HDL LE Ref.

: 98
Instrucciones de Uso

Finalidad . Sistema para la determinación homogénea directa del El método posee excelente correlación con el Método Designado de
colesterol HDL en suero y plasma. Comparación (MDC)3 y presenta características de precisión y exactitud
que superan significativamente los requisitos mínimos de desempeño
Uso profesional. propuestos por el Programa Nacional de Educación en Colesterol (NCEP),
en vigencia desde 19981.
[Solamente para uso diagnóstico in vitro.]
La especificidad deseada es conseguida por la acción del detergente
Principio . La selectividad del método está basada en las tecnologías presente en el reactivo 2 que posee la propiedad de solubilizar solamente
de aceleración de la reacción de la colesterol oxidasa (CO) con el al colesterol HDL.
colesterol libre de las lipoproteínas no-HDL y la solubilización selectiva de
las partículas HDL por acción de un detergente específico. Concentraciones de triglicéridos de hasta 1800 mg/dL, bilirrubina hasta
60 mg/dL, hemoglobina hasta 1000 mg/dL y ácido ascórbico hasta
En la primera fase de la reacción, el colesterol libre de las partículas 100 mg/dL no interfieren significativamente en la reacción.
no-HDL es sometido a una reacción enzimática catalizada por la
colesterol oxidasa (CO) en presencia del Acelerador. El peróxido de El sistema de calibración está referenciado al SRM 1951 del National
hidrógeno producido es consumido por la reacción de la peroxidasa con Institute of Standards and Technology (NIST), lo que le garantiza
la disulfobutilmetatoluidina sódica (DSBmT) formando un producto característica única de rastreabilidad.
incoloro.
La flexibilidad del método lo torna fácilmente aplicable a analizadores
La segunda reacción utiliza un detergente capaz de solubilizar automáticos capaces de procesar reacciones de punto final con dos
específicamente el colesterol HDL. Con la acción de las enzimas reactivos y mediciones a 600 nm.
colesterol esterasa (CE) y colesterol oxidasa y acoplamiento con la
Metodologia . Acelerador-Detergente Selectivo.

(
4-aminoantipirina y el cromógeno DSBmT, en reacción catalizada por la
peroxidasa, hay un desarrollo de color proporcional a la concentración de
colesterol HDL en la muestra. Reactivo

1. - Reactivo 1 - Almacenar entre 2 - 8 ºC.

HDL, LDL, VLDL Acelerador + CO LDL, Quilomicrones + HDL

)
Contiene tampón pH 6,0; colesterol oxidasa <1000 U/L, peroxidasa
y Quilomicrones y VLDL no reactivos <1300 U/L, DSBmT <1 mmol/L, acelerador <1 mmol/L y azida sódica
DSBmT + Peroxidasa
<0,06%.
Detergente selectivo
HDL Colesterol HDL solubilizado 2. - Reactivo 2 - Almacenar entre 2 - 8 ºC.

<
Contiene tampón pH 6,0; colesterol esterasa <1500 U/L,
Colesterol esterasa 4-aminoantipirina <1 mmol/L, ascorbato oxidasa <3000 U/L,
Colesterol HDL solubilizado Colestenona + H2O2 detergente <2% y azida sódica 0,06%.
Colesterol oxidasa

Peroxidasa
3. - Calibrador - Concentración en el rótulo del frasco.
H2O2 + DSBmT + 4-aminoantipirina Antipirilquinonimina + 4 H2O Almacenar entre 2 - 8 ºC.
Reactivo Liofilizado. Preparación conteniendo HDL humano, tampón
50 mM, Cloruro de sódio >150 nM y estabilizadores <15%.
Características del sistema . Debido a la importancia de la
medición exacta del Colesterol HDL, es deseable utilizar un método de Los reactivos no abiertos, almacenados en las condiciones indicadas son
referencia. El método de referencia que combina la ultracentrifugación estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo.
con la precipitación química para separar las HDL, dosando el colesterol
con el método de Abell-Kendall, lleva mucho tiempo y operaciones, y Los reactivos 1 y 2, cuando mantenidos en bandeja refrigerada en el
tiene aplicación limitada en el laboratorio clínico6. equipo, son estables hasta 4 semanas. Este período de estabilidad puede
ser cambiado debido a las características y condiciones de manutención
El sistema HDL LE de Labtest Diagnóstica es un método homogéneo del equipo. Por lo tanto, sugerimos que el control de la calidad sea
líquido para la medición directa del colesterol HDL siendo un proceso utilizado para monitorear el desempeño de los reactivos. Los reactivos
simple y bien definido que brinda confianza por la exactitud de la después de abiertos cuando almacenados bien vedados entre 2 y 8 ºC y
metodología. no sometidos a contaminaciones química o microbiana, son estables
hasta la fecha de expiración indicada en el rótulo.

