Tema 13.

Virología: principios básicos

Descubrimiento e historia de los virus
1892. Ivanovsky. Descubrió que hay agentes filtrables en la enfermedad del mosaico del tabaco
(TMV). No podía observarse al microscopio ni cultivarse en medios artificiales

1898. Beijerinck. Descubrió que el agente causante del mosaico del tabaco era capaz de multiplicarse
en los tejidos de las plantas infectadas

Inicios siglo XX. Diversos investigadores descubrieron otros agentes infecciosos filtrables, capaces de
producir enfermedades en animales y plantas (virus)

1911. Rous demostró que un virus podía causar cáncer en pollos (virus del sarcoma de Rous). Fue el
primer investigador en demostrar que un virus podía causar cáncer en animales

1915. Twort, d`Herelle en 1917. Bacteriófagos

1935. Stanley. Cristalizó el TMV y demostró su composición química: proteína

1939. Se observó que el TMV es una proteína y una molécula de RNA. Posteriormente se observó
que en otros virus aparecía proteína y DNA, pero nunca DNA y RNA juntos. Los virus siempre están
formados por 2 macromoléculas: proteína + ácido nucleico

El desarrollo de la microscopía electrónica y de técnicas de cultivo de virus, así como los avances en
genética y biología molecular, permitieron el descubrimiento y el estudio de numerosos virus a partir
de los años 60 del siglo pasado

1960 – 1970. Se descubrieron numerosos virus oncogénicos de distintas familias

1978. Diener. Viroides

1982. Prusiner. Priones

2000. Importancia ecológica de los virus marinos. Los virus son los microorganismos más abundantes
en los océanos (virioplancton)

8% del DNA humano es de origen vírico

Efectos de los virus

Los virus que causan enfermedades en plantas y animales han sido ampliamente estudiados

No siempre tienen efectos negativos:

- Arabidopsis: infectada con el virus de la viruela del ciruelo aumenta la tolerancia a la sequía
- La infección por densovirus del pulgón del manzano da lugar a una disminución del tamaño y
de la descendencia, pero se forman alas
- La coinfección de pacientes con HIV por el virus de la hepatitis G disminuye la replicación y la
infectividad del HIV
1
Características comunes de los organismos celulares
Estructura celular

Composición bioquímica. Macromoléculas:

- Ácidos nucleicos (DNA y RNA)

- Proteínas
- Lípidos
- Polisacáridos

Metabolismo

Crecimiento

Reproducción

Respuesta a estímulos ambientales

Evolución

Características generales
No poseen estructura celular, ningún tipo de orgánulo ni ribosomas. Estructura: ácido nucleico
rodeado de una cubierta proteica o cápside (nucleocápside). Algunos tienen envoltura

Composición bioquímica sencilla: contienen solo un tipo de ácido nucleico (DNA o RNA). Cubierta
proteica. Pocas enzimas. No poseen la maquinaria de generación de ATP

Carecen de metabolismo propio

No hay crecimiento ni división. Replicación por síntesis por separado de sus componentes y posterior
reunión de los mismos

Parásitos intracelulares obligados. Dependen totalmente de la maquinaria biosintética de la célula

que infectan

Características diferenciales
Estructura acelular

Composición química sencilla. Un solo tipo de ácido nucleico

Replicación

Dos fases en su ciclo vital:

- Extracelular: partícula vírica completa o virión

- Intracelular: ácido nucleico en replicación

2
Estructura y composición química de los viriones
1. Ácido nucleico (genoma)
DNA o RNA, monocatenario (mc) o bicatenario (bc). El RNA mc puede ser (+) o (-). Un grupo
muy pequeño de virus pueden tener RNA y DNA, pero en momentos distintos de su ciclo vital

Molécula lineal o circular

Algunos virus RNA tienen genomas segmentados
Porcentaje de ácido nucleico en el virión entre 1 y 50%
Genoma generalmente mucho menos que el genoma de las células, aunque algunos virus
tienen un genoma mayor que el de algunas bacterias
Los genomas de virus RNA generalmente son más pequeños que los virus DNA
Los virus más pequeños contienen dos genes y los más grandes (que infectan algunas amebas)
más de mil.
o Circovirus 1,77 kpb
o Megavirus 1.5 Mpb
o Pandoravirus 2,5 Mpb
2. Cápside
Cubierta proteica constituida por subunidades proteicas denominadas capsómeros, que se
disponen alrededor del ácido nucleico según un patrón preciso y muy repetitivo
o Codificadas por genes víricos
o Algunos virus tienen solo una clase de proteína debido al pequeño tamaño de su
genoma
Las cápsides pueden tener autoensamblajes espontáneamente o requerir la ayuda de la célula
hospedadora para su plegamiento y ensamblado
Funciones de la cápside:
o Protección del ácido nucleico
o Especificidad de hospedador por afinidad por receptores específicos de la célula
hospedadora (virus desnudos)
Tipos básicos de simetría de la nucleocápside:
o Helicoidal (virus filamentosos) (TMV)
Longitud determinada por la longitud del ácido nucleico
La anchura depende del tamaño y empaquetamiento de los capsómeros
o Icosaédrica (virus esféricos) 20 caras y 12 vértices
Disposición más eficiente de las subunidades de una cubierta cerrada
Subunidades proteicas: pentámeros (vértices), hexámeros (caras)
Pueden poseer espículas en los vértices

3
 Algunos tipos de virus presentan cápsides que no se encuadran en los dos tipos básicos de
simetría:
o Estructura mixta o binaria
Cabeza icosaédrica y cola helicoidal
Bacteriófagos
o Cápsides complejas
3. Envoltura
Puede existir (virus envueltos) o no (virus desnudos) tanto en virus RNA como en virus DNA
Es una cubierta lipoproteica que rodea la nucleocápside con estructura de membrana unitaria
(bicapa lipídica)
o La envoltura proviene de la membrana de la célula hospedadora a la que se incorporan
proteínas víricas
o Proteínas de la envoltura determinadas por genes víricos y los componentes lipídicos
y glucídicos proceden de la célula hospedadora
Común en virus animales y menos frecuente en virus de plantas y bacterias debido a la pared
celular que rodea a la membrana
Puede presentar proyecciones o espículas, proteicas, que pueden tener actividad biológica
Las proteínas y glicoproteínas de la envoltura participan en el reconocimiento y unión a la
célula hospedadora-> especificidad
La envoltura también controla en parte la entrada en la penetración hospedadora

4. Otros componentes del virión

Enzimas
o Enzimas que facilitan la entrada o la liberación de viriones de la célula hospedadora
Lisozima (bacteriófagos)
Neuraminidasas (virus de la gripe)
o Algunos virus tienen sus propias polimerasas para la replicación y transcripción del
genoma vírico:
RNA polimerasas RNA dependientes: virus con genomas RNA (las células no las tienen)
Transcriptasa inversa o retrotranscriptasa DNA polimerasa RNA dependiente: virus
RNA que se replican a través de intermedios de DNA

4
Tamaño y morfología de algunos viriones

Cultivo de virus
Los virus no crecen en los medios microbiológicos estándar, sino que deber ser cultivados dentro de
sus células hospedadoras adecuadas

Los bacteriófagos y los virus de arqueas son más fáciles de cultivar y se han utilizado como sistemas
modelo. Crecen dentro de las bacterias o de las arqueas en cultivos líquidos o en placas de agar

Los virus animales se han cultivado en animales de experimentación y en huevos embrionados

(actualmente se utilizan cultivos celulares)

Los virus vegetales se pueden cultivar en cultivos de tejidos, cultivos de células enteras o cultivos de
protoplastos. Algunas requieren el uso de la planta entera

5
Cuantificación de virus
Directa:

- Recuento de partículas víricas en microscopio electrónico; en algunos casos se puede hacer

en un microscopio de epifluorescencia

Indirecta:

- Ensayos de hemaglutinación
- Técnicas inmunológicas
- Técnicas moleculares: cuantificación del ácido nucleico vírico por PCR cuantitativa
- Ensayos de infectividad
Basados en el efecto de los virus sobre las células hospedadoras
No es un recuento de partículas víricas sino de unidades infectivas víricas. Una unidad
infectiva de virus es la unidad más pequeña que causa un efecto detectable en un hospedador
susceptible
Cantidad de unidades infectivas de virus por unidad de volumen
Ensayo de formación de placas de lisis o calvas

Ensayo de placas con virus animales

El césped de bacterias se puede sustituir por sistemas de cultivos celulares en monocapa. Así se
pueden cuantificar virus animales

- Las células son lisadas y se observan las “calvas” (placas virales)

- Las células pueden no ser lisadas pero sí alteradas, utilizándose técnicas que pongan de
manifiesto esta alteración

Eficiencia del plaqueo: el número de unidades formadoras de placa (UFP) es siempre menor que el
recuento de partículas víricas por microscopía electrónica

- La eficiencia de infección de los viriones es generalmente bastante inferior al 100% (viriones

inactivos o condiciones inapropiadas para la infectividad)

6
Taxonomía vírica
Existe una gran diversidad de virus y hospedadores

Se pueden clasificar los virus en base al hospedador que infectan: virus bacterianos (bacteriófagos),
virus de arqueas, virus animales, virus vegetales, virus de protozoos, etc.

Actualmente se utiliza un enfoque polifásico que incluye análisis fenotípicos, genotípicos y

filogenéticos

- Tamaño y estructura del virión

- Tipo de ácido nucleico, estructura y tamaño del genoma
- Ciclo de replicación
- Secuencia del genoma vírico (establecimiento de relaciones evolutivas)
- Rango de hospedadores
- Patogenicidad
- Otras: propiedades antigénicas, sensibilidad a inhibidores, etc.

Comité Internacional de taxonomía de Virus (ICVT) 1966: supervisa la clasificación y denominación

de los virus

Taxones y nomenclatura ICTV

Orden: terminación en – virales

Familia: terminación en – viridae. Generalmente indica alguna característica

Género: terminación en – virus

Especie: no siguen la nomenclatura biológica

- Se usan nombres comunes para las especies

- Las subespecies se designan por un número

Clasificación de Baltimore

Sistema de clasificación de virus basado en los procesos de replicación y transcripción del genoma
vírico

Complementa el sistema del ICTV

7
 Virus RNA (clases III a VI)
Las RNA polimerasas celulares catalizan la síntesis de RNA a partir de DNA, no a partir de RNA

Los virus RNA necesitan una RNA polimerasa RNA dependiente propia, que se utiliza para sintetizar
RNAm (actividad transcriptasa) o para replicar el genoma RNA (actividad replicasa)

- Algunos virus utilizan la misma enzima para realizar ambas funciones mientras que en otros
existen dos enzimas diferentes
- Los virus RNA bc (clase III) y RNA mc(-) (clase V) poseen RNA polimerasa RNA dependientes
en sus viriones

Los virus RNA mc(+) (clase IV) no poseen transcriptasas víricas en el virión

- El RNA del virus funciona directamente como RNAm (+)

- El RNAm se traduce en la célula
Una de las proteínas sintetizadas es una RNA polimerasa RNA dependiente
Sintetiza cadenas negativas (-) que utiliza como moldes para generar más cadenas (+). Parte
de esas cadenas (+) son utilizadas como RNAm y parte constituyen el genoma de los nuevos
viriones
ARNmc(+) -> ARNmc(-) -> ARNmc(+)

Virus RNA (clase V): Retrovirus

Clase V. RNA mc-RT

- Sintetizan DNAbc como intermediario mediante una transcriptasa inversa vírica

RNAmc(+) -> RNA/DNA -> DNAmc(-) -> DNAbc
- La transcriptasa inversa tiene tres actividades
DNA polimerasa RNA dependiente
Ribonucleasa
DNA polimerasa DNA dependiente

- El DNA bc se transcribe a RNAmc(+) (genoma y mensajero) por enzimas celulares

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 Virus DNA (clase VII)
Clase VII. DNA bc RT

El genoma es parcialmente bc (presenta roturas en una cadena) por lo que en primer lugar se
completa por polimerasas celulares

La transcripción es igual que en la Clase I (RNA polimerasas DNA dependientes)

Replicación: formación de RNAmc a partir de DNA y a continuación formación de DNA a partir de

RNA(+) mediante una transcriptasa inversa vírica

DNAbc -> RNAmc(+) -> RNA/DNA -> DNAbc

Hospedadores para virus de las diferentes clases de Baltimore

Solo ciertas clases de Baltimore infectan ciertas filogenias

Los virus de la clase 1 (DNAbc) son los más abundantes en procariotas (bacterias y arqueas)

Los virus de la clase IV (RNAmc+) son los más abundantes en eucariotas

Los hongos solo son infectados por virus de la clase III y de la clase IV

La mayoría de los virus de la clase I (DNAbc) y de la clase V (RNAmc-) tienen hospedadores animales
más que vegetales

La mayoría de los virus de la clase II (DNAmc) tienen hospedadores vegetales más que animales

Los virus de la clase VI (retrovirus) infectan solo a animales

Los virus de la clase VII son más comunes en plantas que en animales

Posición evolutiva

Evolución retrógrada a partir de células

Origen a partir de material genético celular (hipótesis de escape)

Origen en el inicio de la vida, antes de la aparición de LUCA

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Tema 14. Virus bacterianos
Estructura del virión

Los bacteriófagos son muy diversos tanto por su

estructura como por su ácido nucleico

Los más frecuentes son virus con DNAbc (clase I de

Baltimore), desnudos y con estructura binaria (cabeza
y cola)

Pero existen también fagos con otros ácidos nucleicos

y otras simetrías; muy pocos fagos tienen envoltura

Estructura del fago T4 de E. coli

Tipos de infecciones víricas en bacterias

Infección lítica: tras la infección los virus se multiplican utilizando la maquinaria metabólica de la
bacteria y lisan la célula bacteriana, liberándose nuevos viriones

Infección lisogénica: el genoma vírico puede permanecer dentro de la bacteria sin destruirla

Tipos de fagos:

- Fagos virulentos: solo pueden realizar infección lítica

- Fagos atemperados: pueden realizar dos tipos de ciclo

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Ciclo lítico
Los viriones extracelulares se adsorben a la superficie de la bacteria, introducen el ácido nucleico solo
(no la cápside), se multiplican en el citoplasma y liberan nuevos virus por la lisis de la bacteria: ciclo
productivo

Fases:

Adsorción: receptores para bacteriófagos

Unión del fago a la superficie de la célula hospedadora (pared celular)

- Altamente específica
- Requiere proteínas especializadas del virión para la adsorción y receptores específicos en la
superficie de la bacteria
- Las moléculas receptoras son componentes o estructuras de la superficie bacteriana (ácidos
teicoicos, LPS, proteínas de la pared celular, flagelos o pili) que desempeñan funciones
normales en la célula

- En el caso del fago T4, los viriones se unen a la bacteria por las fibras de la cola que
interaccionan con los lipopolisacáridos de la membrana externa de la pared celular de E. coli
- Las fibras de la cola se retraen y la placa basal (con sus espículas) entra en contacto con la
pared celular

Penetración

Entrada del ácido nucleico vírico en el citoplasma de la bacteria. En algunos casos (virus RNA) entran
en la célula bacteriana proteínas víricas específicas (enzimas de replicación)

- Una lisozima fágica abre un pequeño poro en el peptidoglicano

- La vaina de la cola se contrae y hace penetrar el canal central en el citoplasma
- Cuando el tubo alcanza el citoplasma, el DNA se desenrolla y a través del canal central penetra
en el citoplasma
- La cápside queda fuera

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Biosíntesis

Síntesis por separado del ácido nucleico y las proteína fágicas por la maquinaria celular bacteriana
dirigida por el virus

Al penetrar el ácido nucleico vírico en el citoplasma se detiene la síntesis de DNA, RNA y proteínas de
la bacteria y comienza la transcripción del DNA vírico

La expresión de los genes víricos está controlada temporalmente:

Transcripción temprana:

- Realizada por transcriptasas celulares y factores sigma celulares

- RNAm temprano -> traducción en los ribosomas bacterianos -> proteínas tempranas:
o Enzimas víricos de replicación -> replicación del DNA vírico
o Endonucleasas que degradan el DNA bacteriano
o Proteínas que modifican los enzimas de la célula hospedadora para expresar genes
víricos (nuevos factores sigma víricos)

Transcripción media y tardía:

- Realizada por transcriptasas celulares y los nuevos factores sigma víricos

- RNAm tardío -> traducción -> proteínas tardías:
o Proteínas estructurales de la cápside
o Enzimas necesarias para la liberación de los fagos maduros

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Maduración

Ensamblaje de las cápsides y empaquetamiento de los genomas víricos en las mismas

- Autoensamblaje de las proteínas de la cápside e incorporación del ácido nucleico

- Ensamblaje de la cabeza y el ácido nucleico en 3 etapas:
1. Primero se ensamblan las proteínas de las cabezas vacías (precursores de la cabeza del
bacteriófago)
2. Genoma es introducido en la cápside a presión mediante un motor de empaquetamiento
ligado a la energía (ATP producido por la bacteria)
3. Se descarta el motor
- Paralelamente se ensamblan las proteínas de la cola
- Las colas se ensamblan con las cabezas que ya contienen el ácido nucleico
- Finalmente se ensamblan los componentes restante (fibras de la cola)
- Pueden producirse fallos de ensamblaje dando partículas incompletas

Lisis o liberación

Lisis de la bacteria y liberación de los viriones

Depende de dos proteínas tardías que se combinan para abrir una brecha en la membrana y en la
capa de peptidoglicano:

- Holina: forma poros en la membrana

- Lisozima: ataca al peptidoglicano

La célula se rompe por lisis osmótica y se liberan los viriones (más de 100)

13
 Curva de multiplicación vírica en un paso

La replicación del virus se caracteriza típicamente por una curva de crecimiento de un solo paso: el
número de viriones aumenta cuando las células se lisan

Fase de eclipse: replicación del genoma y traducción de las proteínas

Maduración: empaquetamiento de los ácidos nucleicos en las cápsides

Período latente: eclipse + maduración

Liberación: lisis celular

- Tamaño de la explosión: número de viriones liberados

Ciclo lisogénico o reductivo

Algunos fagos con DNAbc además del ciclo lítico pueden establecer una larga relación estable con la
bacteria, en la que no se forman nuevos viriones y la bacteria no es destruida -> lisogenia: persistencia
indefinida del DNA del fago en la célula hospedadora sin producción de fagos

Estos fagos se denominan atemperados o lisogénicos (λ, Mu, P1 de E. coli)

En este estado la mayoría de los genes víricos no se transcriben y el genoma del virus se replica
sincrónicamente con el de la bacteria y pasa a las células hijas tras la división celular

- El genoma del fago suele integrarse en el cromosoma de la bacteria hospedadora (fagos λ,

Mu), pero en algunos casos se mantiene en forma de plásmido (fago P1)
- El genoma vírico que permanece en el interior de la bacteria y se replica sincrónicamente con
su cromosoma se denomina profago, tanto si está integrad en el cromosoma como libre en el
citoplasma

El estado de lisogenia se puede mantener durante largos periodos, pero en determinadas

condiciones el profago puede ser inducido a realizar un ciclo lítico

Inducción es el paso del profago a fago vegetativo que, por tanto, inicia un ciclo lítico

14
Fases:

1. Adsorción
2. Penetración
3. Integración
El DNA se integra generalmente en un sitio específico del cromosoma de la bacteria
4. Replicación con el DNA de la célula bacteriana
Se expresa un gen vírico que codifica una proteína represora. La mayoría de los genes víricos
no se expresan

Inducción

Paso del profago a fago vegetativo que inicia un paso lítico

- Se debe a un fallo en la represión (inactivación del represor o detención de su síntesis)

- Puede producirse de forma espontánea o por acción de diferentes agentes físicos y químicos
que dañan el DNA (luz UV, rayos X, compuestos carcinogénicos)
- Una proteína del virus escinde el genoma del virus del de la bacteria; comienza la
transcripción del DNA vírico y el desarrollo

