Reporte 4:
Aislamiento y análisis de
carbohidratos
2.A
EQUIPO 2
Integrantes:
AGUILAR SEDANO BRISA YADIRA
GARCIA MAGADAN KEVIN
ORTIZ VILLANUEVA KALED
VILLANUEVA AGUILAR SEBASTIAN
Introducción
Metodología
Resultados
Actividad 1. Identificación del sabor en los carbohidratos de acuerdo
con su clasificación por tamaño.
Carbohidrato Sabor Tipo de Estructura molecular
carbohidrato
Glucosa Dulce Monosacárido
Fructosa Dulce Monosacárido
Sacarosa Dulce Disacárido
Lactosa Dulce Disacárido
Almidón Insípido Polisacárido
Celulosa Insípido Polisacárido
Actividad 2. Aislamiento de carbohidratos a partir de harina de
leguminosas y su identificación por cromatografía.
Tipo de harina Cromatofolio
Harina de frijol negro
Harina de trigo
Harina soya
Harina de Alubia
Actividad 3. Identificación de azúcares reductores y no reductores
a) Indica en la tabla 2, los carbohidratos que tienen poder reductor (+), y los que no
tienen (-) esta característica química. Incluye la fotografía en donde se evidencie,
los cambios de coloración antes y después de la reacción de Fehling.
Carbohidrato Glucosa Fructosa Sacarosa Lactosa Almidón Celulosa
Azúcar + + - + - -
reductor
Fotos antes de la reacción de Fehling
*El orden de los tubos va de glucosa, fructosa, sacarosa, lactosa, almidón, celulosa y
agua
Fotos después de la reducción Fehling
*El orden de los tubos va de glucosa, fructosa, sacarosa, lactosa, agua. Celulosa y
almidón
b) Incluye en la tabla 3, las fotografías de los carbohidratos que no tienen el poder
reductor. Establece una estrategia para convertirlos en reductores, incluye en la
tabla, el diagrama de flujo del procedimiento realiza el procedimiento e incluye las
fotos para evidenciar los resultados obtenidos.
Metodología:
1. Se hará la recolecta de saliva por uno de los compañeros en un vaso precipitado
de 50 ml
2. En dos tubos de ensayo, colocar 2 ml de almidón al 5%; colocar la misma cantidad
de saliva en un solo tubo de ensayo, donde será etiquetado como “almidón
hidrolizado”.
3. Se colocarán los dos tubos de ensayo a calentar en baño maría por 25 minutos
en una temperatura de 35°C
4. Después se colocarán 5 gotas de reactivo de Fehling A y Fehling B a los dos
tubos.
5. Se llevarán a baño maría en ebullición hasta observar algún cambio de color.
*El tubo de la izquierda contiene el almidón hidrolizado con la saliva y reactivo de
Fehling. El tubo de la derecha es almidón no hidrolizado sin saliva y con reactivo de
Fehling.
Actividad 4. Uso de la cromatografía para la identificación de
carbohidratos en muestras biológicas.
Identificar los cromatofolios realizados y presentar una foto de cada uno de ellos en la tabla 4.
Determinar el factor de retención de las muestras analizadas (Rf) como lo aprendiste en el proyecto
de análisis de proteínas. Recuerda que el Rf, es la relación entre las distancias recorridas por la
muestra (dA) y por la fase móvil (dT) desde el origen de la placa. Est, corresponde al carbohidrato
estándar.
Muestra Foto de cromatofolio dA (cm) dT (cm) Rf
Est1: Sacarosa Est1: 1.6 Est1: 1.6 Est1: 0.42
Est2: Fructosa Est2: 2 Est2: 1.6 Est2: 0.52
Est3: Glucosa Est3: 1.7 Est3: 1.7 Est3: 0.46
M1: Azúcar M1: 1.8 M1: 1.8 M1: 0.47
estándar M2: 1.7 M2: 3.8 M2: 0.45
M2: Jugo de caña
Est1: Lactosa Est1: 1.4 Est1: 3.5 Est1: 0.4
Est2: Glucosa Est2: 2 Est2: 3.6 Est2: 0.55
M1: Leche M1: 1.5 M1: 3.65 M1: 0.41
condensada M2: 1.8 M2: 3.6 M2: 0.5
M2: Leche
deslactosada
Est1: Glucosa Est1: Est1: Est1: 0.47
Est2: Fructosa Est2: Est2: Est2: 0.52
Est3: Sacarosa Est3: Est3 Est3: 0.46
M1: Mandarina M1: M1: M1: 0.44
M2: Mandarina 1 M2: M2: M2: 0.48
Est1: Glucosa Est1: 2.4 Est1: 4.8 Est1: 0.5625
Est2: Fructosa Est2: 2.4 Est2: 4.8 Est2: 0.5
Est3: Sacarosa Est3: 2.5 Est3: 4.8 Est3: 0.4583
M1: Coca cola M1: 2.7 M1: 4.8 M1: 0.4584
M2: Coca cola M2: 0 M2: 4.8 M2: 0
light
Cálculos
Discusiones
Actividad 1. Identificación del sabor en los carbohidratos de acuerdo
con su clasificación por tamaño.
