Instituto Politécnico Nacional
Unidad Profesional Interdisciplinaria de
Biotecnología
Laboratorio de Biotecnología Molecular
Profesoras:
Flor Selene Villalobos Escobedo
Aida Margarita Zamora Contreras
Bitácora: Práctica 9 “Método para preparar células
competentes de Escherichia coli con CaCl2” y 10
“Transformación de células competentes”
Alumno: Cano Pérez Jeimy Melanie
Equipo: 5
Fecha de entrega: 04/11/2022
Objetivos:
Aprender a preparar células competentes de Escherichia coli con CaCl2.
Conocer la metodología básica para hacer células competentes de Escherichia coli
con CaCl2.
Determinar la viabilidad de las células calcio competentes de Escherichia coli.
Realizar la transformación de células competentes con un plásmido extraído por
lisis alcalina.
Conocer la metodología básica para transformar células competentes con un
plásmido bacteriano.
Determinar la eficiencia de transformación de células competentes de Escherichia
coli preparadas con CaCl2.
Tabla de reactivos
Reactivo Función
CaCl2 (0.1 M) Neutraliza las cargas negativas de la bicapa de fosfolípidos
y ADN.
Glicerol Crio preservante
Tabla 1. Función de reactivos Práctica 9
Reactivo Función
Placas de agar LB- Permite identificar fácilmente las células que se han
Ampicilina transformado con éxito, ya que, sólo las células que
contienen el marcador deben crecer en el agar.
Medio de cultivo líquido Contiene peptona de caseína y extracto de levadura que
LB proporcionan al medio los nutrientes necesarios para el
desarrollo óptimo de la mayoría de los microorganismos.
Medio de cultivo líquido Se utiliza en el paso final de la transformación celular
SOC bacteriana para obtener una eficacia de transformación
máxima de E. coli
Medio de cultivo líquido Preparación y recuperación de células competentes.
2xYT
Tabla 2. Función de reactivos Práctica 10
Metodología
Diagrama 1. Metodología para preparación de células competentes de Escherichia coli con CaCl2
Diagrama 2. Metodología de la preparación de la muestra de interés práctica 10
Diagrama 3. Metodología de transformación por choque térmico (práctica 10)
Cuestionario
Práctica 9
1. ¿Qué tipo de células competentes existen en el mercado?
Existen dos tipos de células competentes:
Quimiocompetentes: El método de inserción del material genético exógeno
es a través de un choque térmico.
Electrocompetentes: El método de inserción del material genético exógeno
es a través de pulsos eléctricos.
2. ¿Cuál es el efecto del calcio para inducir células transformantes?
El tratamiento con CaCl2 neutraliza las cargas negativas de las cabezas de fosfato y
el ADN cargado negativamente. La neutralización de estas cargas elimina la
repulsión natural, lo cual facilita la adsorción del ADN sobre la superficie celular.
3. ¿Por qué es necesario mantener durante todo el proceso de inducción de
competencia las células en hielo?
La baja temperatura ayuda a mantener la permeabilidad de la membrana celular, por
lo tanto, mantiene una alta eficiencia para la absorción de ADN.
4. ¿Cuál es la función del glicerol?
Crio preservante
Práctica 10
1. Qué métodos de transformación conoces, realiza una tabla y coloca método,
como es la técnica, ventajas y desventajas y a qué tipo de célula se aplica.
Método Técnica Ventajas Desventajas Tipo de célula
Choque Térmico El pulso de calor disminuye el Es más fácil y Es importante realizar Células
potencial de membrana de las simple en bien el cambio de químicamente
células competentes, por lo comparación con la temperatura y la competentes
que disminuye la barrera electroporación duración del choque
potencial para el movimiento térmico para obtener
de ADN cargado buenos resultados, de
negativamente hacia el lo contrario no se
citoplasma. obtendrá la
transformación
deseada.
Electroporación Un pulso eléctrico crea poros y Mayor eficiencia, Se debe contar con un Células
un campo eléctrico temporal. más colonias y electroporador, electrocompe-
El campo eléctrico hala el transformaciones presencia de sales o tentes
ADN hacia el extremo más mucho más rápidas burbujas de aire en tu
cargado positivamente o hacia en comparación ADN lo que pueden
el interior de la célula. Cuando con el método de causar un arco
se apaga el campo eléctrico, la choque térmico. eléctrico (perdida de
membrana celular se vuelve a muestra).
sellar y el ADN queda
atrapado dentro de la célula.
