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S.E.P.
U.E.M.S.T.I.S.
DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN TECNOLÓGICA INDUSTRIAL
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y DE
SERVICIOS No 12
PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE:
“IDENTIFICA MICROORGANISMOS CON BASE EN TÉCNICAS
BACTERIOLÓGICAS”
LABORATORISTA CLÍNICO
NOMBRE: ______________________________ GRUPO: _____________
REALIZO:
Q.F.B. FERNANDO CAMPOS CASTILLO
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29 DE AGOSTO DEL 2022
PRESENTACIÓN
ESTE CURSO CONSTA DE TRES UNIDADES INTERDEPENDIENTES UNA DE LA
OTRA, INICIANDO CON EL CONCEPTO DE MICROBIOLOGÍA, LOS ASPECTOS
TAXONÓMICOS Y SU PROBLEMÁTICA, LA ANATOMÍA CON EL CONCEPTO DE
MICROBIOLOGÍA, LOS ASPECTOS TAXONÓMICOS Y SU PROBLEMÁTICA, LA
ANATOMÍA Y MORFOLOGÍA DE LAS BACTERIAS, TINCIONES IMPORTANTES
EN MICROBIOLOGÍA, FISIOLOGÍA MICROBIANA, MEDIOS DE CULTIVO,
CRECIMIENTO Y MORTALIDAD DE BACTERIAS, DANDO ÉNFASIS ESPECIAL EN
ESTERILIZACIÓN Y ANTIBIOGRAMAS, LAS RELACIONES DE LAS BACTERIAS
CON EL SER HUMANO, LAS PRINCIPALES ESPECIES DE LOS COCOS GRAM
POSITIVOS Y NEGATIVOS DE INTERÉS CLÍNICO.
ES UNA MATERIA TEÓRICA PRACTICA LO QUE IMPLICA QUE EL MAYOR
TIEMPO DEL CURSO SE ESTA EN EL LABORATORIO. EL CUAL DEBERÁ DE
CONTAR CON TODO LO NECESARIO PARA QUE EL CURSO SE PUEDA LLEVAR
A CABO CON ÉXITO.
EL ALUMNO SERÁ UN INVESTIGADOR CONSTANTE Y TENDRÁ MUCHÍSIMO
CUIDADO CON EL MANEJO DE LAS MUESTRAS Y CEPAS, YA QUE SON
PATÓGENAS Y ALTAMENTE CONTAGIOSAS.
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OBJETIVO GENERAL
EL ALUMNO SERÁ CAPAZ DE RECOLECTAR MUESTRAS, PREPARAR FROTIS,
HACER TENCIONES, HACER OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS,
PREPARACIONES DE MEDIOS DE CULTIVO, INOCULAR Y SEMBRAR PARA
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES DE INTERÉS MEDICO, ASÍ
COMO EL CONTROL DE SUS COCOS GRAM POSITIVO Y GRAM NEGATIVOS
ASÍ COMO LOS BACILOS GRAN POSITIVOS.
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EVALUACIÓN DEL LABORATORIO
VALOR: 50% PRACTICO.
SU EVALUACIÓN SE REALIZARA EN EL LABORATORIO, SE TOMARA EN
CUENTA LOS SIGUIENTES PUNTOS.
A). SU ASISTENCIA EN EL LABORATORIO. PERSONA QUE NO ASISTA SIN LA
JUSTIFICACIÓN ANTE SERVICIOS ESCOLARES TENDRÁ CERO (0), EN LA
PRACTICA.
B).- TRABAJO DENTRO DE LABORATORIO. DEBERÁ DE REALIZARLO EN
FORMA CORRECTA GUARDANDO EL MEJOR COMPORTAMIENTO, LOS
PROBLEMAS DE DISCIPLINA PUEDE OCASIONAR QUE SEA SUSPENDIDO
DEL LABORATORIO. DEBIDO A QUE PUEDE PONER EN RIESGO SU SALUD Y
LA DE SUS COMPAÑEROS.
C).- BATA BLANCA. DE MANGA LARGA Y CON BOTONES AL FRENTE,
PRESENTABLE.
D).- CUADERNILLO DE PRÁCTICAS. CON SU REPORTE ELABORADOS.
E).- CUBRE BOCA, CUANDO EL PROFESOR LO INDIQUE, TAMBIÉN
GUANTES, SI NO LOS TRAE. NO PODRÁ PRESENTARSE AL LABORATORIO YA
QUE CORRE EL RIESGO DE CONTAMINARSE.
F).- UÑAS CORTAS Y SIN PINTURA.
G).- PELO RECOGIDO Y SIN PINTURA EN LOS OJOS.
H).- SALUD DEL ALUMNO. PERSONA CON HERIDA DE CIRUGÍA,
EXTRACCIÓN DE MUELAS O UÑAS, INMUNODEPRESIVOS, NO PODRÁ
ASISTIR AL LABORATORIO, SOLO HASTA QUE SU MEDICO LO INDIQUE.
I).- NO PULSERAS DE TELA, EN SUS MUÑECAS.
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CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y
DE SERVICIOS No.12
PRACTICA No.1
CARACTERÍSTICAS DE UN LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA
NOMBRE: ________________________ GRUPO:______ FECHA: ________
INTRODUCCIÓN:
La MICROBIOLOGÍA es una ciencia que estudia a los microorganismos y
sus actividades. Siendo la BACTERIOLOGÍA una rama fundamental de esta
ciencia que estudia a las bacterias.
