CATEDRATICA : AURA DAYANA HERNANDEZ E.

ASIGNATURA : MICROBIOLOGIA

TEMA : REPORTE DE LABORATORIO # 1, 2, 3

Coprocultivo, Urocultivo, Hemocultivo

Antibiograma y pruebas Bioquímicas

Lectura de discos en el antibiograma

INTEGRANTES : ELIZ YAMILETH AGUILERA

EDITH JAMILETH

No. CUENTA : 122010017

LUGAR Y FECHA: TEGUCIGALPA,

07/08/22
 INTRODUCCION
UROCULTIVO
Siembra en medios diferenciales
Comenzamos realizando el urocultivo, se realiza la siembra de un medio de
cultivo con una pequeña cantidad de orina extraída asépticamente.
Este método se usa para diagnosticar bacteriuria, este método sirve para
identificar a los microorganismos que infectan al aparato urinario.

Antibiograma y pruebas bioquímicas

En el siguiente reporte de laboratorio abarcamos dos temas importantes para
la asignatura de Microbiología: Antibiograma y Bioquímica. El antibiograma,
tiene Como objetivo identificar al microorganismo causante de una infección
de las vías urinarias y, además, determinar cuál es su perfil de sensibilidad y
de resistencia a los antibióticos que normalmente son utilizados para tratar
dicha infección. Por lo tanto, a partir del resultado del examen, el médico
puede indicar el medicamento antimicrobiano más adecuado para la
persona.

Un urocultivo se considera negativo cuando, después de 18-24 horas

de incubación de la orina en medio de cultivo, no se nota crecimiento
de colonias de bacterias.

LECTURA DE PRUEBAS BIOQUIMICAS

En esta práctica realizamos las pruebas bioquímicas y su respectiva lectura

Estas pruebas se realizan en medios solidos como ser los agares o en medios
semi sólidos y líquidos que son los caldos

En la lectura implementamos la aplicación de sensidiscos separándolos a una

distancia de 24mm del centro y de un sensidiscos al otro un poco más
cercanos se pueden poner en la placa hasta 12 sensidiscos en nuestro caso
usamos 5 por cada placa. Vamos a decir que las categorías de interpretación
son sensible, intermedio o resistente.
 OBJETIVOS

Urocultivo

Al realizar urocultivo vamos a detector la presencia de bacterias, si hubo o no

crecimiento bacteriano, este procedimiento debe realizarse en el día 1

La siembra se va a realizar en agar Maconkey y en tubos de ensayo

Observar en el microscopio si hubo crecimiento con prueba Gram, se

realizará la lectura de prueba bioquímicas y el antibiograma al 3 día.

Pruebas bioquímicas

 Es necesario realizar las pruebas bioquímicas para así poder saber con
mayor exactitud contra que bacteria nos estamos enfrentando y poder
dar un mayor diagnóstico, efectuándose en el día 2.
 Observar crecimiento en MCK (Bacilo Gram-)
 Realizar antibiograma (dar tratamiento)
 determinar cuál es su perfil de sensibilidad y de resistencia a los
antibióticos que normalmente son utilizados para tratar dicha infección.

LECTURA DE DISCOS EN EL ANTIBIOGRAMA

Determinar la susceptibilidad de los microorganismos ante los agentes

microbianos presentes.

Uso de antibióticos para inhibir los procesos vitales de estos

microorganismos impidiendo de esta forma el desarrollo de los
microorganismos y así evitar la reproducción.
 RESUMEN

Urocultivo

El urocultivo se hace colocando la orina en un medio de cultivo como

ser: Mueller hinton, Agar sangre, Agar soya tripticasa. Si la orina
contiene gérmenes, en 48 horas se podrá identificar la formación de
colonias de bacterias y así se puede identificar qué tipo de bacteria
está presente y que antibióticos son eficaces para luchar contra ellas.

Antibiograma:
Medición de resistencia a los antibióticos. El antibiograma es la prueba
microbiológica que se realiza para determinar la susceptibilidad (sensibilidad
o resistencia) de una bacteria a un grupo de antibióticos.

