AUTOFAGOCITOSIS O AUTOFAGIA
CRECIMIENTO CELULAR
SNTESIS
DEGRADACIN
DEGRADACIN DE PROTENAS INTRACELULARES
Impide la acumulacin de protenas mal sintetizadas o mal plegadas Participa en el control metablico de la clula, eliminando protenas no necesarias o que ya cumplieron su funcin (ej. ciclinas) Es la principal fuente de aminocidos cuando aumentan las necesidades metablicas o disminuye el aporte de nutrientes.
DEGRADACIN INTRACELULAR
NO LISOSOMAL
Es llevada a cabo por el proteosoma Degradacin de protenas de vida media corta Involucra el sistema de ubiquitinacin
LISOSOMAL
Es llevada a cabo en el lisosoma Degradacin de protenas de vida media larga Involucra procesos como la endocitosis, fagocitosis y autofagocitosis
AUTOFAGOCITOSIS
AUTOFAGOCITOSIS Permite la degradacin de macromolculas
citoslicas (ribosomas, RNA) y de compartimientos membranosos (organelas envejecidas, hipertrofiadas)
Participa en la remodelacin celular durante la
diferenciacin, metamorfosis, envejecimiento, cncer, enfermedades neurodegenerativas (Alzheimer)
Mantiene el suministro de aminocidos en ayunos
prolongados mediante el secuestro inespecfico de protenas citoslicas
MADURACIN DE LA VACUOLA AUTOFGICA
FAGOFORO
ENDOSOMAS
LISOSOMAS
AUTOFAGOSOMA
ANFISOMA
AUTOFAGOLISOSOMA
Autofagosomas: microscopa electrnica
Autofagosomas: microscopa electrnica
REGULACIN DE LA AUTOFAGIA
HORMONAS: - Insulina: inhibe la autofagocitosis - Glucagn: estimula la autofagocitosis
AMINOCIDOS: la autofagia aumenta cuando
disminuye la concentracin de AA en el lquido extracelular. Leu, Tyr, Phe, Gln, Pro, Met, His y Trp
REGULACION DE LA AUTOFAGIA
La autofagia es estimulada por el ayuno (falta de aminocidos y suero) y es inhibida en condiciones ricas en nutrientes. Una quinasa llamada Tor (Target of rapamycin) es parte de la cascada de traduccin de seales involucrada en sensar el ambiente nutricional.
+ aminocidos TOR
Rapamicina
- aminocidos
Wortmanina 3-metiladenina
PI3K
Autofagia
MATURATION OF THE AUTOPHAGIC VACUOLE
FAGOFORO
Ayuno Rapamicina
ENDOSOMAS
LiSOSOMAS
LC3
AUTOFAGOSOMA
ANFISOMA
AUTOLISOSOMA
LC3 localiza en autofagosomas despus de ser procesada
LC3-I Citosol
AUTOFAGIA
LC3-II Asociada a membranas
Visualizacin de autofagosomas marcados con la protena GFP-LC3
GFP LC3
Clulas CHO GFP-LC3
+ aminocidos
- aminocidos (ayuno)
Fusin de MVBs con autofagosomas
EGFP-Rab11wt (MVBs) RFP-LC3 (autophagosomes)
Monodansilcadaverina (MDC)
compuesto autofluorescente marcador de autofagosomas
Vacuolas marcadas con MDC
Control
Ayuno (- AA)
+ aminocidos TOR
Rapamicina
- aminocidos
Wortmanina 3-metiladenina
PI3K
Autofagia
INHIBIDORES DE LA VA AUTOFGICA
FAGOFORO
WORTMANINA 3-METIL-ADENINA
LISOSOMAS
AUTOFAGOSOMA
ANFISOMA
AUTOFAGOLISOSOMA
Wortmanina inhibe el procesamiento de LC3 y la formacin de autofagosomas
Ayuno Ayuno + Wortmanina
Wortmanina: inhibidor de PI3K
INHIBIDORES DE LA VA AUTOFGICA
FAGOFORO
LISOSOMAS
VINBLASTINA
AUTOFAGOSOMA
ANFISOMA
AUTOFAGOLISOSOMA
Vinblastina genera grandes vacuolas autofgicas que se marcan con MDC
- Vbl
+ Vbl
AUTOFAGOCITOSIS o AUTOFAGIA Permite la degradacin de macromolculas
citoslicas (ribosomas, RNA) y de compartimientos membranosos (organelas envejecidas, hipertrofiadas)
Participa en la remodelacin celular durante la
diferenciacin, envejecimiento, enfermedades neurodegenerativas, cncer,
Mantiene el suministro de aminocidos en ayunos
prolongados mediante el secuestro inespecfico de protenas citoslicas. Supervivencia celular.
La autofagia puede ayudar a la supervivencia celular pero tambin puede llevar a la muerte celular
Papel de la autofagia en la salud y la enfermedad
Enfermedad
Cncer
Efectos beneficiosos
Efectos dainos
Supresor de tumores Supervivencia de clulas cancerosas MCP Tipo II en clulas cancerosas en el ambiente pobre en nutrientes de remocin de organelas daadas un tumor evitando la muerte celular Permitira le remocin de agregados proteicos Puede inducir MCP en las neuronas que acumulan agregados proteicos: Huntington, Parkinson, Alzheimer
Enfermedades neuronales
Infeccin con patgenos
Defensa contra la invasin de bacterias y virus
Utilizacin de la va autofgica por parte de ciertos patgenos para establecer la vacuola replicativa Aumento de la autofagia llevara a MCP o defectos en esta va causaran la acumulacin de autofagosomas no funcionales.