Todo aquel ser vivo unicelular que tiene vida propia se considera
microorganismo ya que todas sus funciones se realizan en una sola célula.
El laboratorio es parte fundamental de la microbiología ya que el verdadero
conocimiento de esta ciencia empezó cuando se lograron estudiar las bacterias
individualmente en el laboratorio.
El material fundamental para todo laboratorio de BACTERIOLOGÍA es:
❖ Microscopio óptico con objetivo de 100x para ver las estructura de los
microorganismos.
❖ Medios de cultivo que son substancias nutritivas que se utilizan en el
laboratorio para hacerlos crecer artificialmente y ver su comportamiento.
❖ Caja de Petri
❖ Tubo de ensaye
❖ Matraz
❖ Termómetro
❖ Asa bacteriológica
❖ Incubadora
❖ Autoclave
Pero todo el material que se emplea en el laboratorio de bacteriología debe
ser estéril, por lo que debemos emplear técnicas de esterilización adecuada para
trabajar en el laboratorio.
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OBJETIVO:
Identifica los materiales más utilizados en bacteriología y prepara el material
necesario para sus prácticas.
METODOLOGÍA:
Demostrativa y una breve explicación de cada uno de los materiales utilizados.
MATERIAL:
✓ Caja Petri
✓ Tubos de fermentación
✓ Pipetas
✓ Asas bacteriológicas
✓ Autoclave
✓ Estufa bacteriológica
✓ Medios de cultivo
✓ Colores
✓ Matraz para preparar medios de cultivo
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
Se repartirá el material en ellas mesas para la observación y conocimiento de
los alumnos.
EVALUACIÓN:
1.- Dibuje el material más utilizado en el laboratorio de bacteriología.
2.- Realice su rotulo como le corresponde.
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CUESTIONARIO:
1.- Como se puede observar la morfología de un virus?
2.- Defina que es una bacteria?
3.- Anote los tipos de microorganismos que existen
4.- Escriba los pasos a seguir para el manejo del microscopio óptico para la
observación de las bacterias.
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
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CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y DE
SERVICIOS No.12
PRACTICA NO.2
MÉTODO DIRECTO
NOMBRE: __________________________GRUPO: _________FECHA: ____
INTRODUCCIÓN:
El método directo, consiste en observar las bacterias al microscopio
directamente del medio sin aplicar ningún tipo de sustancia o colorante. La
ventaja de este método es que se puede observar la movilidad bacteriana. Y su
desventaja principal es que no se puede ver claramente su morfología o
algunas estructuras que posee debido a que el agua y el protoplasma tienen el
mismo ángulo de refringencia.
OBJETIVO:
Realizar el método directo a varias muestras e indicando los distintos tipos de
microorganismos así como su movimientos vitales.
METODOLOGÍA:
El método directo es una de las técnicas más utilizadas en el laboratorio de
bacteriología. Siempre que se requiere la observación de microorganismos al
microscopio, Se utiliza este método.
MATERIAL:
❖ 2 cultivos puros de bacterias diferentes
❖ Medio natural de vinagre
❖ Medio natural de leche
❖ Microscopio óptico
❖ Portaobjetos
❖ Cubreobjetos
❖ Aceite de inmersión
❖ Mechero Fisher o bunsen
❖ Asa bacteriológica
❖ Fenol al 5 %
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DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
EL método directo consiste en:
1.- Utilizar un portaobjetos y un cubreobjetos limpio y libre de grasa y
jabón.
2.- colocar una gota de muestra a observar encima del portaobjetos, si la
muestra es líquida. Si la muestra es sólida coloque previamente una gota
de agua sobre el portaobjetos y diluya con una azada la muestra.
3.- coloque encima el cubreobjetos procurando que no se derrame el
líquido (si esto sucede vuélvalo hacer).
4.- coloque una pequeña gota de aceite de inmersión sobre el
cubreobjetos.
5.- observe con el objetivo de 100x en microscopio. Evite que la muestra
se seque.
OBSERVACIONES Y DIBUJOS:
Medio de cultivo natural de leche medio de cultivo natural de vinagre
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Cultivo puro de_____________ cultivo puro de ____________________
CUESTIONARIO:
1.- Qué ventajas tiene el método directo?
2.- Que es un cultivo puro?
3.-A que llamamos movimientos vitales?
4.- Que movimientos vitales observaron en el microscopio?
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
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SERVICIOS No.12
PRACTICA No.3
ESTUDIOS DE LOS MICROORGANISMOS VIVOS
(GOTA PENDIENTE)
NOMBRE:___________________________ GRUPO:______ FECHA_______
INTRODUCCIÓN:
Para ver las bacterias al microscopio se emplean dos técnicas:
1.- MÉTODO DIRECTO Y GOTA PENDIENTE: son técnicas y se observan los
organismos vivos directamente de su medio.
2.- TINCIONES O FROTIS TEÑIDOS: donde se emplean organismos muertos y
colorantes.