Pruebas Bioquímicas:

Son una serie de análisis que sirven para determinar la actividad metabólica
de una cepa pura de microorganismos. Son empleadas principalmente para
la identificación y clasificación de bacterias y hongos.

En estas utilizamos varios medios como ser: TSI, MIO, LISINA, CITRATO DE
SIMMONS, FENILALANINA

LECTURA DE DISCOS EN EL ANTIBIOGRAMA

El objetivo es dar un tratamiento específico, basándonos en la tabla de

antibióticos y es base a esto lograremos dar el resultado.

Identificaremos si la bacteria es resistente, intermedia o sensible, vamos a

determinar su concentración a que familia pertenece y conocer su
abreviatura.

Al final daremos un reporte bioquímico.

 REPORTE PRACTICA No 1, 2, 3

TEMA: Urocultivo

Antibiograma y pruebas bioquímicas

Lectura de discos en el antibiograma

1er día de urocultivo

Se realiza la siembra en medios diferenciales y se realiza en el microscopio

la tinción de Gram.

Se reporta si hubo crecimiento bacteriano o no hubo.

2do. Día de urocultivo

Si observa crecimiento en MCK (Bacilo Gram -)

Continuar con la siembra:

 batería de pruebas bioquímicas identificación de enterobacterias

(identificar la bacteria)
 Realizar el antibiograma

Urocultivo

Reactivos utilizados:

 Placa de Petri medio MCK

 Cristal violeta
 Lugol
 Alcohol- acetona
 Safranina
 Porta objetos
 Microscopio
 Reactivos utilizados:

 Placa (medio MCK), (Mueller Hinton)

 Mechero
 Asa en anillo
 Asa en punta
 Hisopos
 Medios líquidos
 Solución salina estéril
 Discos de antibióticos
 Pinza
 Gradillas

Material personal de Bioseguridad

 Gabacha
 Guantes
 Mascarilla

 Realizamos la siguiente técnica de siembra en los distintos medios de

cultivo

- Tomamos el medio TSI, esterilizamos el Asa en punta y realizamos

una picadura y estria en la superficie en forma de zig-zag
 TSI Rojo ladrillo sin inocular

-Tomamos el medio MIO, esterilizamos el Asa en punta lo llevamos al fondo

y realizamos la picadura

MIO violeta sin inocular

- Tomamos el medio LISINA, esterilizamos el Asa en punta llevamos

al fondo del tubo y hacemos picadura y estria en la superficie en
forma de zig-zag
 LISINA violeta sin inocular

- Tomamos el medio CITRATO, esterilizamos el Asa en anillo y

realizamos estria en la superficie del tubo en forma de zig-zag

CITRATO DE SIMMONS verde sin inocular

- Tomamos el medio FENILALANINA, esterilizamos el Asa en anillo

y realizamos estria en la superficie en forma de zig-zag
 FENILALANINA Amarillo sin inocular

Después de haber realizado esta técnica en cada medio incubamos de 18 –

24 hrs a temperatura de 37°C

Lectura:

tendremos en cuenta lo siguiente

En el medio TSI

1. Lactosa
2. Sacarosa
3. Glucosa
4. H2s
5. Gas

MIO:

1. Movilidad
2. Indol
3. Ornitina

LISINA:
1. Descarboxilación
CITRATO DE SIMMONS

1. Utiliza citrato

FENILALANINA:

1. Enzima fenilalanina desaminasa

ANTIBIOGRAMA

Se utilizará el método de Kirby-bauer o el método de difusión en disco

Realizar escala de Mac farland 0.5 (comprar con escala comercial)
Inoculamos con 2 – 3 colonias del crecimiento bacteriano de MCK
mezclamos por agitación en solución salina estéril ( sse) con el Asa
esterilizada o con el hisopo esteril , lo introducimos y luego quitamos
exceso de liquid por las páredes del tubo
Realizamos el extendido en 4 direcciones sin dejar espacios con el
hisopo dejar secar y colocamos los sensidiscos en forma de dirección
de las estrellas, Podemos colocar 5 o más. Incubamos de 18- 24 hrs
  Después de transcurrir las 18 – 24 hrs se realizará la lectura e
interpretación de los resultados:


 Sensible : El microorganismo presenta una gran área de inhibición
causada por el fármaco 95 % éxito.