01 Español - Ref.: 98
 Las muestras que contienen concentraciones de los interferentes
Precauciones y cuidados especiales
mayores que los arriba referidos deben ser diluidas con NaCl 150 mmol/L
Los cuidados habituales de seguridad se deben aplicar en la (0,85%) antes de realizar los ensayos. Multiplicar el resultado obtenido
manipulación de los reactivos, los cuales no deben ser pipeteados con la por el factor de dilución.
boca.
Preparación del calibrador . Adicionar 1,0mL de agua, calidad
El calibrador contiene derivados de sangre humana y presentó resultados reactivo (ver Observación Nº 2), al contenido del frasco de calibrador.
negativos para la presencia de HBsAg y anticuerpos HCV y HIV Dejar en reposo durante 5 minutos. Mezclar por inversión suave evitando
empleando ensayos aprobados. Sin embargo, ningún test conocido la formación de espuma. Estable 7 días entre 2 - 8 ºC y 30 días a 20 ºC
puede asegurar que productos derivados de sangre humana no negativos en un recipiente herméticamente cerrado para evitar la
transmitan enfermedades infecciosas. Por lo tanto, se recomienda evaporación del solvente. Para evitar congelamientos y
manipularlas como siendo potencialmente infecciosas, siguiendo las descongelamientos repetidos, sugerimos separar el calibrador en
normas establecidas para bioseguridad. alícuotas antes de congelar. Después de descongelar, homogeneizar bien
antes de su utilización. No usar vórtex o similar.
Los reactivos contienen azida sódica, que es tóxica. Se deben tomar
precauciones para evitar la ingestión y en caso de contacto con los ojos,
se deben lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y procurar Procedimiento
auxilio médico. La azida puede formar compuestos altamente explosivos Este procedimiento no se aplica a analizadores semi-automáticos que
con las cañerías de plomo y cobre. Por lo tanto, utilizar grandes utilizan únicamente cubeta de flujo. Están disponibles aplicaciones para
volúmenes de agua para descartar los reactivos. sistemas automáticos y semi-automáticos.

Material necesario y no provisto Rotular 2 tubos de ensayo y proceder como sigue:

1. Fotómetro capaz de medir con exactitud absorbancias a 600 nm.

Test Calibrador
2. Incubador o baño-Maria a 37 ºC.
Muestra 0,01 mL
3. Pipetas para medir muestra y reactivos.
Calibrador 0,01 mL
4. Cronómetro. Reactivo 1 0,75 mL 0,75 mL

Muestra Mezclar e incubar a 37 ºC durante 5 minutos. El nivel del agua en el baño

Usa suero o plasma (heparina, litio y EDTA). Las muestras con citrato u debe ser superior al nivel de los reactivos en los tubos de ensayo.
oxalato no deben ser usadas porque dan resultados falsamente Determinar las absorbancias A1 de la muestra y del calibrador a 600 nm,
disminuidos. ajustando el cero con agua desionizada.

Las muestras de suero o plasma no deben permanecer entre 15 - 30 ºC Reactivo 2 0,25 mL 0,25 mL
por más de 14 horas. Cuando las determinaciones no serán realizadas
dentro de las 14 horas, las muestras pueden ser almacenadas entre
Mantener a 37 ºC durante 5 minutos. Determinar las absorbancias A2 del
2 - 8 ºC por 7 días y por 30 días a 20 ºC negativos. Se deben almacenar a
test y del calibrador a 600 nm, ajustando el cero con agua desionizada.
temperaturas £70 ºC negativos cuando hubiera necesidad de
Las absorbancias son estables por 60 minutos.
preservación por períodos mayores de tiempo. Evitar congelamientos y
descongelamientos repetidos. Las muestras descongeladas deben ser Si el fotómetro utilizado posee recursos para lectura bicromática, utilizar
bien homogeneizadas antes de su utilización. No usar vórtex o similar. No un filtro primario con emisión a 600 nm y un filtro secundario con emisión
usar muestras con señales de contaminación microbiana. entre 660 y 700 nm.
Como ningún test conocido puede assegurar que muestras de sangre no
transmiten infecciones, todas ellas deben ser consideradas como Cálculos . Ver Linealidad.
potencialmente infectivas. Así siendo, deberán ser manipuladas
La primera lectura de la absorbancia (A1) debe ser corregida al volumen
siguiendo las normativas establecidas para biosseguridad.
final de la reacción obteniéndose A1cor, antes de realizar el cálculo de la
Para descartar los reactivos y el material biológico sugerimos aplicar las concentración de HDL.
normas locales, estatales o federales de protección ambiental.
A1cor = A1 x 0,75