Las preparaciones húmedas permiten observar a los organismos vivos
suspendidos en un líquido que se encuentra entre un portaobjetos y un
cubreobjetos. En la técnica de gota pendiente para evitar la evaporación y
efectos de las corrientes se rodea la preparación con vaselina u otra sustancia
semejante que cierre el espacio entre el portaobjetos y el cubreobjetos. Por lo
que es recomendable utilizar para esta técnica portaobjetos excavados. Las
ventajas de esta técnica son que se pueden observar los movimientos vitales de
las bacterias, como lo son: locomoción, vibración, movimientos amiboideos
etc.…
OBJETIVO:
Observar las características de las bacterias en vivo, observando sus
movimientos vitales.
METODOLOGÍA:
Todas las preparaciones húmedas son para observar los organismos en vivo.
MATERIAL:
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❖ Cultivo puro de bacterias en caldo enriquecido de 24hrs.(mínimo 3
bacterias diferentes)
❖ Portaobjetos excavados
❖ Portaobjetos
❖ Cubreobjetos
❖ Vaselina microscopio
❖ asa bacteriológica
❖ fenol al 5%
❖ aceite de inmersión
Cultivo puro de: _________________ cultivo puro de: __________________
CUESTIONARIO:
1.-Qué ventajas tiene el método directo?
2.- Que es un cultivo puro?
3.- A que le llamamos movimiento vital?
4.- Que movimiento vital observaste en los microorganismos?
5.- Explique los movimientos vitales y no vitales, observados en la práctica.
6.- Diga las formas morfológicas que pueden tener las bacterias.
7.- Como es el movimiento vital de las bacterias comparándolas con los
protozoarios.
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DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
LA TÉCNICA GOTA PENDIENTE CONSISTE EN:
1.- colocar vaselina con un palillo en la orilla de la excavación del portaobjetos
2.- colocar una gota de suspensión de caldo donde se encuentra los
microorganismos sobre el cubreobjetos con el asa.
3.- se voltea el cubre con la intención de que quede en forma de gota suspendida.
4.- se coloca lentamente el portaobjetos excavado de tal manera que la gota
quede en el centro sin que se mueva, si se escurre o no queda la gota en el
centro tendrá que repetir la preparación.
5.- coloque sobre el cubreobjetos una gota de aceite de inmersión.
6.- observe al microscopio con objetivo de 100x
EVALUACIÓN: DIBUJO OBSERVACIONES:
BACTERIA: CARAC. VITALES
__________________
__________________
__________________
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OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
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SERVICIOS No. 12
PRACTICA No.4
COLORANTES EN BACTERIOLOGÍA
NOMBRE: _________________________GRUPO _______FECHA ________
INTRODUCCIÓN:
Existen diferentes tipos de colorantes utilizados para ver la morfología de las
bacterias. Estas se dividen en:
✓ COLORACIONES SIMPLES: son aquellas en las que solo se utiliza un
solo colorante como el azul de metileno, cristal violeta, safranina,
etc.… Estas substancias coloreadas son alcalinas que tienen facilidad
de penetrar en la bacteria y combinarse con las substancias químicas
del citoplasma, dándoles a las bacterias un color uniforme.
✓ COLORACIONES ESPECIALES: Este tipo de coloraciones se utilizan
para colorear una estructura u organelo que tenga la bacteria. Entre
las coloraciones especiales tenemos: coloración de hiss, coloración de
leifsson, coloración de saffer fulton.
OBJETIVO:
Preparar los colorantes más empleados en bacteriología
METODOLOGÍA:
En la preparación de los colorantes el éxito depende de la metodología empleada
correctamente.
1.- saber utilizar correctamente el microscopio
2.- el uso adecuado de los colorantes y el grado de pureza de los mismos.
3.- escoger las condiciones y las combinaciones de colorantes adecuados.
4.- seguir fielmente la técnica.
5.- dar un resultado preciso de lo observado al microscopio.
MATERIAL:
❖ vaso de precipitado
❖ matraces aforados
❖ colorantes
❖ alcohol
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❖ goteros
❖ agua destilada
❖ cinta masking
❖ balanza granataria
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
Prepare los distintos colorantes siguiendo las indicaciones del profesor.
EVALUACIÓN:
Entregue el material preparado a su maestro para que lo revise y sea utilizado
en las prácticas posteriores.
DIBUJOS:
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
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SERVICIOS No. 12
PRACTICA No.5
COLORACIÓN SIMPLE
NOMBRE______________________________ GRUPO______ FECHA_____
INTRODUCCIÓN:
El método de COLORACIÓN SIMPLE, consiste en aplicar un colorante de
naturaleza básico que no son de origen vegetal como lo son: azul de metileno,
safranina, fucsina, etc.…a las bacterias previamente fijadas en un portaobjetos
y así poder observar su morfología.
OBJETIVO:
Distinguir la morfología de los distintos tipos de microorganismos anotando en
su reporte las VENTAJAS y DESVENTAJAS del MÉTODO DE COLORACIÓN
SIMPLE.
METODOLOGÍA:
1.- Los portaobjetos deberán utilizarse libres de detergentes y grasa, pasarse al
mechero antes de usarse.
2.- Coloque una gota de muestra de cultivo sobre el portaobjeto si es líquida, si
el cultivo es sólido coloque una gota de agua sobre el portaobjetos y extienda
sobre el agua una asada de cultivo sólido.