15
Lisis o lisogenia
Las primeras etapas son las mismas en ambos ciclos, produciéndose la adsorción y penetración e
iniciándose la transcripción (transcripción temprana inmediata)

Caso del fago λ:

- La decisión entre lisis y lisogenia durante la infección por λ depende de un interruptor

genético extremadamente complejo
- La clave son los niveles de dos proteínas tempranas:
o El represor de λ (también denominado proteína cI): reprime el ciclo lítico
o La proteína Cro: activa el ciclo lítico
- La síntesis del represor λ (cI) a su vez tiene una regulación compleja en la que interviene una
proteína (cII)
- La primera proteína que se acumule en la
célula controlará el tipo de infección
o Si se acumula represor de λ (cI) reprime
la expresión de todos los demás genes
de λ, incluyendo cro, y se establece la
lisogenia
o Si se acumula proteína Cro no existirán
niveles suficientes de represor de λ (cI)
para la represión de los genes del fago
y se establece el ciclo lítico

Factores que actúan sobre las proteínas reguladoras:

- La proteína (cII) es muy sensible a una proteasa bacteriana y se ve afectada por varios factores
o Metabolismo bacteriano: cuando el metabolismo bacteriano es activo, en el interior
de la bacteria existe gran cantidad de proteasas; por tanto, se destruye la proteína cII,
lo que implica que no se sintetiza cI (represor de λ) -> ciclo lítico
o Número de fagos por bacteria:
Si el número de fagos es elevado la cantidad de cII es mayor y las proteasas de la
bacteria no son capaces de destruirla toda; por tanto, se sintetiza cI -> ciclo lisogénico
Si el número de fagos por bacterias es bajo, la cantidad de cII es baja y cII es destruida
por las proteasas, no se sintetiza cI (represor de λ) -> ciclo lítico
- Esta regulación supone una ventaja ecológica
En condiciones naturales cuando abundan los hospedadores los bacteriófagos realizan ciclo
lítico
Cuando los hospedadores disponibles son escasos la lisogenia asegura la permanencia del
virus como profago hasta que el número de hospedadores aumente

16
Efectos del profago sobre las funciones del hospedador
Inmunidad

Cuando un fago atemperado lisogeniza una bacteria y se convierte en un profago la bacteria lisógena
no puede ser infectada por un fago del mismo tipo (es inmune). Esto es debido a que los fagos
homólogos son sensibles al mismo represor

Conversión lisogénica

Cuando el profago le confiere a la bacteria nuevas propiedades genéticas porque se expresa algún
gen del fago

Virus de arqueas (arqueovirus)

Hasta ahora todos los que se han identificado tienen genomas DNA. La mayoría son de DNAbc (grupo
I de Baltimore) pero existe alguno de DNAmc

No se ha aislado ningún virus RNA de arqueas hasta ahora, pero los estudios genómicos sugieren que
existen: se han obtenido arqueovirus DNA en fuentes termales ácidas y secuencias únicas de RNA
vírico que no se ajustan a ningún RNA conocido

Virus DNA de arqueas

La mayoría DNAbc circular; también existe alguno de DNAmc

Gran diversidad morfológica. Muchos con morfologías similares a las de los bacteriófagos (cabeza y
cola), pero otros presentan morfologías inusuales que definen familias únicas

Envoltura. Presente en muchos

Ciclos:

- Lítico
- Productivo sin lisis, con liberación de viriones envueltos por gemación, que se parece al
mecanismo que utilizan los virus envueltos de eucariotas
- Lisogénico

ATV (Acidianus two – tailed virus)

Virus de la Crenarchetota Acidianus, arquea de hábitats ácidos (pH 1,5) y cálidos (85º – 90ºC)

- Cuando la célula se lisa los viriones liberados tienen forma apiculada

- Poco después de la liberación, el virión produce dos colas finas y largas, una en cada extremo,
cuando la densidad de arqueas es baja
- Es el primer ejemplo de desarrollo viral sin contacto con la célula hospedadora
- Se cree que estas colas contribuyen a que los viriones puedan sobrevivir en ese ambiente
ácido y cálido. Tiene ciclo lisogénico

17
Protección de bacterias y arqueas frente a virus
Mecanismos de protección frente a los virus:

- Inespecíficos: enzimas de restricción, exclusión del fago, infección abortiva

- Específicos: CRISPR

Enzimas de restricción

Endonucleasas de restricción: enzimas bacterianas y arqueanas que cortan DNA extraño en sitios
específicos. Este proceso se denomina restricción y es un mecanismo general de las bacterias y
arqueas para evitar la invasión por DNA vírico o de otro origen

- La bacteria protege su DNA modificándolo en los sitios en donde estas enzimas actúan,
típicamente por metilación de los nucleótidos
- Algunos virus son capaces de superar la restricción del hospedador, modificando su propio
DNA para que no sea reconocido por las enzimas de restricción de la bacteria (T4). Otros
producen proteínas que inhiben el sistema de restricción del hospedador (T7)
- Algunas bacterias han desarrollado enzimas de restricción alteradas que reconocen el DNA
viral modificado

Exclusión de fagos

Variante de los sistemas de restricción

- Son enzimas que reconocen y modifican el DNA extraño entrante, impidiendo su replicación

Infección abortiva

- Desencadena el suicidio del hospedador (muerte celular programada)

- El hospedador muere pero se evita que se propaguen más viriones, protegiendo a la población

18
Mecanismo específico: sistema CRISPR – Cas

CRISPR (= repeticiones palindrómicas cortas agrupadas y regularmente interespaciadas)

Es un mecanismo de bacterias y arqueas para protegerse de DNA invasor (virus u otros DNA extraños)

Ampliamente distribuido (90% Arquea y 70% Bacteria)

La región CRISPR comprende secuencias palindrómicas idénticas repetidas del cromosoma del
hospedador que alternan con secuencias cortas variables de DNA extraño (espaciadores) que
previamente invadieron la célula

- Los espaciadores actúan como “banco de memoria de las secuencias de ácido nucleico
entrantes (vírico o de otro tipo) para la vigilancia contra el DNA extraño
- Actúa como un “sistema inmune adaptativo” que impide la destrucción de la célula por virus
y mantiene la estabilidad del genoma

Cas (CRISPR – associated (Cas) proteins = proteínas asociadas al CRISPR)

- Tienen actividad endonucleasa

- Median la defensa e incorporan nuevos espaciadores en la región CRISPR

Cuando el DNA de un virus entra a la célula, las proteínas Cas reconocen regiones específicas de su
DNA, cortan un pequeño segmento del DNA vírico y lo insertan en el DNA celular (un espaciador), en
la región CRISPR, inmunizando a la célula

Cuando la célula inmunizada es infectada por el mismo virus, las proteínas Cas destruyen el DNA
entrante en un proceso dependiente de RNA:

- Se transcribe la región CRISPR en una larga molécula de RNA

- Las proteínas Cas cortan esta molécula en medio de las secuencias repetidas, generándose
pequeños CRISPR RNAs (crRNAs) que se asocian a las proteínas Cas
- Si uno de estos crRNAs es complementario del DNA foráneo invasor lo reconoce y se aparea
formando dúplex (DNA vírico: crRNA)
- La actividad endonucleasa de las proteínas Cas destruye este dúplex de ácido nucleico

Como sobrevive la bacteria o la arquea a la invasión inicial el tiempo suficiente para ser inmunizada:
la inmunización probablemente se produce al entrar en contacto con un virus inactivado o si las
enzimas de restricción cortan el DNA invasor

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Algunos bacteriófagos y virus de arqueas han desarrollado mecanismos para evitar el sistema CRISPR

- Mutaciones en las regiones de reconocimiento

- Producción de inhibidores de las proteínas Cas

Importancia de los virus de bacterias y arqueas

Modelos de estudio

Transferencia genética (transducción)

Ingeniería genética

Papel en los ecosistemas

- Presentes en todos los hábitats donde hay bacteria y arqueas. Importantes en el control de
poblaciones
- El ciclo lítico domina cuando los hospedadores son abundantes; el lisogénico cuando el
número de hospedadores es bajo (aún así, no se conoce virus DNAmc o de RNA lisogénico)
- Medio marino: son los organismos más abundantes del medio marino, aunque solo suponen
un 5% de la biomasa. Lisan diariamente entre el 10% y el 50% de sus hospedadores, lo que
constituye un eficaz mecanismo de renovación de nutrientes
- Viroma humano: los bacteriófagos son los virus más abundantes

Bacteriófagos en la industria biológica

Terapia fágica: fagos virulentos e incapaces de transducción

- No afectan a las células animales

- Solo se multiplican si está presente el patógeno específico

20
Tema 15. Virus animales. Quimioterapia antivírica

Diversidad de virus animales

Existen una gran variedad de virus animales; hay virus animales en todas las categorías de Baltimore

Abundan los virus envueltos

Las enfermedades víricas humanas más comunes y algunas de las más importantes están causadas
por virus RNA

Virus animales
La diferencia entre bacterias y células animales implica una serie de diferencias entre la
multiplicación de bacteriófagos y virus animales;

- Adsorción: no existe pared celular; interacción del virión con la membrana

- Penetración: no hay inyección del ácido nucleico; entra la nucleocápside
- Desnudamiento: necesidad de eliminar la cápside
- Biosíntesis
La síntesis de ácido nucleico vírico puede tener lugar en el núcleo (la mayoría de los virus DNA)
o en citoplasma (la mayoría de los virus RNA)
La síntesis de proteínas es siempre en el citoplasma
- Maduración o ensamblaje: puede tener lugar en el núcleo o en el citoplasma. Si la formación
final del virión tiene lugar en el núcleo, las proteínas víricas tienen que emigrar siempre del
citoplasma al núcleo
- Salida: pueden lisar la célula o salir por una especie de gemación

Al igual que los fagos, los virus animales pueden tener ciclos productivos o establecer complejos
estables con las células hospedadoras (infecciones latentes, cáncer)

Tipos de infecciones víricas

Infección productiva o lítica (es la más frecuente)

- Se producen nuevos virus

- La célula se lisa

Infección persistente

- Virus envueltos
- Liberación constante y lenta de los viriones por una especie de gemación
- No hay lisis celular. La célula infectada permanece viva y continúa produciendo virus

21
Infección latente

- El ácido nucleico vírico no se replica y la célula hospedadora no se daña

- Material genético del virus en el interior de la célula, integrado en el genoma o no
- Ciertos factores hacen que el virus salga de la latencia -> infección lítica
- Herpesvirus (HSV – 1), virus de la inmunodeficiencia humana (HIV)

Transformación tumoral

- Malignización de la célula: conversión de una célula normal en tumoral

- Integración del genoma vírico de forma estable en el genoma de la célula
- Alteración de la morfología, crecimiento e interacciones celulares

22
Fases de la infección productiva o lítica
Adsorción a la célula hospedadora

Unión específica entre el virus y la célula hospedadora

Moléculas de la superficie vírica y receptores de superficie de la célula hospedadora

Moléculas víricas de adsorción:

- Proteínas de la cápside (virus desnudos)

- Glicoproteínas de la membrana externa (virus envueltos)

Receptores en la célula hospedadora

- Proteínas, glicoproteínas o lipoproteínas de la membrana citoplasmática con diferentes

funciones celulares
- Presencia/ausencia en función de la especie, tejido, etc.

Resistencia natural. Las células son resistentes a una infección vírica si faltan los receptores para ese
virus

Penetración

El mecanismo varía según se trate de virus desnudos o envueltos

• Endocitosis mediada por receptor

Virus desnudos y virus con envoltura
Formación de una vesícula endocítica
Liberación en el citoplasma del ácido nucleico (virus desnudos) o de la nucleocápside (virus
envueltos)
• Fusión de la envoltura vírica con la membrana de la célula hospedadora y liberación de la
nucleocápside en el citoplasma
Solo virus envueltos

23
Desnudamiento o descapsidación

Separación del ácido nucleico vírico de su cubierta proteica y, en su caso, de la envoltura

La descapsidación tiene lugar en la membrana citoplasmática o en el citoplasma

- En algunos virus el proceso comienza cuando el virión está unido todavía a la membrana (virus
de la polio): proteasas del hospedador localizadas en la superficie de la célula inician el
desnudamiento
- En los virus que penetran por endocitosis, el pH bajo y las enzimas del endosoma comienzan
el proceso de desnudamiento
- Los virus que penetran por fusión e introducen las nucleocápsides en el citoplasma son
desnudados por enzimas hidrolíticos

Finalmente, queda el ácido nucleico desnudo en el citoplasma de la célula hospedadora, pudiendo

quedar en el citoplasma (genomas RNA) o pasar al núcleo a través de la membrana nuclear (genomas
DNA)

Biosíntesis

Replicación del ácido nucleico vírico y síntesis de proteínas víricas

- La replicación del ácido nucleico vírico puede tener lugar en el núcleo (la mayoría de los virus
DNA) o en el citoplasma (la mayoría de los virus RNA)
- La síntesis de proteínas es siempre en el citoplasma

El DNA celular generalmente no se destruye, pero en un ciclo productivo se detiene la síntesis de

DNA, RNAm y proteínas de la célula hospedadora

Transcripción y replicación del ácido nucleico vírico según la clase de Baltimore correspondiente

Síntesis de proteínas víricas:

- Proteínas tempranas
Generalmente enzimas; se sintetizan en cantidades bajas
Enzimas de replicación del ácido nucleico
Proteínas que detienen la transcripción y l traducción en la célula hospedadora
- Proteínas tardías
Componentes estructurales del virión
Otras proteínas necesarias en el ensamblaje o liberación
Se sintetizan en grandes cantidades

24
Maduración

Ensamblaje de las proteínas de la cápside y posterior empaquetamiento del ácido nucleico en la

misma

Generalmente tiene lugar en donde se haya producido la replicación del ácido nucleico. Si la
replicación es en el núcleo, las proteínas tienen que ser transportadas desde el citoplasma al núcleo
para el ensamblaje

No es efectivo al 100%, formándose algunas partículas defectivas

Liberación de viriones

Virus desnudos: independiente de la maduración

- Salida por lisis de la célula hospedadora

- Proteínas víricas tardías modifican y desestabilizan la membrana

Virus envueltos: simultánea a la maduración

- Salida por gemación

- Las proteínas de la envoltura (proteínas tardías) se incorporan a la membrana citoplasmática
de la célula hospedadora desplazando a las proteínas de esta membrana
- La nucleocápside se sitúa debajo de la membrana modificada, uniéndose a ella
- La membrana plasmática gema para formar la envoltura vírica y simultáneamente liberar el
virión maduro
- Pueden utilizarse otras membranas internas para formar las envolturas víricas

25
Retrovirus
Virus RNAmc (+) con envoltura que se replican a través de un intermediario DNA (grupo VI de
Baltimore)

Genoma: dos moléculas idénticas de RNAmc (+)

Los viriones contienen 3 enzimas: transcriptasa inversa, integrasa y proteasa

- La transcriptasa inversa tiene tres actividades:

DNA polimerasa RNA dependiente
Ribonucleasa
DNA polimerasa DNA dependiente

Fueron los primeros virus de los que se demostró que causaban cáncer en animales

El virus de la inmunodeficiencia humana causa el SIDA

Multiplicación

Adsorción: unión de una proteína de la envoltura a un receptor celular

Penetración por fusión de la envoltura con la membrana celular. Desnudamiento

Retrotranscripción de una de las moléculas de RNA:

- Formación de DNAbc a partir de RNAmc por la transcriptasa inversa en el citoplasma

RNAmc(+) -> DNAmc -> DNAbc

El DNAbc vírico es transportado al núcleo y se integran en el genoma de la célula hospedadora

mediante la integrasa vírica (provirus)

- El provirus puede permanecer latente indefinidamente, replicándose con la célula

hospedadora

Transcripción del DNA retrovírico por una transcriptasa celular, con la formación de RNA genómico
del virus y RNAm víricos

- La traducción de los RNAm víricos dan lugar a poliproteínas, que deben ser procesadas por
una proteasa dando lugar a las distintas proteínas estructurales

Maduración y ensamblaje en nucleocápsides en el citoplasma

Gemación de los viriones en la membrana plasmática: obtención de la envoltura y salida de la célula

26
Gripe
La gripe es causada por un virus RNAmc (-) (grupo V de Baltimore) del grupo de los ortomixovirus,
con genoma segmentado y envoltura

Hay tres tipos de virus de la gripe (A, B, C), siendo la gripe A el más importante como patógeno
humano

Se identifican en función de dos glicoproteínas superficiales, hemaglutinina (H) y neuraminidasa (N)

Variabilidad

- Mutaciones en los genes que codifican los antígenos H y N (deriva antigénica)

- Conversión antigénica o salto antigénico: intercambio de segmentos del genoma de RNA de
dos cepas de virus distintas que infectan a la misma célula

Prevención y tratamiento

Inmunización

Cuidadosa vigilancia a nivel mundial: cada año se obtienen muestras de las principales cepas
emergentes del virus de la gripe antes de la aparición de las epidemias estacionales y se utilizan para
preparar la vacuna de ese año

Tratamiento, uso de distintos antivíricos

27
Cáncer
Tumor o neoplasia: masa anormal de tejido formado por la división sin límites (hiperplasia) de una
célula

- Tumor benigno: mantiene su localización

- Tumor maligno: crecimiento invasivo; focos tumorales en distintas partes del cuerpo
(metástasis) -> cáncer

Cáncer: conjunto de enfermedades caracterizadas por el crecimiento excesivo y descontrolado de

células que invaden y dañan tejidos y órganos

El desarrollo del estado canceroso ocurre en varias etapas:

- Iniciación: cambio genético que sufre una célula inicial y que se transmite a todas las células
de la progenie. Provocada por agentes físicos, químicos o biológicos o por fallos intrínsecos
- Promoción: la transformación maligna se produce posteriormente por una acumulación de
mutaciones

Iniciación del cáncer

Genes celulares alterados en el cáncer:

• Proto-oncogenes
Codifican para proteínas estimuladoras del crecimiento y la división de la célula
Alteración: mutación a oncogenes o sobreexpresión -> crecimiento excesivo e invasivo
• Genes supresores de tumores
Controlan el ciclo de división celular, evitando el crecimiento excesivo y manteniendo la
localización de las células
Alteración: al mutar dejan de expresarse o producen una proteína no funcional
• Genes de reparación del DNA
Responsables de corregir los errores producidos durante la replicación del DNA y los daños
producidos en el DNA por distintos agentes (radiaciones y agentes químicos)
Alteración: aparición de múltiples mutaciones en el genoma; estas mutaciones tendrán efecto
cancerígeno si afectan a proto-oncogenes o a genes supresores de tumores

Virus y cáncer

La relación de los virus con algún tipo de cáncer en animales se conoce desde principios del siglo XX

Aproximadamente el 15% de los cánceres humanos son inducidos por virus

Virus oncogénicos u oncovirus: virus capaces de inducir tumores en animales

- Muchos tipos de virus DNA, solo un tipo de virus RNA (retrovirus) -> la oncogénesis es una
propiedad del DNA vírico
- En todos los virus oncogénicos el material genético del virus se integra en el DNA de la célula
hospedadora y se replica con él (similar a la lisogenia)

28
Mecanismos de oncogénesis vírica

- El virus lleva un oncogén que inserta en el genoma de la célula hospedadora

- El DNA vírico, sin oncogén, se inserta en el genoma de la célula hospedadora alterando la
expresión de los genes adyacentes
o Activación de proto – oncogenes
o Inhibición de genes supresores de tumores

Mecanismos indirectos

Superfamilia virus nucleocitoplasmáticos de DNA de gran tamaño (NCLDV)

1992. Coco de Bradford, identificado en 2003 como mimivirus (mimicking microbe)

Virus de gran tamaño (girus) de 200 a más de 1000nm; pueden ser mayores que algunas bacterias

Genoma DNAbc de gran tamaño que se replican tanto en el núcleo como en el citoplasma de la célula
hospedadora

