REPLICACIÓN DEL ADN
El significado genético de la replicación es el de conservar la información genética.
La estructura del ADN en doble hélice permite comprender como dicha molécula
puede dar lugar a copias sin perder su conformación. En principio, las dos hebras
deberían separarse. Después, mediante la acción de otra enzima, a partir de
desoxirribonucleótidos sueltos y según la complementariedad de bases, podría irse
construyendo las hebras complementarias de las dos hebras “modelo” iniciales.
MODELOS DE REPLICACIÓN PROPUESTOS
Para explicar este proceso se propusieron tres hipótesis:
Hipótesis Conservativa. Propone que tras la duplicación, quedan, por un lado, las
dos hebras antiguas juntas y, por otro, las dos hebras nuevas también espiralizadas.
La Hipótesis Semiconservativa sobre la duplicación del ADN se debe a Watson y
Crick. En ella se sostiene que, en las dos moléculas de ADN de doble hélice hijas,
una de las hebras sería la antigua y otra la moderna.
La Hipótesis Dispersiva supone que la primitiva molécula de ADN se fragmenta en
multitud de pequeños trozos, copiándose éstos y reuniéndose tanto los fragmentos
originales como las copias de modo que las dos nuevas moléculas están formadas
por fragmentos antiguos y nuevos.
El experimento más definitivo para dilucidar cuál de estas tres hipótesis era la
correcta fue el de Meselson y Stahl en 1957. La hipótesis confirmada fue la
semiconservativa.
1
REPLICACIÓN “IN VIVO” DEL ADN
La enzima que lleva a cabo la replicación del ADN es la ADN polimerasa, esta
enzima tiene unos requerimientos específicos para trabajar, que le imponen
restricciones:
1. Sólo añade nucleótidos en la dirección 5’ 3’.
2. Necesita para poder empezar a copiar y unir nucleótidos un molde de ADN.
3. Necesita un pequeño trocito de ARN al cual unir los nucleótidos, ya que ella no
puede empezar a unir los nucleótidos sin tener una pequeña cadena ya formada.
4. Utiliza nucleótidos trifosfato.
Dadas las necesidades de esta enzima y sabiendo que la molécula de ADN está
formada por dos hebras antiparalelas, se plantea un problema en la cadena de ADN
que va en la dirección 5’ 3’, porque aquí la enzima estaría trabajando en la
dirección contraria, y sin embargo, se observa que las dos hebras se van replicando.
La solución al dilema la dio el desabrimiento, en 1968, por Okazaki de unos
fragmentos constituidos por unos 50 nucleótidos de ARN y entre 1.000 y 2.000
nucleótidos de ADN, denominados fragmentos de Okazaki. Así se podía explicar
como se copia esta cadena, siendo de forma discontinua en la dirección 5’ 3’ y la
otra cadena de forma continua. También quedaba solucionado el problema de que la
enzima necesitara una cadena de ARN a la cual unir los nucleótidos.
2
Veamos ahora como se lleva acabo el proceso:
Existe una secuencia de nucleótidos en el ADN llamada origen de replicación
que actúa como señal de iniciación.
Las cadenas de ADN están unidas por puentes de hidrógeno, que debemos
romper para facilitar la separación de las cadenas para ser copiadas, esta
separación la lleva a cabo las enzimas helicasas.
Como el desenrollamiento de la doble hélice da lugar a superenrollamientos en el
resto de la molécula, capaces de detener el proceso, se hace preciso la presencia
de las enzimas topoisomerasas que eliminen las tensiones en la fibra.
A continuación, para evitar que las dos hebras vuelvan a reunirse y formar los
puentes de hidrógeno se colocan unas proteínas llamadas SSB (Single-Strand
DNA Binding proteins), que estabilizan las cadenas sencillas.
El proceso es bidireccional, es decir, hay una helicasa trabajando en un sentido y
otra trabajando en sentido opuesto. Se forman pues las llamadas burbujas u ojos
de replicación.
3
Como ninguna ADN-polimerasa puede actuar sin cebador, interviene primero una
ARN polimerasa (primasa) que si lo puede hacer, sintetiza un corto fragmento de
ARN de unos 10 nucleótidos denominado primer que actúa como cebador.
Después interviene la ADN polimerasa III, que a partir de este cebador comienza
a sintetizar en dirección 5’ 3’ una hebra de ADN partir de nucleótidos trifosfato.
La energía necesaria para el proceso es aportada por los propios nucleótidos que
pierden dos de sus fósforos. Esta nueva hebra se sintetiza en el sentido que se
abre la horquilla de replicación, es de crecimiento continuo y se denomina hebra
conductora.
Sobre la otra hebra (hebra discontinua o retardada) la ARN polimerasa
sintetiza unos 40 nucleótidos de ARN en un punto que dista unos 1.000
nucleótidos de la señal de iniciación. A partir de ellos la ADN polimerasa III
sintetiza unos 1.000 nucleótidos de ADN, formándose un fragmento de Okazaki.
Este proceso se va repitiendo a medida que se van separando las dos hebras
patrón.
A continuación interviene la ADN polimerasa I, que, primero, gracias a su función
exonucleasa, retira los segmentos de ARN, y que luego, gracias a su función
polimerasa, rellena los huecos con nucelótidos de ADN.
Finalmente la ADN ligasa unirá los dos extremos, tanto en la cadena continua
como los sucesivos fragmentos de Okazaki que se van formando en la cadena
discontinua.
Cuando se observa como se produce la replicación se ve que la cadena continua va
más rápida que la discontinua, esto es debido a que cada vez que se forma un
fragmento de Okazaki hay que realizar todo este proceso como si se comenzara la
síntesis de nuevo, formando el primer y el resto de pasos, sin embargo, en la
continua solo se realizará una vez.
4
5
REPLICACIÓN DEL ADN EN EUCARIOTAS
Es similar a la de los procariontes, es decir, semiconservativa y bidireccional.
Existe una hebra conductora que sintetiza de manera continua y la retardada de
forma discontinua con fragmentos de Okazaki.
Sin embargo, la replicación en eucariotas presenta ciertas peculiaridades:
El ADN de los eucariontes está fuertemente
asociado a los octámeros de histonas, en
forma de nucleosomas, por lo que además de
replicarse el ADN, deben duplicarse también
las histonas. Al parecer, tanto los nuevos
nucleosomas como los antiguos se reparten de
manera aleatoria entre las dos nuevas hebras
hijas: en la retardada y en la conductora.
La longitud del ADN de un cromosoma
eucariótico es mucho mayor que el ADN
bacteriano, de ahí que no haya un único origen
de replicación. Para que el proceso sea más
rápido, existen numerosas burbujas de
replicación a lo largo de cada cromosoma.
CORRECCIÓN DE ERRORES
La actividad de la ADN polimerasa debe ser exacta, rápida y fiel, ya que la vida entera
y su continuidad de generación en generación dependen de la exactitud y precisión
con que se transmite la información, es decir de la fidelidad de la duplicación del
ADN.
La selección de nucleótidos por la ADN polimerasa y su actividad autocorrecctora,
constituyen mecanismos de prevención de errores, pero aún así se comete un error
de apareamiento por cada 10 millones de bases.
Esta precisión podría resultar suficiente para una bacteria, cuyo genoma contiene 3
millones de pares de bases, pero resulta insuficiente para el genoma humano que
contiene 3.109 pares de bases.
