Universidad Galileo Quetzaltenango
Faculta de Ciencias de la Salud
Curso: Pruebas Especiales
Lic. Heydi Velasquez
Investigación
Electroquimioluminiscencia
Exposición Grupal
Técnico en Laboratorio Clínico
4toSemestre dia sábado.
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Integrantes
Isabel María José Meneses Barreno 15007822.
Kimberly Alejandra Monzón Agustín 19002383
Fernando Antonio de León Menchu 17004416
Cesar Emanuel Yac Roblero 19005308
Fernando Alfonso Vásquez Ramírez 19003060
Carmen Francisca Par Tzoc 19008367
Herminia Margarita Puac Vásquez 19009545
Andrea Fabiola Cardona Alvarado 19002594
Jackeline Paola Damaso Sosa 19008560
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Índice
INTRODUCCIÓN ................................................................................................................................................................... 5
ELECTROQUIMIOLUMINISCENCIA .............................................................................................................................. 6
OBJETIVOS GENERALES ................................................................................................................................................... 7
OBJETIVOS ESPECÍFICOS ................................................................................................................................................. 7
ELECTROQUIMIOLUMINISCENCIA .............................................................................................................................. 8
FUNDAMENTO ..................................................................................................................................................................... 8
REACTIVOS. ...................................................................................................................................................................... 9
VENTAJAS DEL ECL DE COREACTANTE SOBRE EL ECL DE ANIQUILACIÓN DE IONES .................. 10
CRITERIOS PARA UN BUEN COREACTANTE .................................................................................................... 10
SISTEMAS ECL COREACTANTES TÍPICOS Y SUS MECANISMOS ............................................................... 11
SISTEMA DE OXALATO (C2O42) ........................................................................................................................... 11
SISTEMA DE PEROXIDISULFATO (PERSULFATO, S2O82) .......................................................................... 12
SISTEMA DE TRI-N-PROPILAMINA (TPRA) ...................................................................................................... 12
SISTEMA PYRUVATO/CE(III) ................................................................................................................................. 15
SISTEMA DE HIDRACINA (N2H4) ......................................................................................................................... 15
SISTEMA DE PERÓXIDO DE BENZOILO (BPO) ................................................................................................ 15
SISTEMA DE PERÓXIDO DE HIDRÓGENO / LUMINOL ................................................................................. 16
PROCEDIMIENTO ............................................................................................................................................................. 17
Principio de tipo Sandwich ...................................................................................................................................... 17
FORMA DE REPORTAR RESULTADOS................................................................................................................. 18
DETECCIÓN DE ANTÍGENO DE SUPERFICIE DEL VHB (HBsAg) .............................................................. 19
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS FRENTE AL ANTÍGENO DE SUPERFICIE DEL VHB (antiHBs) .... 19
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS TOTALES FRENTE AL ANTÍGENO DEL CORE DEL VHB (anti-
HBc) .................................................................................................................................................................................. 19
DETECCIÓN DEL ANTÍGENO “e” DEL VHB (HBeAg) ..................................................................................... 19
DETECCIÓN DE LOS ANTICUERPOS FRENTE AL ANTÍGENO “e” DEL VHB (anti-HBe) ................ 20
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS DE TIPO IgM FRENTE AL ANTÍGENO DEL CORE DEL VHB (anti-
HBc IgM) ......................................................................................................................................................................... 20
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS FRENTE AL VHC ........................................................................................... 20
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IGG FRENTE AL VIRUS DE LA RUBÉOLA ............................................ 20
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IGM FRENTE AL VIRUS DE LA RUBÉOLA ........................................... 20
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IGG FRENTE AL TOXOPLASMA .............................................................. 21
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DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IGM FRENTE AL TOXOPLASMA ............................................................. 21
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS TOTALES O DEL TIPO IGG FRENTE AL T. PALLIDUM ................... 21
DETERMINACIÓN; AC ANTI SARS-COV-2 (COVID19) ................................................................................... 21
VENTAJAS ............................................................................................................................................................................ 22
DESVENTAJAS ................................................................................................................................................................... 22
PRECAUCIONES ................................................................................................................................................................ 23
INTERFERENTES.............................................................................................................................................................. 23
Hemolisis ........................................................................................................................................................................ 23
Bilirrubina ...................................................................................................................................................................... 23
Lipidemia ........................................................................................................................................................................ 23
PRUEBAS DE LABORATORIO MÁS UTILIZADAS.................................................................................................. 24
REACCION DE ECLIA ....................................................................................................................................................... 25
TECNOLOGIA DEL MÉTODO DE ELECTOQUIMIOLUMINISCENCIA ............................................................. 25
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INTRODUCCIÓN
La Electroquimioluminiscencia o quimioluminiscencia electro generada, EQL, es la
luminiscencia provocada por una reacción electroquímica. En el presente trabajo se estudia el
efecto de diferentes materiales usados como electrodo sobre la EQL del luminol, que
representaremos por LH2. El mecanismo propuesto se funda en la reacción del producto de
la oxidación del luminol en medio básico con el anión radical superóxido, O2.-. En
disoluciones alcalinas de luminol, la reacción quimio luminiscente, QL, se produce cuando el
anión monobásico del luminol, LH-, pK=6.2, es oxidado en presencia de O2o H2O2. Dicho
pro-ceso puede ser catalizado por la acción de ciertos iones inorgánicos, tal como
[Link] ambas reacciones, EQL o QL participa el anión LH-formándose como
producto final de la reacción el anión3-aminoftalato, AP2-, identificado como el emisor de los
fotones
Es básicamente un medio para convertir energía eléctrica en energía radiativa. Es un proceso
que involucra la generación de especies en la superficie del electrodo, que eventualmente
participan en reacciones de transferencia electrónica conducentes a la formación de estados
excitados que emiten luz. Por ejemplo, la aplicación de una diferencia de potencial a un
electrodo.
