APTT HEMOSTASIS Ref.

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Instrucciones de Uso

Tiempo de tromboplastina parcial activada Los reactivos no abiertos, almacenados en las condiciones indicadas,
son estables hasta la fecha de expiración impresa en los rótulos. Después
Finalidad . Reactivo para la determinación del tiempo de de abiertos, los reactivos deben ser manipulados de acuerdo a las buenas
tromboplastina parcial activada (TTPA) y medición de los factores de prácticas de laboratorio para evitar contaminaciones de naturaleza
coagulación basada en el tiempo de tromboplastina parcial activada. química y microbiana que pueden provocar reducción de su estabilidad.

[Solamente para uso diagnóstico in vitro.] El Reactivo 1 debe permanecer abierto y fuera de la temperatura de
almacenamiento, solamente el tiempo necesario para obtener el volumen
Principio . El reactivo conteniendo activador plasmático (ácido a utilizar en el ensayo. La exposición prolongada del Reactivo 1 al aire
puede comprometer el desempeño del mismo. La estabilidad del Reactivo
elágico) desencadena el mecanismo de coagulación de la vía intrínseca a
1 puede comprometerse con la introducción de puntas mal lavadas.
través de la activación del factor XII (Hageman), que forma un complejo
con el cininógeno de alto peso molecular (HMWK) y con la pre-calicreína
(PK). El factor XII activado actúa sobre el factor XI generando el factor XIa Precauciones y cuidados especiais
que en presencia de fosfolípidos y calcio transforma el factor IX en una
Los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados en la
enzima activa (factor IXa), que activa el factor VIII, formando el complejo
manipulación del reactivo.
IXa-fosfolípido-VIIIa que activa el factor X. Este factor activado transforma
la protrombina en trombina que actúa sobre el fibrinógeno generando El Reactivo 2 contiene azida sódica que es tóxica. No ingerir y, en caso de
fibrina. La formación de fibrina está macroscópicamente demostrada por contacto con los ojos, lavar inmediatamente con abundante cantidad de
la aparición de un coágulo. agua y procurar auxilio médico.
El TTPA se realiza incubando el plasma citratado con el reactivo que La azida puede formar compuestos altamente explosivos con las cañerías
contiene el activador y fosfolípidos. Después de la adición del calcio, se de plomo y cobre. Por lo tanto, utilizar gran cantidad de agua para
realiza la medición del tiempo de formación del coágulo. descartar el reactivo.

Característica del sistema . APTT Hemostasis - Labtest Material necesario y no provisto

contiene sustitutos de fosfolípidos plaquetarios que, junto con un
activador soluble, el ácido elágico, proporciona condiciones óptimas para
1. Baño-María mantenido a temperatura constante (37 ºC);
la activación por contacto de los factores de la coagulación (vía
intrínseca).
2. Pipetas para medir muestras y reactivo;
A pesar de ser sensible a deficiencias de todos los factores de la 3. Cronómetro.
coagulación, con excepción del factor VII, el sistema APTT Hemostasis
detecta desórdenes hemorrágicos secundarios principalmente a Influencias pre-analíticas . El TTPA puede estar aumentado en
deficiencia de los factores VIII, IX, XI, XII y Pre-calicreína. individuos que usan ácido acetilsalicílico, aztreonam, ofloxacino,
APTT Hemostasis puede ser utilizado también con éxito para monitorear metronidazol y fenitoína.
pacientes en terapia con heparina. El sistema es suficientemente sensible La reducción del TTPA puede observarse en individuos que usan anti-
para discriminar diferentes concentraciones de este anticoagulante, histamínicos, digitálicos, anticonceptivos orales, tetraciclina y
presentando una prolongación del tiempo de coagulación proporcional a estrógenos conjugados.
la concentración de heparina en el plasma. Es importante también que la muestra sea recogida, preparada y
almacenada conforme se describe en el ítem MUESTRA.
Metodologia . Coagulometría.
Muestra
Reactivo
Usar plasma recogido en citrato trisódico anhidro 109 mmol/L (3,2%).
1. 1 - Reactivo 1 - Almacenar entre 2 - 8 ºC. Se debe crear un Procedimiento Operativo Estándar (POE) que establezca
Contiene ácido elágico ≥99 µmol/L, fosfolípidos de cerebro de conejo
procedimientos adecuados para la toma, preparación y almacenamiento
≥0,007%, fenol 320 mmol/L, albúmina bovina 0,005%, estabilizadores y de la muestra. Destacamos que los errores debidos a la muestra pueden
conservante. Listo para usar. ser mayores que los errores ocurridos durante el procedimiento analítico.
Considerando que a calidad de la muestra es fundamental para la
2. 2 - Reactivo 2 - Almacenar entre 2 - 30 ºC.
exactitud de los resultados, se recomienda la utilización de los
Contiene cloruro de calcio 20 mmol/L y azida sódica ≤0,095%. procedimientos que siguen1-3.