 Intermedio: Se presenta un halo de inhibición más reducido.

 Resistente: Presenta muy poco o casi nada de halo.

Resultados
Lectura de pruebas bioquímicas
En el medio TSI

Lactosa

(P)

6. Sacarosa (N)
7. Glucosa (N)
8. H2s (N)
9. Gas (P)

En el medio TSI

1. Lactosa (P)
2. Sacarosa (N)
3. Glucosa (P)
4. H2s (N)
5. Gas (P)
En el medio TSI

Lactosa

(P)

1. Sacarosa (N)
2. Glucosa (P)
3. H2s (N)
4. Gas (P)

MIO:

1. Movilidad
2. Indol
3. Ornitina

4. Movilidad (P)
5. Indol (P)
6. Ornitina (P)

7. Movilidad (P)
8. Indol (N)
9. Ornitina (P)

LISINA:
2. Descarboxilación (N)

LISINA:
3.
4. Descarboxilación (N)
 LISINA:
5. Descarboxilación (N)

CITRATO DE SIMMONS

2. Utiliza citrato (N)

CITRATO DE SIMMONS

Utiliza citrato (N)

CITRATO DE SIMMONS

Utiliza citrato (P)

FENILALANINA:

2. Enzima fenilalanina desaminasa (N)

FENILALANINA:

1. Enzima fenilalanina desaminasa (N)

FENILALANINA:

1. Enzima fenilalanina desaminasa (N)

 LECTURA DE DISCOS EN EL ANTIBIOGRAMA

Resultados

Fam Abrv Ct S I R

Moxifloxacin MXF 5 

Nalidi xicacid NA 30 >17

Amikacin AK 30 >17

Cefadroxil CDX 30 

Cephalexin CL 30 

Reporte bioquímico: Shigella E. (aglomeración aglutinar)

Fam Abrv Ct S I R
Cefalexin CL 30 R
ACIDO NIA 30 <17
NALIDIXICO
AMIKACIN AK 30 <17
MOXIFLOXACINA MXF 5 <17
CEFOXITIN FOX 30 <17

Reporte bioquímico: Enterobacter aglomerans

 CONCLUSION

El urocultivo

El urocultivo es un examen muy necesario para la detección de

bacterias, presentes en la orina, la finalidad de este examen de
laboratoriol es el diagnostico bacteriuria ya que en la orina hay mucha
susceptibilidad para la reproducción de microorganismos en el
aparato urinario.
Gracias a estos métodos como ser urocultivo, pruebas bioquímicas la
lectura de discos del antibiograma podemos tener un diagnóstico
preciso y el tratamiento adecuado para la eliminación de estos
microorganismos dañinos.
Los antibióticos son herramientas imprescindibles para el tratamiento
de infecciones bacterianas con el fin de preservar la sanidad animal y,
por tanto , el bienestar animal y la bioseguridad alimentaria.

Sin embargo, las bacterias son capaces de desarrollar mecanismos

de resistencia, comprometiendo su eficacia a medio, largo plazo y con
la ayuda del antibiograma y pruebas bioquímicas se descubren las
bacterias que afectan al ser humano hoy en día.
Los resultados del antibiograma pueden variar de un laboratorio otro.
Por lo tanto, es mejor consultar a un médico con el fin de que los
interprete correctamente y prescriba el tratamiento más adecuado.
 BIBLIOGRAFIA

 Información de Antibiograma y Lectura de

bioquímica.

Doctora Aura Hernández Escober

Reportes realizados en la práctica de

laboratorio

 https://static.tuasaude.com/media/article/antibiograma

(imágenes de los anexos)

 ANEXOS

UROCULTIVO

Pruebas bioquímicas
Lectura de discos antibiograma
Antibiograma (sensidiscos)

Extendido
CATEDRATICA: AURA DAYANA HERNANDEZ E.