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Electroquimioluminiscencia
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Objetivos Generales
Presentar los distintos materiales usados en Electroquimioluminiscencia.
Determinar el grado de validez diagnostica en términos de sensibilidad y especificidad
del método del ensayo de Electroquimioluminiscencia.
Utilizar el método de Electroquimioluminiscencia para la dosificación del péptido C en
pacientes diabéticos.
Explicar cuando puedan solicitarse determinadas pruebas
Determinar el grado de validez diagnóstica en términos de sensibilidad y especificidad
del método de ensayo Electroquimioluminiscencia.
Objetivos Específicos
Determinar la sensibilidad del método Electroquimioluminiscencia para Troponina
Cardiaca.
Comprobar que sin el paso de corriente eléctrica a través de la celda electroquímica no
hay emisión de luz.
Establecer que la emisión de luz depende del material usado como electrodo y del
tratamiento previo a que es sometido.
Identificar la utilidad diagnostica del método de ensayo Electroquimioluminiscencia de
tiempo real.
Establecer el método de ensayo Electroquimioluminiscencia frente al método en tiempo
real para el diagnóstico de hepatitis C.
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ELECTROQUIMIOLUMINISCENCIA
Es un tipo de Luminiscencia o un inmunoensayo que utiliza la reacción Ag-Ag para el análisis
cualitativo o cuantitativo de sustancias o fluidos Biológicas mediante la emisión de descargas
eléctricas. En la Electroquimioluminiscencia las moléculas excitadas se producen
directamente en el transcurso de una reacción química y estas se desactivan emitiendo luz,
una parte de la energía liberada por esta reacción se emite a modo de radiación luminosa,
estas reacciones son la base de numerosas determinaciones.
Esta reacción tiene una gran sensibilidad y ha sido puesta a punto para determinar el analítico
con la ayuda del equipo que dispone de un generador de ozono incorporado. El luminol es el
compuesto más utilizado para realizar diferentes aplicaciones mediante el método
Electroquimioluminiscencia.
En este Inmunoensayo no competitivo, el anticuerpo utilizado recubre unas micropartículas
inmantadas, que tras la formación del complejo antígeno-anticuerpo, se fijan a un electrodo
por un magnetismo.
Dicho anticuerpo está conjugado con un marcador (derivado del rutenio) capaz de emitir
fotones cuando se aplica una pequeña diferencia del potencial sobre el electrodo.
En cualquier caso la energía lumínica se sigue detectando en un fotomultiplicador.
FUNDAMENTO
Esta técnica se considera de campo obscuro ya que consiste en emisión de radiación
electromagnética mediante un infrarrojo producido por una reacción química, cuando esta
emisión proviene de organismos vivos, se denomina bioluminiscencia, este fenómeno
luminiscente se identifica tradicionalmente mediante un prefijo, que identifica la fuente de
energía responsable del inicio de la emisión de radiación electromagnética.
Este Inmunoensayo se generan a partir de sustratos estables, que son productos capaces de
emitir fotones al pasar de un estado intermedio inestable y energéticamente superior, a uno de
energía inferior más estable; aunque en este caso su origen es electroquímico y no una
reacción enzimática
Los procesos de la ECLIA presentan numerosas moléculas rutenio, osmio, renio entre otros
elementos. La Electroquimiolumiscencia es un proceso en el que se generan especies muy
reactivas a partir de precursores estables en la superficie de un electrodo; estas especies
sumamente reactivas reaccionan entre sí, y así producen luz.
