Práctica No.
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Método de concentración por flotación de Sheather
“Glucosa” y Método de Willis “Cloruro de Sodio”
OBJETIVOS
• Adquirir habilidad para realizar otras técnicas de concentración por flotación
y el manejo de muestras biológico-infeccioso.
• Comparar las ventajas y desventajas de las técnicas de concentración.
Método de concentración de Willis (cloruro de sodio)
La técnica es cualitativa de concentración; se conoce como flotación de Willis.
Es muy antigua se utiliza desde 1921, es ideal para el trabajo de campo pues la
solución saturada de NaCl (sal común de mesa (28 g para 100mL se debe
obtener una densidad de 1.19) se puede preparar en cualquier recipiente. La
muestra se homogeniza en una pequeña cantidad de salmuera, enseguida se
hace la suspensión de tal manera que llegue hasta el borde del frasco, se deja
reposar de 15 a 30 minutos y se recolecta el material flotante con un
cubreobjetos en donde se buscaran las formas parasitarias.
Es el método indicado para cualquier forma parasitaria, excepto para
trofozoítos. La lectura se debe tomar pasado el tiempo señalado para evitar
deformación de las fases de parásitos. La materia fecal se puede utilizar con
soluciones conservadoras o sin ellas.
Método de concentración Sheather (glucosa)
Técnica basada en la flotación simple en solución saturada de sacarosa
(azúcar de mesa), la cual se realiza de manera semejante a la de Willis.
Algunos parasitólogos recomiendan una densidad de la solución de sacarosa
de 1.12 (Sin una medida exacta, pero más densa que la de NaCl) Esta técnica
también puede deformar las formas parasitarias por lo que la lectura se debe
hacer 15 a 20 minutos después de hacer el homogeneizado. También es
posible utilizar
muestras con diversos conservadores.
MATERIAL
• Asa de nicromo
• Pipeta de plástico
• Gradilla.
• Tubos de ensaye de 13 X 100
• Tapón de hule
• Varilla de vidrio (15 a 20 cm longitud)
• Vasos de precipitados de 250 ml o frascos.
• Coladera de plástico de malla fina.
• Portaobjetos y cubreobjetos.
• Bata.
• Guantes.
• Lentes de seguridad.
• Franela, Jabón y cloro.
EQUIPO
• Microscopio óptico.
• Centrifuga.
REACTIVOS
• Solución de Sheather (sucrosa 500 gr. agua destilada 320 mL y fenol 6.5
g) (densidad 1.18).
• Solución saturada de NaCl (densidad 1.20)
• Solución de lugol.
OTROS
• Heces frescas parasitadas.
PROCEDIMIENTO PARA MÉTODO DE WILLIS
1. Depositar aproximadamente 1 gr. de la muestra en un vaso de precipitados
o frasco de vidrio.
2. Agregar 10 ml de Sol. de Willis
3. Agitar hasta una mezcla homogénea.
4. Filtrar
5. Colocar el filtrado en un tubo de ensaye hasta llenarlo completamente y se
forme el menisco (puede auxiliarse de la pipeta de plástico). 6. Colocar un
cubreobjetos sobre el tubo de tal manera que haga contacto con el menisco
del líquido.
7. Dejar reposar el tubo con el cubreobjetos encima, durante 10 minutos
8. Colocar una gota de lugol en un portaobjetos.
9. Retirar el cubreobjetos transcurrido el tiempo y ponerlo sobre la gota de
lugol.
10. Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X
11. Anotar lo encontrado.
PROCEDIMIENTO PARA MÉTODO DE SHEATHER
1. Depositar aproximadamente 1gr. de la muestra en un
vaso de precipitados o frasco de vidrio.
2. Agregar 10 ml de agua destilada
3. Agitar hasta una mezcla homogénea.
4. Filtrar
5. Colocar el filtrado en un tubo de ensaye
6. Centrifugar a 1500 rpm. durante 5 minutos.
7. Decantar
8. Agregar al sedimento solución de Sheather.
9. Tapar el tubo
10. Agitar hasta una mezcla homogénea
11. Centrifugar (sin tapón) a 1500 rpm. durante 5 minutos
NO decantar
12. Colocar una gota de lugol en un portaobjetos.
13. Tomar con el asa de nicromo de la película formada en la parte superior
del líquido.
14. Enjuagar el asa en la gota de lugol (sin extenderla)
15. Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X
RESULTADOS
MÉTODO DE WILLIS: Dibujar lo observado al microscopio, anotado el nombre del
parásito identificado.
Se observan grasas neutras, células vegetales y Se observan fibras de carne digeridas
Granos de almidón. Grasas neutras y células vegetales.
Objetivo: 40x Objetivo: 40x
MÉTODO DE SHEATHER: Dibujar lo observado al microscopio, anotado el nombre del
parásito identificado.
Se observa grasa neutra, células vegetales Se observa un pelo vegetal, células
Granos de almidón. Vegetales y grasas neutras.
Objetivo: 40x Objetivo: 40x
ACTIVIDAD
Conclusión general de los métodos de concentración.
Las técnicas de concentración se llevan a cabo con el fin de separar los
parásitos de la materia fecal. Tales técnicas no solo aumentan el número de
parásitos en el sedimento sino también los desenmascaran, haciéndolos más
visibles mediante la eliminación de desechos orgánicos e inorgánicos
Al igual que nos ayudan a aumentar la capacidad de detección de ooquistes,
quistes de protozoos, huevos y larvas de helmintos.
Se aplican dos métodos que son método de flotación en el cual se utiliza líquido
de más alta densidad que los elementos buscados, por lo que los elementos
buscados flotarán a la superficie, en cambio en el método de sedimentación se
utiliza un líquido de menos densidad para que los elementos se irán hacia el
fondo.
Es necesario conocer en cada caso cual técnica es viable para ese caso en
específico, ya que cada uno de ellos tiene tanto ventajas como desventajas, al
igual que diferentes aplicaciones, al saber de que parasitosis se trata podemos
encontrar un método de concentración que sea mas conveniente y efectivo
para dicho caso.
Bibliografía:
BOTERO, David y RESTREPO, Marcos. Parasitología humana. Medellín,
corporación para investigaciones biológicas, 1992. 7 – 11, 61 – 68 p.