Interferencias Test (A2-A1cor)

Colesterol HDL (mg/dL) = x CC
Concentraciones de bilirrubina total de hasta 60 mg/dL, hemoglobina Calibrador (A2 -A1cor)
hasta 1000 mg/dL, ácido ascórbico hasta 100 mg/dL, gammaglobulinas
hasta 5000 mg/dL y triglicéridos hasta 1800 mg/dL no interfieren CC: concentración del calibrador
significativamente en la reacción.

02 Español - Ref.: 98
Ejemplo Se sugiere utilizar las preparaciones estabilizadas de la línea Qualitrol y
Qualitrol H de Labtest para el control interno de la calidad en ensayos de
Los datos fueron obtenidos con lecturas bicromáticas 600/700 nm: química clínica.

Test: A1 = 0,004 A1cor = 0,003 A2 = 0,080 Valores deseables o recomendados . Los valores siguientes
Calibrador: A1 = 0,002 A1cor = 0,0015 A2 = 0,085
sustituyen los valores de referencia y fueron determinados a partir de
datos epidemiológicos tratados estadísticamente, que relacionan las
Concentración del Calibrador: 45,7 mg/dL
concentraciones del colesterol con la prevalencia de dolencia coronaria
0,080-0,003 isquémica (DCI).
Colesterol HDL (mg/dL) = x 45,7 = 42,1
0,085 - 0,0015 2
Adultos . Clasificación ATPIII - Colesterol Total, LDL y HDL (mg/dL)
Debido a la gran reproducibilidad que puede ser obtenida con la
metodología, puede ser empleado el método del factor. Colesterol Total
Deseable <200
CC Umbral elevado 200 - 239
FACTOR =
Elevado ³240
Calibrador (A2 - A1cor)

Colesterol HDL (mg/dL) = Muestra (A2 -A1cor) x Factor

Colesterol LDL (mg/dL)
Ejemplo Óptimo <100
45,7 Umbral óptimo 100 - 129
Factor = = 547 Umbral elevado 130 - 159
0,085 - 0,0015 Elevado 160 - 189
Muy elevado ³190
Colesterol HDL (mg/dL) = (0,080-0,003) x 547 = 42,1

Calibración Colesterol HDL (mg/dL)

El calibrador es rastreable al Standard Reference Material (SRM) 1951 do Bajo <40
National Institute of Standards and Technology (NIST). Elevado (deseable) ³60
Calibraciones manuales
Obtener el factor de calibración al usar un nuevo lote de reactivos o
cuando el control de calidad lo indique.

Sistemas automáticos Niños y adolescentes9

Blanco de reactivo: agua o solución de cloruro de sodio 150 mmol/L Colesterol Total (mg/dL)
(0,85%); Edad: 2 a 19 años
Estándar: usar el calibrador del producto; Deseable <170
Intervalos de calibración; Limíte 170 - 199
Calibración de 2 puntos al cambiar de lote; Elevado ³200
Calibración de 2 puntos cuando el control de calidad lo indique.

Colesterol LDL (mg/dL)

Linealidad
Edad: 2 a 19 años
La reacción es lineal entre 2,5 y 200 mg/dL. En casos raros de valores Deseable <110
mayores a 200 mg/dL, diluir la muestra con NaCl 150 mmol/L (0,85%), Limíte 110 - 129
realizar una nueva determinación y multiplicar el resultado obtenido por el Elevado ³130
factor de dilución.