El desarrollo de los Inmunoensayos ECL de origen se basa en el uso del complejo de rutenio
dos - tris bipyridyl Ru bpy3 dos + y tripopilamida TPA. El producto quimio luminiscente final se
formará durante el paso de detección. Las reacciones quimioluminicente que producen
emisión de luz del complejo de rutenio se inicia por un proceso eléctrico en vez de químico,
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esto con la ayuda de voltajes a los complejos inmunológicos que están unidos a micro
partículas recubiertas de estreptavidina. La gran ventaja de la iniciación eléctrica de la
reacción quimioluminicente es que se puede controlar de forma precisa toda reacción.
Este tipo de ensayo pese a no ser enzimático lo incluimos en este grupo debido a su similitud
melódica con las tácticas de EIA sobre todo con la quioluminiscencia. Al igual que en la
quimioluminiscencia en este Inmunoensayo se genera, Este inmunoensayo no competitivo el
anticuerpo utilizando recubre unas macropartículas imantadas que tras la formación del
complejo antígeno de anticuerpo se fija a un electrodo magnetismo.
Reactivos.
Se ordenan por micropartículas paramagnéticas unidas a estreptavidina Ag/Ac.
Los reactivos para la Electroquimioluminiscencia son:
RU(bpy)3 2+ (derivado del rutenio)
Peroxidisulfato
Peroxido de hidrogeno/Luminol
Piruvato
Hidrazina
Peroxido de Benzoilo
Tri-n-propilamina (TPrA) como coreactante
Oxalato como coreactante
ECL POR COREACTANTES
A diferencia de la ECL de aniquilación de iones, en la que se requiere la generación
electrolítica de los precursores ECL oxidados y reducidos, la ECL coreactante se genera con
un solo paso de potencial o una exploración de potencial direccional en un electrodo en una
solución que contiene luminóforo especies en presencia de un reactivo añadido
deliberadamente (coreactante). Dependiendo de la polaridad del potencial aplicado, tanto el
luminóforo como la especie de coreactante pueden oxidarse o reducirse primero en el
electrodo para formar radicales, y los intermedios formados a partir del coreactante luego se
descomponen para producir una poderosa especie reductora u oxidante que reacciona con el
oxidado. o luminóforo reducido para producir los estados excitados que emiten luz.
Ya que Las especies intermedias altamente reductoras se generan después de una oxidación
electroquímica de un coreactante, o las altamente oxidantes se producen después de una
reducción electroquímica, las reacciones de ECL correspondientes a menudo se denominan
ECL de "reducción oxidativa" y ECL de "oxidación reductora", respectivamente (17, 124). Por
tanto, un coreactante es una especie que, tras la oxidación o reducción electroquímica,
experimenta inmediatamente una descomposición química para formar un intermedio reductor
u oxidante fuerte que puede reaccionar con un luminóforo ECL oxidado o reducido para
generar estados excitados.
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Otra diferencia entre el ECL de aniquilación y el coreactante es que, en el ECL de
aniquilación, Todas las especies iniciales pueden regenerarse después de la emisión de luz,
mientras que en el ECL del coreactante, solo las especies de luminóforos se pueden
regenerar y el coreactante se consume a través de las reacciones ECE (2).
VENTAJAS DEL ECL DE COREACTANTE SOBRE EL ECL DE
ANIQUILACIÓN DE IONES
1. El uso de un coreactante puede hacer posible la ECL incluso para algunos compuestos
fluorescentes que solo tienen una oxidación o reducción electroquímica reversible.
2. Incluso con disolventes para ECL que tienen una ventana de potencial estrecha de modo
que solo se puede producir una forma reducida u oxidada de un luminóforo, por ejemplo, tris
(2,2 -bipiridina) rutenio (II), Ru (bpy) 32+ (bpy = 2,2 -bipiridina), en soluciones acuosas,
todavía es posible generar ECL mediante el uso de un coreactante.
3. Cuando la reacción de aniquilación entre especies oxidadas y reducidas no es eficiente, el
uso de un coreactante puede producir ECL más intensa.
CRITERIOS PARA UN BUEN COREACTANTE
Los siguientes seis criterios son generalmente necesarios para un buen
compuesto coreactante
1. Solubilidad. El coreactante debería ser razonablemente soluble en el medio de reacción,
porque la intensidad de ECL es generalmente proporcional a la concentración de los
coreactantes.
2. Estabilidad. Las especies intermedias generadas electroquímica y químicamente deberían
ser suficientemente estables para permitir una reacción apreciable con el precursor de ECL.
