Universidad Autónoma del Estado de Hidalgo
Instituto de Ciencias Básicas e Ingeniería
Área Académica de Química
Licenciatura en Química de Alimentos.
Biomoléculas y su Metabolismo
Dr. Rene Velázquez Jiménez
Práctica 2
¨Obtención de extracto crudo de hígado vacuno y determinación en el mismo de la
concentración de proteínas por el método de 443246Lowry¨
Equipo:
NOMBRE NUM. CUENTA
Cruz Rivas Helena 464073
Moreno Perez Joana Lizbeth 440947
Ortiz Uribe Karina Paola 378845
Monroy Avila Rodrigo 443246
4to Semestre
Grupo 2
Fecha de la práctica: 09/02/2023
Fecha de entrega: 16/02/2023
INTRODUCCIÓN:
Las proteínas son una de las moléculas orgánicas más abundantes en los
sistemas vivos y son mucho más diversas en estructura y función que otras clases
de macromoléculas. Una sola célula puede contener miles de proteínas, cada una
con una función única.
Al determinar la concentración de proteínas en
una muestra biológica es una técnica de rutina
básica cuando se aborda un esquema de
purificación de una proteína concreta, cuando se
quiere conocer la actividad específica de una
preparación enzimática, para el diagnóstico de
enfermedades, así como para otros muchos
propósitos. Existen diferentes métodos para la
cuantificación de proteínas. Muchos de estos
métodos se basan en:
a) la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV
b) para la formación de derivados químicos
c) la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes. En la Tabla I se
recogen los métodos más usados así como sus respectivas sensibilidades.
Uno de los diferentes métodos que se ocupan es El método de Lowry (1951) que
es un método colorimétrico de valoración cuantitativa de las proteínas. A la
muestra se añade un reactivo que forma un complejo coloreado con las proteínas,
siendo la intensidad de color proporcional a la concentración de proteínas, según
la Ley de Lambert-Beer.
Además recordemos que en bioquímica la palabra proteínas se le conoce a las
moléculas formadas por aminoácidos, que están unidos por un tipo de enlaces
conocidos como enlaces peptídicos. Por ejemplo: fibrina, elastina, actina, insulina.
OBJETIVO:
● Desarrollar la habilidad para extraer y cuantificar biomoléculas como las proteínas
partiendo de un material biológico.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
● Aplicar un procedimiento para extraer de la muestra las biomoléculas que se analizarán,
en este caso las proteínas.
● Construir una curva patrón para determinar el contenido de proteína en las muestras a
analizar.
● Aplicar el método de Lowry para cuantificar la concentración de proteínas en una
muestra de origen animal.
DESARROLLO DE LA ACTIVIDAD PRÁCTICA:
RESULTADOS:
Tubo Muestra (ml) H2O (ml) Absorbancia a 620 nm
Blanco - 1 0
1 0.1 0.9 0.005
2 0.2 0.8 0.359
3 0.3 0.7 0.618
4 0.4 0.6 0.652
P1 0.1 0.9 2.075
P2 0.2 0.8 2.517
DISCUSIÓN:
Se logra observar que a menor cantidad de agua agregada en las muestras los niveles de
absorbancia obtenida son [Link] las muestras de vacuno presentamos mucha mayor
cantidad de proteína esto se pudo notar ya que al realizar el experimento obtuvimos colores
muy azulados lo que indicaba mayor porcentaje de proteína ,esto tras la agregación de los
reactivos A y B,compuestos por SO4Cu y por el reactivo Folin-Ciocalteau .
CUESTIONARIO:
1. Construir la recta de calibrado representando gráficamente los resultados
correspondientes a los tubos 1, 2, 3 y 4. En el eje X se representan los mg de proteína
que hay en cada tubo (0.1 – 0.4 mg) y en el eje Y los valores de absorbancia obtenidos en
cada caso.
2. Para calcular la concentración de proteínas de la muestra problema, se hallará en
primer lugar, la media aritmética de las absorbancias obtenidas para ambas réplicas (P1
y P2) teniendo en cuenta las diferencias de volumen de muestra en ambos tubos, es
decir:
Absorbancia = [(Abs P2/2) + Abs P1]/ 2
Llevar el valor de absorbancia obtenido a la recta de calibrado elaborada previamente y por
extrapolación obtener los mg de proteína que hay en 0.1 mL de muestra problema. A partir de
este dato, y teniendo en cuenta la dilución realizada, calcular:
- Los mg de proteína/ mL de extracto crudo. 0.8493mg/ml
- Los mg de proteína/ g de tejido. 3.82 mg/g
BIBLIOGRAFÍA:
1) Lehninger, A. L., Nelson D. L., Cox, M. M. 1993. Principles of Biochemistry. 2a edición.
Worth Publishers, Nueva York.
2) Muñoz, E. 1989. Determinación cuantitativa de proteínas. En: Lozano, J. A., Tudela, J.
Prácticas de Bioquímica, experimentación y simulación. Editorial Síntesis. Madrid.
3) Villamarín, J. A., Ibarguren, I., Ramos-Martínez, J. I., Rodríguez, R. J. L., Sarandeses,
C. 2006. Manual de prácticas de Bioquímica. Tercera edición. Universidad de Santiago
de Compostela. España.
