Datos de identificación de la práctica
ASIGNATURA BIOQUÍMICA ESTRUCTURAL
CLAVE NOMBRE DE LA PRÁCTICA
BG102-03 Comportamiento ácido-base del aminoácido glicina
COMPETENCIA DE Determina el comportamiento ácido-base de un aminoácido
LA PRÁCTICA mediante una titulación con hidróxido de sodio
REQUISITOS
COGNITIVOS PROCEDIMENTALES ACTITUDINALES
Establece un sistema de Establece una técnica Capacidad oral y
separación por cromatografía eficiente para la separación escrita con sentido de
mediante el cual se puedan de aminoácidos, haciendo ética en el análisis. Así
identificar los aminoácidos por uso del conocimiento como sentido crítico,
su tamaño y propiedades adquirido en clase acerca de liderazgo y autonomía
químicas las características de los
aminoácidos
COMPETENCIAS GENÉRICAS:
1. Participa de manera efectiva en equipos diversos aportando sus puntos de vista y
conocimientos congruentes, donde considera las intervenciones de otras personas
de manera reflexiva para solucionar problemas o desarrollar proyectos relacionados
con su profesión.
2. Desarrolla su capacidad de aprender y de actualizarse permanentemente para dar
solución mediante el uso de la investigación al mejoramiento del entorno que lo
rodea.
3. Capacidad para identificar el flujo de operaciones internas que determinan su
aprendizaje, actualizándose de manera continua y autónoma.
PROBLEMA A ATENDER:
A menudo es necesario identificar los aminoácidos individuales presentes en una
mezcla. El uso de la cromatografía en capa fina es útil para averiguar el número y la
cantidad relativa de los diferentes aminoácidos presentes en una muestra de origen
proteico, además de servir como una guía para el desarrollo de otros métodos
cromatográficos más complejos que permitan la separación y cuantificación de
aminoácidos, como la cromatografía de líquidos de alta resolución.
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1. Introducción
1.1. Los aminoácidos tienen carácter anfótero
Los aminoácidos se pueden comportar como ácidos y bases, carácter anfotérico. Todos
son al menos dipróticos, en medio ácido tienen al menos dos protones disociables, el del
grupo COOH y del NH 3 , ambos unidos al carbono α del aminoácido. Dependiendo del
grupo R del aminoácido, algunos tendrán más de dos protones disociables. De esta
manera, todos los aminoácidos tienen al menos dos constantes de disociación (K a1 y Ka2)
y por lo tanto dos valores de pKa: pKa1 del COOH y pKa2 del NH 3 . Para la glicina la
disociación se presenta en la Figura 4.1.
Figura 4.1. Disociación de los protones de la glicina mediante la titulación con una
base (NaOH).
El pKa es el pH al que las concentraciones de las especies involucradas en la disociación
están en concentraciones equimolares.
1.2. Punto isoeléctrico
Para un aminoácido diprótico al ir aumentando el pH, los protones se van disociando hasta
alcanzar la titulación completa de los protones disociables de uno de los grupos, primer
punto de equivalencia, en este punto las cargas negativas del grupo COO - están en igual
número que las cargas positivas del grupo NH 3 , así la carga neta del aminoácido será
cero y no se moverá en un campo eléctrico, el valor de pH al que se presenta este
fenómeno se le conoce como punto isoléctrico, pI.
1.3. Los aminoácidos se valoran (titulan) mediante la adición de una base
Los aminoácidos a pH menor que uno están completamente protonados. Al añadir base
los protones se van disociando y para el caso de un aminoácido diprótico, la gráfica tendría
la forma observada en la Figura 4.2. En la Figura 4.2. es posible definir 5 puntos (1-5) que
corresponden a especies químicas con diferente grado de protonación para el ácido
diprótico (e.g. glicina):
Punto 1. Inicio de la titulación, pH bajo (< 1), el aminoácido está totalmente
protonado.
Punto 2. Se han añadido 0.5 equivalentes de NaOH (un equivalente de base titula
un equivalente de ácido), por lo tanto el grupo carboxilo se encuentra ionizado al
50%, la mitad está completamente protonado y para la otra mitad, las moléculas de
aminoácido han perdido el protón de su carboxilo α, están en la forma (COO -).
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5
pKa2
4
pH
3
pKa1
2
1
0.5 1.0 1.5 2.0
-
Equivalentes de OH
Figura 4.2. Curva de titulación de un aminoácido diprótico.
El valor de pH en este punto corresponde al pKa1 del aminoácido.
Punto 3. Se ha añadido un equivalente de NaOH, por lo tanto el grupo COOH α
está completamente titulado y en la forma COO-; de esta forma la carga negativa
del carboxilo α se anula con la carga positiva del amino α y el aminoácido tiene una
carga neta de cero. El valor de pH para este punto de la titulación del aminoácido
diprótico corresponde a su punto isoeléctrico pI.