3. Propiedades electroquímicas. El coreactante debe oxidarse o reducirse fácilmente con
las especies de luminóforos en o cerca del electrodo, y debe someterse a una rápida reacción
química para formar un intermedio que tenga suficiente energía reductora u oxidante para
reaccionar. con el luminóforo oxidado o reducido para formar el estado excitado.
4. Cinética. La velocidad de reacción entre el intermedio y la especie de luminóforo oxidada o
reducida debe ser rápida.
5. Efecto de enfriamiento. El coreactante y sus productos redox no deberían ser buenos
extintores de la luminiscencia del compuesto ECL .
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6. Antecedentes de ECL. El propio coreactante no debería dar ninguna señal ECL sobre el
rango de potencial escaneado.
SISTEMAS ECL COREACTANTES TÍPICOS Y SUS MECANISMOS
Aunque existe una amplia variedad de moléculas que exhiben ECL, la inmensa mayoría de las
publicaciones relacionadas con ECL coreactantes y sus aplicaciones analíticas se basan en la
química que involucra a Ru (bpy) 32+, o análogos estrechamente relacionados como la
especie emisora debido a sus excelentes propiedades químicas, electroquímicas y
fotoquímicas incluso en medios acuosos y en presencia de oxígeno. Como resultado, gran
parte de esta sección se refiere a sistemas ECL de Ru (bpy) 32 + / coreactantes.
SISTEMA DE OXALATO (C2O42)
Este fue el primer relato del sistema ECL coreactante informado en la literatura por el grupo
de Bard en 1977 , y es un ejemplo clásico de ECL de "reducción oxidativa".
En primer lugar, el Ru (bpy) 32+ se oxida en el electrodo al catión Ru (bpy) 33+. Esta especie
es entonces capaz de oxidar el oxalato (C2O42) en la capa de difusión cerca de la superficie
del electrodo para formar un anión radical oxalato (C2O4 ). Este se descompone para formar
un anión radical altamente reductor (CO2, E = 1,9 V frente a NHE y dióxido de carbono.
Luego, el intermedio reductor reduce el complejo Ru (bpy) 33+ de nuevo al complejo padre en
un estado excitado, o reduce Ru (bpy) 32+ para formar Ru (bpy) 3+ que reacciona con Ru
(bpy) 33+ para genera el estado excitado Ru (bpy) 32 + *, que emite luz con un máximo de ~
620 nm.
En soluciones acuosas, se ha informado que la intensidad de ECL del sistema Ru (bpy) 32 + /
oxalato tiene un máximo a ~ pH 6, y también es esencialmente constante desde pH 4-8 a
macroelectrodos y de pH 5-8 en ultramicroelectrodos.
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SISTEMA DE PEROXIDISULFATO (PERSULFATO, S2O82)
Este fue el primer ejemplo del sistema ECL de coreactante de "oxidación reductora" informado
en la literatura. Debido a que Ru (bpy) 3+ es inestable en soluciones acuosas y (NH4) 2S2O8
tiene una baja solubilidad en soluciones de MeCN, las soluciones mixtas de MeCN – H2O
fueron elegidos para producir una intensa emisión de ECL.
Resume las posibles vías para la producción de Ru (bpy) 32 + * cuando se usa S2O82 como
coreactante, en el que el intermedio fuertemente oxidante SO4, generado durante la reducción
de S2O82/.
Se cree que el ion persulfato es un coreactante de Ru (bpy) 32+ ECL así como un extintor
eficaz del estado excitado Ru (bpy) 32 + *). Como resultado, se encontró que la intensidad de
ECL del sistema Ru (bpy) 32 + / S2O82 era una función de la concentración de S2O82, y para
la solución 1 mM de Ru (bpy) 32+, la intensidad máxima de ECL se obtuvo a 15– 20 mM
S2O82.
SISTEMA DE TRI-N-PROPILAMINA (TPRA)
La mayoría de las aplicaciones ECL reportadas hasta ahora involucran Ru (bpy) 32+ o sus
derivados como emisor (o etiqueta) y TPrA como coreactante, porque el sistema Ru (bpy) 32
+ / TPrA exhibe la mayor eficiencia ECL y este sistema constituye la base de los sistemas
comerciales de inmunoensayo y análisis de ADN. El mecanismo de ECL de esta reacción es
muy complicado y ha sido investigado por muchos investigadores. Generalmente, la emisión
ECL de este sistema en función del potencial aplicado consta de dos ondas La primera ocurre
con la oxidación directa de TPrA en el electrodo, y esta onda a menudo se fusiona en el pie de
la segunda onda cuando se encuentran concentraciones relativamente altas de Ru (bpy) 32+
(~ mM) usado.