Control interno de calidad . El laboratorio debe mantener un Colesterol HDL (mg/dL)

programa de control interno de calidad que defina con claridad los Edad: <10 años Deseable ³40
reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para Edad: 10 a 19 años Deseable ³35
especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones
correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados
para evaluar la imprecisión y desviaciones de calibración. Recomiéndase Características de desempeño8
utilizar un sistema de reglas de control para verificar la estabilidad del
sistema de medición7. Exactitud . La exactitud del método fue verificada por comparación
3
con el MDC obteniéndose los siguientes resultados:

03 Español - Ref.: 98
 Método Designado Significancia clínica . Existen fuertes evidencias de que el
de Comparación HDL LE colesterol es un factor de riesgo directo para la Dolencia Coronaria
(MDC) Isquémica (DCI). Estudios retrospectivos y prospectivos demuestran
Número de muestras 52 52 claramente una interrelación curvilineal entre los niveles del colesterol
Intervalo (mg/dL) 32,0 - 133,0 33,6 - 133,0 sérico, más específicamente el colesterol LDL, y la prevalencia de DCI.
Media (mg/dL) 56,3 58,3
Ecuación de regresión HDL LE = 0,99* (MDC) + 2,81 mg/dL En 1977 se demostró que el colesterol HDL tiene un efecto protector
Coeficiente de correlación 0,996 contra la prevalencia de la DCI. Los estudios de Framinghan muestran de
modo inequívoco que los niveles del colesterol HDL son inversamente
proporcionales a la prevalencia de la DCI. Esta relación inversa es
El error total (aleatorio + sistemático), estimado en un nivel de decisión claramente percibida en la tabla de valores deseables o recomendados.
de 40 mg/dL, es igual a 4,39 mg/dL o 11,0%.
Las concentraciones del colesterol en las fracciones LDL y VLDL y en la
Especificidad . Para evaluar la especificidad del método en muestras fracción HDL dependen de metabolismos distintos y no se debe intentar
con triglicéridos elevados, se realizó un estudio utilizando muestras con buscar una correlación entre sus valores de concentración.
concentraciones de triglicéridos mayores a 400 mg/dL (431 a
2807 mg/dL), obteniéndose los siguientes resultados en comparación Observaciones
con el método de referencia del CDC6:
1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores
fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de
Método Referencia resultados correctos.
HDL LE
(MR)
Número de muestras 41 41 2. El laboratorio clínico tiene por objetivo proveer resultados exactos y
Intervalo (mg/dL) 26,0 - 47,0 23,7 - 47,4 precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa
Media (mg/dL) 37,9 35,6 potencial de errores analíticos. El agua utilizada en el laboratorio debe
Ecuación de regresión HDL LE = 1,01* (MR) -2,48 mg/dL tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así, para preparar
Coeficiente de correlación 0,968 reactivos, utilizar en mediciones y para el uso en el enjuague final de la
vidriería, el agua debe tener resistividad ³1 megaohm.cm o conductividad
£1 microsiemens/cm y concentración de silicatos <0,1 mg/L. Cuando la
El error total (aleatorio + sistemático), estimado en un nivel de decisión columna desionizadora está con su capacidad saturada ocurre liberación
de 40 mg/dL, es igual a 4,06 mg/dL o 10,2%. de varios iones, silicatos y sustancias con gran capacidad de oxidación y
reducción que deterioran los reactivos en pocos días o incluso en horas,
modificando los resultados de forma imprevisible. Por ello es
Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo fundamental establecer un programa de control de calidad del agua.
N Media DP CV (%)
Muestra 1 20 32,9 0,3 0,9
3. Varios factores alteran los resultados obtenidos con el
calibrador. Estos factores incluyen los errores en la reconstitución,
Muestra 2 20 50,6 0,2 0,4
homogeneización, la contaminación del agua o materiales de vidrio,
Muestra 3 20 101,4 0,7 0,7
control inadecuado de la temperatura o errores técnicos relacionados con
el instrumento. Sugerimos que el cumplimiento de buenas prácticas de
laboratorio y la verificación de las instrucciones del fabricante del
Reproducibilidad - Imprecisión total instrumento y de los reactivos utilizados, relacionadas con las
N Media DP CV (%) limitaciones del procedimiento.
Muestra 1 40 32,8 0,4 1,2
Muestra 2 40 50,0 0,7 1,4 4. El valor del calibrador fue establecido mediante utilizándose el
Muestra 3 40 100,1 1,1 1,1 producto HDL LE (Ref. 98) y procedimiento como se describe en las
instrucciones de uso. Por el efecto de la matriz, la calibración podrá no ser
adecuada cuando fueron utilizados reactivos de otros fabricantes.
Sensibilidad metodológica . Utilizando la absorbancia del
calibrador como parámetro, la sensibilidad fotométrica es 0,57 mg/dL, Referencias
correspondiendo a una absorbancia igual a 0,001.
1. Bachorik PS, Ross JW. Clin Chem 1995;41:1414-33.
Efectos de la dilución de la matriz . Una muestra con valor
2. Executive Summary of the Third report of the National Cholesterol
igual a 200 mg/dL fue utilizada para evaluar la respuesta del sistema a las
Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and
diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/L (0,85%). Los desvíos
Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel
máximos encontrados con relación a la línea de linealidad fueron iguales o
III). JAMA 2001;285:2486-97.
menores al 5%.

