Universidad Nacional Autónoma
de Honduras en el Valle de Sula
UNAH-VS
Laboratorio de Química Orgánica III QI-233
Sección: 1900
Nombre Instructor(a): Joel Lavaire.
Nombre y # de Práctica: 6-proteinas
Día y Sección de Laboratorio: sábado 1600.
Fecha de Entrega: 31/7/2022
Alumnos:
Edgardo Isaias Torres Perdomo. 20202001346
Giselle Paola Barrientos Rivera. 20202001027
OBJETIVO GENERAL
• Identificar a través de pruebas bioquímicas las proteínas existentes en soluciones problemas.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
• Determinar la presencia de proteínas en diferentes muestras mediante la reacción de Biuret.
• Reconocer mediante una reacción de NaOH y acetato de plomo la presencia de aminoácidos
azufrados en la clara de huevo.
RESUMEN DE LA PRACTICA
En la presente practica de laboratorio se llevado a cabo 3 pruebas una de Xantoproteico, otras de
Buret y por último de aminoácidos azufrados, en donde se ocupó usar fenol, HNO3, clara de huevo,
gelatina, agua de embutido, NaOH, (OH3CH2COO)2Pa, para poder determinar la presencia de
proteínas y aminoácidos azufrados
PROCEDIMEINTO EXPERIMENTAL
I Ensayo Xantoproteico
Se rotularon 4 tubos de ensayos en los que se colocaron las siguientes sustancias.
T1:2ml de fenol + 1ml de HNO3
T2:2ml de clara de huevo + 1ml de HNO3
T3:2ml de gelatina (50%) + HNO3
T4:2ml de agua de embutido + 1ml de HNO3
Luego se calentó el tubo de ensayo en el que se encontraba la clara de huevo luego se agregó
NaOH y se observaron cambios
Resultados
T1:2ml de fenol + 1ml de HNO3: se observo que el fenol al reaccionar con el HNO3 produjo
una reacción muy violenta liberando un gas, y la solución cambio de color café claro casi
incoloro a un color café oscuro, al agregar el NaOH la solución cambio nuevamente a un color
rojizo.
T2:2ml de clara de huevo + 1ml de HNO3: la clara de huevo se tornó blanca; se coció (como
si hiciéramos un huevo frito o duro), al someterlo a baño maría y al agregar NaOH la solución
se tornó a un color naranja
T3:2ml de gelatina (50%) + HNO3: la solución perdió su característica gelatinosa y se volvió
menos espesa, al calentarla y agregar NaOH la solución era completamente liquida
T4:2ml de agua de embutido + 1ml de HNO3: la solución se torno a un color amarillento,
cuando se calentó no se observó ningún cambio.
II. Reacción de Buret
1. Se rotulo un tubo de ensayo como clara de huevo, a este tubo se le agrego 3 ml de clara de
huevo + 2 ml de NaOH % + 5 gotas de CuSo4 1%.
Resultados: se tornó color violeta dando positivo para la prueba de proteína.
2. Se rotulo 1 tubo de ensayo como agua de embutido, a este tubo se le agrego 3 ml de agua
de embutido + 2 ml de NaOH % + 5 gotas de CuSo4 1%.
Resultados: se tornó color violeta dando positivo para la prueba.
3. Se rotulo 1 tubo de ensayo como gelatina, a este tubo se le agrego 3 ml de gelatina + 2 ml
de NaOH % + 5 gotas de CuSo4 1%.
Resultados: se tornó color violeta dando positivo para la prueba.
III. Reacción de aminoácidos azufrados
1. Se rotuló 1 tubo de ensayo con clara de huevo, se procedió a añadir 3 ml de clara
de huevo + ml de NaOH % + 10 gotas de (OH3CH2COO)2Pa. Se calentó hasta
ebullición.
Resultados: se formo precipitado marrón casi negro.
ANALISIS DE RESULTADOS
La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los
agentes indicados, que al actuar sobre la proteína la desordenan por la destrucción de su estructura
terciaria y cuaternaria.
Ensayo xantoproteico
La reacción Xantoproteica es una de las maneras de identificar la presencia de proteínas (con restos
químicos) solubles. Esta reacción se lleva a cabo agregando HNO3 en el tubo de ensayo en el cual
la muestra a estudiar se encuentra. El HNO3 en presencia de proteínas con restos aromáticos
reacciona con estos tornando la muestra a un color amarillo. Es una prueba para la presencia de
tirosina o triptófano en una proteína. Esto se debe a que en el anillo felino de los restos estas
proteínas tienen un grupo funcional el cual aumenta la reactividad de la molécula hacia un tipo de
reacción química en particular a estos grupos se los denominan grupos activantes. El grupo
activante presente en el anillo felino puede ser nitrado al agregar acido nítrico, cuando esto ocurre
la muestra se torna amarilla.
Por lo cual esta reacción se puede considerar una sustitución electrofílica aromática, de los restos
de la tirosina de las proteínas por la nitración que genera el HNO3.
El coagulo o el precipitado formado en la clara de huevo es debido a la formación de un compuesto
aromático nitrado de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico
concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de
grupos bencénicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se
neutraliza con un álcali vira a un color anaranjado oscuro. Lo que quiere decir que es el único
compuesto en la cual esta presente la tirosina es en la clara de huevo o en la ovoalbúmina ya que
es la única en la que se logro observar el precipitado amarillo.
