Universidad Nacional de Barranca
Facultad de Ingeniería
Dpto. Acad. Ciencias Básicas y Afines
PRÁCTICA N° 11
OBSERVACIÓN DE NÚCLEOS CELULARES
I. INTRODUCCIÓN
Al preparar sangre para microscopia se extiende primero una gota pequeña sobre una
laminilla de vidrio y se deja que seque. Se requiere mucha práctica y cuidado para
obtener un buen frotis. Después del secado, se fijan las células y se tiñen. Se emplea
metanol como fijador seguido de tinción con uno de los colorantes de Romanowsky.
Estas tinciones se preparan a partir de mezclas de azul de metileno y eosina por métodos
que involucran la producción de colorantes púrpura (azur), que son productos de la
oxidación del azul de metileno. El colorante Leishman se emplea comúnmente en
Inglaterra y el colorante de Wright en E.U.A. Una vez diferenciados los linfoblastos en
linfocitos, los monoblastos en monocitos, y los mieloblastos en polimorfonucleares o
granulocitos (basófilos, neutrófilos y eosinófilos), la concentración de leucocitos totales
en sangre se encuentra entre los 4500 y 11000 unidades por milímetro cúbico. En la
médula ósea hay una gran reserva, de modo que puede triplicar este número. Esta
reserva se moviliza (y se multiplica) en situaciones de estrés o en una infección. La
división principal, los deja de la siguiente manera:
Hay cinco tipos de glóbulos blancos: Los neutrófilos son el tipo más común de glóbulo
blanco. Estas células van al lugar de una infección y liberan sustancias llamadas
enzimas para combatir las bacterias o los virus invasores Linfocitos. Hay dos tipos
principales de linfocitos: Linfocitos B y T. Los linfocitos B combaten las bacterias, las
toxinas o los virus invasores. Los linfocitos T atacan y destruyen las células propias que
han sido infectadas por virus o por células cancerosas.
Los monocitos eliminan las sustancias extrañas y las células muertas y estimulan la
respuesta inmunitaria del cuerpo Los eosinófilos combaten las infecciones, la
inflamación y las reacciones alérgicas. También defienden al cuerpo contra los parásitos
y las bacterias Los basófilos liberan enzimas para ayudar a controlar las reacciones
alérgicas y los ataques de asma. La fórmula leucocitaria normal en el ser humano es:
Neutrófilos: 50-70 %, Linfocitos: 20-40 %, Monocitos: 2-8 % , Eosinófilos: 1-4 % y
Basófilos: 0-1 %
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Los colorantes policromos de azul de metileno y eosina derivados del método original
de Romanowsky sirven para la tinción diferencial de la mayoría de las estructuras
normales y anormales de la sangre. La mayor parte se disuelven en alcohol metílico y
combinan la fijación y la tinción. Se han ideado numerosos métodos para la preparación
y aplicación de estos colorantes siendo los más conocidos los de Giemsa y Wright. El
colorante de Wright, es policromático porque produce varios colores. Es una solución
de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina) y otro básico (azul de metileno). Los
núcleos y algunas otras estructuras de las células se tiñen con el colorante básico, por lo
que se denominan basófilas; ciertas estructuras solo toman el colorante ácido y se
llaman acidófilas, oxífilas o eosinófilas. Algunas otras estructuras se tiñen por una
combinación de ambos y se denominan neutrófilas. El colorante de Wright es uno de los
mejores y más empleados, permitiendo la identificación de los diferentes tipos de
células sanguíneas.
II. OBJETIVOS
Reconocer las diferentes formas nucleares en tejido sanguíneo.
Ubicar e identificar los palillos de tambor en los leucocitos neutrófilos.
III. MATERIAL Y MÉTODOS
3.1. Proporcionado por el laboratorio:
Colorante Wright
Buffer 6.8- 7.2.
Placas Petri
Laminas portaobjetos.
Laminas cubreobjetos.
Microscopio compuesto
Aceite de inmersión
3.2. Proporcionado por el alumno:
Lancetas
Algodón
Alcohol al 70%
Guantes
Gorro quirúrgico descartable
3.3. Procedimiento:
3.3.1. Obtención y frotis de la muestra de sangre.
1. Desinfectar el dedo cordial (medio) con el algodón embebido con la solución de
alcohol, esperar que se volatilice.
2. En el lado externo del dedo, hacer una punción con firmeza y rapidez utilizando
la lanceta estéril.
3. Colocar una gota de sangre en una lámina portaobjetos y hacer la extensión de la
sangre con un movimiento suave y firme con otra lamina portaobjetos.
4. Dejar secar al medio ambiente durante 1 a 5 minutos.
3.3.2. Coloración y observación de la muestra.
5. Cubrir el frotis completamente con el colorante de WRIGHT durante 5 minutos.
6. Sin tirar el colorante agregar el buffer de fosfatos ph 7.2 durante 5 minutos.
7. Desechar el colorante y lavar con la sol. Buffer o con agua corriente.
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8. Secar al calor moderado.