Comprende actualmente 9 familias que incluyen virus de vertebrados, insectos, algas y protozoos

29
Mimivirus

Infectan amebas

Genoma DNAbc de gran tamaño con genes implicados en la reparación del DNA, en la replicación del
DNA, en la transcripción y en la traducción, por lo que tienen menos dependencia de la maquinaria
enzimática del hospedador

Sintetizan y ensamblan todos los componentes del virión en regiones del citoplasma de la ameba
denominado viroplasma o factorías citoplasmáticas que pueden ser tan grandes como el núcleo
celular

- Los viroplasmas (fábricas virales unidas a la membrana) se forman en algunas células

eucariotas para aumentar la tasa de ensamblaje del virión y protegerse de la defensa del
hospedador

Mimivirus y virófagos

Un descubrimiento fue la detección de pequeñas partículas similares a virus rodeando a los Mimivirus
intracelulares

Estas estructuras contienen DNA rodeado por proteínas de la cápside, por lo que deberían ser virus.
Sin embargo, el DNA de estas partículas no codifica las proteínas necesarias para su replicación y no
se puede replicar por sí mismas dentro de las amebas

Estas diminutas estructuras secuestran las factorías de replicación del virus y, finalmente, la
formación de Mimivirus defectivos incapaces de infectar nuevas células hospedadoras. Estas se
denominaron virófagos por su analogía con los bacteriófagos

Interferencia vírica
La infección por un virus interfiere con la infección posterior por otro virus. Moléculas responsables:
interferones (IFNs). Los interferones constituyen una respuesta inmune contra virus

Son proteínas solubles de bajo peso molecular producidas por ciertas células de vertebrados cuando
son infectadas por virus

Existen tres tipos de IFN, tipo I, tipo II y tipo III. El tipo I está inducido por virus. Actualmente se
producen por ingeniería genética

Los interferones se sintetizan en respuesta a virus vivos (virus RNA > virus DNA), a virus inactivados
y a ácidos nucleicos víricos

La producción tiene lugar hasta que se detiene la síntesis macromolecular del hospedador

Las células infectadas por virus de baja virulencia producen gran cantidad de interferón, mientras
que las infectadas por virus muy virulentos producen poco. Estos inhiben la síntesis proteica antes
de que se sintetice el interferón

30
Interferón: acción antivírica
Agente antivírico de amplio espectro

- Son secretados al medio en cantidades mínimas y actúan como mediadores de señales

- Estimulan la producción de proteínas antivíricas (AVPs) en células no infectadas, que impiden
la replicación vírica. Por tanto, no actúan sobre la célula que los produce sino sobre células
adyacentes no infectadas. Su acción no es específica del virus, sino que es específica del
hospedador (incluso del tipo de célula)

Mecanismo de acción

1. Unión a receptores de superficie específicos de células diana

2. Inducción de la síntesis de proteínas antivíricas nuevas (AVPs):
o Degradación del RNAm vírico (inhibición de la traducción vírica)
o Inactivación de la síntesis de proteínas (inhibición de la traducción vírica)

No actúa sobre un virus en particular sino contra cualquier virus que penetre en la célula (amplio
espectro)

31
Quimioterapia antivírica
Importancia de las infecciones víricas, por su frecuencia y la gravedad de algunas

Problema: los virus utilizan la maquinaria del hospedador y poseen pocas funciones propias; es difícil
encontrar sustancias terapéuticas con acción antivírica que no dañen la célula hospedadora

Necesario encontrar funciones exclusivamente víricas

Generalmente sustancias altamente específicas para cada grupo de virus, ya que interfieren
mecanismos definidos de la replicación vírica que difieren ampliamente entre los distintos grupos de
virus; no hay agentes antivíricos de amplio espectro (excepto interferones)

Posibles mecanismos de acción antivírica:

- Inhibición de la adsorción vírica

- Inhibición o bloqueo de la penetración y/o desnudamiento
- Inhibición de la síntesis de ácidos nucleicos víricos
- Detención de la traducción
- Inhibición de la modificación de las proteínas
- Inhibición del ensamblaje y salida

Los agentes antivíricos de mayor éxito y de uso común son los análogos de nucleósidos:

- AZT (azidotimidina). HIV. Inhibidor de la transcriptasa inversa

- Aciclovir. Herpesvirus. Inhibidor de la polimerasa vírica

Otros agentes antivíricos

- Inhibidores de la proteasa. HIV. La replicación de los retrovirus requiere un corte de los

polipéptidos por una proteasa vírica. Los inhibidores de la proteasa son agentes
antirretrovirales de gran potencia
- Inhibidores de la neuraminidasa. Virus de la gripe. Inhiben la liberación de los virus de la célula
- Inhibidores de la fusión. HIV

32
AZT

Análogo de la timidina (azidotimidina)

Inhibidor de la retrotranscriptasa en los retrovirus sensibles

- Inhibe la síntesis de DNA durante la retrotranscripción, deteniéndose el crecimiento de la

cadena de DNA

Al entrar en la célula el AZT es convertido en AZT trifosfato, que es la forma activa, por quinasas
celulares

El AZT-3P tiene más afinidad por la transcriptasa inversa que por las polimerasas celulares (unas 100
veces)

Al incorporarse el AZT-P a la cadena de DNA no permite la unión del siguiente nucleósido, por lo tanto
cesa la retrotranscripción

ATZ -> quinasas celulares -> AZT-3P -> transcriptasa inversa -> DNA-P-AZT + P-P

Además, la transcriptasa inversa tiene más afinidad por el AZT – 3P que por la timidina-3P

Primer compuesto para tratamiento del virus del SIDA

33
Aciclovir

Análogo de la guanosina

Inhibe la síntesis de ácidos nucleicos víricos, bloqueando la elongación de la cadena de DNA

Es convertido selectivamente a aciclovir monofosfato por una timidina-quinasa que poseen los virus
sensibles mientras que la timidina-quinasa celular no reconocer al aciclovir

Aciclovir + P -> timidina quinasa vírica -> aciclovir-P

Las siguientes fosforilaciones son realizadas por timidina-quinasas celulares

Aciclovir-P + P -> quinasa celular -> aciclovir-P-P

Aciclovir-P-P + P -> quinasa celular -> aciclovir-P-P-P

El aciclovir-3P tiene más afinidad por la polimerasa vírica que por la celular, por lo que este análogo
se agrega fundamentalmente al DNA vírico

Aciclovir-P-P-P -> polimerasa vírica -> DNA-P-aciclovir + P-P

Al incorporarse el aciclovir-P a la cadena de DNA no permite la unión del siguiente nucleósido:

interrupción del crecimiento de la cadena de DNA

Su poca afinidad a las polimerasas celulares y el hecho de que la fosforilación ocurre solo en células
infectadas hace que tenga una toxicidad baja

Activo contra herpesvirus

34
Tema 16. Virus vegetales. Partículas subvíricas
Virus vegetales
Nivel de conocimiento actual menor

Generalmente producen enfermedades degenerativas y crónicas. Repercusión en las cosechas

Suelen tener un amplio rango de hospedadores. Algunos virus de plantas son también virus de
insectos

Cultivo de virus vegetales:

- Inoculación mecánica en una planta

Lesión local o infección general
- Protoplastos
- Cultivos monocapa de células susceptibles de insecto

Ciclo vital determinado por el tipo de células que infectan

- Presencia de una gruesa pared celular infranqueable para el virus

Estructura y composición

Mayoritariamente carecen de envoltura (desnudos)

Nucleocápside (proteína + ácido nucleico)

- Mayoritariamente de simetría helicoidal

Rígidos
Flexuosos

Ácido nucleico:

- La mayoría son virus RNA. Los virus RNA (+) suponen el mayor porcentaje de los virus de
plantas (grupo IV de Baltimore)

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Ciclo de un virus vegetal

Penetración

- Ausencia de reconocimiento y adsorción (no especificidad)

- Entra el virión completo
- No existen mecanismos activos de entrada
Heridas en la pared celular
Transmisión a través de semillas

Desnudamiento o descapsidación

Replicación

- Muy frecuente en sitios determinados de la célula vegetal asociados a membranas.

Viroplasmas
- Proteínas de replicación, proteínas de la cápside y proteínas de movimiento
- Replicación del ácido nucleico: grupo de Baltimore

Ensamblaje

- Las partículas víricas se ensamblan y se acumulan en la célula vegetal

Movimiento a otras células

Movimiento y distribución en la planta

1. Célula a célula
Unos pocos viriones migran a las células vecinas a través de los plasmodesmos
La capacidad de movimiento célula a célula determina la capacidad infecciosas y el rango de
hospedadores
Proceso activo: proteína vírica específica
2. Movimiento a larga distancia
Dispersión sistémica:
Por tejidos vasculares (floema)
El virus se mueve siguiendo la dirección de los fotoasimilados

Transmisión a otros hospedadores

- Semillas
- Propagación vegetativa
- Contacto
- Vectores (insectos, ácaros, etc.)

36
Partículas subvíricas: viroides
Diener 1971

Solo se han encontrado en plantas en las que causan varias enfermedades. Importancia económica

Moléculas circulares de RNAmc desnudo (no RNAm), carecen de cápside

Pequeño tamaño (246-267 nucleótidos), con alto grado de complementariedad

Estructura secundaria en horquilla por el apareamiento intracatenario de bases (simula una molécula
de doble cadena con los extremos cerrados): estabilidad y protección frente a nucleasas

Entrada por heridas, insectos y otro efecto mecánico

No codifican para ningún polipéptido; totalmente dependientes del hospedador para su replicación

Replicación en el núcleo o en el cloroplasto por una RNA polimerasa celular (RNA polimerasa II)

- Se forma una larga molécula de RNA con muchas unidades de viroides unidas por los extremos
- El viroide tiene actividad ribozímica (RNA catalítico) y corta esta molécula liberando los
viroides individuales

Paso pasivo célula a célula por los plasmodesmos. No se forman proteínas de movimiento

Efectos: asintomáticos o síntomas leves a mortales; la mayoría relacionados con el crecimiento

Mecanismo de acción: imitan a RNA reguladores pequeños o interfieren de alguna forma con ellos

- Los viroides producen RNA pequeños de interferencia (siRNA) como subproducto durante su
replicación. Se ha propuesto que estos siRNA pueden actuar como inhibidores y suprimir la
expresión de genes de la planta que tienen homología con el RNA del viroide. La falta de
expresión de un gen necesario da lugar a la enfermedad

Priones
Prusiner 1982

Solo proteínas

Ausencia de ácidos nucleicos

Partículas infecciosas (transmisibles)

- Causan enfermedades crónicas del SNC en mamíferos (encefalopatías espongiformes

transmisibles)
- No se conocen enfermedades priónicas en animales no mamíferos ni en plantas, pero se han
encontrado priones en levaduras y en otros vertebrados (peces, anfibios) sin que causen
ninguna enfermedad

37
Formas de las proteínas priónicas

Si los priones carecen de ácido nucleico, como se codifica la proteína priónica: la propia célula
hospedadora codifica el prion

La célula hospedadora de animales sanos tiene un gen que codifica la proteína priónica celular normal
PrPC (brazo corto del cromosoma 20 humano): la proteína priónica celular normal se encuentra en la
superficie de las neuronas, sobre todo en el cerebro, de animales sanos

La forma patógena de esta proteína, PrPSc o proteína priónica del scrapie, se acumula en las células
cerebrales formando placas

La secuencia de aminoácidos de la forma normal y la forma patógena de una especie es la misma,

pero tienen una conformación diferente:

- Los priones celulares están formados mayoritariamente por segmentos de hélice α, mientras
que los priones patógenos tienen menos hélices α y más láminas β

Ciclo infectivo de los priones

Cuando un prion patógeno entra en una célula con proteína priónica normal, causa que la PrPC
cambie su conformación a la forma anormal PrPSc

- Parece como si la PrPSc se replicase, pero lo que hace es convertir proteínas priónicas
normales que ya existían en la célula en proteínas priónicas patógenas
- Los nuevos priones patógenos convierten a más priones normales en la forma anormal,
siguiendo una progresión geométrica que recuerda el crecimiento exponencial

Los priones patógenos se acumulan formando agregados insolubles en las células nerviosas, que
conducen a los síntomas neurológicos debidos a la destrucción del cerebro o del tejido nervioso
relacionado

Priones no patógenos

Algunos hongos tienen “priones” que no les causan

ninguna enfermedad detectable, sino que les sirven
para adaptar a condiciones ambientales

También se han encontrado “priones” beneficiosos

en humanos. La proteína mitocondrial MAVS forma
agregados, de forma similar a la descrita para los
priones, en células infectadas por virus. Esta
agregación activa la producción de interferones

38
Tema 17. Elementos genéticos en bacterias

Plásmidos
Muy frecuentes en bacterias y arqueas; raros en eucariotas

Moléculas pequeñas de DNA bicatenario que existen libres en el citoplasma celular y que se replican
independientemente del cromosoma

- Algunos pueden integrarse en el cromosoma: episomas

No tienen existencia extracelular

La mayoría son circulares, pero hay algunos plásmidos lineales

Contienen genes no esenciales (los esenciales residen en el cromosoma), aunque frecuentemente

codifican para funciones útiles y beneficiosas para la célula. Pueden influir en la fisiología de la célula

Tamaño variable, de 1000 a más de 106 pares de bases. Un plásmido típico tiene menos del 5% del
tamaño del cromosoma

Presente en diferente número de copias

Algunas bacterias pueden contener varios tipos diferentes de plásmidos

Número de copias: los diferentes plásmidos se presentan con un número particular de moléculas por
célula. Algunos plásmidos se presentan en la célula en 1-3 copias mientras que otros pueden
presentar más de 100 copias. El número de copias está controlado por genes del plásmido y por
interacciones entre el hospedador y el plásmido

Grupos de incompatibilidad (Inc): los plásmidos que pertenecen al mismo grupo de incompatibilidad
no pueden coexistir de forma estable en la misma célula. Los plásmidos del mismo grupo comparten
un mecanismo común de regulación de la replicación

39
Transferencia: el principal mecanismo de transferencia célula a célula (horizontal) es la conjugación.
Los plásmido que dirigen su propia transferencia son conjugativos (región tra)

Curación: pérdida espontánea o inducida de un plásmido

Replicación

Tienen su propio origen de replicación, pero utilizan enzimas celulares para su replicación

Todos contienen genes para su replicación. Los genes que contiene el plásmido están principalmente
implicados en el control de la iniciación de la replicación y en el reparto de los plásmido replicados
entre las células hijas

La mayoría de los plásmidos circulares se replican:

- De forma similar al nucleoide: iniciación de la replicación en un origen y replicación

bidireccional completando el círculo
- Por un mecanismo de círculo rodante

Debido al pequeño tamaño del DNA del plásmido en relación con el nucleoide, la replicación
completa ocurre muy rápidamente (en la décima parte o menos del tiempo del ciclo de división
celular)

Transferencia

Transferencia vertical: transferencia a las células hijas durante la división celular

Transferencia horizontal: transferencia de una célula a otra. Conjugación

Plásmidos conjugativos: dirigen su propia transferencia de una célula a otra por contacto:

- Los genes implicados en esta transferencia constituyen la región tra

- La transferencia puede ser entre células de la misma especie, especies próximas o entre
especies con una relación muy distante

Plásmidos no conjugativos: no pueden ser transmitidos por conjugación:

- Pueden ser co-transferidos si coexisten en una bacteria con un plásmido transmisible

40
Plásmidos de resistencia (plásmidos R)

Muy extendidos en bacterias; suponen un grave problema en clínica

Confieren resistencia a antibióticos y otros inhibidores del crecimiento

Resistencia múltiple:

- Un solo plásmido R puede llevar varios genes de resistencia

- Una célula puede ser portadora de varios plásmidos R

Generalmente son conjugativos

Estructura:

- Parte constante: contiene los genes para la replicación autónoma y para la conjugación (tra)
- Parte variable: varía considerablemente de tamaño y contiene los genes responsables de la
resistencia r (uno o más)

DNA móvil: elementos genéticos transponibles

Pequeños segmentos de DNAbc insertados en otras moléculas de DNA que pueden desplazarse
físicamente de un lugar a otro en la misma o en otra molécula de DNA. No existen moléculas de DNA
independientes, sino que siempre están insertos en otras moléculas de DNA

Se encuentran tanto en bacterias y arqueas como en eucariotas, así como en virus y plásmidos

No tienen origen de replicación, por lo que se replican solo cuando lo hace la molécula en la que
están insertos

Tipos de elementos transponibles

Los tipos principales en bacterias son las secuencias de inserción (IS) y los transposones

Características comunes:

- Codifican para la transposasa, enzima necesaria para la transposición

- Tienen repeticiones invertidas cortas en sus extremos

Diferencias:

- Secuencias de inserción (IS)

Pequeño tamaño (unos 1000 nucleótidos)
Solo codifican para su propia transposición (transposasa)
- Transposones
Son más grandes que las secuencias de inserción
Codifican para la transposasa, pero tienen más genes

41
Tema 18. Mutación en bacterias
Modificaciones del fenotipo
Son debidas a cambios ambientales, sin relación con el genoma, y no transmisibles

Generalmente se caracterizan porque:

- Afectan a la mayoría de la población sometida a la modificación ambiental

- Son reversibles al desaparecer las circunstancias externas que las produjeron

Pueden ser de distintos tipos:

- Morfológicas
- Cambios enzimáticos
- Patogénicas
- Producción de pigmentos, etc.

