Universidad de Guayaquil
Facultad de Ciencias Químicas
Bioquímica y Farmacia
Informe de Laboratorio Inmunología
N° 13 ANALISIS DE PSA POR TECNICA ELISA
Nombre: Sissi Mendoza Bajaña Semestre: Sexto
Docente: QF. Lourdes Suarez Camacho Grupo: 2B
Objetivos de la práctica de laboratorio
Determinación cuantitativa de concentración de antígeno prostático específico libre en el suero
humano mediante técnica ELISA.
Realizar un análisis de la concentración de la PSA que pueden considerarse regulares.
Marco Teórico.
El antígeno prostático específico, o PSA, es una proteína producida por las células normales,
así como por células malignas de la glándula prostática. El análisis del PSA mide la concentración
del PSA en la sangre de un hombre. Para esa prueba, se envía una muestra de sangre a un
laboratorio para ser analizada. Los resultados se reportan generalmente en nanogramos de PSA
por cada mililitro de sangre (ng/ml).
La concentración del PSA en la sangre es frecuentemente elevada en hombres con cáncer de
próstata. El análisis del PSA fue originalmente aprobado por la Administración de Alimentos y
Drogas de EE. UU. (FDA) en 1986 para observar el avance del cáncer de próstata entre hombres
que habían sido ya diagnosticados con la enfermedad. En 1994, la FDA aprobó el uso del análisis
del PSA en combinación con el examen digital del recto (DRE) para examinar si hombres
asintomáticos presentan cáncer de próstata. Los hombres que presentan síntomas de la próstata
usualmente se hacen el análisis del PSA (junto con el examen digital del recto) para ayudar a los
médicos a determinar la naturaleza del problema. (Springer SU, 2018)
Además del cáncer de próstata, algunos estados benignos (no cancerosos) pueden causar que
aumente la concentración del PSA en el hombre. Las afecciones benignas más comunes de
próstata que causan que se eleve la concentración del PSA son la prostatitis (inflamación de la
próstata) y la hiperplasia benigna de la próstata (BPH) o agrandamiento de la próstata. No existe
evidencia de que la prostatitis o que la hiperplasia benigna de la próstata cause cáncer, pero es
posible que un hombre presente una o ambas afecciones y que tenga también cáncer de próstata.
Si un hombre que no presenta síntomas de cáncer de próstata elige hacerse exámenes
selectivos de detección para esta enfermedad y se descubre que tiene una concentración elevada
del PSA, el médico quizás recomiende otro análisis del PSA para confirmar el valor original. Si la
concentración del PSA es alta aún, el médico tal vez recomiende que el paciente siga haciéndose
análisis del PSA y exámenes digitales del recto en intervalos regulares para observar cualquier
cambio que se presente con el tiempo.
Si la concentración del PSA sigue aumentando o si se detecta una protuberancia sospechosa
en el examen digital del recto, el médico podría recomendar otras pruebas para determinar la
naturaleza del problema. Un urinálisis posiblemente se recomiende para buscar una infección de
las vías urinarias. Tal vez el médico recomiende también exámenes de exploración con imágenes,
como una ecografía por el recto, radiografías, o una cistoscopia.
Si se sospecha la presencia de cáncer de próstata, el médico recomendará una biopsia de la
próstata. Durante este procedimiento, se insertan agujas huecas en la próstata y luego se retiran.
Por lo general, las agujas se insertan por la pared del recto (biopsia transrectal). Un patólogo
examina luego el tejido al microscopio. El médico puede usar una ecografía para ver la próstata
durante la biopsia, aunque la ecografía sola no se puede usar para diagnosticar el cáncer de
próstata. (Springer SU, 2018)
PRINCIPIO DEL ENSAYO
La Prueba PSA ELISA está basada en el principio de un ensayo inmunoabsorbente vinculado a
las enzimas de fase sólida. El sistema de ensayo utiliza un anticuerpo anti-PSA de ratón dirigido
hacia el PSA intacto para la inmovilización de la fase sólida (en los pozos de micro valoración). Un
anticuerpo anti-PSA monoclonal conjugado con peroxidasa de rábano picante (HRP) se encuentra
en la solución del conjugado de enzima-anticuerpo. La muestra de la prueba reacciona primero
con el anticuerpo de conejo inmovilizado a temperatura ambiente por 60 minutos. Los pozos son
lavados para remover cualquier antígeno no adherido. El conjugado HRP anti-PSA monoclonal es
entonces agregado con el antígeno inmovilizado por 60 minutos a temperatura ambiente
provocando que las moléculas de PSA se encuentren entre la fase sólida y los anticuerpos
vinculados a la enzima. Los pozos son lavados con agua para remover anticuerpos etiquetados no
adheridos. Una solución de Reactivo TMB es agregada e incubada a temperatura ambiente por 15
minutos, provocando el desarrollo de un color azul. El desarrollo del color es frenado con la adición
de HCl 3N, cambiando el color a amarillo. La concentración de PSA es directamente proporcional
a la intensidad del color de la muestra de prueba. La absorbancia es medida
espectrofotométricamente a 450nm. (Wang Y, 2018)
Reactivos de laboratorio
1. Estándares de PSA: 6 viales (listos para uso)
2. Enzima conjugada PSA
3. Solución de Lavado concentrada - 20 ml
4. Reactivo Sustrato
5. Solución de parada
6. Inserto del producto
7. Sustrato TMB
Materiales de laboratorio.
1. Placa: micropocillos
2. Papel de cocina
3. Micro pipetas
4. Viales
5. Tubos recolectores
Equipos de laboratorio
Espectrofotómetro
Procedimiento
000
Resultados obtenidos
CALIBRADORES ESTANDAR CONCENTRACIÓN ng/ml PSA
CALIBRADOR F 50 2.672
CALIBRADOR E 25 1.99
CALIBRADOR D 10 0.594
CALIBRADOR C 5 0.335
CALIBRADOR B 2 0.098
CALIBRADOR A 0 0.011
PACIENTE 2 0.099
CONCENTRACIÓN ng/ml PSA
3.000
2.500
absorbancia concentraciones
2.000
1.500 CONCENTRACIÓN ng/ml PSA
1.000
0.500
0.000
0 10 20 30 40 50 60
calibradores
La concentración de PSA del paciente coincide con el estándar 2, tiene valores normales de
PSA entre 2 ng/ml.
Conclusión
El PSA sigue siendo el marcador patrón para el diagnóstico del cáncer de próstata. Es
importante mejorar la especificidad para lo que necesitamos nuevos modelos predictivos o nuevas
isoformas que puedan ayudarnos a seleccionar mejor los pacientes candidatos a biopsia. Existen
en este momento diferentes líneas de investigación prometedoras con nuevos marcadores, si bien
aún no existe sustituto ideal para el PSA que sigue siendo el patrón estándar.
Recomendaciones
Tener cuidado a la hora de manipular material como agujas
Leer cuidadosamente la práctica antes de realizarla
Tirar los insumos utilizados como residuos bio-peligrosos.
No utilizar componentes provenientes de lotes diferentes.
Bibliografía
1. Springer SU, Chen CH, Rodriguez Pena MDC, et al. Non-invasive detection of urothelial cancer
through the analysis of driver gene mutations and aneuploidy. Elife 2018; 7:e32143.
2. Wang Y, Li L, Douville C, et al. Evaluation of liquid from the Papanicolaou test and other liquid
biopsies for the detection of endometrial and ovarian cancers. Science Translational Medicine 2018;
10(433):eaap8793.
