Extracción de ADN a partir de verduras
y/o frutas
Objetivos: Romper o lisar con detergentes la pared celular, la membrana
plasmática y la membrana nuclear para dejar libre el ADN y hacer que
precipite en alcohol, para poder visualizar las fibras del ADN.
Introducción:
ADN es la abreviatura del Ácido Desoxirribonucleico. Es la molécula de la
vida, pues constituye el material genético de todos los organismos vivos y
se encuentra en el interior del núcleo de las células. EL ADN es el
componente químico primario de los cromosomas y el material que
constituye los genes. Su función esencial es la de conservar la información
durante la división celular, transmitirla de generación en generación y hacer
efectiva la información genética que contiene.
La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los
iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo
su dispersión coloidal y posterior extracción de la célula. Se empieza por
lisar (romper) las células, vaciándose su contenido molecular,
procediéndose a continuación a su protección frente a enzimas que puedan
degradarlo, para conseguir finalmente su aislamiento, haciéndolo precipitar
en alcohol.
Material:
` Guisantes. ` Tubos y vasos de plástico.
` Agua destilada. ` Colador.
` Detergente lavavajillas. ` Cucharilla de café.
` Sal (NaCl). ` Batidora/mortero.
` Zumo de piña o de papaya. ` Hielo.
` Alcohol de 96º muy frío. ` Gasa para colar.
Manipulación:
` Preparación del tampón de extracción: en un vaso echamos media
cucharadita de detergente de lavavajillas, una pizca de sal y media
cucharadita de zumo de piña. Añadimos 30 ml de agua destilada. ` A
continuación, se mezcla esta solución con 30 g de guisantes y se procede a
triturar la mezcla, con el mortero (en este caso se adicionan 2 g de sal
gorda para que actúe como abrasivo) o la batidora (a velocidad máxima
durante 30 segundos). Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan
los lípidos de las membranas celulares y, ayudados por la trituración con el
mortero o la acción de la batidora, son capaces de romper la pared celular y
las membranas plasmática y nuclear. La sal evita la unión de las proteínas al
ADN y solvata sus cargas negativas. Los zumos de piña y papaya contienen
un enzima, la papaína, que contribuye a eliminar las proteínas que puedan
contaminar o degradar el ADN.
` Filtramos el líquido obtenido con un colador y gasa. ` Llenamos la mitad de
un tubo con la disolución filtrada. ` Añadimos cuidadosamente la misma
cantidad de alcohol muy frío, haciéndolo resbalar muy despacio por las
paredes del tubo, para que forme una capa sobre el filtrado, no debiendo
mezclarse el filtrado y el alcohol.
El alcohol frío se utiliza para precipitar el ADN en la interfase formada entre
el alcohol y el agua.
` Dejamos reposar durante 2 ó 3 minutos. ` En la interfase de las dos
soluciones aparecen unos filamentos de ADN que van emigrando hacia la
fase alcohólica. Podemos ayudar a la migración del ADN efectuando
movimientos de rotación (suavemente) del tubo de ensayo. Los filamentos
de ADN acaban aglomerándose, formando un precipitado de aspecto
algodonoso