Modificaciones del genotipo

Mutación

Recombinación: movimiento de genes entre células no relacionado con la reproducción ->

transferencia horizontal de genes. Produce mayores cambios

La mutación y el intercambio genético son el motor de la evolución

Mutación

Cambio hereditario en la secuencia de bases del ácido nucleico que constituye el genoma de una
célula (DNAbc) o un virus. No implica intercambio físico de DNA entre elementos genéticos

Puede causar cambios en el fenotipo

Algunas mutaciones son beneficiosas, otras perjudiciales y otras no tienen efectos

El crecimiento exponencial en procariotas acumula mutaciones rápidamente

Cepa salvaje: cepa original de cualquier célula o virus aislada de la naturaleza, sin ninguna mutación.
Puede aplicarse a un organismo completo o a un gen particular

Mutante: cepa que difiere de la cepa original en el genotipo (secuencia de nucleótidos del genoma)

42
Aislamiento de mutantes: cribado y selección

Mutaciones seleccionables:

Son las que confieren algún tipo de ventaja al mutante bajo ciertas condiciones ambientales

Fáciles de detectar

Se pueden seleccionar las células mutantes escogiendo las condiciones ambientales adecuadas que
permiten su desarrollo e impiden el crecimiento de la cepa salvaje

Se seleccionan los mutantes en condiciones que permitan la expresión distintiva de los fenotipos
mutantes

- En medios sólidos selectivos

- Condiciones ambientales selectivas

Ejemplos:

- Resistencia a inhibidores químicos (antibióticos)

- Cambios en la nutrición
- Resistencia a fagos

La selección permite el aislamiento de un solo mutante en una población de millones o miles de

millones de células

Mutaciones no seleccionables:

Hay mutantes que no pueden seleccionarse impidiendo el crecimiento de la cepa salvaje aunque
produzcan un cambio fenotípico

Ejemplos:

- Perdida de color de un organismo pigmentado

- Mutantes auxótrofos
- Perdida de la capacidad de producir un antibiótico

Estas mutaciones se pueden detectar examinando un gran número de colonias y buscando las que
son diferentes

Algunas son fáciles de detectar: cambios de pigmentación. Otras son más complejas, como la
detección de mutantes auxótrofos

43
 Aislamiento de mutantes axotróficos

Estos requieren algún nutriente que la cepa salvaje no requiere (prototrofa). La incapacidad de crecer
en un medio que carezca del nutriente indica mutación

Técnica de réplica en placa:

- Transferir las colonias de la placa original (medio completo) a una placa sin el nutriente
- Las colonias salvajes crecerán u las mutantes no
- Se identifica en la placa original la colonia correspondiente al hueco en la placa de réplica
- Se recoge, se purifica y se caracteriza

Tipos de mutaciones

Mutaciones espontáneas:

- Las que ocurren al azar, sin ninguna intervención externa

- Fundamentalmente debidas a errores de replicación
- Tasa de mutación muy baja

Mutaciones inducidas:

- Las que se deben a agentes ambientales o a las provocadas deliberadamente

- Pueden ser debidas a la exposición a la radiación natural o a compuestos químicos que alteran
el DNA

Mutaciones puntuales:

- Mutaciones que afectan solo a un par de bases

- Causadas por la sustitución de un solo par de bases en el DNA (sustituciones)
- El cambio fenotípico depende del punto exacto en que se produce la mutación

44
Bases moleculares de la mutación: sustituciones de bases

Transiciones: una base es sustituida por otra del mismo tipo. Transversiones cuando una base es
sustituida por otra de otro tipo

Mutación de sentido equivocado o cambio de sentido:

- El nuevo codón codifica para un aminoácido distinto, lo que implica un cambio en la secuencia
de aminoácidos de un polipéptido
- Si el cambio ocurre en una posición crítica la proteína puede ser inactiva o menos activa
- No todas las mutaciones de cambio de sentido conducen a proteínas no funcionales

Mutación sin sentido:

- El nuevo codón es un codón de terminación, finalizando la síntesis de la cadena polipeptídica;

la proteína resultante es incompleta
- Las proteínas incompletas son completamente inactivas o están fuertemente afectadas en su
actividad
- El efecto puede ser menor solo si la mutación sin sentido está muy cerca del final del gen

Mutación silenciosa: no afecta a la secuencia de aminoácidos; el nuevo codón codifica para el mismo
aminoácido

Bases moleculares de la mutación: mutaciones de desfase y otras inserciones y deleciones

Mutaciones de desfase o desplazamiento del marco de lectura:

- Inserciones o deleciones de un solo par de bases que provocan un desplazamiento (o desfase)

del marco de lectura
- Alteran por completo la secuencia de aminoácidos desde el punto de la inserción o la
deleción. Cambios drásticos en las proteínas, que normalmente no son funcionales
- La inserción o deleción de dos pares de bases también causa un desplazamiento del marco de
lectura
- La inserción o deleción de tres pares de bases añade o elimina un codón y, por tanto, se añade
o elimina un aminoácido en el polipéptido lo que no suele tener consecuencias graves

Grandes inserciones o deleciones:

- Pérdida o ganancia de cientos o miles de pares de bases

- Pérdida completa de la funcionalidad del gen; incluso pueden afecta a varios genes
- Pueden ser letales
- Generalmente relacionadas con errores durante la recombinación genética o inserción de
elementos genéticos transponibles
- Las grandes deleciones son irreversibles

45
Consecuencias fenotípicas de las mutaciones

Las alteraciones de las proteínas se manifiestan en modificaciones de distintos tipos:

- Morfológicas
- Patogénicas
- Cambios en las propiedades de la proteína, como cambios en la sensibilidad a distintos
factores físicos o químicos
Resistencia y sensibilidad a agentes antimicrobianos
Resistencia a fagos
Resistencia y sensibilidad al frío o calor
- Cambios en la nutrición, ya sea en las fuentes de los elementos o en los requerimientos de
factores de crecimiento (mutantes auxotróficos)
- Mutaciones letales
- Mutaciones condicionales: son aquellas cuya expresión fenotípica depende de las condiciones
ambientales
Algunas de estas son letales en ciertas condiciones ambientales y no en otras: letales
condicionales

Reversión
Alteración del DNA que invierte los efectos de una mutación, restableciendo el fenotipo original

Las mutaciones puntuales son normalmente reversibles

Se denomina revertiente a la cepa en que se restablece el fenotipo original. Pueden ser de dos tipos:

- Revertiente de un mismo sitio: la mutación que restaura el fenotipo se produce en el mismo

sitio que la mutación original. Si la mutación restablece la secuencia original se denomina
revertiente verdadero
- Revertiente de segundo sitio: la segunda mutación ocurre en un sitio diferente del DNA
Mutaciones supresoras: mutaciones que compensan el efecto de la mutación original y
restablecen el fenotipo original

46
Tasa de mutación

La tasa de mutación depende no solo de la frecuencia de alteración del DNA sino también de la
eficiencia de los mecanismos de reparación del DNA. Si el daño se corrige antes de la división celular,
no se produce mutación

Para la mayoría de los microorganismos los errores en la replicación del DNA se producen a una
frecuencia de 10-6 – 10-7 por kilobase. Dado que un gen típico es de 1kb, la frecuencia de mutación
en un solo gen está en el mismo rango

En eucariotas con genomas muy grandes la frecuencia de error en la replicación suele ser 10 veces
menor que en las bacterias

Los virus DNA tienen tasas de error entre 100 y 1000 veces mayores que las de los organismos
celulares

La tasa de mutación en genomas RNA es todavía mayor debido a la falta de sistemas de corrección y
de mecanismos de reparación. Esto implica poblaciones en constante cambio y evolución lo que
obstaculiza la lucha contra ciertas enfermedades víricas

Mutagénesis

La frecuencia de mutación espontánea es muy baja pero hay distintos agentes químicos, físicos o
biológicos que pueden aumentarla y, por tanto, se dice que inducen mutaciones: mutágenos

- Son agentes o compuestos que afectan al DNA

- Incrementan la tasa de mutación
- Químicos
- Físicos
- Biológicos

Las bacterias y arqueas pueden estar expuestas a estos mutágenos en sus medios, no solo
intencionadamente en condiciones de laboratorio

Mutagénesis dirigida. Construcción in vitro de un gen con una mutación específica

Mutagénesis y carcinogénesis: Test de Ames:

Determina si un compuesto químico es mutagénico

Se basa en la correlación entre mutagénesis y carcinogénesis

Determina el incremento en la tasa de reversión de cepas auxótrofas de bacterias en presencia de

un presunto mutágeno

Cepa más utilizada: Salmonella entérica His-

47
Tema 19. Mecanismos de intercambio genético en bacterias y arqueas
Transferencia genética en bacterias
Transferencia horizontal: desplazamiento de genes entre
células que no descienden directamente unas de otras
(normalmente unidireccional)

- Permite una rápida adquisición de características

nuevas
- Promueve la diversidad metabólica

Se conocen tres mecanismos de intercambio genético en

bacterias: transformación, transducción y conjugación

El DNA transferido tiene tres destinos posibles:

- Puede ser degradado por enzimas de restricción

- Puede replicarse si tiene su propio origen de
replicación (un plásmido o el genoma de un fago)
- Puede recombinarse con el cromosoma del
hospedador si existe homología

Recombinación
Intercambio físico del DNA entre elementos genéticos para formar nuevas combinaciones de genes

La recombinación genética supone generalmente cambios mucho mayores que la mutación

El mecanismo más frecuente es la recombinación homóloga o general: intercambio de secuencias

homólogas de DNA de dos fuentes diferentes

- Eucariotas: reproducción sexual (transferencia vertical)

- Procariotas: tras la transferencia de DNA de una célula donadora a una célula receptora
(transferencia horizontal). Normalmente, solo una parte del material genético de la célula
donadora es transferido a la célula receptora

48
Mecanismo molecular de la recombinación homóloga

La recombinación homóloga, además de se un mecanismo de variabilidad genética es utilizada para

reparación de DNAbc

El mecanismo molecular es similar en distintos organismos y células

Muy conservado en los tres dominios y en virus

Los fragmentos de DNA homólogos se aparean, entrecruzan e intercambian segmentos de DNA

- Formación de DNA con grandes regiones heterodúplex, donde cada cadena procede de un
elemento genético diferente

La proteína RecA es esencial en casi todo el proceso de recombinación homóloga

- RecA se ha encontrado en todas las bacterias examinadas, así como en arqueas y en la

mayoría de los eucariotas

49
Transformación
Proceso de transferencia genética por el cual el DNA libre es incorporado del medio por la célula
bacteriana receptora y se produce un cambio genético

Implica la liberación de DNA bicatenario de la célula donadora al medio de donde lo incorporan las
células receptoras, sin contacto directo entre ambas ni intervención de fagos. Solo se transfieren una
pequeña parte de los genes de la célula donadora (10 genes)

Fue descubierta por Griffith en 1928 en una bacteria gran positiva

Este proceso preparó el camino para el descubrimiento del papel del DNA como material genético

Se ha encontrado en bacterias gram + y gram – y en algunas arqueas

Experimento de Griffith

- Inyectó vivos tipo S en ratones. Estos mueren y en su sangre se aíslan neumococos S

- Inyectó S muertos por el calor. El ratón vive
- Inyectó R vivos. El ratón vive
- Inyectó R vivos + S muertos por el calor. El ratón muere y aísla en su sangre neumococos S.
Descarta que pueda ser una mutación: frecuencia demasiado alta, utilización de distintas
cepas S y R (las células S aisladas siempre tenían la cápsula del tipo de las células S muertas
por el calor)
- Conclusión: los neumococos S muertos liberan alguna sustancia capaz de transformar las
células R en S: principio transformante
- Avery, McLeod y McCary 1944. Purificación e identificación del principio transformante: DNA

Competencia
Una célula bacteriana que es capaz de aceptar DNA y ser transformada se dice que es competente;
esta capacidad está determinada genéticamente

En algunas bacterias, la competencia está directamente ligada a los pili

- En las bacterias gran (-), las proteínas del pilus reconocen y se unen al DNA extracelular; la
retracción del pilus introduce el DNA en la bacteria
- En las bacterias gran (+), pili u homólogos a los sistemas de secreción tipo II unen DNA y lo
introducen

El DNA se una a las proteínas del sistema de competencia asociadas a la membrana

50
Mecanismo general de transformación

1. Unión del fragmento de DNAbc a una proteína de unión en la membrana bacteriana

2. Entrada de DNAmc. Una de las cadenas de DNA es degradada por una nucleasa mientras la
otra es introducida a la célula
3. Una vez dentro de la célula, el DNAmc se une a proteínas específicas que lo protegen. Si hay
homología de secuencia, se alinea con la región homóloga del cromosoma bacteriano y tiene
lugar la recombinación mediada por RecA

Regulación de la competencia

Pocas bacterias son competentes de forma natural y fácilmente transformables

En las bacterias naturalmente transformables, la competencia está regulada

- En Streptococcus pneumoniae la competencia es una respuesta de quorum (responde a la

densidad celular)
Las células producen y excretan un pequeño péptido durante el crecimiento y cuando alcanza
una determinada concentración induce la competencia de las células
Todas las células se vuelven competentes pero se mantienen en este estado un corto periodo
de tiempo
- En Bacillus subtilis hay una regulación similar por quorum sensing, pero no todas las células
se vuelven competentes (apenas 20%) aunque permanecen así durante horas
- En Vibrio cholerae es por quorum, presencia de quitina y represión por catabolito

Otras bacterias pueden hacerse artificialmente competentes mediante distintos tratamientos

químicos o físicos (tratamiento con iones Ca2+, electroporación

- La electroporación implica el uso de pulsos eléctricos de alto voltaje para hacer la envoltura
celular permeable y permitir la entrada de DNA. Puede utilizarse con bacterias, arqueas,
levaduras e incluso células vegetales

51
Transducción
Transferencia de un pequeño fragmento de DNA bicatenario de una célula bacteriana donadora a
una bacteria receptora a través de un bacteriófago

Existe en muchas bacterias y al menos una arquea

Dos tipos de transducción:

- Transducción generalizada
Un pequeño fragmento del cromosoma bacteriano se incorpora a un virión en formación en
lugar del genoma vírico y es transferido a otra célula cuando la partícula vírica la infecta
Cualquier fragmento de DNA de la célula donadora puede ser transferido a la célula receptora
- Transducción especializada. Solo fagos atemperados
El DNA de una región específica del cromosoma de la célula donadora se integra en el genoma
del virus, normalmente reemplazando alguno de los genes víricos
Solo determinados fragmentos de DNA de la célula donadora pueden ser transferidos a la
célula receptora

Transducción generalizada

Ocurre durante el ciclo lítico

Un pequeño fragmento del cromosoma bacteriano se incorpora a un virión en formación (partícula

transductora)

Durante la lisis se liberan los viriones normales y las partículas transductoras

Cuando se infectan nuevas células, la mayoría son infectadas por el virus normal pero una pequeña
proporción recibe las partículas transductoras

Los genes de la célula donadora no se pueden replicar independientemente y no forman parte de un

genoma vírico. Si hay homología pueden recombinarse con el cromosoma receptor. Si no se
recombinan, el fragmento de DNA es destruido y se pierde

Cualquier fragmento de DNA de la célula donadora puede incorporarse en el virión y ser transferido
a la célula receptora

Baja eficiencia

52
Transducción especializada

Solo determinados fragmentos de DNA de la célula donadora pueden

ser transferidos a la célula receptora

Ocurre cuando se produce un ciclo lisogénico y luego pasa a un ciclo

lítico

El genoma del fago se integra en un punto específico del cromosoma

bacteriano y se replica con él

Después de la inducción, al producirse la separación del genoma del

fago, normalmente, se escinde de forma correcta, pero en algunas
ocasiones se escinde incorrectamente llevándose algunos genes
bacterianos adyacentes a una parte del profago y dejando algunos genes
del fago

Cuando se produce la liberación, todas las partículas son transductoras

Cuando infectan una nueva célula puede haber recombinación

homóloga o lisogenia

Alta eficiencia

Conjugación bacteriana
Mecanismo de transferencia genética entre bacterias que implica el contacto directo entre células

La conjugación puede tener lugar entre bacterias no relacionadas, incluso de diferentes géneros

Codificada por plásmidos. La célula donadora tiene un plásmido conjugativo y la receptora carece de
este plásmido

- Transferencia del plásmido

- Otros elementos genéticos pueden movilizarse durante la conjugación (plásmidos o
cromosoma)

Los mecanismos de transferencia por conjugación pueden variar según el plásmido implicado, pero
la mayoría de plásmidos en bacterias Gram (-) utilizan un mecanismo similar al del plásmido F de E.
coli

53
Plásmido F

Conjugativo

Contiene genes para replicación del DNA

Contiene elementos transponibles que le permiten integrarse en el cromosoma hospedador

Región tra que contiene genes que codifican funciones de transferencia

- Movilización del DNA a otra célula

- Síntesis de pilus conjugativo y sistema de secreción tipo IV
- Alteración de receptores de superficie para que la célula no pueda actuar como receptora en
la conjugación

Conjugación mediada por el plásmido F

Tipos de células:

• Células F+: poseen el plásmido F libre en el

citoplasma
• Células F-: carecen de plásmido F
• Células Hfr: poseen el plásmido F integrado en el
cromosoma
• Células F´: poseen plásmidos F que contienen
genes del cromosoma

Proceso de conjugación:

1. Emparejamiento específico de las cepas donadoras (F+, Hfr, F´) y receptoras (F-) con una serie
de reacciones que conducen a la formación de un puente de conjugación (codificado por
genes de la región tra)
o Unión específica mediante el pilus de la célula donadora con receptores superficiales
de la célula aceptora
o Retracción del pilus poniéndose en contacto con las dos células
o Mantenimiento del contacto mediante proteínas de unión localizadas en la membrana
externa de cada célula
2. Transferencia de DNA de una célula a otra
o Es necesaria la síntesis de DNA para la transferencia por conjugación
o Esta síntesis no es por el mecanismo de replicación bidireccional normal sino por un
mecanismo de replicación por círculo rodante
o Una cadena del DNA circular del plásmido F es cortada y transferida a la bacteria
receptora
o La enzima cortadora necesaria para iniciar el proceso está codificada en la región tra
del plásmido F
o Tras el proceso, ambas células tienen una copia de DNA transferido

54
Conjugación F+ x F-

El factor F se replica al ser transferido por el mecanismo de círculos

rodantes

- Una cadena del DNA circulares del plásmido es cortada y

comienza a ser transferida al receptor
- A medida que se produce la transferencia, e sintetiza DNA
por el mecanismo de círculo rodante y este nuevo DNA
reemplaza la cadena transferida en la célula donadora,
mientras que se sintetiza una cadena complementaria de
DNA en la célula receptora

Al final de la transferencia tanto la donadora como la aceptora

tienen plásmidos completos, ambas células son F+

No se transfiere DNA del cromosoma donador

No hay recombinación

La transferencia de plásmidos es eficiente y rápida; en condiciones

favorables, casi todas las células receptoras adquieren el plásmido

La transferencia del plásmido F tarda unos 5 minutos

Cepas Hfr

El plásmido F es un episoma y puede integrarse en distintos puntos del cromosoma bacteriano: cepas
Hfr

Cuando está integrado se pueden transferir por conjugación genes cromosómicos junto a genes
plasmídicos: se transfiere parte del factor F y una parte del cromosoma de la célula donadora a la
receptora

La cantidad de DNA cromosómico transferido depende del tiempo que las células permanezcan en
contacto

55
Conjugación Hfr x F-

La transferencia de DNA comienza por un punto

interior del factor F

Cuando el plásmido F inicia la replicación por círculo

rodante ésta continúa después con el cromosoma ya
que forma una sola molécula. Por tanto, una fracción
más o menos grande del cromosoma también se
replica y se transfiere

Si se dejan el tiempo suficiente puede pasar todo el

cromosoma y todo el factor F. sin embargo, las células
generalmente se separan antes. Por tanto, no se
transfiere una copia completa del factor F, y la célula
receptora sigue siendo F-

El DNA cromosómico donador que es transferido

puede ser degradado o recombinar con el DNA de la
célula receptora (alta frecuencia de recombinación)

Útil para hacer mapas genéticos. Hay distintas cepas Hfr que transfieran los
genes en orden diferente

Formación de células F´. Conjugación F´ x F-

Ocasionalmente, los plásmidos F integrados en el cromosoma al separarse

incorporan genes cromosómicos. Estos plásmidos que contienen genes
cromosómicos se denominan F´

En la conjugación se transfiere el factor F´ de la célula donadora a la receptora.

