Universidad de Guayaquil
Facultad de Ciencias Químicas
Bioquímica y Farmacia
Informe de Laboratorio Inmunología
N° 12 ANALISIS DE ESTRADIOL POR TECNICA ELISA
Nombre: Semestre: Sexto
Docente: QF. Lourdes Suarez Camacho Grupo: 2B
Objetivos de la práctica de laboratorio
Determinación cuantitativa de concentración de Estradiol en suero o plasma humano mediante
un ensayo inmunoenzimométrico con microplacas
Marco Teórico.
La medición de Estradiol en suero o plasma es considerada el camino más confiable para
evaluar su tasa de producción.
Estradiol (17β-Estradiol), es una hormona esteroide (de peso molecular 272.3 daltons) la cual
circula predominantemente unida a una proteína. En adición al Estradiol, otros estrógenos
esteroides naturales incluyen hormonal secretadas principalmente por los folículos ováricos y
también por las glándulas adrenales, cuerpo lúteo y placenta; en el hombre por los testículos.
Estrógenos exógenos (naturales o sintéticos) provocan un grado de variación a todas las
respuestas farmacológicas usualmente producidas por estrógenos endógenos. Las hormonas
estrogénicas son secretadas a diferentes tasas durante el ciclo menstrual a lo largo del periodo de
actividad ovárica. Durante el embarazo la placenta llega a ser la fuente principal de estrógenos. En
la menopausia la secreción de estrógenos disminuye a diferentes tasas. Las gonadotropinas de la
secreción que regula la glándula pituitaria anterior de las hormonas ováricas, estradiol y
progesterona; control hipotalámico de la producción de la gonadotropina hipofisiaria es regulada
por la concentración de plasma de estrógenos y progesterona. Este sistema de retroalimentación
compleja resulta en fenómeno cíclico de ovulación y menstruación. (Springer SU, 2018)
Las determinaciones de estradiol han proporcionado valor en una variedad de contextos
incluyendo la investigación de pubertad precoz en niñas y ginecomastia en hombre. Su principal
uso ha sido en el diagnostico diferencial de amenorrea y en el monitoreo de la inducción de la
ovulación. Este kit usa un anticuerpo anti-estradiol específico y no requiere extracción de la
muestra previa de suero o plasma. La reactividad cruzada a otros esteroides relacionados
estructuralmente y naturalmente es baja.
El empleo de varios sueros de referencia de concentraciones conocidas de estradiol permite la
construcción de una gráfica de actividad y concentración. A partir de la comparación de la curva
dosis respuesta la actividad de una muestra desconocida puede ser correlacionada con la
concentración de estradiol.
FUNDAMENTO
Los reactivos esenciales requeridos para un inmunoensayo enzimático incluyen anticuerpo,
conjugado enzima-antígeno y antígeno nativo. Después de mezclar el anticuerpo marcado con
biotina con un suero que contiene el antígeno, da como resultado una reacción del antígeno y el
anticuerpo.
Después de una incubación corta la enzima combinada es adicionada (esta adición retrasada
permite un incremento en sensibilidad para las muestras con una baja concentración). Aunque la
adición del conjugado de la enzima resulta en una reacción de competición entre la enzima
análoga y el antígeno en la muestra por un número limitado de sitios de unión de anticuerpos (no
consumidos en la primera incubación.
Ocurre una reacción simultánea entre la biotina adherida al anticuerpo y la estreptavidina
inmovilizada sobre el micro pozo. Esto efectúa la separación de la fracción unida al anticuerpo
después de decantación o aspiración.
La actividad de la enzima en la fracción unida al anticuerpo es inversamente proporcional a la
concentración del antígeno nativo. Mediante el uso de varios sueros de referencia con
concentración de antígeno conocida, se puede generar una curva de respuesta de dosis, de la
cual se puede hallar la concentración de antígeno desconocida.
Reactivos de laboratorio
1. Calibradores de Estradiol - 1.0 ml/vial– [Iconos A-G]Control positivo
2. Reactivo Enzima de Estradiol - 6 ml/vial – icono
3. Reactivo de biotina estradiol -6 m
4. Solución de Lavado concentrada - 20 ml
5. Reactivo Sustrato – 12 ml/vial- Icono S
6. Solución de parada-8 ml/vial icono
7. Inserto del producto
Materiales de laboratorio.
1. Placa: 96 micropocillos
2. Papel de cocina
3. Micro pipetas
4. Viales
5. Adhesivo para prevenir contaminación
6. Tubos recolectores
Equipos de laboratorio
Espectrofotómetro
Procedimiento
Resultados obtenidos
CALIBRADORES CONCENTRACIÓN ng/ml
ESTANDAR PSA
CALIBRAD
OR G 3000 0.388
CALIBRAD
OR F 1500 0.487
CALIBRAD
OR E 500 0.723
CALIBRAD
OR D 250 1.003
CALIBRAD
OR C 100 1.426
CALIBRAD
OR B 20 1.849
CALIBRAD
OR A 0 2.256
PACIENTE 160 1.202
CONCENTRACIÓN ng/ml ESTRADIOL
2.5
1.5
0.5
0
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500
Los valores de estradiol están enre 160-200 ng / ml por lo que es un valor normal
Conclusión
El estradiol ayuda a evitar que los espermatozoides mueran prematuramente. Este examen
puede solicitarse para verificar: la importancia de las determinaciones hormonales en los
protocolos de sincronización radica en la necesidad de realizar tratamientos hormonales, que
aseguren las concentraciones necesarias de dichas hormonas, para el desarrollo de folículos
sanos, producto de una ovulación sincronizada y de promedios aceptables de preñez, que se
traduzcan en un óptimo desempeño reproductivo
La prueba del estradiol también se puede utilizar para supervisar el avance de un embarazo, en
los tratamientos de fertilidad y para evaluar los síntomas de la menopausia.
Recomendaciones
Tener cuidado a la hora de manipular material como agujas
Leer cuidadosamente la práctica antes de realizarla
Desechar los productos usados como residuos bio-peligrosos.
No mezclar componentes de lotes diferentes
Bibliografía
1. https://reactlab.com.ec/wp-content/uploads/2022/07/Estradiol-ELISA-1.pdf