3.- Con su asa bacteriológica extienda la muestra y haga un frotis (etiquételo)
4.- Fíjelo al mechero pasándolo por el fuego, teniendo cuidado de que no se
sobrecaliente, probándolo con el dorso de la mano.
5.- Agregue colorante, el que guste (safranina, azul de metileno, etc.…)
cubriendo la preparación por espacio de un minuto.
6.- Retire el colorante con agua corriente cuidando que no pegue de lleno sobre
la preparación.
7.- Deje que se seque al aire libre
8.- observe con el objetivo de 100x poniéndole una gota pequeña de aceite de
inmersión sobre la preparación.
MATERIAL:
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❖ 2 cultivos puros de bacterias recientes.
❖ 2 cultivos de microorganismos de medio natural (yogurt, vinagre, leche,
caldo etc.
❖ Portaobjetos
❖ Asa bacteriológica
❖ Microscopio
❖ Colorantes
❖ Algodón
❖ Aceite de inmersión
❖ Lápiz graso
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
Realice la coloración simple como se indica en la metodología ha muestras de
búlgaros, muestra de vinagre, cultivo puro de Eschericha coli, cultivo puro de
Staphylococcus aureus.
COLORACIÓN SIMPLE DE LOS CULTIVOS NATURALES
_________________________ ______________________
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Cultivo puro de _______________ cultivo puro de ____________
CUESTIONARIO:
1.- Cuales son las formas morfológicas de las bacterias?
2.- Escriba 6 colorantes que puedan ser usados en bacteriología, así como la
coloración que presentan.
3.- Diga las ventajas de la coloración simple.
4.- Por que la levadura y los hongos no se colorean por este medio?
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
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SERVICIOS No.12
PRÁCTICA No. 6
COLORACIÓN DE GRAM
NOMBRE___________________________ GRUPO_______ FECHA_______
INTRODUCCIÓN:
La coloración de Gram es una de las tinciones DIFERENCIALES más
utilizadas en el laboratorio de bacteriología, fue introducida por el científico danés
Hans Cristian Gram en 1884, y divide a las bacterias en dos grandes grupos:
LAS GRAM POSITIVAS y LAS GRAM NEGATIVAS, y esto tiene gran
importancia taxonómica.
El procedimiento de la tinción de Gram se inicia en la coloración de las células
bacterias fijadas con el colorante básico que es el cristal violeta, llamado
colorante diferencial. Se trata después con una solución yodatada que forma una
capa insoluble con el cristal violeta es seguida de agregar, enseguida se agrega
el mordiente que es el alcohol cetona que se encarga de colorear a las células
bacterianas y quitar el exceso de colorante, por ultimo agrega el colorante de
contraste que puede ser safranina o fucsina etc.…
Las células Gram positivas conservan el complejo yodo – colorante y se
tiñen de color VIOLETA
Las Gram negativas se destiñen al ser tratadas con el mordiente (alcohol
cetona) y se tiñen con el colorante de contraste, quedando teñidas de
color ROSA.
OBJETIVO:
Realizar a tres bacterias la técnica de Gram indicando a que tipo pertenece y
anotando sus características morfológicas.
METODOLOGÍA:
El método de Gram es exclusivo para bacterias y consiste en:
1.- Utilice un portaobjetos limpio de jabón, grasa y detergente. Ponga una asada
de cultivo sobre el portaobjetos si es líquido, si es sólido agregue primero una
gota de agua encima de ella.
2.- Una vez hecho el frotamiento, proceda a fijarlo a la flama del mechero bunsen
pasándolo al mechero sin que se sobrecaliente.
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3.- Rotule con la bacteria que utilizo
4.- Agregué el cristal violeta por un minuto
5.- Lave con agua de la llave procurando que no pegue de lleno sobre la muestra.
6.- Quite el exceso de agua sacudiendo y agregue el Lugol por un minuto.
7.- Lavar con alcohol- cetona (aproximadamente 6 – 8 gotas)
8.- Agregue la safranina por espacios de un minuto
9.- Enjuague con agua de la llave procurando que no pegue de lleno sobre la
preparación.
10.- Seque el frotis al aire libre.
11.- Enfoco a 10x y observe con el objetivo de 100x
MATERIAL:
❖ 3 cultivos puros de bacterias
❖ Colorante de cristal violeta
❖ Colorante de safranina
❖ Lugol y yodo de Gram
❖ Alcohol cetona
❖ Asa bacteriológica
❖ Mechero de bunsen
❖ Aceite de inmersión
❖ Microscopio
❖ Lápiz graso
❖ Cinta testigo
❖ Portaobjetos
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
Realice la técnica de Gram que se encuentra en la metodología a 3 cultivos
puros de bacterias que le proporcione el profesor. Y realice correctamente su
reporte.
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EVALUACIÓN:
BACTERIA MORFOLOGÍA GRAM
________________
_________________
_________________
CUESTIONARIO:
1.- Que es un mordiente y cual es utilizado en la coloración de Gram?
2.- Qué papel desempeña la pared celular en la coloración de Gram?
3.- Por que la técnica de Gram es exclusiva para bacterias?
4.- Cuales sustancias pueden substituirse en la técnica de Gram?