La segunda onda aparece donde se oxida Ru (bpy) 32+. Ambas ondas están asociadas con la
emisión de Ru (bpy) 32 + *. La intensidad relativa de ECL de la primera onda es significativa,
particularmente en soluciones diluidas de Ru (bpy) 32+ (~ M) que contienen ~ 0.1 M TPrA.
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Así, la mayor parte de la señal ECL obtenida en este sistema con concentraciones bajas de
analitos, como en los Inmunoensayos y sondas de ADN con Ru (bpy) 32+ como marca ECL,
probablemente se origina en la primera onda ECL. Resume el mecanismo de la primera ECL
onda, donde la especie de radicales catiónicos TPrA • + formada durante la oxidación de TPrA
es un intermedio suficientemente estable con una vida media de ~ 0.2 ms que puede oxidar
Ru (bpy) 3+ (formado a partir de la reducción de Ru (bpy) 32+ por TPrA radical libre) para dar
Ru (bpy) 32 + *
El mecanismo de la segunda onda ECL sigue el clásico mecanismo de coreactante de
“reducción oxidativa” donde la oxidación de TPrA genera una especie fuertemente reductora
TPrA (EP1 / TPrA •1.7 V vs. SCE. Esta oxidación puede ser a través de una "ruta catalítica"
donde el Ru (bpy) 33+ electrogenerado reacciona con TPrA, así como por reacción directa de
TPrA en el electrodo.
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La "ruta catalítica" que implica la oxidación homogénea de TPrA con Ru (bpy) 33+ se muestra
la contribución de este proceso a la intensidad de ECL general depende de la concentración
de Ru (bpy) 32+ y es pequeña cuando se utilizan concentraciones relativamente bajas de Ru
(bpy) 32+.
El estado excitado de Ru (bpy) 32+ se puede producir a través de tres rutas diferentes (i)
oxidación de Ru (bpy) 3+ por radicales catiónicos TPrA +, (ii) reducción de Ru (bpy) 33+ por
TPrA radicales libres, y (iii) la reacción de aniquilación Ru (bpy) 33+ y Ru (bpy) 3+.
La naturaleza de la superficie de un electrodo de trabajo puede afectar significativamente la
intensidad de ECL producida por el sistema Ru (bpy) 32 + / TPrA. Entre los electrodos de Au,
Pt y carbono vítreo (GC), GC exhibe la respuesta ECL más fuerte. La intensidad de ECL
también depende del pH de la solución, con incrementos dramáticos a ~ pH 5.5 y un valor
máximo a pH 7.5. Por lo general, no se deben usar pH superiores a 9, ya que el Ru (bpy) 33+
generado en el electrodo podría reaccionar con iones hidróxido para producir una señal de
fondo ECL significativa.
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SISTEMA PYRUVATO/CE(III)
Tras la oxidación anódica, ECL se puede generar a partir de una solución ácida que contiene
piruvato, Ce (III) y Ru (bpy) 32+ especies . El oxidante fuerte Ce (IV) producido por la
oxidación de Ce (III) en el electrodo de Pt puede oxidar el piruvato, lo que da como resultado
la formación del intermedio CH3CO fuertemente reductor. Esta especie se comporta de
manera similar al CO2 y participa en reacciones de transferencia de electrones con Ru (bpy)
33+ y Ru (bpy) 32+.
SISTEMA DE HIDRACINA (N2H4)
El esquema 13.12 resume el mecanismo ECL del sistema N 2H4 / Ru (bpy) 32+, en el que se
creía que las reacciones entre Ru (bpy) 33+ y N2H4, y entre Ru (bpy) 33+ y N2H2 eran
aproximadamente del 1% y aproximadamente 99% de eficiencia, respectivamente.
SISTEMA DE PERÓXIDO DE BENZOILO (BPO)
El peróxido de benzoilo (BPO) se puede utilizar como coreactante porque, como el persulfato,
el BPO puede producir un agente oxidante reactivo, el radical benzoato (C6H5CO2), después
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de que se reduce. El radical benzoato recién formado es lo suficientemente enérgico como
para reaccionar con algunos radicales catiónicos para formar los estados excitados, ya que el
valor de potencial redox para el par C6H5CO2 / C6H5CO2 (+1,5 V vs. SCE), es bastante
positivo. Akins y demostraron que la ECL de varios hidrocarburos aromáticos, como 9,10-
DPA, rubreno, fluoranteno y antraceno, se puede generar en presencia de BPO, después de
que el electrodo se llevó a un potencial de 1,90 V vs. .SCE. El mecanismo ECL propuesto por
Akins se consideró deficiente en energía, aunque también puede existir la ruta de energía
suficiente.