En la actividad 1 se identificó que azucares serian reductores y cuáles no. Las
conclusiones fueron realizadas tras investigar que los monosacáridos son los que tienen
características reductoras, esto debido a que poseen un grupo carbonilo libre que les da
esa reactividad. Al agruparse y formar disacáridos o polisacáridos este grupo es el que
va a formar un enlace para agrupar los carbohidratos, lo que provoca que el compuesto
pierda sus capacidades como agente reductor.
Por todo lo anterior se concluye que los carbohidratos que tendrán comportamiento
reductor en esta práctica serán: glucosa y fructosa. Aquellos azucares que serán no
reductores son: sacarosa, lactosa, celulosa y almidón.
Finalmente, las moléculas de azucares simples son aquellas que presentan un sabor
dulce, pues suelen reaccionar con las enzimas presentes en la saliva y pueden ser
descompuestas inmediatamente, para esta práctica los carbohidratos determinados
como dulces son: lactosa. fructosa, glucosa y sacarosa. Por lo tanto, la celulosa y el
almidón fueron catalogados como insípidos.
Actividad 2. Aislamiento de carbohidratos a partir de harina de
leguminosas y su identificación por cromatografía.
En esta actividad cada uno de los equipos aporto un tipo diferente de harina de los cuales
se realizó una extracción y cromatografía con fase móvil de cloroformo: metanol: ácido
acético en proporción [Link].5.
En la primera placa correspondiente a harina de frijol se puede observar claramente que
los compuestos están presentes en formas de manchas muy grandes, atribuible a que la
carga fue realizada de forma tosca o sin dar el suficiente tiempo para que se seque la
muestra. Adicionalmente podemos observar claramente que los componentes de la
solución no migraron, esto probablemente se deba a que no se preparó correctamente
la fase móvil, por lo tanto, no se pueden sacar resultados de este experimento.
En la segunda placa correspondiente a la harina de trigo la migración es correcta, sin
embargo, las manchas denotan que se realizó una carga tosca. En esta muestra la
migración deja una banda demasiado extensa para ser descrita con precisión, además
de que las bandas correspondientes a glucosa y fructuosa están muy cerca una de la
otra y finalmente, no aparenta tener una banda para la muestra problema. Todo lo
anterior en conjunto impide una lectura apropiada de los resultados.
En la tercera placa correspondiente a la harina de soya, las manchas de la placa
muestran una elusión correcta, además de ser lo suficientemente finas para decir que se
cargó correctamente. Un problema con esta placa es que presenta demasiadas manchas
que complican su lectura, mas no es impedimento para ello. Por la forma en que migro
la muestra problema, parecería que se trata de un compuesto de sacarosa presente en
dicha harina.
La cuarta placa perteneciente a la harina de alubia muestra un tanto una carga como una
fase móvil preparadas de forma incorrecta. La carga de la primera banda es demasiado
grande, además de que al solo presentar dos bandas se intuye que estas se mesclaron,
además de que estas bandas no salen realmente de la zona de carga, es decir, que
prácticamente no presentan migración. Todo lo anterior imposibilita sacar conclusiones
acerca de esta placa.
Actividad 3. Identificación de azúcares reductores y no reductores
En esta actividad se evaluó la capacidad reductora de los azucares a modo de comprobar
lo expresado en la teoría. En las tablas de resultados mostradas se puede observar
claramente que lo expresado en la teoría se cumplió: solo fructosa, glucosa y lactosa
dieron positivo a la reacción con reactivo de Fehling.
La segunda parte de la actividad es el determinar un método para lograr que estos
azucares no reductores se vuelvan monosacáridos y puedan reducir otros compuestos.
El método seleccionado fue la lisis enzimática en la cual se recolecta amilasa para
posteriormente ponerla a baño maría y dejar que interaccione con el almidón.
Para este método se obtuvo amilasa de la saliva y tras dejar reaccionar por 25 minutos
en baño maría, se logra observar que el reactivo de Fehling reacciona tras ser separado
en monosacáridos por la enzima.
Para poder llevar a cabo este proceso en otros azucares se necesita una enzima
especifica de ese azúcar para poder llevar a cabo su lisis.
Actividad 4. Uso de la cromatografía para la identificación de
carbohidratos en muestras biológicas.
En la actividad 4 se realizó una prueba cromatográfica para comprobar la naturaleza de
los carbohidratos presentes en los alimentos de consumo recurrente, en esta prueba se
puede observar que la muestra de jugo obtuvo valores de RF semejantes al azúcar
estándar y a su vez semejantes a la glucosa. Con esto se entiende que el azúcar
presente en el jugo es la glucosa.