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES
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SERVICIOS No.12
PRACTICA No.7
COLORACIÓN DE ZIEHL – NEELSEN
NOMBRE _____________________________ GRUPO_____ FECHA______
INTRODUCCIÓN.
Algunas bacterias como Mycobacterium tuberculosis y el bacilo de la lepra,
que pertenecen a las MYCOBACTERIAS. Las cuales son patógenas y difíciles
de teñir, pero después de que fijan un colorante potente con intervención de
calor, resisten a la decoloración por ácidos. Esta característica se debe a la
presencia de lípidos como el ácido micolico, en la estructura del organismo. Por
lo que esta bacteria recibe el nombre de ALCOHOL ACIDO RESISTENTE y la
técnica de decoloración también se le conoce como técnica de BAAR (bacilo
alcohol acido resistente). Una delas muestras biológicas empleadas para esta
técnica, es el esputo, aunque también se puede utilizar orina para detectar
tuberculosis renal.
OBJETIVO:
Identificar por medio de la técnica ZIEHL – NEELSEN las bacterias alcohol
acido resistente en una muestra de esputo.
METODOLOGÍA:
La técnica ZIEHL – NEELSEN se utiliza para identificación de bacterias acido
resistente.
1.- recolección de muestras, tiene que ser esputo, que es la flema que proviene
desde el árbol bronco alveolar. Se recolecta la primera muestra de la mañana.
De preferencia no saliva.
2.- prepare un frotis de esputo déjelo secar y fíjelo al calor.
3.- Cubra la preparación con carbol fucsina y se calienta hasta emisión de
vapores.
4.- se tiñe durante 3 minutos. Cuidando no se evapore el colorante
5.- se lava con agua
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6.- se lava con ácido sulfúrico al 20% hasta que la película sea amarilla, y luego
se lava con agua. De volverse rosa se repite la operación hasta que permanezca
amarilla al ser lavada.
7.- Se trata con alcohol al 95% por un minuto.
8.- Se lava con agua
9.- Se hace la coloración de contraste con azul de metileno durante 30 segundos.
10.- Se lava y se seca
11.- Se pone sobre la muestra aceite de inmersión
12.- Observar con objetivo de 100x
Los microorganismos alcohol – acido resistente se tiñen de color ROJO. Los
demás AZULES y aun que el método mencionado generalmente se acepta
emplearse algunos modificaciones, que incluyen el uso de ácido clorhídrico al
3%, el alcohol etílico al 95%. Lo que a menudo es seguido por un tratamiento de
uno a dos minutos con ácido sulfúrico al 20% para la coloración de fondo.
MATERIAL:
❖ Portaobjetos
❖ Asa bacteriológica
❖ Puente para tinción
❖ Mechero de bunsen
❖ Colorantes de ZIEHEL – NEELSEN
❖ Azul de metileno
❖ Fenol al 5%
❖ Aceite de inmersión
EVALUACIÓN:
OBSERVACIONES;
Preparación fresca preparación Fija
CONCLUSION:
CONCLUSION
24
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CUESTIONARIO:
1.- Que bacterias alcohol acido resistente son patógenas, así como que
enfermedades producen?
2.- Con que otro nombre se le conoce a esa técnica?
3.- Cual es el mordiente en esta técnica?
4.- Que acido se utiliza para esta técnica?
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
25
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CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y DE
SERVICIOS No.12
PRACTICA No.8
ESTERILIZACIÓN Y MEDIOS DE CULTIVO
NOMBRE:____________________________ GRUPO_______ FECHA: ____
INTRODUCCIÓN:
Todo el material utilizado en bacteriología debe ser previamente esterilizado
con el fin de que no interfiera los microorganismos del medio ambiente con los
microorganismos que se deben utilizar, el proceso de esterilizado constes en
eliminar todo tipo de microorganismo y formas resistentes que se encuentra
presente tanto en el aire, como en el material utilizado y los medios de cultivo
para esterilizar en el laboratorio pueden utilizar; calor seco y calor húmedo,
utilizando el mechero ( flama ) o autoclave.
OBJETIVO:
Utilizar el calor húmedo en el laboratorio para esterilizar correctamente por medio
de autoclave el material de vidrio.
METODOLOGÍA:
Existen dos formas de esterilización para el material de vidrio:
ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECO: se utiliza la estufa bacteriológica
u horno de secado. El material ya envuelto se coloca en la estufa u horno
a temperatura de 200 ° de 1 a 2 horas, para este tipo de esterilización se
recomienda tener porta pepiteros y porta caja de metal con el fin de que
no se manchen oh se estrelle el vidrio
ESTERILIZACIÓN CON AUTOCLAVE: ( olla de presión ) En este método
se esteriliza por calor húmedo, el autoclave se maneja de la siguiente
manera :
Asegurar que el autoclave tenga agua necesaria
Que los medios de cultivo tengan su torunda de algodón
Cerrar el autoclave teniendo abierta la llave de vapor
Encender el aparato.
Esperar que todo el aire se desaloje de la autoclave. Lo cual pondrá
apreciar por la salida abundante vapor constante.
Cerrar la válvula de escape y dejar que la autoclave suba la presión
a 15 libras de presión por espacio de 15 minutos. No mueva la
válvula de escape.