Se establecen diploides parciales para una región concreta del cromosoma

Transferencia genética horizontal en arqueas

Los estudios genéticos en arqueas no están tan avanzados como en bacterias

- Muchas arqueas necesitan condiciones extremas de crecimiento

- La mayoría de los antibióticos no les afectan, por lo que hay que buscar
nuevos marcadores para seleccionar los recombinantes
- No existe una especie modelo en arqueas

Existen ejemplos de transformación, transducción (rara) y conjugación en

arqueas, aunque en algunos casos los mecanismos son diferentes a los de
bacterias

56
Tema 20. Introducción a la ingeniería genética
Ingeniería genética

Uso de técnicas in vitro para el aislamiento, modificación y expresión de DNA o RNA y para el
desarrollo de organismos genéticamente modificados, capaces de producir productos nuevos o
modificados

Herramientas básicas de la ingeniería genética son la amplificación del DNA, electroforesis,

hibridación, clonación molecular, la expresión de genes extraños o la mutagénesis dirigida

La ingeniería genética tiene aplicaciones médicas, industriales o agrícolas

Amplificación de DNA in vitro: reacción en cadena de la polimerasa

La PCR forma múltiples copias de las secuencias diana in vitro. Multiplica segmentos de DNA hasta
miles de millones de veces

Requiere DNA polimerasa y oligonucleótidos sintéticos de DNA como cebadores (primers)

Amplifica fragmentos específicos de DNA de hasta unos miles de pares de bases (secuencia diana) a
partir de una molécula más grande de DNA (molde)

Procedimiento:

1. El DNA molde se desnaturaliza por calor (separación de las cadenas) y se añaden, en exceso,
dos cebadores específicos de oligonucleótidos sintéticos de DNA, que se unen uno a cada
cadena
2. La DNA polimerasa extienden los cebadores usando el DNA original como molde
proporcionando una copia del DNA bicatenario original
3. Una vez duplicada la secuencia diana, se calienta de nuevo, se enfría y se repite el ciclo hasta
30 – 40 veces, incrementándose de 106 a 109 veces

Las DNA polimerasas que se utilicen deben ser termoestables

También puede amplificar RNA después de su conversión a DNA (RT – PCR)

Aplicaciones de la PCR y la RT – PCR

- Obtención de genes para clonación o secuenciación

- Estudios comparativos y filogenéticos
- Amplificación de cantidades muy pequeñas de ADN de distintas procedencias
- Diagnóstico médico
- Ciencia forense

Una importante variación es la PCR con transcripción inversa (RT – PCR). Sintetiza DNA a partir de un
molde de RNAm. Se utiliza para detectar si un gen se expresa o para producir un gen eucariota sin
intrones para su expresión en bacterias. Utiliza el enzima retrovírico transcriptasa inversa para
convertir RNA en DNA complementario (cDNA)

57
Clonación molecular
Amplificación de una secuencia concreta de DNA in vivo. Para hacerlo, primero se aísla la secuencia
de interés; después se inserta este fragmento dentro de otra molécula de DNA (conocida con el
nombre de vector) y, finalmente, se introduce en una célula hospedadora adecuada. Cada vez que
esta célula hospedadora se divide, se replica también la secuencia de DNA foráneo insertado

Se basa en la recombinación de moléculas de DNA diferentes, no homólogas, en una única molécula

- La recombinación se realiza in vitro no en una célula viva

- La molécula recombinante debe introducirse en una célula para su multiplicación y
propagación
- Las moléculas de DNA pueden ser de organismos poco relacionados entre sí

Se obtienen organismos genéticamente modificados, capaces de producir productos nuevos o

modificados

DNA + vector -> hospedador -> propagación

Procedimiento:

1. Obtención del DNA con el gen específico

2. Unión in vitro del DNA deseado a un vector de clonación. Los vectores de clonación se utilizan
para transportar y replicar segmentos de DNA
3. Introducción del DNA recombinante en una célula hospedadora apropiada donde se pueda
replicar
4. Detección y purificación de la nueva cepa recombinante que expresa las características
deseadas
5. Producción de gran número de células con el clon deseado

58
Obtención del DNA origen

1. Obtención a partir de DNA genómico mediante endonucleasas de restricción

2. Amplificación por PCR
3. Síntesis a partir de RNA mensajero (cDNA)
4. DNA sintético

Dificultad de expresar genes eucariotas en bacterias: intrones

Vector de clonación

Elemento genético pequeño con capacidad de replicación independiente que se utiliza para
transportar y replicar segmentos de DNA

Propiedades de los vectores:

- Contener un origen de replicación

- Tamaño relativamente pequeño
- Contener genes de identificación

Principales vectores de clonación: plásmidos y virus. Depende del tamaño del fragmento que se vaya
a clonar y del hospedador

Unión in vitro del DNA de interés con el vector. No debe afectar a su replicación

Las cadenas se unen por una DNA ligasa:

- Si el DNA de interés y el vector se cortan con el mismo enzima de restricción que produce
extremos cohesivos la unión de ambas moléculas está muy favorecida por el apareamiento
de estos extremos cohesivos
- Si son de extremos romos se pueden unir directamente o usando ligadores sintéticos de DNA

Plásmidos como vectores de clonación:

- Origen de replicación independiente

- Pequeño tamaño, que permite que su DNA se aísle y manipule con facilidad
- DNA circular (más estable)
- Gran número de copias por célula, por tanto gran número de copias del gen clonado por célula
- Presencia de genes marcadores seleccionables
- Generalmente fáciles de transferir por transformación artificial, química o física
(electroporación), pero no conjugativos
- Pueden construirse o modificarse en el laboratorio

59
• Plásmido pUC 19 como vector de clonación
Es relativamente pequeño
Se mantiene estable en su hospedador (E. coli)
Contiene un gen de resistencia a la ampicilina para la selección de células del hospedador que
contengan el plásmido
Contiene un corto segmento de DNA artificial (MCS) que tiene sitios de corte únicos para más
de una docena de enzimas de restricción, ausentes en el resto del plásmido. Este segmento
MCS está inserto en el gen lacZ (E-galactosidasa) sin inactivarlo
La inserción del DNA foráneo se puede detectar por un ensayo colorimétrico mediante el gen
lacZ
Clonación:
- Se elige una enzima de restricción con sitio de corte dentro del MCS
- Se corta el vector y DNA extraño con el mismo enzima
- Se inserta DNA extraño en el sitio de corte y se une con una DNA ligasa. Inactivación del gen
lacZ, utilizada para detectar el DNA clonado
- Los transformantes se colocan en un medio que contiene ampicilina y el reactivo incoloro X-
gal para detectar la actividad-galactosidasa
Las células sin DNA foráneo tienen actividad galactosidasa, hidrolizan X-gal y generan un
producto azul (forman colonias azules)
Las células que contienen el vector con la inserción de ADN foráneo son blancas porque se ha
inactivado el gen lacZ y no se sintetiza el enzima galactosidasa
• Bacteriófago lambda (λ) como vector de clonación
Se conoce muy bien su biología
Puede contener más DNA que la mayoría de
los plásmidos
El fago λ tiene una región central no esencial
para la infectividad que puede ser sustituida
por DNA extraño. Esto permite la inserción de
fragmentos de DNA relativamente grandes,
hasta el doble de la capacidad de clonación de
los vectores plasmídicos típicos
El DNA puede empaquetarse eficientemente
en partículas fágicas in vitro
Puede infectar células hospedadora
adecuadas, de forma mucho más eficiente
que la transformación artificial
Generalmente no se utiliza el fago λ salvaje
sino fagos modificados que actúan como
vectores más útiles

60
Hospedadores para los vectores de clonación

El DNA recombinante debe ser introducido en un hospedador adecuado para su replicación

Características del hospedador ideal:

- Capaz de crecer rápidamente en un medio de cultivo económico

- No patógeno ni dañino
- Capaz de incorporar DNA
- Genéticamente estable en cultivo
- Tener las enzimas adecuadas que permitan la replicación del vector
- Amplio conocimiento de su biología y genética

Introducción del DNA recombinante en la célula hospedadora

Bacterias y arqueas:

- Transformación artificial mediada por compuestos químicos

- Electroporación
- Transducción

Eucariotas:

- Electroporación, ampliamente utilizada en todo tipo de células eucariotas

- Introducción de DNA en células de mamífero y células vegetales

Búsqueda del clon correcto

A menudo se produce una mezcla de recombinantes en las que solo algunas células contienen el gen
deseado

Es esencial detectar y aislar el clon correcto que contiene el gen de interés

Se puede hacer un cribado inicial aislando las células hospedadoras que contengan el vector
mediante la selección de un marcador del vector, como la resistencia a antibióticos, de forma que
solo estas células formen colonias

Es necesario, además, detectar la presencia de DNA foráneo en el vector con el gen de interés

Si el gen clonado se expresa en el hospedador se puede buscar la proteína codificada en las colonias
de la célula hospedadora: utilización de anticuerpos específicos marcados con fluorescencia o
radioactividad

Si el gen clonado no se expresa hay que detectar la presencia del ADN: sondas de ácidos nucleicos
marcadas con fluorescencia o radioactividad

61
Expresión de genes extraños en bacterias

Los organismos tienen sistemas reguladores complejos y con frecuencia los genes clonados se
expresan poco o nada en una célula hospedadora extraña

Los principales problemas para la expresión incluyen la necesidad de un promotor bacteriano, la

eliminación de los intrones, etc.

Vectores de expresión: vector de clonación que contiene las secuencias reguladoras necesarias que
permiten la transcripción y traducción del gen o genes clonados

Los vectores de expresión deben asegurar que el RNAm se traduce eficientemente. Se necesita un
sitio de unión al ribosoma (RBS) apropiado y un codón de inicio

Aplicaciones de la ingeniería genética

- Productos microbianos (antibióticos, enzimas, aminoácidos, etc.)

- Proteínas de mamíferos (insulina, hormona del crecimiento, factores de coagulación, etc.)
- Vacunas víricas
- Biotecnología ambiental (plásticos biodegradables, bioinsecticidas)
- Animales y plantas transgénicos
- Regulación y terapia génica

62
Tema 21. Evolución microbiana
Teorías sobre el origen de la vida
Las diferentes hipótesis sobre el origen de la vida se pueden agrupar en 4 categorías:

- Mitos de la creación (creacionismo)

La vida es el resultado de un suceso sobrenatural no explicable por la ciencia
- Generación espontánea
Origen de la vida compleja a partir de componentes inertes en cortos periodos de tiempo
- Origen cósmico de la vida
Panspermia natural: contaminación de la tierra por “gérmenes” procedentes de meteoritos,
polvo cósmico, etc. Objeciones: condiciones adversas en el espacio. Materia orgánica en
meteoritos. Como se origino la vida en el lugar de donde procedan
Panspermia dirigida: siembre deliberada por seres inteligentes
- Evolución química y celular
La vida surgió en la tierra mediante una serie de reacciones progresivas
Evolución química, prebiótica y biológica

Origen y evolución de la tierra

Origen de la tierra: 4.600 – 4.500 millones de años

Durante los primeros 500 millones de años, condiciones inhabitables, caracterizadas por una
superficie fundida bajo un intenso bombardeo de meteoritos

Ausencia de O2 -> no hay capa de ozono -> intensa radiación UV en la superficie

El agua del planeta se originó por liberación de gases volcánicos del interior del planeta y por las
innumerables colisiones de asteroides y cometas helados. Como consecuencia de las altas
temperaturas el agua estaría en forma de vapor, no habría agua líquida

No hay rocas datadas del origen de la tierra ni evidencias moleculares, pero se han descubierto
cristales antiguos del mineral zircón. Las impurezas atrapadas en los cristales y la relación isotópica
del oxígeno en los mismos indican que es posible que hace unos 4.300 millones de años se formara
la corteza sólida y que el agua empezase a condensarse

Rocas sedimentarias más antiguas: ISSUA (Groenlandia). 3.600 millones de años. Presentan
inclusiones carbonáceas enriquecidas en carbono ligero y restos fosilizados de lo que parecen ser
células

63
Restos fósiles de vida primitiva

Registro fósil del origen de la vida escaso y disperso

Necesidad de utilizar evidencias indirectas y el método científico

Evidencias más antiguas: fósiles químicos

- Compuestos químicos de síntesis biológica

- Fraccionamiento isotópico
La abundancia relativa de los isótopos estables de un elemento cambia cuando son
metabolizados por los microorganismos porque las enzimas prefieren normalmente los
isótopos más ligeros
Por ejemplo, cuando un organismo autotrófico fija CO2, el C celular se enriquece en 12C y se
empobrece en 13C respecto a un estándar de carbono inorgánico de composición isotópica
conocida
Por tanto, el enriquecimiento en isótopos ligeros es indicativo de procesos bióticos
- Las rocas de Issua y Akilia (Groenlandia) de 3.800 millones de años contienen inclusiones
carbonáceas enriquecidas en C ligero. Esto es una evidencia indirecta de que ya hace 3.800
millones de años existía algún tipo de vida simple

Microfósiles más antiguos: 3.500 años

- Elementos globulares y filamentosos encontrados en Australia y Sudáfrica

- Estromatolitos:
Tapetes microbianos (biopelículas gruesas) fosilizados compuestos de capas de procariotas y
sedimentos asociados
Los más antiguos tienen 3500 millones de años, pero se han encontrado en distintas épocas,
incluso actuales
Los estromatolitos actuales dominan las cianobacterias mientras que los antiguos están
formados por bacterias filamentosas fototrofas anoxigénicas

Pasos previos a la aparición de la vida celular

Evolución prebiótica química. los primeros compuestos bioquímicos necesarios para el origen de la
vida se formaron abióticamente

Aparición de los primeros sistemas autorreplicativos, precursores de la vida celular

Establecimiento del sistema tripartito DNA, RNA y proteínas

Síntesis de vesículas de membrana fosfolipídica que envuelven la maquinaria bioquímica y la

replicación celular

LUCA: Último antepasado universal común

64
Evolución Prebiótica química: síntesis de monómeros

Oparin 1924 y Haldane 1929

Bases de la teoría:

- Atmósfera fuertemente reductora con grandes cantidades de CH4, NH3 Y vapor de agua
- En presencia de energía reaccionan y dan compuestos orgánicos: azúcares, aminoácidos
purinas, pirimidinas, varios nucleótidos y ácidos grasos
- En ausencia de O2 esos compuestos serían estables
- Acumulación de grandes cantidades de materia orgánica

Experimentos de Miller y Urey 1953

- HCN y formaldehído
- Urea y ácido fórmico
- Aminoácidos

En contra: atmósfera suavemente reductora (CO2, N2 y H2O). Simulaciones de síntesis orgánica con
rendimientos mucho menores

Actualmente se cree que la atmósfera primitiva pudo ser más parecida a la idea original (más
reductora)

Conclusión: Diferentes experimentos de simulación de las condiciones primitivas, bajo supuestos

muy diversos, conducen a la formación de compuestos químicos biológicos sencillos

Síntesis orgánica extraterrestre:

- Presencia de compuestos orgánicos en polvo interestelar, cometas, asteroides, meteoritos,

atmósferas de Júpiter y Saturno
- Meteorito de Murchison (Australia) 1969: condrita carbonácea
Aminoácidos, hidrocarburos, moléculas isoprenoides, ácidos grasos, adenina, etc.
No hay pruebas de su origen biótico: mezclas equimoleculares de D y L aminoácidos; No
enriquecimiento en isótopos ligeros

Por tanto, los monómeros para la formación de las macromoléculas biológicas pudieron aparecer
como resultado de reacciones químicas relativamente sencillas tanto dentro como fuera de nuestro
planeta

No parece plausible que ocurriese la polimerización en disolución, en la sopa prebiótica

Papel de las superficies minerales como catalizadoras de la polimerización

65
Cuestiones por resolver

- Baja eficiencia en la síntesis abiótica de la ribosa y la desoxirribosa

- Quiralidad: todos los aminoácidos de las proteínas son L y los azúcares de los ácidos nucleicos
(ribosa y desoxirribosa) son D
- la evolución prebiótica química explica la aparición de los principales tipos de moléculas
biológicas pero no explica la evolución hacia organismos equipos, es decir, el ensamblaje
funcional de los componentes para dar un organismo vivo

Donde se originó la vida

- Hipótesis del origen en superficie

- Hipótesis del origen bajo la superficie (chimeneas hidrotermales submarinas)
Las condiciones habrían sido más estables
En estos lugares habría habido un suministro constante y abundante de energía en forma de
sustancias inorgánicas reducidas
La geoquímica puede favorecer la producción abiótica de moléculas necesarias para la vida

Primeros sistemas autorreplicativos

Primera entidad autor autorreplicativa más simple que la célula. Actualmente ácidos nucleicos:
información, proteínas: ejecutoras

Los primeros sistemas autorreplicativos pudieron ser moléculas de RNA (teoría del mundo RNA) que
cumplían ambas funciones: información + catalizador -> ribozimas

Las moléculas de RNA pueden realizar diversas funciones bioquímicas

- El RNA forma parte de cofactores y moléculas esenciales

- El RNA puede unirse a pequeñas moléculas
- El RNA puede catalizar algunas reacciones bioquímicas: ribozimas
- Puede servir de molde para su propia síntesis
- Puede catalizar la síntesis de proteínas
- Puede regular la expresión génica
- Puede haber catalizado su propia síntesis

66
Mundo RNA:

RNA poco estable en disolución

La ribosa es demasiado frágil, especialmente a elevadas temperaturas

Moléculas pre – RNA: análogos más sencillos que el RNA. Se han sintetizado en distintos laboratorios
polímeros artificiales con estructura análoga a los ácidos nucleicos naturales y capaces de portar
información genética (ninguno encontrado en la naturaleza)

- PNA: ácido péptido – nucleico, esqueleto parecido a las proteínas del cual sobresalen las bases
nitrogenadas
- GNA: ácido glicol nucleico (ácido nucleico de glicerol)
- TNA: ácido treonucleico (ácido nucleico de treosa)

Más tarde, al surgir nuevas proteínas, algunas con actividad catalítica, estas reemplazaron la
actividad catalítica del RNA

En algún momento posterior surgió el DNA. El DNA, una molécula más estable, reemplazó las
funciones codificantes del RNA, asumiendo el papel de molde para la síntesis de RNA

El sistema de las 3 partes (DNA, RNA y proteína) evolucionó y se hizo universal

Aislamiento del medio: generación de una membrana. Teoría de los liposomas

- Síntesis de vesículas fosfolipídicas que rodearon a la maquinaria bioquímica y de replicación

- Sustancias anfipáticas

Dos hipótesis:

- Liposomas con RNA autorreplicativo, a los que se incorporarían posteriormente proteínas y

DNA
- Liposomas rodeando al sistema tripartito (DNA, RNA y proteína)

Las primeras células probablemente tenían DNA, RNA, proteínas y una membrana

LUCA

LUCA No significa el primer organismo que existió, ni el organismo actual más próximo al antepasado
común, ni que existiese solo ese organismo al principio

LUCA no es una única especie sino una Comunidad de células primitivas en interacción que fácilmente
intercambiaban sus genes (THG, transferencia horizontal de genes) y de la que divergieron los
antecesores de las actuales bacterias y arqueas

LUCA pudo haber existo hace unos 4.300 – 4000 millones de años

Pre-LUCAs o T-LUCAs (LUCA transiciones). Anteriores a LUCA. Entidades surgidas de la química

prebiótica representando una en que las maquinarias moleculares de replicación, transcripción y
traducción estaban en proceso de evolución

67
Características genéticas de LUCA:

- Unos investigadores en Alemania han generado un retrato genético de LUCA analizando más
de 6,1 millones de genes de 1847 genomas bacterianos y 134 de arqueas, información que se
ha ido acumulando en las bases de datos
- Han identificado 355 genes de familias de proteínas que probablemente estarían presentes
en LUCA y que pueden dar una idea de cómo podría ser su genoma
- Entre los genes encontrados se incluyen algunos en el metabolismo del H2 como fuente de
energía, otros que le permitirían fijar el CO2 y N2, el gen de la girasa inversa y genes
relacionados con lectura del código genético. Además, poseía muchas enzimas repletas de
grupos FeS y FeNiS por lo que debía habitar en ambientes ricos en esos metales
- Los resultados sugieren que LUCA era quimiolitotrófo, autótrofo, anaerobio, termófilo. Con
todos estos datos, es muy probable que LUCA habitase en un ambiente hidrotermal de las
profundidades marinas geoquímicamente muy activo, rico en H2, CO2 y hierro
- Sin embargo, existen otras posibilidades. Por ejemplo, que la vida se originara en cualquier
otro lugar y que posteriormente se quedara confinada a ambientes marinos profundos debido
a alguna catástrofe

Metabolismo primitivo

Condiciones extremas

Metabolismo de las células primitivas exclusivamente anaerobio

La falta de materia orgánica implica que las células primitivas utilizaban el CO2 como fuente de
carbono (autótrofos)

Debían ser quimiolitotróficas, utilizando H2 y H2S como donadores de electrones

Sº (abundante en la tierra primitiva) probablemente fue aceptor de electrones (respiración anaerobia

quimiolitotrófica)

Desarrollo de la capacidad de fijar nitrógeno atmosférico debido a la escasez de compuestos de

nitrógeno combinado

Actualmente existen arqueas y bacterias hipertermófilas quimiolitotrofas, con metabolismos que

podrían adaptarse a las condiciones de la tierra primitiva

Las primeras formas de metabolismo quimiolitotrófico produjeron grandes cantidades de

compuestos orgánicos. La materia orgánica acumulada proporcionó una fuente abundante, diversa
y continuamente renovada de carbono orgánico, disparando la evolución de distintos metabolismos
quimioorganotrofos