Punto 4. Se han añadido 1.5 equivalentes de NaOH, todo el carboxilo α está en la
forma de carboxilato (COO-) y la mitad de los protones del grupo amino α han sido
titulados, el valor de pH para este punto de la titulación corresponde al pKa2.
Punto 5. Fin de la titulación, se han añadido 2 equivalentes de NaOH, con lo que
se terminan de titular los protones ácidos del aminoácido diprótico.
1.4. Los aminoácidos como reactivos para la preparación de soluciones
amortiguadoras, ejemplo con un aminoácido diprótico (e.g. glicina)
Los grupos unidos al carbono α (COOH y NH 3 ) se comportan como ácidos débiles y por
lo tanto al titularse presentan regiones de amortiguamiento, donde el cambio de pH debido
a la adición de base es muy pequeño, en las regiones cercanas a sus pKa, para un
aminoácido diprótico los pares ácido/base conjugados son: COOH/COO - (pKa1) y NH 3 /
NH 2 (pKa2,). Así los aminoácidos se usan para la preparación de soluciones
amortiguadoras para mantener prácticamente constante el pH en la región: pH = pKa ± 1.
2. Materiales y reactivos
Potenciómetro
3 Vasos de precipitado de 100 mL
1 vaso de precipitado de 500 mL
1 Pipeta de 10 mL
1 Bureta de 25 mL
Agua destilada
Papel que no deje pelusa (Kleenex)
Solución de glicina 0.1 M
Solución de NaOH 0.1M
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3. Técnica
Antes de iniciar la práctica el potenciómetro deberá estar calibrado (instructor).
Prepara el equipo de titulación: ajustando soporte y bureta.
Agregar 25 ml de solución de NaOH 0.1 M a la bureta.
En un vaso de precipitado de 100 ml, se colocan 10 mL de la solución de glicina 0.1
M.
Se adicionan 1 mL de NaOH. Y se agita con cuidado por lo menos por 30 segundos.
Se introduce el electrodo del potenciómetro, evitando que toque las paredes y se
registra la lectura inicial de pH. se anota la lectura estabilizada.
Se siguen adicionando volúmenes de NaOH (de 1 mL cada vez) hasta completar
un volumen de 20 ml.
4. Resultados
Volumen de Volumen de Volumen de
NaOH pH de la NaOH pH de la NaOH pH de la
añadido solución añadido solución añadido solución
(ml) (ml) (ml)
1 8 15
2 9 16
3 10 17
4 11 18
5 12 19
6 13 20
7 14
4.1. Cuestionario pre-laboratorio
¿Qué es un sistema amortiguador ácido-base y qué utilidad tiene?
¿Cuáles son los sistemas amortiguadores más importantes en los seres vivos?
¿Qué es el pKa?
¿Se pueden usar los aminoácidos como amortiguadores de pH y por qué?
¿Será la glicina un buen amortiguador a pH de 7.0 y por qué?
¿Cómo se determina el punto isoeléctrico de los aminoácidos que sólo tienen un
grupo amino y un grupo carboxilo?
¿Cuál es la carga eléctrica de los aminoácidos que tienen 2 grupos carboxilo a pH
de 7.0? Para contestar esta pregunta tome uno de estos aminoácidos como ejemplo
y dibuje sus diferentes estados de ionización en función del pH.
4.2. Anotaciones:
5. Cálculos
Graficar pH vs. volumen de NaOH añadido.
Determinar de la gráfica los valores de pKa, el punto isoeléctrico y los puntos de
equivalencia de la glicina.
Señalar las regiones de amortiguamiento y los valores de pH que le corresponden.
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6. Reporte de la práctica
Universidad Autónoma de Sinaloa
Facultad de Ciencias Químico Biológicas
REPORTE DE LA PRÁCTICA
Nombre de la práctica: Separación de aminoácidos por cromatografía
Nombre del alumno: ____________________________________ Fecha: ____________
Grupo: _____ Grado: _____ Equipo: ____ Carrera: ______________________________
Resultados:
Grafica pH vs. volumen de NaOH añadido.
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Determine de la gráfica anterior:
o pKa, el punto isoeléctrico y los puntos de equivalencia de la glicina.
o Regiones de amortiguamiento y los valores de pH que le corresponden.
o Concentración de glicina en la muestra problema.
Conclusiones y comentarios
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¿Se alcanzaron los objetivos? Sí No
Instructor:
Firma Sello
Bibliografía
(Daniel and Neal 1967; Nelson and Cox 2005)
Anexos: No aplica
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