Se apaga el autoclave y se deja enfriar sola, no le ponga agua
encima ni le mueva a la válvula por qué se puede tirar los medios
26
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de cultivo y por consecuencia hacharse a perder todo el material
esterilizado
Una vez que baja la presión a cero libras abra la válvula con el fin
de que salga todo el vapor.
Con mucho cuidado destape su autoclave, cuidando que no se
queme con el vapor.
LAS PIPETAS deben de tener en el extremo superior una porción de algodón
que no debe estar ni flojo ni apretado. Deberán ser envueltos por separado en
papel y colocarlos en porta pipetas.
CAJAS PETRI deberán ser envueltas en papel por separado o bien colocarlas
en porta cajas.
MATRACES Y TUBOS DE ENSAYE deberán de tener un algodón en la boca,
este algodón no debe estar ni flojo ni apretado.
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO:
Todos los medios de cultivo ya sean sólidos o líquidos se deben preparar de
acuerdo a las instrucciones que tengan los recipientes donde están contenidos.
Existen en el laboratorio de bacteriología dos tipos de medios:
NATURALES: son aquellos que se toman desubstancias nutritivas que
existen en la naturaleza únicamente se esterilizan. Ejemplo: jugo de
manzana, caldo de res.
SINTÉTICOS: estos vienen en presentación comercial, como lo son
polvos deshidratados, u lo que tenemos que hacer únicamente es
hidratarlos de acuerdo a las instrucciones que vienen en el frasco que
lo contienen. Después se esteriliza de acuerdo a las indicaciones.
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
Prepara el material que le indique el maestro, entregándolo previamente
esterilizado. Al terminar la clase para ser utilizado en las practica.
ANOTE RESULTADOS Y DIBUJOS DE LA PRÁCTICA
EVALUACIÓN:
27
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1.- Cuales son las formas de esterilizar el material en el laboratorio de
bacteriología?
2.- Cual es la finalidad de envolver el material de cristal con papel?
3.- Porque el material es envuelto por separado?
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
28
29
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y DE
SERVICIOS No.12
PRACTICA No.9
TÉCNICA DE SIEMBRA EN CAJA PETRI Y TOBO DE ENSAYE,
UTILIZANDO DIFERENTES MEDIOS
NOMBRE___________________________ GRUPO______ FECHA________
INTRODUCCIÓN:
Los medios de cultivo son las substancias nutritivas que se utilizan en el
laboratorio para que las bacterias se desarrollen y así poder estudiarlas. Los
medios de cultivo pueden ser sólidos y se llaman AGAR O bien pueden ser
líquidos y se llaman CALDO. En cajas Petri se utilizan medios sólidos, se
siembran por estría: que consiste en deslizar el asa a través del agar en forma
de zig- zac. Los medios enriquecidos son utilizados para las bacterias
heterótrofas exigentes, un ejemplo de ellos es el agar soya tripticaseina (AST)
en medios de agar en caja de Petri podemos ver la morfología colonial de las
bacterias que una de las características de identificación bacteriana.
OBJETIVO:
Utilizar medios enriquecidos para utilizar técnicas de estría simple, estría
cerrada, empleando cajas Petri.
METODOLOGÍA:
Se puede emplear varias técnicas y esto va a depender directamente del
estudio bacteriológico que se vaya a realizar, el método de siembra por estría se
utiliza generalmente para el estudio bacteriológico de purificación y aislamiento
de cepas bacterianas. En todas estas técnicas se diseminan en forma alterna
una cantidad pequeña de muestra bacteriana mezclándose en la superficie del
medio solido con un alambre de nicromo o de platino. Cada laboratorio tiene un
método favorito, lo que es esencial cubrir el agar ampliamente con el material
bacteriano en forma tal que las bacterias se distribuyan adecuadamente y lograr
un aislamiento bacteriano.
MATERIAL:
❖ 2 caja Petri con agar soya tripticaseina (AST) por alumno
❖ Mechero Fisher o bunsen
❖ Asa bacteriológica
❖ Algodón
❖ Cultivo en caldo de 2 microorganismos.
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
29
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Se realizan dos técnicas de siembra empleadas en caja Petri, utilizando para
ello el estudio de aislamiento de las bacterias empleados. Siga las indicaciones
paso a paso de su maestro y de su cuadernillo de prácticas
ESTRÍA SIMPLE BACTERIA_____________ ESTUDIO___________
A B C D E
A.- esterilizar el asa
B.- flamear la boca del tubo del cultivo, introducir el asa.
C.-colocar la bacteria sobre la superficie del agar en forma de zig- zac, cuidando
que no se empalmen las estrías y sin romper el agar.
F.- incubar en posición invertida a 37°C por 25HRS.
ESTRIA CERRADA BACTERIA___________ ESTUDIO_________
F G
F.- seguir los mismos pasos de esterilización
G.- en el paso de la estría, las estrías son cerradas
OBSERVACIONES Y DIBUJOS:
ESTRÍA SIMPLE:
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31
CARACTERÍSTICAS DE LA COLONIA Y TIPO DE BACTERIA
_______________
COLOR________________
FORMA________________
CONSISTENCIA_________
ELEVACIÓN____________
BORDE________________
ASPECTO______________
FORMA________________ LOGRO EL
ESTUDIO?____________________
ESTRÍA CERRADA:
CARACTERÍSTICAS DE LA COLONIA Y TIPO DE
BACTERIA________________
COLOR_______________
FORMA_______________
CONSISTENCIA________
ELEVACIÓN___________
BORDE_______________
ASPECTO_____________ LOGRO EL ESTUDIO?