ASIGNATURA : MICROBIOLOGIA

TEMA : REPORTE DE LABORATORIO # 3

DESCARTE DE MATERIAL

INTEGRANTES: ELIZ YAMILETH AGUILERA

EDITH YAMILETH

No. CUENTA : 122010017

LUGAR Y FECHA: TEGUCIGALPA,

DESCARTE DE MATERIAL
 DESCARTE DE MATERIAL

Manejo interno de residuos (descarte de cultivos inoculados, sólidos y

líquidos) material sucio
Hablaremos sobre la normativa de manejo y descarte, debemos
regirnos por las normas y manejo de procedimientos internos de los
residuos que quedan en nuestro laboratorio, esta normativa debe ser
cumplida por cada laboratorio y en cada facultad de laboratorio

Para realizar el manejo adecuado nos regiremos por las normas

Establecidas debemos respetar el uso y manejar correctamente los

colores ya establecidos:
Bolsa color negra: se usa para los residuos comunes, estos no van a
presentar ningún peligro es como los desechos comunes que salen de
cada hogar.
Bolsa roja: se usa para el desecho de residuos biológicos, esta bolsa no
debe ir muy cargada y debe de pasar por la autoclave, lo que
desechamos en esta bolsa es material descartable que estuvo en
contacto con agentes contaminantes, como ser los cultivos ya que esto
es peligroso e infectivo.
Bolsa amarilla: su uso es para los residuos especiales, la única
disposición final de esta bolsa será la incineración no basureros
comunes, no ríos, mar únicamente la incineración, el traslado de este
será en transporte interno de los laboratorios el personal que traslada
estos desechos debe cumplir los márgenes de seguridad y la asepsia
adecuada para evitar la contaminación cruzada.
 OBJETIVOS

 Dejar en orden y con los márgenes de asepsia el laboratorio

 Asear lo reutilizable

 Descartar lo que ya no se puede reutilizar

 Hacer uso de los controles:

Fiscos y químicos y el control biológico
 RESUMEN

A continuación, se presentan algunas medidas que se deben tomar en

cuenta para manipular y eliminar el material contaminado dentro del
laboratorio.
 No se debe descartar ningún material contaminado directamente
al desagüe ni en los depósitos de basura.
 Todo el material contaminado (vidrio, metálico, etc.) deberá ser
colocado en
recipientes irrompibles y resistentes al calor, ubicados en el área
de trabajo. Si
el material es desechable debe ser colocado directamente en las
bolsas rojas
de desechos biológicos para posteriormente ser esterilizados y
descartados.
 No se debe retirar el material contaminado una vez que ha sido
colocado en los recipientes destinados a su recolección, pues ello
puede ocasionar accidentes por cortaduras, pinchazos o contacto
directo con material contaminado.
 Todos los recipientes que contienen material contaminado
deberán trasladarse al área de esterilización, lavado y preparación
en carros diseñados para transportar material.
 Todo material reutilizable contaminado deberá seguir la siguiente
secuencia de tratamiento:
 Esterilización: La esterilización por calor húmedo
(autoclave) es uno de los métodos más empleados para la
descontaminación de medios de cultivo y cualquier material
que contiene sustancias que se pueden adherir al emplear
la esterilización por calor seco (horno).
• Lavado
• Secado
• Preparación
 • Esterilización
• Almacenamiento
 Todo material no reutilizable contaminado deberá seguir la
siguiente secuencia de tratamiento:
 Esterilización (autoclave o incineración) en bolsas rojas
plásticas de desechos biológicos, marcadas con un código
de color.
 Eliminación de las bolsas bien anudadas.

 Se recomienda que el material a desechar se coloque en contacto

con una solución desinfectante antes de su esterilización.
 Para manipular los recipientes con material contaminado se debe
utilizar guantes resistentes, delantales plásticos, botas, gorros y
otros elementos de protección, los cuales deben adaptarse a la
tarea que se va a realizar y mantenerse en buenas condiciones
de higiene.