2. De acuerdo al tipo de célula competente que usaste que método de
transformación de los anteriores puedes usar
Choque térmico
3. De acuerdo a tu práctica ¿Cuál es el efecto del choque térmico?
El pulso de calor disminuye el potencial de membrana de las células competentes,
por lo que disminuye la barrera potencial para el movimiento de ADN cargado
negativamente hacia el citoplasma.
4. ¿Qué criterios se consideran para elegir el adecuado entre los diferentes
métodos de transformación?
El tipo de célula con el que se esta trabajando, el equipo con el que se cuenta para
elaborar la transformación, la cantidad de células transformadas que se desea
obtener.
5. ¿Qué es un marcador de selección? ¿Cuál se utilizó y qué otros existen?
Es un gen que generalmente confiere resistencia a un antibiótico o genera un
fenotipo particular con el cual puede seleccionarse la célula que incorporó el vector.
En la practica se uso el de resistencia a ampicilina. También existen otros
marcadores como el gen lacZ, GFP, etc.
6. ¿Por qué es importante la selección del vector y construcción génica adecuados
para cierta célula?
Es importante ya que la transformación y la selección bacteriana son pasos cruciales
para realizar otros procedimientos posteriores como lo son la clonación de ADN, la
secuenciación de ADN, la construcción de bibliotecas de ADN, entre otros. Por lo
cual se debe tener especial cuidado en la selección del vector y en realizar
correctamente la transformación para que de esta forma no se tengan errores en los
procedimientos posteriores.
7. A qué se refiere la eficiencia de transformación. Coloca la fórmula para su
cálculo.
La eficiencia de transformación (ET) es el número de unidades formadoras de
colonias producidas por transformar 1 µg de plásmido de ADN en un volumen
conocido de células competentes.
N úmero de colonias que expresan elmarcador de resistenciaa antibiótico
ET =
C antidad de ADN que fueutilizado en el experimento
Referencias
Práctica 9
Pregunta 1: Muñoz, J. M. (2021). Generación de marcadores de peso molecular para la
identificación de fragmentos de ADN (ácido desoxirribonucleico) para ensayos de
electroforésis. Benemérita Universidad Autónoma de Puebla.
Pregunta 2: Serrano-Rivero, Y., Hernández-García, A., & Fando-Calzada, R. (2013).
Comparación de dos métodos para la preparación de células competentes en Escherichia
coli. Revista CENIC. Ciencias Biológicas, 44(2). ISSN: 0253-5688. Recuperado de:
https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=181227534009
Pregunta 3: Kroemer, T. (s/f). Comprensión de las Células Competentes en la
Transformación Bacteriana. Goldbio. Recuperado de:
https://goldbio.com/articles/article/Celulas-Competentes-Transformacion-Bacteriana
Pregunta 4: Baamonde, J. M. (2013). Principios de Criobiología. Bioterios. Recuperado
de: https://www.bioterios.com/post.php?s=2013-05-01-principios-de-criobiologa
Práctica 10
Pregunta 1: Kroemer, T. (s/f). Comprensión de las Células Competentes en la
Transformación Bacteriana. Goldbio. Recuperado de:
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Pregunta 3: Kroemer, T. (s/f). Comprensión de las Células Competentes en la
Transformación Bacteriana. Goldbio. Recuperado de:
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Pregunta 5: Rodríguez, A. S. S., Rizo, A. B. M., & de la Mora, D. A. L. (2013). Biología
molecular. Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud. McGRAW-HILL
INTERAMERICANA EDITORES. Recuperado de:
https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?
bookid=1473§ionid=102743892#1118679752
Pregunta 6: Kroemer, T. (s/f). Comprensión de las Células Competentes en la
Transformación Bacteriana. Goldbio. Recuperado de:
https://goldbio.com/articles/article/Celulas-Competentes-Transformacion-Bacteriana
Pregunta 7: Kroemer, T. (s/f). ¿Cómo Resolver Problemas De Transformación
Bacteriana?. Goldbio. Recuperado de: https://goldbio.com/articles/article/Resolver-
Problemas-De-Transformacion-Bacteriana