SISTEMA DE PERÓXIDO DE HIDRÓGENO / LUMINOL
La reacción ECL de luminol (5-amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione) con peróxido de
hidrogeno en un medio alcalino es similar a la quimioluminiscencia de el desencadenante de
luminol por oxidación química. El mecanismo mostrado en el siguiente esquema es
generalmente aceptado en en solución alcalina, el luminol se desprotoniza para formar un
anión, que luego sufre oxidación electroquímica para producir una diazaquinona. Esta especie
se oxida aún más con peróxido o superóxido para dar 3-aminoftalato en un estado excitado
que emite luz a ~ 425 nm.
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PROCEDIMIENTO.
Principio de tipo Sandwich
Este principio se aplica a analitos con mayor peso molecular:
La muestra del paciente se combina con un reactivo que contiene anticuerpo biotinilado
de la Troponina y un anticuerpo específico para Troponina marcado con rutenio.
Se incuba 9 minutos, los anticuerpos capturan la Troponina presente en la muestra.
Se añaden micropartículas paramagnéticas recubiertas de estreptavidina. Durante una
segunda incubación de 9 minutos, el anticuerpo biotinilado se adhiere a la superficie
recubierta de estreptavidina de las micropartículas.
Esta mezcla de reacción que contiene los complejos inmunes se transporta hasta la
célula de medición. Los complejos inmunes quedan atrapados magnéticamente sobre
el electrodo de trabajo, mientras que el reactivo y la muestra libres se eliminan con la
solución de limpieza ProCell.
En la reacción de ECL, el conjugado es un derivado basado en rutenio y la reacción
quimio luminiscente se estimula eléctricamente para producir luz. La cantidad de luz
producida es directamente proporcional a la cantidad de Troponina presente en la
muestra.
La evaluación y el cálculo de la concentración del antígeno o analito se realiza
mediante una curva de calibración creada a partir de estándares con concentraciones
de antígeno conocidas
El ensayo dura aproximadamente 18 minutos
PRIMERA INCUBACIÓN:
Colocar 50 µL de la muestra, con biotina monoclonal del reactivo de troponina cardiaca TnT,
se le adhiere 50 ul de reactivo monoclonal de troponina cardiaca TnT con rutenio para que se
forme la reacción Elisa sándwich.
SEGUNDA INCUBACIÓN:
Después de adherir las macropartículas de estreptavidina se mescla la solución de biotina con
estreptovidina para formar una reacción que se aspire en la célula de medición, donde las
micropartículas son capturados magnéticamente sobre la superficie del electrodo, dichas
sustancias no unidas se eliminan luego con ProCell y la aplicación se induce a una emisión
quimioluminiscente que se mide por un fotomultiplicador.
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Los resultados se obtienen mediante una curva de calibración que se genera por calibración
de 2 puntos y una curva máster incluida en el código de barras del reactivo.
FORMA DE REPORTAR RESULTADOS
Valor asignado.
Antígeno de superficie del VHB (HBsAg) mediante ECLIA:
Positivo.
Anticuerpos frente al antígeno de superficie del VHB (anti-HBs) mediante ECLIA:
Negativo
Anticuerpos totales frente al antígeno del core del VHB (anti-HBc) mediante ECLIA:
Positivo
Antígeno "e" del VHB (HBeAg) mediante ECLIA:
Negativo
Anticuerpos frente al antígeno "e" (anti-HBe) del VHB mediante ECLIA:
Positivo
Anticuerpos de tipo IgM frente al antígeno del core del VHB (anti-HBc IgM) mediante
ECLIA:
Negativo
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DETECCIÓN DE ANTÍGENO DE SUPERFICIE DEL VHB (HBsAg)
Positivo
Positivo Negativo Total
Método Marca débil
(% a) (% a) Nº (%b)
(% a)
ECLIA cobas® / Elecsys® (Roche) 38 (92,7) 1 (2,4) 2 (4,9) 41 (25,2)
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS FRENTE AL ANTÍGENO DE SUPERFICIE
DEL VHB (antiHBs)
No
Negativo Positivo Total
Método Marca interpreta
(%a) (% a) Nº (%b)
(% a)
ECLIA cobas® / Elecsys® (Roche) 38 (95,0) 2 (5,0) – 40 (26,8)
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS TOTALES FRENTE AL ANTÍGENO DEL
CORE DEL VHB (anti-HBc)
Negativo (% Total
Método Marca Positivo(%a) a