Enfermedades lisosomales
Aumento de la autofagia compensara ciertos defectos lisosomales
Microorganismos y la va autofgica
Se benefician
Porphyromonas gingivalis Brucella abortus ( cell type?) Legionella pneumophila Chlamydia trachomatis Coxiella burnetii Staphylococcus aureus Trypanosoma cruzi Poliovirus MHV
Herpes virus
Son destruidos
Listeria monocytogenes Mycobacterium tuberculosis Group A Streptococcus Shigella flexneri Salmonella entrica (20%)
Las vacuolas replicativas de Coxiella son decoradas por GFP-LC3
CRV CV N CRV CV N CRV CV N
Bern et al; Infect. Imm. 70: 5816-5821(2002) Gutierrez et al., Cell. Microb. 7: 981-993 (2005)
La induccin de la autofagia favorece el desarrollo de la vacuola con Coxiella
C
% ce lls with v acuole s 70 60 50 40 30 20 10 0
D
% ce lls with v acuole s
E
**
**
**
**
70 60 50 40 30 20 10 0
Ctrl 2h Full
6h 24h
Ctrl Rap Wm 3-MA Full Starvation
Starvation
Gutierrez et al., Cell. Microb. 7: 981-993 (2005)
Conclusiones
La induccin de la autofagia aumenta el % de clulas infectadas y favorece la generacin y maduracin de las vacuolas con Coxiella. La vacuola con Coxiella colocaliza con protenas de la va autofgica. Sobreexpresin de protenas autofgicas favorece el desarrollo de la vacuola replicativa.
Mycobacterium tuberculosis inhibe la maduracin del fagosoma
Reside en compartimientos que son modificados para evitar la fusin con los lisosomas y la adquisicin de enzimas hidrolticas. Bloquea la maduracin del fagosoma en un punto entre el endosoma temprano y el tardo. Los fagosomas que contienen Mycobacterium restringen la adquisicin de la bomba de protones previniendo la acidificacin.
La induccin de la autofagia favorece la maduracin de los fagosomas con mycobacterium
Cath D
Control
% colocalization
Mycobac
60 50
*** ***
40 30 20 10 0
***
Ayuno
Gutierrez et al., Cell 119:753-766 (2004)
Co n tr ol Sta rv a tion Co ntr ol Sta rv a tion Co n tr ol Sta rv a tion Co nt r ol Sta rv a tio n
CathD LBPA
LAMP-1 VoATPase
La induccin de la autofagia disminuye la supervivencia de Micobacterium
100
% survival
80 60 40 20 0
*** ***
Sta rva tion Ra pam ycin 50 Star v+3M A Star v+W m
Co ntro
Gutierrez et al., Cell 119:753-766 (2004)
Autofagia y microorganismos
Coxiella burnetii
Coxiella
M. tuberculosis
Mycobacterium
phagosome
lysosome
lysosome
autophagosome
Mycobacterium degradation
ER
Coxiella replication
LA AUTOFAGIA COMO MECANISMO DE DEFENSA
Levine, Cell 2005
Papel de la autofagia en la salud y la enfermedad
Enfermedad
Cncer
Efectos beneficiosos
Efectos dainos
Supresor de tumores Supervivencia de clulas cancerosas MCP Tipo II en clulas cancerosas en el ambiente pobre en nutrientes de remocin de organelas daadas un tumor evitando la muerte celular Permitira le remocin de agregados proteicos Puede inducir MCP en las neuronas que acumulan agregados proteicos: Huntington, Parkinson, Alzheimer
Enfermedades neuronales
Infeccin con patgenos
Defensa contra la invasin de bacterias y virus
Utilizacin de la va autofgica por parte de ciertos patgenos para establecer la vacuola replicativa Aumento de la autofagia llevara a MCP o defectos en esta va causaran la acumulacin de autofagosomas no funcionales.
Enfermedades lisosomales
Aumento de la autofagia compensara ciertos defectos lisosomales
Papel de la autofagia en la patognesis de enfermedades lisosomales
MIOPATAS LISOSOMALES
Enfermedad de Danon
Enfermedad de Pompe
Acumulacin de glucgeno
ENFERMEDAD DE DANON Enfermedad poco frecuente ligada al cromosoma X caracterizada por: cardiomiopata hipertrfica Miopata de msculos esquelticos retardo mental variable
Tratamiento Trasplante cardaco
ENFERMEDAD DE DANON
Causada por mutaciones en el gen que codifica a la protena LAMP-2 (Lysosomal Associated Protein-2)
Protena mayoritaria de la membrana lisosomal con un nico dominio transmembrana, un gran dominio intraluminal (altamente glicosilado) y una cola citoslica corta.
Principales alteraciones celulares en la Enfermedad de Danon
Diagnstico
Carencia de protenas LAMP-2 en msculo, leucocitos, y fibroblastos esquelticos y del miocardio
Acumulacin de vacuolas autofgicas con caractersticas de sarcolema en varios tejidos: hgado, rin, msculo cardaco y esqueltico Estas vacuolas contienen enzimas lisosomales, marcadores autofgicos (LC3) y adems protenas del sarcolema como distrofina y acetilcolinesterasa
Acumulacin de vacuolas autofgicas con caractersticas de sarcolema
Malicdan et al., 2008
Por qu se acumulan los autofagosomas?
Se debe a fallas en la maduracin de los autofagosomas (bloqueo en la fusin con lisosomas) y no a un aumento en la produccin de dichos autofagosomas. Estudios demostraron que la protena LAMP es requerida para la fusin de fagosomas y autofagosomas con los lisosomas y para el transporte va microtbulos
La Enfermedad de Danon es un trastorno de la autofagia debido a alteraciones en la fusin y/o motilidad de organelas
ENFERMEDADES LISOSOMALES CON AUTOFAGIA DISFUNCIONAL