01 Espanhol - Ref.: 502

1. Obtener la sangre por punción venosa y evitar el agarrotamiento 8. La presencia de coágulos implica el rechazo de la muestra.
prolongado, la hemólisis, la formación de burbujas y la aspiración de
líquido tisular (factor lll). La aguja debe penetrar directamente en la vena Las muestras de sangre deben ser consideradas como potencialmente
en la primera tentativa (punción venosa no traumática). La sangre debe infecciosas. Por lo tanto, al manipularlas se deben seguir las normas
fluir libremente sin que sea necesario aplicar demasiada fuerza al émbolo. establecidas para bioseguridad.
No realizar el TTPA en muestras cuya punción fuera difícil (punción
venosa traumática). Para descartar los reactivos y el material biológico, sugerimos aplicar las
normas locales, estatales o federales de protección ambiental.
2. Recoger la muestra con jeringa de plástico y centrifugar en tubos de
plástico. El uso de material de vidrio no siliconado activa los factores de la Interferencias
coagulación y reduce falsamente el TTPA. Después de sacar la aguja,
Muestras ictéricas, lipémicas y hemolisadas pueden modificar los
utilizar la porción central de la muestra en la jeringa, dejando las porciones
resultados de modo imprevisible.
anterior y posterior para otros ensayos.

3. En los sistemas de recolección al vacío, usar tubo de plástico o de Procedimiento4

vidrio siliconado. Tomar 2 muestras cuando la recogida se destine El siguiente procedimiento se aplica a la técnica manual. El reactivo puede
solamente a ensayos de coagulación. La primera en un tubo sin ser empleado para la determinación del TTPA utilizando equipos
anticoagulante o en un tubo conteniendo citrato (tapa azul) que debe ser automáticos y semi-automáticos. Se recomienda seguir exactamente las
despreciada. instrucciones de operación propuestas por los fabricantes.
La segunda muestra recogida en tubo conteniendo citrato (tapa azul)
debe ser utilizada para la realización de los ensayos. En el caso de una 1. Realizar el ensayo en tubos de vidrio rigurosamente limpios.
recogida múltiple, la muestra para los ensayos de coagulación debe ser
obtenida después de la toma de la muestra en tubo sin anticoagulante y 2. La temperatura del baño-María debe estar entre 36,0 y 38,0 ºC.
antes de la recogida en tubo contiendo EDTA.
3. Pre-calentar el Reactivo 2 (20 mmol/L) a 37 ºC.
4. Mezclar 9 partes de sangre con 1 parte de citrato ó 3 mL de sangre y 1
gota de Trombstab (Labtest Ref.: 45). Homogeneizar 3 ó 4 veces por 4. Incubar a 37 ºC, 0,1 mL del plasma a ser medido (control o paciente)
inversión suave. No usar oxalato, pues el Factor V es muy sensible a este como mínimo 1 minuto y como máximo 10 minutos.
anticoagulante.
5. Adicionar 0,1 mL del Reactivo 1, homogeneizar e incubar a 37 ºC por 3
5. En pacientes que presentan un hematocrito mayor a 55% la relación a 5 minutos (tiempo de activación). Para obtener resultados
entre los volúmenes de sangre y de anticoagulante debe ser ajustada para reproducibles el tiempo de activación debe ser estandarizado para todas
garantizar la exactitud del resultado. Para calcular el volumen de las muestras.
anticoagulante necesario en función del hematocrito y del volumen de
sangre, utilizar la siguiente fórmula: 6. Adicionar 0,1 mL del Reactivo 2 (previamente calentado a 37 ºC) y
disparar simultáneamente el cronómetro. Mezclar suavemente y
Volumen de anticoagulante (mL) = 0,00185 x volumen de sangre (mL) x
mantener en el baño-María a 37 °C por 15 a 20 segundos.
(100 - hematocrito)

Ejemplo . Para un hematocrito de 60% usar 0,22 mL de citrato y 7. Extraer el tubo, inclinarlo constantemente a intervalos menores a 1
completar a 3,0 mL con sangre. Para usar Trombstab (Labtest Ref.: 45), segundo y observar la formación de un coágulo que interrumpe el
adicionar 2 gotas a 0,5 mL de agua y usar en la proporción indicada por el movimiento del líquido. Detener inmediatamente el cronómetro y registrar
cálculo. el tiempo.