En caso de que se produzca la ruptura de uno de los guantes,

éste debe retirarse y descartase en bolsas plásticas;
inmediatamente se debe lavar sus manos con abundante agua y
jabón, colocar una solución antiséptica y
colocar un nuevo par de guantes.
 Se deben mantener en óptimas condiciones de higiene todos los
recipientes donde se coloca el material contaminado, así como
los carros para transporte de material y las áreas de disposición
final del material de desecho.
 REPORTE
 Descarte de material
Tubos de ensayo (los lavamos) y los pusimos a secar en las gradillas
Las placas las descartamos

Control Físico:
 Tiempo: 20 minutos
 Temperatura: 120-121° C
 Presión: 15 Lbs (1 Atm)

Control químico:
 Usamos la cinta testigo
 Óxido de etileno

Control biológico
 Bacillus stearothermophilus
 Agar sangre
 Agar Soya tripticasa
 Agar chocolate
 CONCLUSIONES

Se puede concluir que al no realizarse las adecuadas técnicas

de almacenamiento existe peligro constante al interior de los
laboratorios, poniendo en situación de riesgo a las personas
que tienen contacto con los laboratorios y sus equipos. Ya que
son desechos peligrosos que deben manejarse con cuidado
debido a su riesgo biológico.
 BIBLIOGRAFIA

 https://www.univalle.edu.co/~saludocu/normas.htm

 PRACTICAS EN EL LABORATORIO UCENM

 ANEXOS

BOLSA NEGRA: Material BOLSA ROJA: Material descartable que haya

descartable (placas, tubos,
tomado contacto con agentes biológicos
guantes) que NO hayan estado en
contaminantes. • Material plástico utilizado para
contacto con agentes
cultivos
contaminantes.

Esterilización
CATEDRATICA : DRA. AURA DAYANA HERNANDEZ

ASIGNATURA : MICROBIOLOGIA

TEMA : REPORTE LABORATORIO # 4

ZIEHL NEELSEN

INTEGRANTES : ELIZ YAMILETH AGUILERA

EDITH YAMILETH
No. CUENTA 122010017

LUGAR Y FECHA : Tegucigalpa 07 DE AGOSTO DEL 2022

 INTRODUCCION

Es una tinción diferencial utilizada para la identificación de bacteria

Mycobacterium tuberculosis.

Se basa en calentamiento inicial que permite aumentar tanto la energía

cinética de las moléculas del colorante (fucsina de ziehl Nielsen), como
alcanzar rompimiento de las estructuras cristalinas de la ceras, favoreciendo
así el ingreso del colorante a la pared bacteriana y al interior de la célula. Al
suspender el calentamiento y enfriar con agua, se provoca una nueva
solificación de los ácidos grasos (ceras) de modo que el colorante queda
atrapado dentro de dichas estructuras cristalinas y ya no puede salir de las
bacterias.
 OBJETIVOS

 Diferenciar BAAR

 Identificar Mycobacterium tuberculosis

 Bacilos ácido alcohol Resistentes

 Esta tinción se emplea para bacterias que son más fáciles de teñir, y no
se tiñen con colorantes convencionales, ya que estos no penetran el
interior de estas bacterias

 Crear contraste entre las estructuras que se desean observar

 Observar algunos parásitos unicelulares ( Cryptosporidium parvum)

 RESUMEN

El fundamento de esta técnica de tinción se basa en las propiedades de la

pared celular de estos microorganismos. La pared está formada por un tipo
de ácidos grasos llamados ácidos micólicos; estos se caracterizan por
presentar cadenas muy largas.

Cuando los ácidos grasos presentan estructuras muy largas, estos pueden
retener los colorantes con mayor facilidad. Algunos géneros de bacterias son
muy difíciles de teñir mediante tinción de Gram, debido al alto contenido de
ácidos micólicos de la pared celular.

En la tinción de Ziehl-Neelsen se utiliza el compuesto fenólico

carbol fucsina, un colorante básico. Este tiene la capacidad de
interactuar con los ácidos grasos de la pared celular, la cual es de
textura cerosa a temperatura ambiente.