) Nº (%b)
ECLIA cobas® / Elecsys® (Roche) 39 (95,1) 2 (4,9) 41 (26,0)
DETECCIÓN DEL ANTÍGENO “e” DEL VHB (HBeAg)
No
Negativo Positivo Total
Método Marca interpreta
(%a) (% a) a Nº (%b)
(% )
ECLIA cobas® / Elecsys® (Roche) 30 (100,0) – – 30 (22,4)
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DETECCIÓN DE LOS ANTICUERPOS FRENTE AL ANTÍGENO “e” DEL VHB
(anti-HBe)
Negativo Total
Método Marca Positivo(%a)
(% a) Nº (%b)
ECLIA cobas® / Elecsys® (Roche) 30 (100,0) – 30 (22,1)
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS DE TIPO IgM FRENTE AL ANTÍGENO DEL
CORE DEL VHB (anti-HBc IgM)
Total
Método Marca Negativo (% a)
Nº (%b)
ECLIA cobas® / Elecsys® (Roche) 31 (100,0) 31 (24,2)
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS FRENTE AL VHC
Indeterminado Negativo Total
Método Marca Positivo(%a)
(% a) (% a) Nº (%b)
ECLIA cobas® / Elecsys® (Roche) 28 (100,0) – – 28
(16,1)
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IGG FRENTE AL VIRUS DE LA RUBÉOLA
Indeterminado Negativo Total
Método Marca Positivo(%a)
(% a) (% a) Nº (%b)
ECLIA cobas® / Elecsys® (Roche) 20 (100,0) – – 20
(11,7)
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IGM FRENTE AL VIRUS DE LA RUBÉOLA
Negativo No Interpreta Total
Método Marca
(%a) (% a) Nº (%b)
ECLIA cobas® / Elecsys® (Roche) 12 (100,0) – 20 (11,7)
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DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IGG FRENTE AL TOXOPLASMA
Positivo Negativo Total
Método Marca
(%a) (% a) Nº (%b)
ECLIA cobas® / Elecsys® (Roche) 21 (100,0) – 21
(12,2)
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS IGM FRENTE AL TOXOPLASMA
Negativo Total
Método Marca
(% a) Nº (%b)
ECLIA cobas® / Elecsys® (Roche) 20 (100,0) 20 (12,0)
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS TOTALES O DEL TIPO IGG FRENTE AL T.
PALLIDUM
Positivo Negativo Total
Método Marca
(%a) (% a) Nº (%b)
ECLIA cobas® / Elecsys® (Roche) 26 (96,3) 1 (3,7) 27
(16,4)
DETERMINACIÓN; AC ANTI SARS-COV-2 (COVID19)
Positivo Negativo Total
Método Marca
(%a) (% a) Nº (%b)
ECLIA cobas® / Elecsys® (Roche) 26 (96,3) 1 (3,7) 27
(16,4)
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VENTAJAS
Comodidad de trabajar con reactivos líquidos, ya que posee una etiqueta de marcación
no isotópica extremadamente estable.
Una sensibilidad elevada y cortos tiempos de incubación que arrojan resultados de
mejor calidad.
Un amplio rango de medición que disminuye la necesidad de diluciones y repeticiones,
optimizando el tiempo de manipulación y el consumo de reactivos.
Permite emplear una instrumentación bastante sencilla, una que el sistema óptico no
requiere fuente externa de excitación.
La ausencia de niveles altos de luz e fondo, que si ocurren en espectrofotometría y
fluorimetria, reduce el ruido y permite mejorarlos límites de detección.
Alta capacidad de amplificación de la señal a partir de una molécula marcada.
DESVENTAJAS.
La dependencia de la emisión quimioluminiscente de varios factores ambientales deben
ser controlados.
La falta de selectividad, ya que un reactivo quimio luminiscente no se limita a un único
analítico.
La emisión quimioluminiscente no es constante ya que existe variación de tiempo.
El flash de luz está compuesto de una señal que se produce tras la mezcla de los
reactivos, alcanza un máximo y después cae hasta la línea de base, y este perfil de
emisión frente al tiempo puede variar ampliamente en diferente señal por lo que hay
que extremar el cuidado para detectar el sistema de flujo, midiendo en periodos de
tiempo bien definidos.
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PRECAUCIONES
Evite la formación de espuma en reactivos y muestra de todo tipo (especímenes,
calibradores, controles).
Uso únicamente para diagnostico in Vitro.
Observas las medidas de precaución usuales para la manipulación del inmunoensayo.
Observar las medidas de precaución usuales para la manipulación de reactivos.
El material de origen Humano debe considerarse como potencialmente infeccioso
INTERFERENTES
La interferencia en Electroquimioluminiscencia varía según el tipo de inmunoensayo.