6. Centrifugar hasta 1 hora después de la recogida a 3000 rpm o a 1500 g Control interno de la calidad . El laboratorio debe mantener un
durante 15 minutos. No es necesario remover el plasma del tubo. programa de control interno de calidad que defina claramente:
Mantener el tubo tapado hasta la realización del examen para prevenir regulaciones aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para
alteraciones del pH de la muestra que pueden interferir en los resultados. especificaciones de calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y
registro de las actividades. Se deben usar materiales de control para
7. Mantener las muestras entre 2 - 24 ºC y realizar el TTPA hasta 4 horas evaluar la imprecisión y desvíos de la calibración. Se sugiere utilizar las
después de la recolección. En caso de que exista posibilidad de especificaciones CLIA para el cálculo del error total5.
congelamiento rápido, el plasma, separado de las células, puede ser 6-8
congelado a 20 ºC negativos por 2 semanas o a 70 ºC negativos por 6 Intervalo de referencia . Los intervalos deben ser usados sólo
meses. Sugerimos congelar el material en alícuotas de 0,5 mL y, para como orientación. Se recomienda que cada laboratorio establezca, en la
evitar la evaporación del material durante el período de almacenamiento, población atendida, sus propios intervalos de referencia.
utilizar frascos adecuados para congelamiento ( criotubos ). Las
muestras deben ser descongeladas rápidamente a 37 ºC y ensayadas
inmediatamente.

02 Espanhol - Ref.: 502

 Edad Intervalo (segundos) La acción anticoagulante de la heparina depende de muchos factores,
2 meses 26,3 - 46,9 tales como: nivel adecuado de antitrombina III, activación plaquetaria y
5 meses 26,1 - 45,9 subsecuente exposición del Factor 4 plaquetario.
Los medicamentos, la tasa de metabolización y la forma de
Niños a partir de los 6
26,7- 37,6 administración de la heparina y el tiempo entre la obtención de la muestra
messes y adultos
y la realización del ensayo interfieren en el test de sensibilidad.
La sensibilidad relativa del reactivo APTT Hemostasis a la heparina, puede
ser determinada estableciendo una curva de sensibilidad a la heparina. La
Características de desempeño9 curva debe construirse adicionando cantidades conocidas de heparina a
un pool de plasma normal y realizando el ensayo para la determinación del
Estudios de comparación . El método propuesto fue comparado TTPA. El laboratorio debe realizar el ensayo de sensibilidad utilizando
con un método similar, obteniéndose los siguientes resultados: heparina de la misma fuente que la administrada al paciente y teniendo en
cuenta las variables que influyen en el test.
El ejemplo que sigue ilustra la relación entre concentración de heparina y
Método Método el tiempo en segundos obtenido con el reactivo APTT Hemostasis y un
Comparativo Labtest coagulómetro foto-óptico.
Número de muestras 205 205
Tiempo de tromboplastina
21,9 - 200 21,0 - 167,8
parcial activada (segundos) Concentración de Heparina TTPA
Media da las estimativas (unidades/mL) (segundos)
34,6 32,7
(segundos)
0,0 24,3
Labtest = 0,8232 x
Ecuación de regresión 0,1 27,3
Comparativo + 4,25
0,2 33,6
Coeficiente de correlación 0,985 0,3 42,1
0,4 53,0
0,5 65,5
Utilizando la ecuación de regresión, el error sistemático total estimado en 0,6 77,9
el tiempo de 26,7 segundos es igual al 1,76% y en el tiempo de 65,6 0,7 93,7
segundos es igual al 11,2%.

Estudios de precisión . Los siguientes resultados fueron Sensibilidad a la deficiencia de los factores de
obtenidos en los estudios de precisión:
coagulación . Plasmas con deficiencia moderada y grave de varios
factores fueron evaluados con el reactivo APTT Hemostasis y el reactivo
Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo demostró sensibilidad apropiada a las deficiencias de los factores de la
coagulación, conforme se muestra en la siguiente tabla:
N Media DP CV (%)
Muestra 1 10 26,8 0,08 0,3
Muestra 2 10 66,6 0,60 0,9
Factor Actividad del factor% TTPA (segundos)
VIII <1 82,0
VIII 20 44,8
Reproducibilidad - Imprecisión total IX <1 83,5
N Media DP CV (%) IX 20 40,9
Muestra 1 5 26,7 0,19 0,7 XI <1 134,2
Muestra 2 5 65,6 0,79 1,2 XI 20 47,8
XII <1 >200
XII 20 36,2
Pre-calicreína <1 69,5
Evaluación del error total . El error total (error aleatorio + error
sistemático) estimado en el tiempo de 26,7 segundos es igual a 3,13% y
en el tiempo de 65,6 segundos es igual a 13,6%. Los resultados indican
que el método cumple con la especificación CLIA para el error total
Observaciones
(≤15,0%) .
5

