sembraron 25 μl de la suspensión de bacterias transformadas en una placa
control sin antibiótico y otros 25 μl en una placa con ampicilina, X-gal e IPTG. A las 24 horas de
incubación, a 37 ºC, en la placa control, crecieron 450 UFC y en la placa con ampicilina y X-gal
crecieron 30 colonias blancas y 120 colonias azules. Calcula:
a) La tasa de transformación.
b) La tasa de transformación recombinante.
c) El porcentaje de clones recombinantes respecto del total de clones transformados.
d) El porcentaje de células transformadas respecto del total de células presentes en la suspensión
inicial.