Los interferentes de Electroquimioluminiscencia son los interferentes endógenos los cuales
son:
Hemolisis
La interferencia analítica por hemolisis es determinada como interferencia significativa a un
10% de variación, ante la presencia de la hemolisis con una concentración de hemoglobina
igual o mayor a 0.53g/l, esto se traduce como una pérdida de fiabilidad en los resultados
obtenidos para los analitos inclusive al presentarse hemolisis ligera dicha interferencia se
debe a mayores concentraciones de contribuyentes en el interior de los hematíes que en el
suero: el estudio de valoración por interferencia por hemolisis debe realizarse con una
muestra que tenga concentración del analito próxima a los valores de decisión clínica.
Bilirrubina
Esta causa interferencia en los analitos con 3.0mg/dl ya que esa es considerada un marcador
de la función hepática la bilirrubina. Siendo conjugado con la hemolisis dos interferentes para
la determinación de Electroquimioluminiscencia.
Lipidemia
Esta es una interferencia causada por turbidez debido a la lipemia (presencia de lípidos o
grasas en la sangre). Por lo que causa turbidez.
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PRUEBAS DE LABORATORIO MÁS UTILIZADAS
Detección de hormonas tiroideas: T4 T3 y TSH
Pruebas de fertilidad: Testosterona total, gonadotropina coriónica humana, hormona
luteinizante y prolactina
Diagnóstico de anemia: Vitamina B12, ferritina, folato (ácido fólico)
Búsqueda de IgG: TORCH y hepatitis
Búsqueda de antígenos viral: Ag p24 del VIH-1 y VIH-2 (más usado).
Cromatografía
Análisis de alimentos y aguas
Detección de agentes biológicos de la tierra
Diagnóstico clínico:
- Vitamina B12
- Proteína A
- Testosterona total
- T4 libre
- Cortisol
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REACCION DE ECLIA
La reacción tiene lugar en la superficie de los electrodos de platino, que forma un capto
eléctrico por la utilización de voltajes determinados.
Los componentes sufren excitación por la pérdida de un electrón en su configuración
electrónica.
Este voltaje transforma la tripropilamina en un radical libre debido a la pérdida de un
electro y un protón.
En el caso de rutenio hay la pérdida de un electrón mientras tanto el catión de rutenio
reacción de esta mera con un radical produciendo un fenómeno llamado reducción.
A través de esta reducción se produce la emisión de fotones a una longitud de onda de
620nm. En Donde el foto multiplicados los capta y los transforma en absorbancias.
TECNOLOGIA DEL MÉTODO DE ELECTOQUIMIOLUMINISCENCIA
Se basa en usar los dos compuestos químicos.
Tris – Bispiridil – Rotuleno
Tripropilamina.
Los Dos compuestos participan principalmente en el proceso de excitabilidad de la reacción
Electroquimioluminiscencia y tienen la facilidad de acoplarse a los grupos aminos de las
proteínas.
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CONCLUSIÓN
ECLIA es altamente recomendable en el tamizaje serológico por los altos valores
de sensibilidad y especificidad, su completa automatización y el hecho de que al
no presentar valores en zona gris, no genera un desperdicio innecesario de
hemocomponentes.
La baja sensibilidad con respecto a IC se relacionaría a la posibilidad de que la
muestra reactiva procedía de un donante con sífilis latente o en periodo de
ventana (2 a 4 semanas luego de la infección), ya que en esta etapa baja la
sensibilidad de la prueba. De igual manera, la posible presencia de fibrinógeno en
la muestra pudo provocar la generación del falso negativo, hecho que se
recomienda a tomar en cuenta para el procesamiento de las muestras con esta
técnica
La baja especificidad encontrada aquí podría tener relación a la tendencia que
presenta esta técnica a generar resultados falsos positivos. Aún se desconoce la
posible causa de estos resultados ya que, no se deben a reacciones cruzadas con
otras enfermedades (ej. Lyme) o virus (ej. HIV, Epstein-Barr), ni tampoco a
reacciones cruzadas entre los antígenos recombinantes presentes en el reactivo
(TpN15, TpN17, y TpN47) los cuales ayudan a optimizar la sensibilidad en
pacientes con HIV o con una posible respuesta inmune anormal.
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RECOMENDACIONES
Los exámenes de laboratorio de este tipo, inclusive los de versión rápida no
deben ser auto indicado, lo debe siempre indicar un médico.
Toda la serología disponible hasta este momento es para uso profesional,
por tanto no se recomienda el autotesteo, es decir realizar el test por
personas que no son del área de laboratorio clínico.
No se recomienda el auto interpretación por parte del paciente, pues lo
debe interpretar un médico dentro del contexto clínico.
Los médicos clínicos deben recurrir a los profesionales de laboratorio para
interpretar casos discordantes con la clínica.
Es muy importante estandarizar y hacer un buen análisis de riesgos de las
fases pre analítica, analítica y pos analítica en la implementación de estos
exámenes serológicos y conocer muy bien su desempeño analítico y
clínico.
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