____________________
OBSERVASIONES:
CONCLUSIONES:
31
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CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y DE
DE SERVICIOS No12
PRÁCTICA No 10
COPROCULTIVO
NOMBRE___________________________ GRUPO______ FECHA________
INTRODUCCIÓN:
Es un procedimiento de laboratorio qué se utiliza para demostrar la presencia de
una bacteria entero patógeno en las muestras fecales. Se habla de
COPROCULTIVO ya qué las técnicas usadas son precisamente el cultivo de las
bacterias del contenido intestinal. Puesto qué la microscopia únicamente
demostraría, teñida por las técnicas habituales Gram. Serian miles de bacilos
Gram. Negativos. Siendo imposible diferenciar microscópicamente una
Salmonella de una Eschericha. Un proteus de una Shigella.
OBJETIVO:
El alumno sembrara su muestra de heces fecales sospechosa de infección
intestinal para identificar una bacteria entero patógeno siguiendo las técnicas de
copro cultivo. Correctamente.
METODOLOGÍA:
1.- MANEJO DE LA MUESTRA:
Se recomienda recogerla en enfrasco estéril y de preferencia con un medio de
transporte como el de Stuar. Siga fielmente todas las reglas para el manejo de
las muestras qué se vio en el objetivo anterior.
2.- AISLAMIENTO DE LA BACTERIA ENTEROPATOGENA.
Para ello se utilizan medios de cultivo:
-EMB.
-ENNDO.
-XLD
-TERGITOL 7.
Se siembra por estría en cuadrante en placa de petri.
Se incuba por 24Hrs... Se compara la morfología colonial para posteriormente
resembrarse en los medios enriquecidos.
3.- LOS MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO SON:
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-Caldo de tetrationato
-BVB
-MacConkey
-SS.
-SULFITO DE BISMUTO
4.- PRUEBAS BIOQUÍMICAS_
Siembra en medios diferenciales:
TSI, SIM, CITRATO, UREA, RM, VP, MANITOL, DEXTROSA, LACTOSA
MALONATO, SACAROSA,
COMPARACIÓN PARA IDENTIFICACIÓN POR MEDIO DE LA TABLA
BIOQUÍMICA.
5.- ANTIBIOGRAMA:
Determinar el antibiótico más recomendable para la cepa patógena.
MATERIAL:
-Frasco estéril para recoger la muestra.
. MacConkey
.BVB.
.SB.
.Tergitol l7.
Medios en tubo de ensaye:
-TSI
-SIM
-UREA
-VP.
-SACAROSA
-LACTOSA
-MANITOL
-MALONATO
-MEDIO DE TRANSPORTE STUAR.
-ASA BACTERIOLÓGICA
-MECHERO
-CLORO
DESARROLLO DE PRÁCTICA:
Siga el cuadro de procesamiento para llevar correctamente su coprocultivo
EVALUACIÓN:
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REPORTE
MEDIOS SELECTIVOS PARA IDENTIFICACIÓN (TIPO DE COLONIAS)
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
BACTERIA PROBABLE:
______________________
MEDIOS SELECTIVOS PARA IDENTIFICACIÓN (TIPO DE COLONIA)
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
BACTERIA PROBABLE._______________________
MEDIOS DIFERENCIALES: PRUEBAS BIOQUÍMICAS:
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
AGENTE CAUSAL: __________________
ANTIBIÓTICO MÁS RECOMENDABLE: ___________________________________
______________________________________________________________________
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
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CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y
DE SERVICIOS No 12
PRÁCTICA No 11
UROCULTIVO
NOMBRE___________________________ GRUPO______ FECHA________
INTRODUCCIÓN:
Es un procedimiento de laboratorio qué sirve para demostrar el ó los agentes
causales de la infección. El urocultivo debe hacerse cuando hay signos ó
síntomas de infección urinaria, insuficiencia renal o Hipertensión.
Llevarlo a cabo siempre en personas qué se sospecha de infección sistemática
ó qué tenga fiebre de origen desconocido. Puede ser qué el Urocultivo forme
parte del examen periódico de rutina de la salud.
Las infecciones del tracto urinario pueden ser producidas por un agente
etiológico específico y rara veces por una flora mixta.
OBJETIVO:
Sembrara una muestra de orina de un paciente qué se sospeche de infección en
vías urinarias en los distintos medios y técnicas para realizar un urocultivo.
METODOLOGÍA:
Con el objeto de tener resultados dignos de confianza, debe de tomarse en
forma correcta la muestra:
1.- Un previo aseo escrupuloso y repetido de las áreas: genitales urinarias con
agua y jabón.
2.-Colectar la muestra a partir de la porción media de la micción con el objeto de
desechar los m.o. estacionados en la uretra.
3.- Recolectar la muestra en frasco estéril.
4.- Sembrar la muestra lo antes posible para qué las bacterias no se reproduzcan
o se mueran.
Sembrar su muestra en los tubos de bioclin. Para realizar la cuenta de Kass. Y
hacer la estimación cuantitativa de las bacterias.