La reacción que ocurre es algo así
La gelatina es una proteína compleja (polímero), esto significa que está compuesta de una cadena
de dieciocho (18) aminoácidos y el principal componente de las mismos es la Glicina. La secuencia
de los mismos determina sus propiedades. Una notable propiedad de las disoluciones de esta
molécula es su comportamiento frente a temperaturas diferentes: son líquidas en agua caliente y
se solidifican en agua fría. En el animal, la gelatina no existe como componente, se la obtiene por
hidrólisis parcial del colágeno, su precursor insoluble. La conversión del colágeno insoluble a la
gelatina soluble constituye la transformación esencial de su elaboración industrial. El proceso
puede llevar a diferentes gelatinas dependiendo de las rupturas en las uniones intramoleculares.
Tanto la gelatina alimenticia como la no alimentaria llevan, más o menos, el mismo proceso, pero
una requiere ciertas condiciones de higiene especiales por su destino posterior que es la
alimentación. La gelatina es muy fácil de digerir y aunque sea 100 % proteína su valor nutritivo es
incompleto al ser deficiente en la presencia en ciertos aminoácidos esenciales.
Se noto en la práctica de la gelatina que no se formo un precipitado, pero este paso de ser una
solución espesa a ser una solución completamente liquida, pero esta no salió positiva en el ensayo
xantoproteico ya que la gelatina no posee anillos felinos en sus restos por lo cual no existe una
nitración lo que impide el cambio en la coloración o precipitado.
Reacción de Buret
Durante la prueba de Biuret, las muestras que dieron un resultado positivo fueron gelatina,
clara de huevo y agua de embutido:
Cuando a la gelatina, clara de huevo y agua de embutido se le añaden gotas de sulfato de
cobre y gotas de NaOH, se vuelve violeta. Esto indica la presencia de proteínas.
Esta es la prueba de Biuret y el principio es simple como sigue:
En presencia de medio alcalino (sosa cáustica o NaOH), el Cu Los iones 2+ se reducen a
Cu + y se unen a las proteínas de la gelatina, clara de huevo y agua de embutido, dando así
un color violeta.
Así pues, para las 3 muestras se tiene que, en presencia de una solución alcalina, el ion
cobre II de color azul puede formar un complejo con los enlaces peptídicos ya que el
péptido tiene pares de electrones no compartidos en el nitrógeno y el oxígeno del agua. El
complejo de coordinación coloreado se forma entre el ion Cu2+ y el oxígeno carbonílico
(>C=O) y el nitrógeno amídico (=NH) del enlace peptídico. Una vez que se ha formado
este complejo, la solución cambia de azul a púrpura. Cuanto más profundo es el color
púrpura, mayor es el número de complejos de péptido-cobre. La reacción ocurre en
cualquier compuesto que contenga al menos dos H2N-C, H2N-CH2-, H2N-CS- o grupos
similares unidos entre sí directamente oa través de un átomo de carbono o nitrógeno. Un
ion de cobre probablemente esté unido a 6 enlaces peptídicos cercanos mediante enlaces
coordinados. La intensidad del color es directamente proporcional al número de enlaces
peptídicos presentes en la molécula de proteína que está reaccionando y también al número
de moléculas de proteína presentes en el sistema de reacción.
Reacción de aminoácidos azufrados
Ya que se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo,
utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo que nos sirve para identificar proteínas que tienen en
su composición aminoácidos con azufre. El aminoácido que contiene azufre, como la clara de
huevo reacciona con acetato de plomo en condiciones alcalinas para formar un precipitado
marrón. Estos aminoácidos que contienen azufre se degradan en medios fuertemente alcalinos para
liberar iones de sulfuro (S 2- ) en forma de H 2 S (sulfuro de hidrógeno). Los iones de sulfuro
pueden reaccionar con el acetato de plomo (II) para formar un precipitado de color negro pardusco.
CONCLUCIONES
• Podemos confirmar que la reacción Xantoproteica es una de las maneras de identificar la
presencia de proteínas (con restos químicos) solubles. La prueba xantoproteica utiliza una
reacción de nitración para determinar la presencia de proteínas en una solución. Cuando la
muestra se trata con ácido nítrico concentrado y caliente, reacciona con aminoácidos
aromáticos como fenilalanina, tirosina y triptófano y forma un producto de color amarillo
conocido como proteína xanto. Con la adición de una base fuerte como NH3 o NaOH,
cambia aún más a un color naranja intenso. Por lo que esta prueba da un resultado positivo
en aquellas proteínas que contienen aminoácidos que tienen anillos aromáticos en sus
cadenas laterales.
• En la prueba de Biuret temenos que el principio fundamental de este ensayo es que, en
condiciones alcalinas, el ion cúprico forma complejos con los enlaces peptídicos
adyacentes en la proteína y forma un complejo de color púrpura intenso. Esta reacción
surge solo con la presencia de enlaces peptídicos y no con cadenas laterales de
aminoácidos. La intensidad del color es directamente proporcional a la concentración de
proteína
