UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA
Escuela Académica Profesional:
Ingeniería en Industrias Alimentarias
DETERMINACIÓN DE BIOMASA
INTEGRANTES:
Muñoz Borda Emy Viviana
López Terrones Thalía
Viton Gonzales Nicol
DOCENTE:
Ing. Ochoa Herrera Gladys
CURSO:
Bioingeniería
CICLO:
IX
Cajamarca, Agosto del 2022
I. Introducción
Biomasa es un término general que se refiere a los microorganismos presentes
en un sistema. Existen muchas maneras de medir la concentración de biomasa,
como por ejemplo masa, volumen, extensión linear de filamentos, dispersión de
luz, conteo de células u organelos.
En la industria alimentaria es de importancia conocer el número de
microorganismos presentes en una muestra. Este conocimiento puede ser
utilizado en estudio de curvas de crecimiento, análisis de alimentos,
preparaciones de inóculos para fermentación, etc.
Existen diferentes métodos para cuantificar el número de microorganismos o
peso (biomasa) de células microbianas en un cultivo; los métodos pueden ser
directos e indirectos. Entre los directos se puede mencionar a la determinación
de peso seco y el recuento de células en cámara de Neubauer.
La determinación de peso seco es un método de cuantificación muy utilizado en
cultivos de gran densidad como hongos y levaduras.
II. Objetivos
- Determinar la biomasa de una solución celular (levadura) mediante método de
peso húmedo.
- Determinar la biomasa de una solución celular (levadura) mediante método de
peso seco.
- Determinar la biomasa de una solución celular (levadura) mediante método
cámara de Neubauer.
III. Marco teórico
III.1. Biomasa
Se refiere a todos los microorganismos que se encuentran presentes en un
sistema, se refiere también a la cantidad de células, personas y seres vivos.
La determinación de la biomasa es una variable importante para los
bioprocesos, para estableces tasas de producción, de consumo de nutrientes y
cálculos de balance en cualquier bioproceso.
III.2. Peso seco
La cantidad total de biomasa presente en una muestra puede medirse en
términos de peso seco por unidad de volumen, ya sea como sólidos en
suspensión totales (SST) o sólidos en suspensión volátiles (SSV). Las células
se separan del líquido bien por centrifugación bien por filtración.
La principal desventaja de estas técnicas es que su determinación incluye no
sólo microorganismos activos sino microorganismos muertos, material
inerte, polímeros extracelulares y materia orgánica adsorbida. Los métodos
gravimétricos son simples, pero consumen bastante tiempo y son poco
reproducibles.
III.3. Peso húmedo
Se obtiene a partir de una muestra en suspensión que es pesada luego de la
separación de las células por filtración o centrifugación. Es una técnica útil
para grandes volúmenes de muestra. La principal desventaja es que el
diluyente queda atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total
de la masa. La cantidad de líquido retenida puede ser importante. Para
corregir el peso húmedo se determina la cantidad de líquido que queda
retenida en el espacio intercelular luego de una centrifugación, para ello se
utilizan soluciones de polímeros no iónicos (como el Dextran) que pueden
ingresar en el espacio intercelular pero no pueden atravesar las paredes
bacterianas.
III.4. Cámara de neubauer
La cámara de neubauer es una cámara de contaje adaptada al microscopio de
campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos con una
depresión en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un
diamante una cuadricula. Es un cuadrado de 3x3mm, con una separación entre
dos líneas consecutivas de 0,25mm. Así pues, el área sombreada y marcada L
corresponde a 1 milímetro cuadrado, la depresión central del cubreobjetos está
hundida 0,1mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un
cubreobjetos este dista de la superficie marcada 0,1mm, y el volumen
comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0,1 milímetro cubico,
es decir 0,1 microlitro.
IV. Materiales
- Levadura de panificación
- Tubo de ensayo
- Pipeta
- Agua destilada
- Matraz
- Vaso precipitación
- Equipos
- Centrifugadora
- Estufa
- Cámara de neubauer
- Balanza electrónica
V. Metodología
V.1. Para determinación de peso húmedo
- Peso de tubos de ensayo vacío
- Colocar 5 ml de muestra en cada tubo de ensayo
- Pesar tubo de ensayo con la muestra
- Llevar a centrifuga a 400rpm por 10 minutos
- Separar la parte liquida del tubo de ensayo
- Pesar el sólido de la muestra
V.2. Para determinación de peso seco
o Pesa el tubo de ensayo vacío
o Coloca 5 ml de muestra en cada tubo de ensayo
o Pesa el tubo de ensayo con la muestra
o Llevar a centrifuga a 400 rpm por 10 minutos
o Llevar a la estufa a 105°C por 4 horas
o Pesar el tubo de ensayo con la muestra seca
Luego se llevó a todas las diluciones para poder medir la turbidez a 550 nm.
VI. Resultados y análisis
Peso de tubo inicial=10g
Peso total (tubo +muestra) =17g
Peso de la muestra seca o húmeda = 7g
Las ecuaciones para la determinación de peso seco y peso húmedo son:
peso de tubo de muestra− peso de tubo vacio
Peso de muestra seca=
volumen de la muestra
peso de tubode muestra−peso de tubo vacio
P . de muestra humeda =
volumen de lamuestra
Peso de muestra seca
CM =
volumen de la muestra
peso de muestra humeda
CM =
volumen de lamuestra
Tabla 1. Peso seco y Peso húmedo de las muestras de 5 ml
Muestra Peso de W tubo + W tubo + Peso en Peso en
tubo vacío muestra muestra húmedo seco
(g) seca (g) húmeda (g) (g/ml) (g/ml)
1 10 15 12 0.4 1
2 10 15 12 0.4 1
3 10 15 12 0.4 1
Promedio - - - 0.4
Tabla 2. Resultados de absorbancia por el espectrofotómetro a 550nm.
Dilución Absorbancia nm
−1
10 2.54
−2
10 0.387
VII. 10
−3
0.359
−4
10 0.054
−5
10 -0.036
CONCLUSIONES
La biomasa de levadura es capaz de absorber cantidades apreciables de
cationes y otros elementos químicos en el medio de crecimiento, aun
cuando estos no sean necesarios para el funcionamiento adecua- do de su
metabolismo.
La determinación de la biomasa mediante peso seco o peso húmedo es un
método y rápido de realizar, en el laboratorio de manera exitosa se pudo
realizar las muestras del peso húmedo, más las muestras del peso seco no
dio algún valor significativo al momento de pesarlos en la balanza, el
contenido de ello fue nulo.
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
IX. Anexo
Fig. 1 Peso de la levadura Fig. 2 Muestra
Fig. 3 Peso de tubo de ensayo vacío Fig. 4 Peso de tubo con la muestra
Fig. 5 Muestra en la centrifuga Fig. 6 Separación de la parte solida de la liquida
Fig. 7 Peso de la muestra húmeda Fig. 8 Tubos de ensayo en la estufa
IX.1. Fig. 9 Curva de la cámara de neubauer