Observaciones al microscopio el sedimento urinario. Tanto en forma directa
como al Gram. Para ver el tipo de bacterias y la presencia de leucocitos.
Siembra de la muestra en medios selectivos y enriquecidos.
Identificación a la bacteria. Por medio de pruebas bioquímicas o microscopia.
Realizar antibiograma del agente causal de la infección.
MATERIAL:
-Frasco estéril para recolectar orina.
-Tubo de ensaye con 9 ml. de agua destilada estéril.
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-Asa bacteriológica.
-Tubo bioclin para cuenta de Kass.
-portaobjetos y cubreobjetos.
-Centrifuga.
-Microscopio.
-Colorantes de Gram.
-Agar para antibiograma.
-agar de: AS. A. SABORAUD, A. TERGITOL 7, A. SOYA TRIPTICASEINA.
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
Siga correctamente su cuadro de procesamiento. Acatando cada pasó las indicaciones de
su maestro.
EVALUACIÓN: REPORTE.
MICROSCOPIA: ____________________________________________________
COLORACIÓN DE GRAM: ___________________________________________
COLONIAS DESARROLLADAS EN MEDIOS SELECTIVOS:__________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN: ________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
ANTIBIOGRAMA:
TRATAMIENTO MAS RECOMENDADO:__________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
AGENTE CAUSAL: __________________________________________
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES
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CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL
Y DE SERVICIOS No 12
PRÁCTICA No 12
EXUDADO FARÍNGEO
NOMBRE___________________________ GRUPO______ FECHA________
INTRODUCCIÓN:
Estas infecciones son las qué se localizan en la faringe, amígdalas, fosas nasales, senos
para nasales y por extensión a través de trompas de Eustaquio, a oído medio.
A semejanza del colon humano (la faringe, posee variada y abundante flora bacteriana
qué es necesario conocer para diferenciarla de las bacterias de finida patogenicidad, ya
qué no hacerlo pueden surgir serias confusiones diagnosticas), la siguiente lista de
bacterias de la macrobiótica normal de la faringe. En su orden de frecuencia:
STREPTOCOCCUS salivarius y otros estreptococos alfa hemolíticos.
NEISSERIA Catarrhalis y otras especies
STAPHYLACOCCUS Epidermis (y a veces S. aureus en discreto número).
CORYNEBACTERIUM psudodiphtertioum (hoffmannii o difteroides).
LACTOBACILLUS Acidophilus (y otras especies).
HAEMOPHILUS Haemoliticus.
ESTREPTOCOCO no hemolítico
DIPLODOCCUS pyogenes
HAEMOPHILUS influenzae
ENTEROBACTERIACEAE
CANDIDA ALBICANS
OBJETIVO:
Qué el alumno sepa aislar una bacteria de las vías respiratorias altas e identificado el
agente causal de dicha región,
OBTENCIÓN DEL ESPÉCIMEN:
Debe usarse abate lenguas para una correcta toma del producto. Tome un par de hisopos
y procure e una buena iluminación. Una vez abierta la boca ya la lengua abatida,
inspeccione rápidamente la faringe, pilares, amígdalas, etc. Y cerciorase de la presencia
de membranas, lesiones ulcerativas, inflamación, abscesos, sospechosos de estar
infectado (faringe, amígdalas, etc.) procurando no contaminar los hisopos con saliva. Si
no esta sospechoso de qué la toma fue buena elimine los hisopos. Y repita la operación.
Una vez toma la muestra introducir el hisopo al medio de transporte Stuart y procesar
después.
A.- Hacer un frotis directo con el hisopo y teñirlo con tinción de gram.
B.- Sembrar en medios de cultivo Agar sangre, con estría simple.
C.- Sembrar en medios de EMB.
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D.- Sembrar en medio de S110.
E.- Incubar con una atmósfera de CO2 24Hrs. A 37°C.
EVALUACIÓN. REPORTE: EXUDADO DE: _________________________
MICROSCOPIA: __________________________
TIPOS DE COLONIAS DESARROLLADAS EN LOS MEDIOS
EMPLEADOS:__________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
COLORACIÓN GRAM: ____________________________
ANTIBIÓTICO RECOMENDABLE:
________________________________________
AGENTE CAUSAL: ___________________________________________
CUESTIONARIO:
1.- Cuales son las bacterias qué constituyen la flora normal de la garganta:
2.- Mencione algunas bacterias patógenas qué entran por las vías respiratorias:
3.- Qué es una Sinusitis:
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
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Bibliografía
MICROBIOLOGIA MEDICA BASICA . En A. BONIFAZ, MICROBIOLOGIA MEDICA BASICA . MENDEZ
.
DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO . En J. B. HENRY, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO . SALVAT -
MASSON .
Henry, J. B. (2000). DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICO PARA LABORATORIO. En J. B.
Henry, DIAGNOSTICO Y TRATAMIENTO CLINICO PARA LABORATORIO. SALVAT .
DICCIONARIO MEDICO . En J. MENDEZ. MASSON .
NOTA: TODAS LAS PRÁCTICAS DEBERÁN TENER OBSERVACIONES Y
CONCLUSIONES. OBSERVACIONES CON DIBUJO Y OBSERVACIONES
CON LETRA.
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