9. Observar al microscopio con el objetivo de inmersión, previamente colocar una
gota de aceite de inmersión.
Cuestionario:
¿Cuál es la composición del colorante WRIGHT?
¿Qué función cumple el Buffer 7?0 en la coloración de Wright?
Elaborar maquetas sobre replicación, transcripción y traducción y explicar en
clase la proxima sesión.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
AUDERSIK, T.; G. AUDERSIK y B. E. BYERS. 2003. Biología: La vida en la tierra. 6ta. Edic.
Edit. Pearson Educación, S. A. México.
KIMBALL, A. 1982. Biología. Fondo Educativo. Interamericano, S.A. México.
SOLOMON, E.P.; R. BERG; D. MARTIN. 1998. Biología. 4ta. edic. Edit. Mc Graw-Hill
Interamericana editores, S.A. México, D.F.
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BIOSÍNTESIS DE PROTEÍNAS.
I. INTRODUCCIÓN.
La información genética en los seres vivos está contenida en el ADN (ácido
desoxirribonucleico), bajo la forma de genes, que codifica la síntesis de un ARN y/o de
una proteína. Cada gen es una secuencia de nucleótidos, que a su vez contienen ácidos
nucleicos, los cuales son el depósito de información de todas las secuencias de
aminoácidos de todas las proteínas de la célula. Cada nucleótido del ADN puede
presentar una de 4 bases nitrogenadas: adenina (A), guanina (G), citosina (C) y timina
(T); en el caso del ARN (ácido ribonucleico), las bases son las mismas, con excepción
de timina, que es sustituida por uracilo (U). Las proteínas que se conocen están
formadas únicamente por 20 aminoácidos diferentes, llamados aminoácidos proteicos o
canónicos (Se conocen otros 150 aa que no forman parte de las proteínas). Existe una
correlación entre ambas secuencias: a una secuencia de 3 nucleótidos (codón) en en el
ARN corresponde 1 aminoácido en una proteína. La descripción de esta correlación es
lo que se denomina CÓDIGO GENÉTICO. Este código es universal y se encuentra
conservado en todos los organismos vivios (con pocas excepciones).
Fig: Tabla de código genético.
Para obtener proteínas se requiere de dos pasos: La transcripción y la traducción.
Transcripción: Se realiza en el núcleo. Una cadena de ADN sirve como patrón
estructural para el ensamblaje del ARN, a partir de nucleótidos libres en la célula.
Traducción: Se efectúa en el citoplasma. El ARN dirige el ensamblaje de aminoácidos
para formar cadenas polipeptídicas. En la traducción, se emplean tres tipos de
moléculas. ARNm (ARN mensajero): tiene los codones o tripletes de bases. ARNr
(ARN ribosomal): reconoce el extremo del ARNm por donde se debe iniciar la síntesis
de proteínas. ARNt (ARN transferencia): transfiere un aminoácido específico al
ribosoma. Lleva el anticodón que debe ser complementario al codón.
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II. OBJETIVO.
Al finalizar la sesión de práctica, el alumno comprende y diferencia los mecanismos de
la transcripción, maduración y la traducción.
III. MATERIAL Y EQUIPO.
Papel cuadriculado
Lapiceros
Ejercicios propuestos.
IV. RESULTADOS - EJERCICICOS PROPUESTOS.
4.1. Transcripción de una Cadena de ADN a ARNm
5° CTTACGAACGTA 3°
3° ACTAAGTCAGGC 5°
4.2. Transcribir y Traducir una cadena de ADN, Hallar ADN Complementario, ARNm
y AA que lo codifican: 5° CATGGCTATAAC 3°
4.3. Encontrar el ADN y los Aminoacidos a partir del ARNm, hallar doble hélice,
Anticodón (ARNt): 5° UCGAGUCCA 3°
4.4. Se parte de la secuencia del ARNm que se a utilizado para sintetizar una proteína.
cual debe ser la secuencia del molde de ADN que le dio origen: AUGCCGACGAA
4.5.
4.6.
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4.7.
V. CUESTIONARIO
1. Investigue qué es el genoma humano, cuántos genes contiene, y cuántas proteínas
codifican.
2. ¿Por qué se producen las mutaciones genéticas?
3. ¿Qué antibióticos producen inhibición de las síntesis de proteínas? ¿Cuál es el fundamento
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
LODISH, H. F., ZIPURSKY, S. L. y DARNELL, J. E.: Biología Celular y Molecular. 7a ed.
Editorial Médica Panamericana. 2016.
https://www.youtube.com/watch?v=xD5s6W501y0 : Cómo utilizar las tablas de código
genético (bases y aminoácidos).
http://www.wwpdb.org/ : Worldwide Protein Data Bank
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/ : GenBank
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