La tinción con carbol fucsina es mejorada en presencia de calor,

debido a que la cera se derrite y las moléculas de colorante se
mueven con mayor rapidez hacia el interior de la pared celular.

LA MUESTRA.
La muestra más examinada es el esputo debido a que, como se ha dicho, la
tuberculosis pulmonar es la más frecuente. Sin embargo, dado que la
enfermedad puede manifestarse en cualquier órgano, con menor
frecuencia
 REPORTE PRACTICA # 4

 COMO RECOLECTAR LA MUESTRA:

1. Enjuagar la boca con agua para eliminar el exceso de bacterias que

puedan contaminar es esputo
2. Tomar aire profundamente por la boca
3. Retener el aire en los pulmones por unos segundos
4. Toser fuertemente, cubriendo la boca, para eliminar la flema o esputo
desde los pulmones
5. Depositar la flema o esputo en el frasco colector de muestras
6. Repetir los pasos 2,3,4, y 5 , las veces nesecarias hasta obtener una
muestra de por lo menos 5 mililitros de esputo
7. Tapar bien el frasco colector

8. Verificar que lleve el nombre y la fecha en la etiqueta del frasco están

bien escritos
9. Entregar el frasco colector bien tapado al personal que realizara el
exámen en el laboratorio.
 Materiales y reactivos utilizados:

Asas de siembra
Mecheros
Porta objetos
Aceite de inmersión
Fuscina fenicada
Alcohol ácido
Azul de metileno
Pinzas
Microscopio

 Material personal de Bioseguridad

Gabacha
Guantes
Mascarilla
Pasos para tinción:

 Al tener la muestra ya recolectada con una Asa esterilizada colocamos

un poco de muestra en una porta objetos esparcirla por la lámina, luego
esperar un minuto para que seque, fijarla al calor

 Cubrir el frotis con fucsina fenicada de 5 -10 minutos durante este

tiempo y de vez en cuando calendar hasta que el colorante empiece a
emitir vapores (evitar que seque y hierva)

 Lavar con agua

 Decolorante alcohol ácido 1 minuto

 Lavar con agua

 Cubrir la preparación con azul de Metileno 1 minuto

 Lavar con agua y dejar secar

 Observar al microscopio a 100 x con aceite de inmersión

  Resultados exámen microscópico

1. No se encontraron BAAR en 100 campos observados

2. Se observaron de 1 a 9 BAAR en 100 observados
3. Se observaron entre 1a 99 BAAR en 100 campos observados
4. Se observaron 1 – 10 BAAR por campo en su campo observado
5. Se observaron más de 10 BAAR por campo en 20campos observados

 Informe

1. No se observó BAAR
2. Número exacto de bacilos en 100 campo
3. Positivo +
4. Positivo + +
5. Positivo + + +

 Para identificar en la lámina

Color Rojos Positivo

Color Azul Negativo

 CONCLUSION

La tinción de ziehl neelsen es una tinción muy usada en la práctica clínica

y se usa para la identificación de las bacterias ácido alcohólico resistente
como lo son el Micoplasma, las micobacterias entre otros.
Debido a que la pared celular de algunas bacterias, como
Mycobacterium tuberculosis están provistas de un alto contenido de
lípidos y ácidos micólicos, les confiere características únicas en la fijación
de un colorante tan fuerte, que resisten la decoloración con alcohol
ácido. Estas propiedades ácido-resistentes de las microbacterias
empleando la técnica de Ziehl Neelsen permiten un diagnóstico rápido
y presuntivo para detectar el bacilo de la tuberculosis pulmonar.
 BIBLIOGRAFIA

 TINCION Y TECNICA DE ZIEHL NIELSEN

DRA.AURA HERNANDEZ

 FOTOGRAFIAS
TECNICAS APLICACADAS EN LABORATORIO POR ESTUDIANTES

 ANEXOS - IMAGENES
microbiio.info/tincion-de-ziehl-neelsen
 ANEXOS

POSITIVO + + + NEGATIVO