En la segunda placa donde se puso leche condensada y leche deslactosada. Se observa
que la leche condensada posee un Rf semejante al de la lactosa, cosa que era de
esperarse gracias a la información de la teoría. Mientras que en la muestra de leche
deslactosada se encuentra que el valor de Rf de la muestra coincide con el de la glucosa,
esto tiene sentido pues el proceso de producción de leche deslactosada implica la lisis
de la lactosa puesto que este compuesto requiere de lisis enzimática dentro del
organismo, aquellos con deficiencia de lactasa son considerados intolerantes a la
lactosa. Por lo anterior es que se hace la lisis de la lactosa desde el producto, esta lisis
va a descomponer la lactosa principalmente en glucosa.
En la placa 3 de mandarina, realmente la diferencia de Rf es muy mínima como para
poder sacar conclusiones al respecto, lo sugerible seria cambiar la fase móvil para
favorecer una mayor separación de las moléculas. En segundo lugar, el valor de Rf
mostrado por la fructosa es el más alejado de los valores obtenidos en la mandarina,
cosa que es inesperada pues teóricamente se sabe que la fructuosa es un carbohidrato
proveniente principalmente de las frutas. Por lo demás es difícil diferenciar el compuesto
de la glucosa y la sacarosa.
Finalmente, para las muestras de refrescos se utilizó un refresco normal y uno sin azúcar.
El refresco normal mostro un resultado de Rf casi exactamente igual que el obtenido de
la sacarosa, mientras que este valor de Rf se mantiene alejado de los estándares de
glucosa y fructosa. Para finalizar. El refresco sin azúcar no mostro ningún valor de Rf en
primer lugar lo que sugiere que no se obtuvo azúcar desde el proceso de extracción en
primer lugar, ante esto se puede decir que efectivamente los refrescos “light” no poseen
azucar.
Cuestionario
1. ¿Cuál es el principio de las pruebas utilizadas para la identificación del
poder reductor de un glúcido?
La reacción de Fehling se basa en la oxidación, en un medio alcalino, del grupo carbonilo
de la aldosa (carbohidrato con un grupo aldehído), por medio de un agente reductor que
sería el ion cúprico (Cu2+), generando el ion cuproso (Cu+), generando un color rojo
característico (Herrera, et al., 2014). En la imagen presentado, se denota la reacción del
grupo aldehído en presencia del ion Cúprico en medio alcalino (OH -), esto genera que
haya una sustitución del Hidrogeno unido al carbono principal por otro oxígeno,
generando un ion carboxilato.
En la segunda reacción se puede ver como reaccione la glucosa (en forma lineal),
reacciona con el ion cúprico para generar un ion carboxilato, generando una especie
química llamada Gluconato; esto ocasiona que también pueda dar a lugar un tipo de
ácido aldónico, siendo el Ácido Glucónico
2. Propón una estrategia para identificar el edulcorante en un refresco light
El edulcorante que es utilizado en las bebidas dietéticas es un derivado del ácido
aspártico, llamado aspartamo. Donde será tomado una muestra del refresco, se va a
descarbonatar y después será diluido en etanol y agua. Se colocará en placas de silica
o en cromatofolios, para después ser llevados en una fase móvil de constituido por n-
butanol/ácido acético/agua en proporción [Link].6. Después de que termine de correr las
muestras, se sacara el cromatofolio y se dejaran secar. El cromatofolio será llevado en
presencia de luz ultravioleta de onda corta (254nm) (Bautista Herrera & Díaz Martinez,
2003)
Conclusiones
En la práctica, pese a haberse perdido algunos cromatofolios por errores en la fase
móvil, se demostró claramente las propiedades de los carbohidratos y el cómo
comprobarlas. Así pues, también se inquirió un poco en el proceso de lisis de un azúcar
no reductor para volverlo reductor ante la observación de reactivo de Fehling.
Durante el transcurso de la práctica se logró observar claramente en la mayoría de los
casos la identidad de los azucares presentes en los alimentos además de su naturaleza
reductora o no reductora. Como bono también se demostró la capacidad enzimática del
organismo para degradar un azúcar complejo como lo es el almidón.
Bibliografía
1. Admin. (20 de febrero de 2019). Análisis de carbohidratos. Obtenido de Manual
de Laboratorio: [Link]
carbohidratos/
2. Herrera, E., et al. (2014). “Bioquímica Básica: Base molecular de los procesos
fisiológicos”-
3. Bautista Herrera, K.L.& Díaz Martínez, E.G. (2003). “Determinación cualitativa y
cuantitativa de aspartame y de metanol, como producto de degradación, en
bebidas carbonatadas que lo contienen y en el edulcorante presentado en sobres
de un gramo”. Universidad de El Salvador. Facultad de Quimica y Farmacia.
Trabajo de tesis de Licenciatura.