1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores

fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de
Sensibilidad a la heparina . El TTPA se utiliza para monitorear la
resultados correctos.
terapia con heparina, considerando que la prolongación del tiempo de
formación del coágulo es directamente proporcional al aumento de la
cantidad de heparina.

03 Espanhol - Ref.: 502

2. El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos 7. Flanders MM, Crist RA, Roberts WL, Rodgers GM. Clinical Chemistry
y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa 2005;51:1738-1742.
potencial de errores analíticos. El agua desionizada o destilada utilizada
8. Jacobs DS, DeMott WR, Oxley DK. Laboratory Test Handbook, 5a
en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así,
edição, Lexi-Comp Inc: Hudson (Cleveland), 2001, 328-330.
para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en
enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad ≥1 [Link] o 9. Labtest: Datos de archivo.
conductividad ≤1 microsiemens/cm y concentración de silicatos
<0,1 mg/L. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad
saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones, Presentación
silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que
deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los Producto Referencia Contenido
resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer 1 1 X 4 mL
APTT Hemostasis 502-1/4
un programa de control de la calidad del agua. 2 1 X 6 mL

3. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas

de interferencia en los resultados y en la metodología se sugiere consultar Están disponibles las aplicaciones para sistemas automáticos y semi-
[Link] automáticos.

Referencias Informaciones al consumidor

1. International Committee for Standardization in [Link] [Términos y Condiciones de Garantía]
Haemostas 1976;36:237-238.
Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto, dentro de
2. NCCLS. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens for las especificaciones, hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos,
Testing Plasma-Based Coagulation Assays; Approved Guideline- siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en
Fourth Edition. NCCLS document H21-A4, 2003. los rótulos y en estas instrucciones, sean seguidos correctamente.

3. NCCLS. Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens

by Venipuncture; Approved Standard-Fifth Edition. NCCLS document Labtest Diagnóstica S.A.
H3-A5, 2003. CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
4. NCCLS. One-Stage Prothrombin Time (PT) Test and Activated Partial Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - [Link]
Thromboplastin Time (APTT) Test; Approved Guideline. NCCLS Servicio de Apoyo al Consumidor e-mail: sac@[Link]
document H47-A, 1996.

5. CLIA Requirements for Analytical Quality. Disponible en

<[Link] Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
Edición: Febrero, 2007
Ref.: 170309 Reproducción bajo previa autorización
6. Conway AM, Hinchliffe RF, Finn A, Bell F. Clin. Lab Haem 1999;21:427-
428.

04 Espanhol - Ref.: 502

05 Espanhol - Ref.: 502
 Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro
Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro
Symbols used with ivd devices

Conteúdo suficiente para < n > testes Risco biológico

Contenido suficiente para < n > tests Riesgo biológico
Contains sufficient for < n > tests Biological risk

Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa) Marca CE

Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa) Marcado CE
Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy) CE Mark

Material Calibrador Tóxico

Material Calibrador Tóxico
Calibrator Material Poison

Material Calibrador Reagente

Material Calibrador Reactivo
Calibrator Material Reagent

Limite de temperatura (conservar a) Fabricado por

Temperatura limite (conservar a) Elaborado por
Temperature limitation (store at) Manufactured by

Representante Autorizado na Comunidade Europeia Número do lote

Representante autorizado en la Comunidad Europea Denominación de lote
Authorized Representative in the European Community Batch code

Consultar instruções de uso Controle

Consultar instrucciones de uso Control
Consult instructions for use Control

Número do catálogo Controle negativo

Número de catálogo Control negativo
Catalog Number Negative control

Adições ou alterações significativas Controle positivo

Cambios o suplementos significativos Control positivo
Significant additions or changes Positive control

Produto diagnóstico in vitro Controle

Dispositivo de diagnóstico in vitro Control
In vitro diagnostic device Control

Liofilizado Corrosivo
Liofilizado Corrosivo
Lyophilized Corrosive

Ref.: 170309

06 Espanhol - Ref.: 502