04 Español - Ref.: 98
3. Kimberly MM, Leary ET, Waymack PP. Clin Chem 1999;45:1803-12. Están disponibles aplicaciones para sistemas automáticos.

4. Pesce AJ, Kaplan LA. Methods in Clinical Chemistry, St. Louis: The C.V. El número de ensayos en aplicaciones automáticas depende de los
Mosby Co., 1987:1179-1194. parámetros de la programación.

5. Virella MFL, Stone P, Ellis S, Colwell G. Clin Chem 1977;23:882-884.

Informaciones al consumidor
6. Warnick RG, Wood PD. Clin Chem 1995; 41:1427-33.
[Términos y Condiciones de Garantía]
7. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981; 27:493-
501. Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto, dentro de
las especificaciones, hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos,
8. Labtest: Datos de Archivo. siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en
los rótulos y en estas instrucciones, sean seguidos correctamente.
9. Leite PF, Martinez TLR, Halpern A, Cendoroglo MS, Novazzi JP, Fonseca
FAH, Dias JCA. Risco cardiovascular: fatores metabólicos e
nutricionais: diagnóstico e tratamento. São Paulo: Loyola, 1994. p.56.
Labtest Diagnóstica S.A.
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Presentación Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
Producto Referencia Contenido
Customer Service e-mail: [email protected]
1 1 X 60 mL
98-80 2 1 X 20 mL
1 X 1,0 mL
1 1 X 240 mL
HDL LE 98-320 2 1 X 80 mL
1 X 1,0 mL Revisión: Septiembre, 2013 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
Ref.: 050118 Reproducción bajo previa autorización
1 3 X 2000 mL
98-8000 2 1 X 2000 mL
1 X 1,0 mL

05 Español - Ref.: 98
 Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro
Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro
Symbols used with ivd devices

Conteúdo suficiente para < n > testes Risco biológico

Contenido suficiente para < n > tests Riesgo biológico
Contains sufficient for < n > tests Biological risk

Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa) Marca CE

Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa) Marcado CE
Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy) CE Mark

Material Calibrador Tóxico

Material Calibrador Tóxico
Calibrator Material Poison

Material Calibrador Reagente

Material Calibrador Reactivo
Calibrator Material Reagent

Limite de temperatura (conservar a) Fabricado por

Temperatura limite (conservar a) Elaborado por
Temperature limitation (store at) Manufactured by

Representante Autorizado na Comunidade Europeia Número do lote

Representante autorizado en la Comunidad Europea Denominación de lote
Authorized Representative in the European Community Batch code

Consultar instruções de uso Controle

Consultar instrucciones de uso Control
Consult instructions for use Control

Número do catálogo Controle negativo

Número de catálogo Control negativo
Catalog Number Negative control

Adições ou alterações significativas Controle positivo

Cambios o suplementos significativos Control positivo
Significant additions or changes Positive control

Produto diagnóstico in vitro Controle

Dispositivo de diagnóstico in vitro Control
In vitro diagnostic device Control

Liofilizado Corrosivo
Liofilizado Corrosivo
Lyophilized Corrosive

Período após abertura Uso veterinário

Período post-abertura Uso veterinario
Period after-opening Veterinary use

Instalar até
Instalar hasta
Install before Ref.: 140214

06 Español - Ref.: 98