Finalmente, la tierra se transformó en aerobia

68
Diversificación metabólica microbiana: fotosíntesis y consecuencias para la biosfera
La fotosíntesis surgió algo más tarde y, al parecer, solo en bacteria

Las primeras formas de fotosíntesis fueron anoxigénicas usando donadores externos como el H2S y
aparecieron hace 3.500 millones de años. Fotótrofos anoxigénicos descubiertos recientemente en
fuentes hidrotermales en la oscuridad del océano realizan la fotosíntesis utilizando la radiación
infrarroja

La diversificación dio lugar a especies que dicen diversos donadores de electrones

Hace entre 3300 y 2500 millones de años, las cianobacterias desarrollaron un fotosistema que podía
utilizar H2O en lugar de H2S como donador externo de electrones, generando O2 como producto de
desecho (fotosíntesis oxigénica)

La fotosíntesis oxigénica y el incremento de oxígeno en la atmósfera terrestre causó el mayor cambio

de la historia de nuestra biosfera y preparó el camino para la evolución de nuevas y más complejas
formas de vida al aprovechar la energía de la respiración del oxígeno

El incremento del oxígeno

El oxígeno no se pudo acumular en la atmósfera hubo reaccionado con los materiales reducidos
existentes en la tierra

Los óxido de hierro son un buen marcador del registro geológico de la presencia del oxígeno en la
atmósfera

- La mayoría del hierro de la tierra estaría en forma reducida (Fe0 y Fe+2) disuelto en los océanos
- El oxígeno producido por el metabolismo de las cianobacterias oxidó los minerales de hierro
reducido formando óxidos de hierro
- Hace 2400 millones de años, la concentración de oxígeno en la atmósfera alcanzó una
concentración de 1 ppm (0,1% respecto a la actual), iniciándose la gran oxidación
- Los óxido de hierro al ser poco solubles precipitaron formando estructuras sedimentarias
denominadas formaciones de hierro en bandas (BIF). Son rocas sedimentarias laminadas
formadas por la deposición de capas de minerales ricos en hierro oxidado y capas de silicatos

Evolución del oxígeno y diversificación metabólica:

- La Fotosíntesis oxigénica apareció varios cientos de millones de años antes de que hubiera
niveles significativos de oxígeno en la atmósfera
- A partir de la Gran Oxidación La concentración de oxígeno en la atmósfera fue aumentado
gradualmente y se fue haciendo óxica
- El desarrollo de una atmósfera óxica provocó la evolución hacia nuevas rutas metabólicas
aerobias con rendimientos mayores que los metabolismos anaerobios; la ventaja energética
de la respiración aerobia supuso que los microorganismos aerobios pudieran reproducirse
más rápidamente que los anaerobios
- Los niveles actuales de oxígeno en la atmósfera se alcanzaron hace 600 millones de años

69
La aparición de la capa de ozono:

- Como consecuencia de la presencia de oxígeno en la atmósfera se formó la capa de ozono

hace 2000 millones de años
Antes de la formación de la capa de ozono la mayor parte de la superficie terrestre sería
inhóspita
Esta capa protege la superficie de la tierra de gran parte de la relación UV
Sin ella la vida solo hubiese podido continuar en ambientes protegidos de la radiación UV
como en los océanos o en el subsuelo
Al aparecer la capa de ozono los organismos pudieron establecerse en la superficie terrestre,
explotar nuevos hábitats y diversificarse

Hipótesis Gaia

Lovelock

Propone que dadas unas condiciones iniciales que hicieron posible la aparición de la vida en la tierra,
ha sido la propia vida en la que las ha ido modificando y, por tanto, las condiciones resultantes son
consecuencia responsabilidad de la vida que la habita. Para explicar cómo la vida puede mantener
las condiciones químicas del planeta, Lynn Margulis destacó la gran capacidad metabólica de los
microorganismos

Origen de los eucariotas

Los linajes que dieron lugar a las actuales bacterias fueron las únicas formas de vida en el planeta
hasta hace 2000 millones de años

Eukarya divergió de Archaea a partir de hace 2700 millones de años

El origen de la célula eucariota y la evolución de la multicelularidad coinciden aproximadamente con

la oxigenación de la atmósfera. El oxígeno puede haber impulsado la evolución eucariota

Los microfósiles demuestran que los eucariotas unicelulares surgieron hace 2000 millones de años,
cuando el oxígeno ya estaba presente en la atmósfera, ya había aparecido la respiración aerobia y
enzimas destoxificadoras de oxígeno, como la SOD (superóxido dismutasa)

- microfósiles eucariota más antiguo que se conoce hace 2000 millones de años
- microfósiles multicelulares de complejidad creciente entre 1900 a 1400 millones de años

70
LECA

Último antecesor común eucariota (antecesor de todos los eucariotas)

Se desconoce la vía evolutiva exacta

La célula eucariota moderna es una quimera genética que contiene genes bacterianos y arqueanos

Se pueden identificar los genes que muy probablemente tenía el último ancestro común eucariota:

- 4000 genes
- Tenía todos los rasgos característicos de las células eucariotas
- >70% de los genes están solo en eucariotas
- El resto de los genes son compartidos con las bacterias o las arqueas

Teoría endosimbiótica

Las mitocondrias de las células eucariotas actuales provienen de la incorporación estable de una
bacteria con metabolismo respiratorio dentro de otra célula

- Las mitocondrias endosimbióticas fueron beneficiosas porque incrementaron la capacidad

respiratoria de esta célula
- Las primeras células con mitocondrias se convirtieron en los ancestros de todos los eucariotas
actuales

Los cloroplastos de las células eucariotas actuales surgieron tras la adquisición de las mitocondrias
por la incorporación estable de una bacteria similar a una cianobacteria, capaz de realizar fotosíntesis
oxigénica. Todos los eucariotas fototróficos descienden de este linaje

Se produjo transferencia de genes entre los genomas de los orgánulos y el del núcleo

El metabolismo y fisiología de mitocondrias y cloroplastos y la secuencia y estructura de sus genomas

respaldan esta teoría

Apoyos a la teoría endosimbionte:

- Dimensiones de mitocondrias y cloroplastos similares a bacterias y se multiplican

independientemente
- Poseen DNA propio (una molécula de DNA bicatenario circular como el de bacterias)
- Replicación de su DNA independientemente del núcleo y no por mitosis
- Poseen ribosomas similares a los de bacterias 70S
- RNAm y RNAt propios
- Síntesis de proteínas propias
- Secuencias del gen del RNAr 16S características del dominio Bacteria
- Los mismos antibióticos que inhiben la función ribosómica en Bacterias inhiben la función
ribosómica en estos orgánulos
- El núcleo eucariota contiene genes de origen bacteriano

71
Lokiarchaeota y el origen de Eukarya

Los genes eucariotas para la replicación, la transcripción y la traducción del DNA proceden de
Archaea, por lo que las arqueas son antecesores de Eukarya

Descubrimiento de los loquiarqueotas:

- Son arqueas cuyos genomas contienen una serie de características eucariotas que sugieren
un citoesqueleto similar al de eucariotas y la capacidad de sintetizar membranas
intracelulares, lo que puede haber facilitado la integración estable de un endosimbionte
- Los análisis filogenéticos indican que pueden ser ancestros cercanos de la línea celular que
dio lugar a Eukarya

Evolución de microorganismos celulares

Evolución -> cambios en los genomas sobre los que actúa la selección natural

- Mutación
- Recombinación: transferencia genética horizontal (en ausencia de reproducción sexual)

Filogenia microbiana: filogenia molecular. Las secuencias de DNA sirven como registro de la historia
evolutiva

Los genes más usados y más útiles para definir las relaciones entre microorganismos son los genes
que codifican para la subunidad pequeña del RNAr (SSU rRNA) (16S en procariotas y 18S en
eucariotas)

- Los ribosomas están distribuidos universalmente en las células

- Funcionalmente constantes
- Suficientemente conservados (cambia lentamente)
- De longitud adecuada

72
Árbol filogenético universal (Carl Woese, 1970s)

Representación gráfica de las relaciones evolutivas de toda la vida basada en los genes que codifican
para la SSU del rRNA

Genealogía de toda la vida en la tierra

Muestra la existencia de 3 dominios: Bacteria, Archaea y Eukarya

La raíz representa el último antepasado común universal (LUCA)

Muestra que las primeras formas de vida fueron microorganismos y que éstos han dominado la
mayor parte de la historia de la vida

A partir del LUCA evolucionaron dos ramas: Bacteria y Archaea

Archaea posteriormente divergió en dos dominios: Archaea y Eukarya

- Archaea y Bacteria no están estrechamente relacionados

- Archaea está más relacionado con Eukarya que con Bacteria

Los microorganismos eucariotas son los antecesores de los organismos multicelulares

Las mitocondrias y cloroplastos se relacionan con linajes específicos del dominio bacteria
(endosimbiosis)

- Antecesor de la mitocondria: proteobacteria

- Antecesor del cloroplasto: cianobacteria

Proximidad entre arqueas y eucariotas

El aminoácido iniciador de la síntesis proteica es la metionina en ambos casos, frente a la formil-

metionina en bacterias

Los antibióticos que inhiben la síntesis de proteínas en bacterias no afectan a esta síntesis en arqueas
y eucariotas

La toxina diftérica inhibe la síntesis de proteínas en arqueas y eucariotas, pero no en bacterias

Ribosomas híbridos de arqueas y eucariotas son funcionales in vitro, mientras que ribosomas híbridos
de arqueas y bacterias no son funcionales

Las bacterias tienen un solo tipo de RNA polimerasa, mientras que arqueas y eucariotas presentan
varios

El antibiótico rifamicina inhibe la RNA polimerasa bacteriana pero no las de arqueas y eucariotas

73
Árboles filogenéticos y genómica

El análisis genómico apoya el concepto de los tres dominios basándose en el análisis de los genes de
las funciones celulares centrales (transcripción, traducción y replicación del DNA)

Árbol filogenético universal y transferencia horizontal de genes:

- Aunque el análisis de numerosos genes apoya el esquema de los 3 dominios, existen genes
compartidos por los 3 dominios o por dos de los 3 dominios
- Hipótesis:
Antes de que los dominios se separasen hubo una extensa actividad de transferencia
horizontal de genes
Con el paso del tiempo se desarrollaron barreras frente a la transferencia horizontal. Como
consecuencia, las poblaciones iniciales genéticamente promiscuas fueron separándose
lentamente en los linajes evolutivos principales, Bacteria y Archaea
Hubo una posterior bifurcación entre Archaea y Eukarya

El esquema evolutivo no es tan lineal y en forma de árbol, sino parecido a una red o telaraña

No obstante, los tres dominios representan las tres líneas evolutivas principales

74
Tema 22. Sistemática microbiana. Clasificación e identificación
Taxonomía

Es la ciencia que caracteriza, nombra y clasifica a los organismos siguiendo criterios definidos

- Clasificación: ordenación en grupos denominados taxones

- Nomenclatura: asignación de nombres
- Identificación: determinación de si un determinado microorganismo pertenece a un taxón
reconocido y a cual

Filogenia: historia evolutiva de un grupo de organismos

Sistemática

Estudio de la diversidad de los organismos y sus relaciones mutuas

Asocia la filogenia con la taxonomía. Utiliza métodos fenotípicos, genotípicos y filogenéticos

Incluye disciplinas como morfología, bioquímica, genética, biología molecular, etc.

Taxonomía en bacterias y arqueas

La taxonomía de bacterias ideas se ha centrado tradicionalmente en aspectos prácticos de
identificación y descripción basados fundamentalmente en comparaciones fenotípicas

La incorporación de información genética permite a la taxonomía reflejar cada vez más las relaciones
filogenéticas

La economía de bacterias y arqueas cambiado sustancialmente en las últimas décadas incorporando

nuevos métodos de identificación de bacterias y criterios adicionales para la descripción de nuevas
especies

La taxonomía actual es polifásica; utiliza 3 tipos de métodos para la identificación, clasificación y

descripción de bacterias y arqueas:

1. Análisis fenotípico: características morfológicas, metabólicas, fisiológicas y químicas

2. Análisis genotípico: características del genoma
3. Análisis filogenético: relaciones evolutivas

Los análisis fenotípico y genotípicos categorizan a los organismos según sus similitudes. Se
complementan con el análisis filogenético que intenta situar a los organismos en el marco de sus
relaciones evolutivas utilizando datos de secuenciación molecular

Análisis fenotípico

El análisis fenotípico examina los caracteres morfológicos, metabólicos, fisiológicos, ecológicos y

químicos de la célula

75
Análisis genotípico

El análisis genotípico analiza distintos rasgos del genoma

Existen diversos métodos para el análisis genotípico:

- Composición de ácidos nucleicos: contenido GC del DNA

- Hibridación de ácidos nucleicos: hibridación DNA – DNA
- Análisis de secuencias génicas
Secuencias de los genes de RNAr de las subunidades pequeñas del ribosoma
Secuencias de otros genes bien conservados
- Huella genómica
- Análisis del genoma completo

Filogenia molecular

La diferencia en la secuencia de nucleótidos entre 2 genes homólogos es una función del número de
mutaciones acumuladas desde que comparten un ancestro común

Las diferencias en las secuencias DNA pueden utilizarse para establecer relaciones

Árboles filogenéticos: diagramas que representan la historia evolutiva

Secuencias firma: oligonucleótidos cortos de secuencia definida que caracterizan organismos

específicos o grupos de organismos

Especie

El concepto de especie biológica no es aplicable a microorganismos, especialmente a bacterias y

arqueas ya que no tienen reproducción sexual

No existe un concepto de especie microbiana universalmente aceptado

Definición clásica de especie en microbiología: conjunto de cepas que comparten un alto grado de
semejanza en varios caracteres independientes y que al mismo tiempo difieren de otras en muchos
caracteres

- Clon o cepa: población de células resultantes de la división de una única célula individual

Actualmente se considera que una especie microbiana es una categoría taxonómica que define una
población de individuos que:

- desciende de un ancestro común (monofilética)

- es coherente desde el punto de vista genómico
- es coherente desde el punto de vista fenotípico
- puede diferenciarse claramente de otras especies

76
Definición actual de especie para Bacteria y Archaea:

Se considera que pertenecen a la misma especie un conjunto de cepas que:

- Son fenotípicamente similares

- Comparten ≥ 70% de secuencias de DNA
- Presentan ≥ 97% de secuencias idénticas en el gen del RNAr 16S

En el caso de género se considera que para proponer que dos organismos pertenecen al mismo
género:

- Se requieren valores de hibridación de DNA de como mínimo un 25%

- La secuencia génica del RNAr 16S debe coincidir en ≥ 95%

No existen criterios consensuados para rangos taxonómicos superiores

Nomenclatura
Todos los microorganismos siguen el sistema binomial de nomenclatura utilizado en toda la biología
(género y especie)

En muchos casos la denominación hace referencia a alguna característica de la especie o de su

descubridor

El Comité Internacional de Sistemática de los Procariotas (ICSP) regula y supervisa la nomenclatura y

taxonomía de las bacterias y arqueas

Descubrimiento de nuevas especies

El reconocimiento de una nueva especie procariota requiere:

- Publicación oficial del nombre y descripción de la nueva en el International Journal of

Systematic and Evolutionary Microbiology (IJSEM). Si se publica en otra revista de reconocido
prestigio, debe enviarse a la IJSEM copia del artículo y toda la información adicional para
solicitar la validación del nombre y su aceptación formal como un nuevo taxón
- Depósito de una muestra del organismo en dos colecciones de cultivo internacionales

El ICSP es responsable de supervisar la nomenclatura y taxonomía de Bacteria y Archaea. Supervisa

la publicación del IJSEM y el International Codeo f Nomeclature of Bacteria

Clasificación
Organización de organismos en grupos progresivamente más generales en base a su parecido
fenotípico o su parentesco evolutivo

El taxón más alto es el Dominio

77
Identificación
Métodos de identificación dependientes de cultivo:

- Aislamiento y obtención de cultivo puro

- Caracteres morfológicos
- Caracteres bioquímicos y fisiológicos
- Caracteres genéticos

Métodos de identificación no dependientes de cultivo:

- Métodos inmunológicos
- Métodos basados en ácidos nucleicos

Métodos de identificación basados en ácidos nucleicos

Métodos extremadamente sensibles basados en la análisis de ácidos nucleicos. Utilizan

características genotípicas para identificar microorganismos específicos

Muy utilizados en microbiología clínica, ambiental, de alimentos, etc.

Estos métodos no dependen del aislamiento ni del crecimiento del microorganismo

Basados en que los ácidos nucleicos se aíslan fácilmente, se detectan y miden en cantidades muy
pequeñas, la secuencia es única por lo que proporciona una identificación inequívoca y las secuencias
pueden amplificarse

Métodos:

- Sondas de ácidos nucleicos

- Amplificación de ácidos nucleicos (PCR)

Hibridación de ácidos nucleicos: sondas moleculares

- Detecta la presencia de secuencias específicas de DNA asociadas a un microorganismo o

grupo de microorganismos determinado
- la sonda suele consistir en un oligonucleótido de cadena única de DNA con una secuencia que
se encuentra únicamente en un gen de interés
- si la muestra contiene secuencias de DNA o RNA complementarias a la sonda, la sonda
hibridará
- La sonda se marca con una molécula indicadora (reporter) que puede detectarse después de
la hibridación: un radioisótopo, un enzima o un compuesto fluorescente

78
Tema 23. Dominio Archaea
Características de las arqueas

Algunas características en común con eucariotas

Algunas características en común con bacterias

Características exclusivas de arqueas:

- Paredes celulares únicas; ausencia de peptidoglicano

- Lípido de membrana: diéter o tetraéter de glicerol y moléculas de fitanilo
- Arquelo
- Metabolismo: diversidad metabólica pero algunas diferencias con bacterias y eucariotas
Nunca fotosintéticas. Algunas tienen un metabolismo de obtención de energía a partir de la
luz distinto a la fotosíntesis
Metanogénesis (algunas)
Algunas vías metabólicas únicas
- Ninguna especie patógena conocida

Diversidad en tamaño, morfología, fisiología y ecología

Aunque muchas especies son extremófilas, la mayoría de las arqueas no lo son. Ampliamente
distribuidas en todo tipo de hábitats: suelos, sedimentos, océanos, lagos, en asociación con animales,
pero nunca patógenas (incluidas especies que forman parte de la microbiota intestinal)

Dominio Archaea
Numerosos fila. Muchos contienen microorganismos que no han podido ser cultivados todavía y se
basan solamente en datos de secuenciación de DNA

Se organizan en 4 superfila principales: Euryarchaeota, DPANN, TACK y Asgard

La mayoría de las especies descritas pertenecen a los fila Crenarchaeota y Euryarchaeota

79
 Filum Euryarchaeota
El mayor filum de arqueas, fisiológicamente diverso

Reciben este nombre por la gran variedad de hábitats que ocupan y la diversidad de patrones
metabólicos que presentan

Muchas especies habitan en ambientes extremos de distintos tipos: altas temperaturas, elevada
salinidad, pH muy ácido

Incluyen diversos grupos fisiológicos:

- Halófilas extremas o haloarqueas (la mayoría aerobias) (Halobacterium)

- Metanogénicas (anaerobias estrictas) (Methanococcus)
- Acidófilas extremas y/o hipertermófilas (Thermoplasma, Ferroplasma, Picrophilus)
- Sulfato – reductoras (Thermococcus, Archaeoglobus)

Existe un gran grupo de euriarqueas no cultivables de origen marino

Euryarchaeotas halófilas extremas: haloarqueas

Géneros representativos: Halobacterium, Halococcus, Natronobacterium

La mayoría aerobias estrictas

Requieren elevadas cantidades de sal para crecer

- Requieren concentraciones mínimas de 1,5M de cloruro sódico; crecimiento óptimo 2-4M;

Crecen hasta concentraciones de saturación de sal (32% NaCl, 5,5M)
- Algunas son haloalcalófilas

Hábitats hipersalinos:

- Los hábitats naturales extremadamente hipersalinos son poco habituales: lagos salados,
salinas. Los lagos salados generalmente se encuentran en zonas del planeta secas y cálidas.
Varían considerablemente en su composición iónica, lo que afecta al pH (los lagos alcalinos
son ambientes hipersalinos de elevado pH, 10-12). En las salinas se encuentran a menudo
arqueas morfológicamente inusuales, incluso algunas especies de forma cuadrada
- Las arqueas halófilas extremas también se encuentran en ambientes hipersalinos artificiales,
como salmueras y alimentos muy salados

Las arqueas halófilas extremas requieren grandes cantidades de NaCl para crecer, pero requieren
tanto Na+ como K+ para mantener el equilibrio osmótico

80
Adaptaciones a la vida en ambientes de alto contenido en iones

- Solutos compatibles:
Compuestos orgánicos
K+ (Halobacterium). En lugar de acumular compuestos orgánicos bombea grandes cantidades
de K+ del medio al interior generando un balance hídrico positivo
- La pared celular de Halobacterium está compuesta por glicoproteínas y estabilizada por Na+
Las glicoproteínas son ricas en aminoácidos ácidos, cuyas cargas negativas se unen al Na+
Los iones de sodio se unen a la superficie externa de la pared y son absolutamente esenciales
para mantener la integridad celular; si desciende la concentración de Na+ la pared se disgrega
y la célula se lisa

Proteínas citoplasmáticas de Halobacterium muy ácidas, con carga negativa, que requieren K+ para
su actividad; menores niveles de aminoácidos hidrofóbicos y básicos (las proteínas polares pueden
mantenerse en solución a concentraciones osmóticas elevadas)

Los ribosomas de Halobacterium también requieren altos niveles de K+ para su actividad

Algunas haloarqueas presentan plásmidos grandes (contiene hasta el 30% dek DNA celular total) con
un % GC diferente al cromosoma

Algunas son frecuentemente pigmentadas. Carotenoides fotoprotectores: bacteriorruberinas (C50)

Algunas especies (Halobacterium salinarum) contienen bacteriorrodopsina y usan luz para obtener
energía

Tiene además otras tres rodopsinas en su membrana:

- Halorrodopsina: bomba de Cl- impulsada por la luz como anión para el K+

- Dos rodopsinas sensoras que controlan la Fototaxis modulando la rotación del arquelo

Euryarchaeotas metanogénicas

Géneros representativos: Methanobacterium, Methanocaldococcus, Methanosarcina

Producen metano como parte de su metabolismo energético (respiración anaerobia) -> exclusivo de
este grupo. Complejas reacciones bioquímicas que utilizan coenzimas exclusivos

Anaerobias estrictas

Mayoritariamente mesófilas, aunque algunas crecen a muy altas o muy bajas temperaturas

Diversidad: morfología diversa, distintos tipos de pared celular; diversidad fisiológica y filogenética

Pueden utilizar distintos sustratos para la metanogénesis

- Pueden ser quimiolitotrofas utilizando H2 como donador de electrones y CO2 como aceptor o
pueden utilizar otros compuestos orgánicos sencillos

Parte del ciclo global del carbono

81
Importantes en un amplio rango de hábitats anaerobios

Se encuentran en ambientes anaerobios ricos en materia orgánica

- Fangos pantanosos, sedimentos de lagos y marinos, suelos encharcados, arrozales

- Tracto digestivo de animales
- Fuentes geotérmicas de H2 + CO2 y chimeneas hidrotermales
- Instalaciones artificiales de biodegradación: digestores de aguas residuales
- Endosimbiontes de protozoos anaerobios

Importancia:

- Eslabón final de la bio degradación de la materia orgánica en anaerobiosis

- Tratamiento de aguas residuales. son uno de los principales grupos de microorganismos
responsabilidad y gestión anaerobia de fangos en las EDAR
- El metano que producen puede utilizarse como fuente de energía
- El metano contribuye al efecto invernadero
- Pueden oxidar hierro: corrosión de tuberías

Methanopyrus, euriarquea metanogénica hipertermófila:

- Comparte características con metanógenos e hipertermófilos

- M. Kandleri es la especie termofílica más conocida, capaz de crecer a 122ºC
- Lípidos de membrana únicos. Éteres de bifitalino con cadenas laterales constituidas por una
forma insaturada del fitanilo
- Aislado de sedimentos alrededor de chimeneas hidrotermales submarinas y de las paredes
de estas chimeneas hidrotermales
- Su descubrimiento puede explicar el origen del metano en sedimentos oceánicos. Ambiente
demasiado caliente para que se produjese la síntesis biogénica de metano

Euryarchaeotas hipertermófilas

Géneros representativos: Thermococcus, Pyrococcus

Temperatura óptima de crecimiento superior a 80ºC

Hábitat: chimeneas hidrotermales anóxicas

Thermococcus y Pryrococcus presentan Características fenotípicas muy parecidas a las crenarqueas

hipertermofílicas

Thermococcus gammatolerans es el organismo conocido más resistente a la radiación; tolera hasta

30.000 Grays

- Es capaz de reconstituir los cromosomas dañados sin pérdida de la viabilidad

- Se ha especulado Con la posibilidad de que los mecanismos de reparación del DNA de este
pudieran incorporarse en el genoma de especies superiores con el fin de mejorar la
reparación del DNA y reducir el envejecimiento celular

82
Pyrococcus furiosus (bola de fuego): interés industrial y biotecnológico. Su polimerasa (Pfu) se utiliza
en la PCR

Filum Crenarchaeota
La mayoría de los representantes cultivados son hipertermófilos que se encuentran en hábitats
extremadamente calientes (>80ºC)

Muchos hipertermófilos son quimiolitotrofos autótrofos. Como no existen fototrofos a esas elevadas
temperaturas las crenarqueas quimiolitoautótrofas suelen ser los productores primarios en sus
hábitats

Hábitats: lugares más calientes de la tierra

- Suelos o aguas calentados por energía geotérmica que contienen azufre elemental y sulfuro
de hidrógeno
- La mayoría de ellos metabolizan el azufre. Algunos lo usan como aceptor de electrones en la
respiración anaerobia; y otros lo utilizan como donador de electrones en el metabolismo
quimiolitotrofo
- Hábitats volcánicos submarinos o terrestres, solfataras, chimeneas hidrotermales, zonas
profundas de corteza terrestre, reservorios profundos de petróleo, plantas de producción de
energía geotérmica. Pueden ser ligeramente alcalinos, moderadamente ácidos y hasta ser
extremadamente ácidos (pH<1)

Crenarqueas hipertermófilas de hábitats volcánicos terrestres

Sulfolobus:

- Organismo modelo para estudio de biología molecular de las arqueas

- Manantiales termales ácidos ricos en azufre
- Células lobuladas irregulares
- Quimiolitotrofo aerobio
Oxida compuestos de azufre. Se adhieren fuertemente a cristales de azufre
También pueden oxidar compuestos de hierro

Crenarqueas hipertermófilas de hábitats volcánicos submarinos

Ignicoccus:

- Se encuentran en las proximidades de chimeneas submarinas (temperatura óptima 90ºC)

- Carece de pared celular o capa S
- Tiene una membrana externa exclusiva que contiene ATPasa y es el lugar de producción de
energía
- Tiene una membrana celular interna que rodea al citoplasma y contiene enzimas de
biosíntesis y de otros procesos de información

83
 - Existe un compartimento entre ambas (análogo al periplasma de G-) muy grande, 2-3 veces
el volumen del citoplasma. Contienen vesículas rodeadas de membrana que pueden
funcionar exportando sustancias al exterior de la célula
- Algunas especies son parasitadas por otra arquea, la nanoarquea

Filum Nanoarchaeota
Género representativo: Nanoarchaeum, una sola especie N. equitans

Uno de los organismos celulares más pequeños (0,4µm, 1% del volumen de E. coli)

Coco. Posee una fina capa S y espacio periplásmico

Parásito obligado de la crenarquea Ignococcus hospitalis

Contiene uno de los genomas más pequeños conocidos

Carece de genes para funciones metabólicas fundamentales: depende de su hospedador para

muchas de sus funciones metabólicas

- Obtiene de Ignococcus energía y distintos metabolitos esenciales

- Se adhiere a la membrana externa de Ignococcus y ambas membranas entran en contacto de
forma que se transfieren metabolitos del citoplasma de ésta a la Nanoarchaeum

Filum Thaumarchaeota: arqueas nitrificantes

Género representativo: Nitrosopumilus

Uno de los filum más abundante y extendido del planeta

- Ubicados en suelos, sedimentos marinos, estuarios y océanos, desde las regiones polares a
fuentes termales (75ºC)
- Particularmente abundantes en los fondos oceánicos

Quimiolitoautótrofas oxidadoras de amonio a nitrito

- Viven en mar abierto y está adaptada a la vida en condiciones extremas de limitación de

nutrientes
- Pueden crecer con concentraciones de amonio cien veces menores que las que necesitan las
bacterias nitrificantes

Papel importante en el ciclo del C debido a su elevado número y su capacidad para fijar carbono
inorgánico

Importancia en el ciclo del N

84
Tema 24. Dominio Bacteria
Contiene más de 80 grupos evolutivos principales

Muchos grupos se han definido solamente por la secuenciación de los genes de rRNA 16S, no existen
representantes cultivados

Menos de la mitad de estos fila incluyen especies que se han podido caracterizar en cultivos de
laboratorio (32)

Más del 90% de las especies cultivadas de bacterias pertenecen a cuatro fila:

- Proteobacteria (Gram -). Son el mayor y más diverso grupo de bacterias

- Actinobacteria (Gram +). Bajo contenido en GC
- Firmicutes (Gram +). Alto contenido en GC
- Bacteroidetes (Gram -)

Algunos fila se definen por una característica fenotípica, como la morfología de las espiroquetas o la
fisiología de las cianobacterias. Pero La mayoría de los grupos son fenotípicamente heterogéneos

Filum Proteobacteria
Las Proteobacterias son el mayor filum de bacterias y el más diverso

Más de 1/3 de las especies de Bacteria caracterizadas se incluyen en este grupo

Son todas Gram (-)

Son el grupo metabólicamente más diverso de todas las bacterias: quimiolitoautótrofas,

quimiorganoheterótrofas, respiración aerobia, anaerobia, fermentación y fototrofas (fotosíntesis
anoxigénica)

También diversas en cuanto a su relación con el oxígeno: anaerobias, microaerófilas, aerobias,

facultativas

Gran variedad de formas celulares: cocos, bacilos, espirilos, formas gemantes y con apéndices

Amplio rango de estrategias ecológicas. Se pueden encontrar en prácticamente todos los ambientes
de la tierra exepto en los de mayor temperatura y los de mayor salinidad

Incluyen a la mayoría de las bacterias conocidas de importancia médica, agrícola o industrial

Clases de Proteobacteria

Cada clase incluye numerosos géneros y especies, excepto las Zetaproteobacterias que tienen una
sola especie caracterizada, la bacteria marina oxidadora de hierro

A pesar de las diferencias filogenéticas, especies de diferentes clases de Proteobacterias a menudo

presentan metabolismos similares. Esto demuestra que fenotipo y filogenia a menudo proporcionan
diferentes perspectivas de la diversidad de procariotas (tanto en bacterias como arqueas)

85
Filogenéticamente se dividen en 6 clases:

- Alfaproteobacteria
- Betaproteobacteria
- Gammaproteobacteria
- Deltaproteobacteria
- Epsilonproteobacteria
- Zetaproteobacteria

Alfaproteobacterias

Es una de las clases de proteobacterias más numerosa, con casi mil especies descritas

Gran diversidad metabólica: nitrificantes, fototróficas, fijadoras de nitrógeno, etc.

La mayoría son aerobias estrictas o facultativas

Muchas son oligotrofas: crecen con concentraciones muy bajas de nutrientes. morfología inusual en
algunas de sus especies: Caulobacter

Incluye las bacterias más abundantes en aguas oceánicas: Pelagibacter

Incluye especies importantes en agricultura y en el ciclo del nitrógeno: fijadoras de N2 libres

(Azospirillium) o en simbiosis con plantas (Rhizobium) y otras quimiolitotrofas nitrificantes,
oxidadoras de nitrito a nitrato (Nitrobacter)

También varios patógenos de plantas y animales. Rickettsia, Wolbachia

Otras son de interés industrial en la producción de ácido acético

Caulobacter:

- Bacterias con apéndices o prostecas

- Prosteca: extensión del citoplasma, de menor diámetro que la célula, rodeada de membrana
y pared celular. Funciones:
Adherencia a un sustrato: permite la unión a materia particulada, material vegetal o a otros
microorganismos en hábitats acuáticos generalmente oligotróficos
Incrementa la relación superficie – volumen de la célula: mejora la captación de nutrientes
Reduce la velocidad de sedimentación: evita el hundimiento hacia zonas sin oxígeno (son
aerobias)
- Presenta un ciclo celular complejo con células prostecadas y células nadadoras con flagelo
polar

86
Rickettsiales:

Géneros principales: Rickettsia, Wolbachia

La mayoría son parásitas intracelulares obligadas de células animales, alguna mutualista. No se han
podido cultivar fuera del hospedador; deben cultivarse en huevos embrionados o en cultivos
celulares

Típicamente asociadas con artrópodos

- Causantes de varias enfermedades humanas transmitidas por artrópodos

- Parásitos obligados o mutualistas de artrópodos

Genomas muy pequeños: pérdida de genes

Carecen de muchas funciones metabólicas, obteniendo metabolitos esenciales de sus hospedadores.

No sobreviven mucho fuera de las células

Rickettsia:

- Causan varias enfermedades humanas que se transmiten por garrapatas, pulgas, piojos y
ácaros
- Rickettsia prowazekii (tifus): su genoma es el más similar al de mitocondrias

Wolbachia:

- Parásitas intracelulares de artrópodos y otros invertebrados: infectan crustáceos, arañas,

ácaros, nematodos y más de un millón de especies de insectos
- Probablemente la bacteria infecciosa más extendida en el mundo
- Transferencia a través de los huevos
- Afecta a las capacidades reproductivas de sus hospedadores: inducción de partenogénesis,
muerte de los machos y feminización (conversión de machos en hembras)
- Estrategias de control de vectores

Betaproteobacterias

Metabólicamente se superponen a las alfaproteobacterias y como ellas presentan una diversidad

metabólica considerable

Algunas de gran versatilidad metabólica: Burkholderia

- Gran versatilidad metabólica respecto a los compuestos orgánicos, en particular respecto a

los aromáticos. Degrada >200 moléculas orgánicas, incluidos compuestos aromáticos
clorados (pesticidas) -> importancia en el reciclaje de la materia orgánica y en procesos de
biorremedación
- Burkholderia cepacia: presente en el suelo y patógeno oportunista
Producen compuestos antifúngicos y antinematodos; se encuentra en la rizosfera de las
plantas y les confieren una protección que favorece su crecimiento

87
 Puede ser un patógeno vegetal en determinadas circunstancia; es la principal causa de la
podredumbre de la cebolla
Patógena oportunista en infecciones hospitalarias humanas (nosocomial), muy importante en
los últimos años; capaz de formar biopelículas en el pulmón y resistente a muchos antibióticos

Otras betaproteobacterias: Neisseria meningitidis (causa meningitis meningocócica) y N. gonorrheae

(causa gonorrea)

Gammaproteobacterias

La clase más numerosa de proteobacterias y la más diversa. Incluye casi la mitad de las especies
conocidas de este filum

Gran variedad de tipos metabólicos: quimiorganotróficas, quimiolitotróficas y fototróficas

anoxigénicas

Se han encontrado en una gran diversidad de hábitats, con características ecológicas muy diversas,
incluyendo especies patógenas

Muchos miembros de este grupo se desarrollan muy bien en cultivos de laboratorio y constituyen
algunas de las especies bacterianas mejor conocidas

O. Enterobacteriales

Bacilos anaerobios facultativos inmóviles o móviles por flagelos peritricos

Pruebas diferenciales: oxidasa negativa y catalasa positiva

Requerimientos nutricionales simples

Fermentan azúcares dando distintos productos finales

Muy comunes, ampliamente distribuidas e importantes. Hay especies patógenas humanas, de

animales y plantas y otras de importancia industrial

Se establecen dos grandes grupos en función del tipo de fermentación de la glucosa

- Fermentación ácida – mixta: producen lactato, acetato, succinato, etanol, CO2 y H2.
Escherichia, Proteus, Salmonella, Shigella
Escherichia:
Habitantes casi universales del tracto universal de humanos y animales homeotermos,
aunque no son los organismos dominantes de ese hábitat
o Síntesis de vitaminas para el hospedador (particularmente vitamina K)
o Como anaerobios facultativos, contribuyen a consumir el O2 y hacer anóxico el
intestino
Indicador de contaminación fecal
Algunas cepas son patógenas: gastroenteritis, infecciones urinarias
E. coli, la bacteria más estudiada

88
 - Fermentación butanodiólica: producen principalmente butanodiol, etanol, CO2 y H2.
Enterobacter, Serratia, Klebsiella

Se utilizan distintas pruebas bioquímicas para la distinción de géneros

O. Pseudomonadales

Pseudomonas

Es el género más importante

Excepcionalmente heterogéneo. Más de 150 especies

Bacilos rectos o ligeramente curvados

Móviles por uno o varios flagelos polares

Metabolismo: Quimioheterótrofos con respiración aerobia quimiorganotrofa, oxidasa y catalasa

positivos. Algunos a veces usan nitrato como aceptor final (respiración anaerobia)

Nutricionalmente versátiles. Capaces de utilizar una amplia variedad de compuestos orgánicos como
fuente de carbono y energía

Hábitats

- Suelos y aguas
- Algunos son importantes patógenos de plantas y animales, incluido humanos

Ecológicamente importantes en aguas y suelos:

- Degradadoras de compuestos orgánicos de origen vegetal o animal: mineralización

- Degradadoras de compuestos xenobióticos: biorremediación

Especies patógenas de Pseudomonas:

- Animales. P. aeruginosa
Es un organismo ubicuo, que se ha encontrado en suelo, agua, animales, plantas, y en
infecciones hospitalarias
No es un patógeno estricto, sino oportunista, que produce infecciones en personas con el
sistema inmune debilitado
Causa frecuente de infecciones hospitalarias
Resistente a muchos antibióticos (plásmido R)
- Plantas. P. syringae
Ataca las hojas produciendo clorosis y lesiones necróticas
Responsable del daño por helada en plantas

89
O. Vibrionales

La mayoría son acuáticos, ampliamente distribuidos en hábitats marinos y dulceacuícolas

Algunos patógenos de peces. Vibrio anguillarum

Otros patógenos humanos:

- Vibrio cholerae. Causante del cólera

- Vibrio parahemolyticus. Produce gastroenteritis por consumo de mariscos crudos o poco
hechos
- Algunos bioluminiscentes. Aliivibrio fischeri, Photobacterium.
Importantes en órganos luminosos de peces y calamares

Bioluminiscencia:

- Pueden emitir luz. La mayoría marinas; algunas colonizan órganos

especializados de ciertos peces y calamares y producen luz que el animal
utiliza para señalizar, evitar depredadores atraer a sus presas
- Solo son bioluminiscentes en presencia de oxígeno
- La bioluminiscencia está catalizada por la enzima luciferasa, que además
de oxígeno como aceptor requiere un aldehído alifático de cadena larga
(RCHO) y el flavín mononucleotido reducido (FMNH2). El sistema
generador de luz supone una ruta metabólica para pasar los electrones
directamente del FMNH2 al O2 sin utilizar otros transportadores de
electrones
- Dependiente del quorum

Asociaciones con bacterias bioluminiscentes:

- La bioluminiscencia está ampliamente extendida en animales de aguas

profundas o en animales de aguas menos profundas con actividad
nocturna. En muchos peces e invertebrados la luz se produce en células
especializadas del animal; otras presentan bacterias simbióticas
bioluminiscentes en estructuras especializadas
- Órganos abiertos que albergan densas comunidades de bacterias bioluminiscentes. Están
comunicados con el intestino o con el exterior
Acceso a nutrientes y oxígeno
Altas densidades de población bacteriana (quorum sensing)
- Beneficio de las bacterias
Microhábitat favorable: protección, nutrición
- Beneficio de los animales
Comunicación: reconocimiento sexual, agregación de peces
Atracción de presas
Huida de depredadores

90
 Filum Actinobacteria
Gram (+) con alto contenido G+C

Desde formas bacilares a filamentosas

Principalmente aerobias que se encuentran en suelos y material vegetal

La mayoría comensales inofensivos con la notable excepción de algunas especies de Mycobacterium

Importancia de algunas como productoras de antibióticos o en la producción de derivados lácteos

Representantes de morfología bacilar:

- Micobacterias
Paredes celulares ácido – alcohol resistentes (con ácidos micólicos); céreas, muy hidrofóbicas,
impenetrables para muchos antibióticos
Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium leprae
- Propionibacterium
Fermenta el ácido láctico a ácido propiónico y CO2 -> importante en la fabricación de ciertos
quesos
Algunas especies patógenas. P. acnés

Actinomicetes

Actinobacterias filamentosas: actinomicetos

Bacterias de filamentos ramificados, que forman una especie de micelio de menor tamaño que el de
los hongos

La mayoría forman esporas cuando hay escasez de nutrientes

Streptomyces:

- Género más importante; más de 500 especies

- Microbiota del suelo donde tiene un papel fundamental en la mineralización de la materia
orgánica
- Producen geosmina, sustancia volátil responsable del olor característico a tierra
- Grandes productores de antibióticos; el 50% de los Streptomyces aislados producen
antibióticos; algunas especies produce más de un antibiótico

91
 Filum Firmicutes
Bacterias Gram (+) con bajo contenido en G+C

Orden Lactobacillales. Nunca forman esporas. Géneros Lactobacillus, Streptococcus, Leuconostoc

Orden Bacillales. Hay géneros formadores de endosporas y otros que no:

- Esporógenos: Género Bacillus

- No esporógenos: Género Staphylococcus

Orden Clostridiales. Hay géneros formadores de endosporas y otros que no:

- Esporógenos: Género Clostridium

- No esporógenos: Género Epulopiscium

Orden Lactobacillales

Son bacilos y cocos que no forman endosporas

Incluyen bacterias del ácido láctico (BAL o LAB)

Tienen metabolismo exclusivamente fermentativo produciendo ácido láctico como único o principal
producto de fermentación (homo o heterofermentativas)

- Obtienen energía solo por fosforilación a nivel sustrato

- Anaerobios aerotolerantes

Generalmente solo fermentan azúcares, por lo que se encuentran en hábitats donde los haya

Nutricionalmente exigentes (vitaminas, aminoácidos, purinas, pirimidinas), ya que tienen

capacidades biosintéticas limitadas

Muy utilizadas en la producción y conservación de alimentos

- Derivados lácteos
- Fabricación del vino: realizan la fermentación maloláctica

Algunas especies de Streptococcus son patógenas: infecciones de garganta; caries dental

Bacillales y Clostridiales formadores de endosporas

Se encuentran fundamentalmente en el suelo

Bacillus:

- Aerobios o anaerobios facultativos

- Producen enzimas hidrolíticas extracelulares que degradan polímeros complejos
- Muchos producen antibióticos, en la mayoría de los casos durante la esporulación
- Algunos producen sustancias larvicidas de insectos. B. thuringiensis
- B. subtilis es la bacteria G+ mejor estudiada. Habitante del suelo

92
Clostridium:

- Bacilos anaerobios estrictos

- Algunos habitan el tracto intestinal de mamíferos
- Especies patógenas. Producen toxinas
C. tetani tétanos
C. botulinum botulismo
C. perfringens gangrena gaseosa
- Especies de importancia industrial
C. acetobutylicum producción de acetona, butanol

Filum Bacteroidetes
Grupo muy amplio

Bacilos Gram (-) que no forman endosporas

Movimiento deslizante frecuente en los miembros de este filum, aunque hay muchas especies
inmóviles y unas pocas móviles por flagelos

Género Bacteroides:

- Anaerobio obligado
- Frecuente en la cavidad oral y en el tracto intestinal de humanos y otros animales
Las especies de este género son las que se encuentran en mayor número en el intestino
humano. Contribuye a la digestión y a la nutrición degradando moléculas complejas

Filum Tenericutes: micoplasmas

Conocidos como micoplasmas porque el género Mycoplasma es el mejor caracterizado

Filogenéticamente relacionados con los Firmicutes

Bacterias sin pared celular

- Pleomorfas
- Resistentes a antibióticos que inhiben el desarrollo normal de la pared celular
- Resistencia a la lisis osmótica mediante:
Membranas más fuertes
Esteroles en su membrana; algunos tienen lipoglicanos

Se encuentran entre las bacterias más pequeñas capaces de crecimiento autónomo. Genoma muy
pequeño (aprox ¼ del de E. coli). Parásitos de animales y plantas. Mycoplasma pneumoniae

Cultivo en laboratorio:

- Medios bastante complejos

- Colonias de morfología típica (huevo frito)

93
 Filum Cyanobacteria
Bacterias Gram (-) que realizan la fotosíntesis oxigénica

- Aparato fotosintético con dos fotosistemas (PSI y PSII)

- Clorofila a en tilacoides
- Ficobiliproteínas (ficobilisomas): ficocianina y ficoeritrina. Adaptación cromática

Algunas especies fijan nitrógeno

Gran diversidad de tamaño

Diversidad morfológica: formas unicelulares, coloniales y filamentosas

Muchas presentan envueltas mucilaginosas extensas o vainas. Rodean células aisladas o filamentos

Estructuras celulares:

- Carboxisomas
- Vesículas de gas, típicas en las especies planctónicas
- Pueden presentar distintos tipos de inclusiones de reserva: glucógeno, polifosfatos,
cianoficina
- No tienen flagelos pero algunas tienen movilidad deslizante

Pueden presentar distintos tipos de células especializadas (heterocistos)

Ecología:

- Ampliamente distribuidas en hábitats terrestres, dulceacuícolas y marinos

- Fundamentales en la productividad de los océanos
Cianobacterias unicelulares como Synechococcus y Prochlorococcus son los fototrofos más
abundantes en los océanos
Responsables del 80% de la fotosíntesis marina y del 35% de la actividad fotosintética total
de la tierra; importante efecto en el ciclo global del carbono
La fijación de nitrógeno por cianobacterias supone el mayor input de nitrógeno en vastas
regiones oceánicas, especialmente en aguas oligotróficas tropicales y subtropicales
- Son más tolerantes a condiciones extremas que las microalgas eucariotas. Por ello suelen ser
fototrofos oxigénicos dominantes o únicos en manantiales termales, suelos salinos, suelos
desérticos y otros extremos ambientales
- Algunas producen potentes neurotoxinas
- Muchas son responsables del olor y sabor característico de algunas aguas (geosmina)

94
 Filum Spirochaetes
Bacterias Gram (-), con forma espiral o helicoidal, flexibles, delgadas y sinuosas

Móviles por endoflagelos (o fibrillas axiales)

Estructura única:

- Cilindro protoplasmático rígido (citoplasma, membrana y pared celular G-)

- Endoflagelos apicales que se extienden hacia la zona central de la célula. Rotación
- Vaina externa flexible compuesta de proteínas, lípidos y carbohidratos

Movimiento por flexión o látigo en un medio líquido. Permite el movimiento en medios muy viscosos

95
Microorganismos eucariotas
Célula eucariota: endosimbiosis primaria

En la endosimbiosis primaria, el ancestro de Eukarya adquirió directamente un simbionte bacteriano

Las mitocondrias evolucionaron cuando este ancestro formó una relación simbiótica con una célula
bacteriana capaz de respirar

Los cloroplastos también se adquirieron por endosimbiosis primaria cuando una célula eucariota, que
ya contenía mitocondrias, adquirió una cianobacteria fototrófica como endosimbionte

- Todos los eucariotas fotótrofos (plantas y algas) necesitan cloroplastos para realizar la
fotosíntesis
- La endosimbiosis primaria originó el cloroplasto en un antecesor común de las algas verdes,
las algas rojas y las plantas, Archaeplastidia (el antiguo plasto)

Endosimbiosis secundaria: otros cloroplastos

Algunas eucariotas no fototrofos adquirieron cloroplastos por endosimbiosis secundaria,

incorporando una célula de alga verde o roja, reteniendo su cloroplasto y convirtiéndose en fotótrofo

- Endosimbiosis de algas verdes: euglénidos y cloraracniofitas

- Endosimbiosis de algas rojas: alveolados (dinoflagelados, ciliados y apicomplejos) y
estramenópilos

Los cloroplastos ancestrales de las algas rojas se perdieron en algunos linajes (ciliados) o se redujeron
(apicomplejos), o bien fueron reemplazados en distintos momentos por cloroplastos de un alga
diferente (algunos dinoflagelados)

Los procesos secundarios de endosimbiosis son la causa de la gran diversidad filogenética de los
eucariotas fototrofos

Las endosimbiosis son aparentemente comunes y aún continúan

96
Linajes filogenéticos de Eukarya

La adquisición endosimbiótica de las mitocondrias fue el acontecimiento fundacional de la evolución

de la célula eucariota

- Todos los Eukarya existentes contienen mitocondrias, estructuras homólogas a las

mitocondrias o algún rastro genético de estas estructuras
- Una serie de endosimbiosis secundarias dio lugar a la diversidad de eucariotas fototróficos
actual

El moderno árbol filogenético del Dominio Eukarya incorpora datos moleculares que han aportado
nuevos conocimientos

- Notable radiación filogenética inicial

- Los eucariotas sin mitocondrias (diplomónadas, parabasálidos) no son organismos primitivos
- Los hongos y los animales están estrechamente relacionados

Las secuencias del gen RNA ribosómico reconocen actualmente cinco supergrupos de Eukarya

- Archaeplastida, el clado SAR, Excavata, Amoebozoa y Opisthonkonta

Grupos de eucariotas
Los eucariotas presentan una enorme complejidad morfológica y ecológica, pero una limitada
diversidad metabólica. Son casi exclusivamente quimioorganotróficos o fototróficos y la mayoría son
aerobios obligados

Principales supergrupos de Eukarya:

- Archaeplastida (antiguo plasto). Incluye las plantas, algas verdes y algas rojas
- Excavata. Se caracterizan por la presencia de un surco ventral (excavado) utilizado para
capturar e ingerir pequeñas partículas con la ayuda de las corrientes generadas por los
flagelos (euglénidos, diplomonadinas, parabasalidos)
- SAR: Stramenopilos, Alveolata y Rhizaria
Stramenopilos: poseen flagelos con muchas prolongaciones cortas, parecidas a pelos
(diatomeas, algas pardas, algas doradas)
Alveolata: presencia de unos sacos o alveolos debajo de su membrana plasmática
(dinoflagelados, ciliados, apicomplejos)
Rhizaria: emiten pseudópodos filiformes que utilizan para desplazarse y alimentarse
(radiolarios, foraminíferos)
- Amoebozoa: utilizan pseudópodos lobulados para desplazarse y alimentarse (amebas, hongos
mucosos)
- Opisthokonta: incluye animales y hongos

Los miembros microbianos del dominio Eukarya son muchos más diversos genética y ecológicamente
que los eucariotas más grandes

97
Protistas

Describe cualquier eucariota microbiano que no sea una planta, animal o un hongo

Los protistas son un grupo muy diverso que incluye microorganismos fototrofos y no fototrofos,
unicelulares o coloniales, que nunca muestras organización tisular

Tienen una amplia distribución en la naturaleza

- Crecen en muchos tipos de hábitats húmedos, terrestres o planctónicos

- La mayoría son de vida libre, aunque algunos son parásitos de animales o humanos
- Algunos forman relaciones mutualistas con hongos o animales

Presentan una variada morfología

Nutrición por absorción, ingestión o fotosíntesis

Reproducción sexual y/o asexual

Muestran una gran diversidad filogenética. Están presentes en todos los linajes de eucariotas excepto
plantas, hongos y animales

Los protistas representan una gran parte de la diversidad del dominio Eukarya

Todavía se les designa como microalgas, protozoos y hongos mucosos (ya no tienen valor sistemático)

Eucariotas fototrofos por endosimbiosis primaria

Eucariotas que llevan a cabo fotosíntesis oxigénica y cuyos cloroplastos se originaron por
endosimbiosis primaria (Archaeplastida)

- Plantas
- Algas rojas (macroalgas y microalgas)
- Algas verdes (macroalgas y microalgas)
- Glaucophyta (algas unicelulares de agua dulce)

Eucariotas fototrofos por endosimbiosis secundaria

Eucariotas que llevan a cabo fotosíntesis oxigénica y cuyos cloroplastos se originaron por
endosimbiosis secundaria

- Euglénidos
- Dinoflagelados
- Estramenópilos
Diatomeas
Algas doradas
Algas pardas
- Haptophyta (posición incierta)

98
 Archaeplastida

Algas rojas (Rodofitas):

- La mayoría de las algas rojas son multicelulares, pero también hay especies unicelulares
- La mayoría marinas aunque hay unas pocas especies de hábitats de agua dulce o terrestres
- El color rojo se debe a la ficoeritrina

Algas verdes (Clorofitas):

- Carecen de ficobilinas por lo que no desarrollan las coloraciones de algas rojas

- Pueden ser unicelulares o multicelulares
- La mayoría de las algas verdes unicelulares viven en agua dulce, aunque algunas son marinas
o terrestres. También pueden encontrarse en la nieve o como simbiontes en los líquenes

Euglénidos

Endosimbiosis secundaria: microalga verde

Nutrición alternativamente como Quimiotrofos o fototrofos

Exclusivos de ambientes acuáticos, con activa movilidad que les permite tener acceso a hábitats
iluminados y oscuros

Contienen cloroplastos que utilizan cuando viven en ambientes iluminados

En oscuridad pierden los cloroplastos y funcionan como quimiorganotrofos

También pueden alimentarse de bacterias por fagocitosis

Dinoflagelados

Endosimbiosis secundaria: microalga roja

Los dinoflagelados son un grupo diverso de alveolados fototróficos de agua dulce y marina

Tienen dos flagelos con diferente longitud y con diferentes puntos de inserción en la célula,
transversal y longitudinal. Generan un movimiento de giro que da nombre al grupo

Algunos son de vida libre; otros viven simbióticamente con los corales

Algunas especies son tóxicas y pueden producirse blooms y mareas rojas debido a los pigmentos de
color rojo que poseen (Gonyaulax). Asociadas con la muerte de peces y envenenamiento de personas

99
 Estramenópilos: Diatomeas

Endosimbiosis secundaria: microalga verde

Los estramenópilos poseen flagelos con muchas prolongaciones cortas, parecidas a pelos

Principales componentes de las comunidades microbianas del fitoplancton de aguas marinas y agua
dulce (más de 100.000 especies)

Paredes celulares silíceas denominadas frústulas

Simetría radial o pennada

Las frústulas son resistentes a la descomposición y por ello son algunos de los mejores fósiles
conocidos

Aparecieron en la tierra hace unos 200 millones de años

Haptophyta

Situación filogenética incierta

Protistas fototróficos unicelulares y de vida libre que se encuentran en ambientes acuáticos,

fundamentalmente marinos

Se caracterizan por la presencia de dos flagelos, dos cloroplastos y una estructura única denominada
haptonema

El haptonema es un apéndice contráctil que se utiliza para alimentarse, pero también puede facilitar
la fijación y evitar a los depredadores

El grupo principal es el de los cocolitóforos (exclusivamente marinos):

- Tienen un exoesqueleto de placas calcáreas (cocolitos). Tiene un gran impacto en el ciclo del
carbono de la tierra
- Es uno de los eucariotas unicelulares fototróficos más abundantes y ampliamente distribuidos
en los océanos, especialmente en mar abierto, además de ser extremadamente abundantes
como microfósiles
- Pueden aportar del 1 al 10% de la productividad primaria en condiciones normales, pero
pueden producir blooms (floraciones masivas) durante las que suponen más del 40% de la
actividad fotosintética

100
Protistas sin mitocondrias

Hidrogenosomas:

- Orgánulos rodeados de doble membrana que se encuentran en algunos eucariotas

anaerobios que carecen de mitocondrias
- Tamaño similar al de las mitocondrias pero carecen de crestas y de las enzimas del ciclo de
Krebs
- Proporcionan ATP a las células mediante reacciones de fermentación: oxidan el piruvato a H2,
CO2 y acetato
- En la mayoría de los casos carecen de genoma
- Parabasálidos (género Trichomonas)

Mitosomas:

- Son orgánulos rodeados de doble membrana que se encuentran en eucariotas unicelulares

anaerobios o microaerófilos que no tienen mitocondrias
- Carecen de proteínas de transporte de electrones y de enzimas del ciclo del ácido cítrico y no
generan ATP
- Carecen de genoma
- Diplomónadas (género Giardia)

Otros protistas

Ciliados (Alveolata):

- Poseen cilios en algún momento de su ciclo vital

- Los más ampliamente distribuidos pertenecen al género Paramecium
- Utilizan los cilios no solo para moverse sino también para alimentarse, al ingerir partículas.
Los cilios que recubren el surco oral mueven el alimento hacia la boca
- Tienen dos núcleos: macronúcleo y micronúcleo. Los genes del macronúcleo regulan las
funciones celulares básicas y los del micronúcleo están implicados en la reproducción sexual
- La reproducción sexual se realiza por conjugación; las células se fusionan parcialmente y se
intercambian los micronúcleos

Rizarios:

- Se distinguen de otros protistas porque emiten pseudópodos filiformes que utilizan para
desplazarse y alimentarse
• Foraminíferos
Organismos exclusivamente marinos
Forman estructuras similares a conchas denominadas testas muy características y
generalmente ornamentadas. Las testas están compuestas por material orgánico reforzado
con minerales como carbonato cálcico. Las testas son resistentes a la descomposición y, por
tanto, es fácil que acaben fosilizadas

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 • Radiolarios
La mayoría son marinos y planctónicos
Las testas son de sílice
El nombre se debe a la simetría radial de sus testas

Amebozoos:

- Grupo muy diverso de protistas acuáticos y terrestres que utilizan pseudópodos para
desplazarse y alimentarse
• Gimnamebas (G. Amoeba)
Protistas de vida libre que habitan en ambientes acuáticos y terrestres
Se mueven por movimiento ameboideo (generado por corrientes citoplasmáticas); también
lo utilizan para alimentarse por fagocitosis
• Entamebas (G. Entamoeba)
Parásitos de vertebrados e invertebrados
Carecen de mitocondrias

Otros eucariotas: Hongos

Son el grupo más relacionado con los animales. Se cree que se separaron hace aproximadamente
1.500 millones de años

- Quimioheterótrofos que se alimentan por absorción

- Poseen pared celular, la mayoría de quitina
- Reproducción sexual y asexual

Es un grupo muy extendido y diverso que incluye a las levaduras, los mohos y las setas

La mayoría son microscópicos y terrestres y se encuentran en todas las latitudes. Muy pocos son
acuáticos

Habitan en el suelo o en materia vegetal muerta y cumplen una importante función de

mineralización: descomponedores. Capaces de degradar madera, papel, tejido y otros productos
orgánicos a compuestos orgánicos simples y moléculas inorgánicas

Algunos forman asociaciones (líquenes, micorrizas)

También pueden causar enfermedades en plantas y animales (micosis)

Muchos de importancia industrial:

- Fermentación alcohólica
- Producción de ácidos orgánicos, como el ácido cítrico
- Antibióticos: penicilina
- Otros compuestos farmacéuticos: ergometrina, cortisona

También utilizados en investigación: Saccharomyces cerevisiae. Levadura utilizada como sistema

modelo en muchas disciplinas

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